抗腫瘤多肽tt-1在制備抗腫瘤藥物中的用途
【專利摘要】本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種免疫調(diào)節(jié)多肽的及其應(yīng)用，本發(fā)明對(duì)蜂毒素(Melittin)進(jìn)行改造，將原有的不穩(wěn)定的氨基酸脯氨酸替換為帶有正電荷的賴氨酸，增加了穩(wěn)定性，同時(shí)保留了其N端的活性中心部位，采用固相化學(xué)合成法獲得具有較高抗腫瘤活性多肽TT-1，藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，TT-1體內(nèi)外抑制人甲狀腺癌TT荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)，并且毒性較低，表明TT-1可能作為一種抗腫瘤治療的藥物。
【專利說(shuō)明】抗腫瘤多肽TT-1在制備抗腫瘤藥物中的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種抗腫瘤多肽的及其應(yīng)用，本發(fā)明的 多肽具有抗腫瘤活性。

【背景技術(shù)】
[0002] 抗微生物肽是生物體內(nèi)經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一類具有殺滅或抑制細(xì)菌或病毒的小分子 多肽，具有抗細(xì)菌、抗病毒和抗腫瘤活性?？咕氖且环N新型的抗微生物多肽，帶正電，富含 疏水堿基，能形成兩親性結(jié)構(gòu)。腫瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞高表達(dá)磷脂酰絲氨酸、硫酸乙酰肝素等 陰離子物質(zhì)，使細(xì)胞膜帶負(fù)電，增強(qiáng)其與抗菌肽相互作用，產(chǎn)生對(duì)腫瘤細(xì)胞的膜裂解作用， 使抗菌肽對(duì)腫瘤細(xì)胞有特異的選擇性作用。抗菌肽由于其特殊的抗腫瘤機(jī)制，不易產(chǎn)生耐 藥性，以及對(duì)哺乳動(dòng)物正常細(xì)胞毒性較低等特點(diǎn)，已經(jīng)成為抗腫瘤藥物研發(fā)的一大熱點(diǎn)。
[0003] 蜂毒素（Melittin)是蜂毒的主要成分，具有較強(qiáng)的表面活性，能通過(guò)卵磷脂膜和 混合膜。研究證明，M eIittin抗菌作用明顯、并療關(guān)節(jié)炎、抗腫瘤和心血管疾病、抗電離輻射 以及免疫調(diào)節(jié)的功能；并且對(duì)肝癌細(xì)胞、骨肉瘤細(xì)胞、胃癌細(xì)胞等具有顯著地抗腫瘤活性。
[0004] 目前，多肽的發(fā)展存在三大瓶頸：多肽的生產(chǎn)成本高；毒性較大；多肽對(duì)蛋白酶體 的穩(wěn)定性差。研究表明，可從設(shè)計(jì)上改善原有的多肽結(jié)構(gòu)，保留其活性位點(diǎn)，縮減肽鏈，以減 少多肽的生產(chǎn)成本。在進(jìn)行多肽設(shè)計(jì)的時(shí)候，需要考慮到毒性及穩(wěn)定性等因素，使其與原有 的多肽在毒性及穩(wěn)定性方面保持一致，通過(guò)統(tǒng)籌電荷、疏水性、二級(jí)結(jié)構(gòu)等諸因素，使其更 加低毒1?效穩(wěn)定。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明對(duì)Melittin的部分氨基酸的氨基酸序列進(jìn)行縮短，采用固相化學(xué)合成法 獲得具有較高抗腫瘤活性抗腫瘤多肽TT-1。本發(fā)明多肽TT-1，氨基酸序列如SEQ ID:No. 1 所示，其氨基酸全序列為：賴氨酸-異亮氨酸-賴氨酸-丙氨酸-纈氨酸-亮氨酸-賴氨 酸-纈氨酸-亮氨酸-蘇氨酸-蘇氨酸。其分子量為1213. 5,等電點(diǎn)為10. 3。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn) 表明，TT-I體內(nèi)抑制人甲狀腺癌TT荷瘤鼠腫瘤生長(zhǎng)，表明TT-I可能作為一種抗腫瘤治療 的藥物。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0006] 圖1多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞的體外抑制活性。
[0007] 圖2多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞荷瘤鼠瘤體積的影響。
[0008] 圖3多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞荷瘤鼠瘤重的影響。
[0009] 圖4多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞荷瘤鼠抑瘤率的影響。
[0010] 圖5多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞荷瘤鼠體重的影響。

【具體實(shí)施方式】
[0011] 實(shí)施例1多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞的體外抑制活性
[0012] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的TT細(xì)胞，用含10% FBS的F12K培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為5 X IO4個(gè) /ml，于96孔培養(yǎng)板中加入細(xì)胞懸液100 μ 1，并加入用培養(yǎng)液稀釋的不同濃度ΤΤ-120 μ 1/ 孔（終濃度分別為：〇、1、2、4、8、16、32μ g/ml)，37°C、5% CO2培養(yǎng)48小時(shí)后，吸上清，加入 80 μ 1新鮮培養(yǎng)液，然后每孔加入5mg/ml的MTT 20 μ 1，繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，離心，仔細(xì)吸去上 清，每孔加入150 μ I DMS0,輕輕振蕩以使甲臜完全溶解，在570nm波長(zhǎng)處用酶標(biāo)儀測(cè)吸光 值。細(xì)胞活率按文獻(xiàn)計(jì)算，細(xì)胞活率（％) = (加藥組吸光度平均值/空白對(duì)照組吸光度平 均值）X 100。
[0013] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如附圖1所示，多肽TT-I可以體外顯著抑制TT細(xì)胞的生長(zhǎng)，并呈劑量依 賴關(guān)系。在TT-I濃度為1、2、4、8、16、32μ g/ml時(shí)，細(xì)胞活率分別為65. 2%、63. 1%、47. 8%、 29. 9%、18. 9%、0. 1%，并且加藥組與空白對(duì)照組相比，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（*P〈0. 01)。
[0014] 實(shí)施例2多肽TT-I對(duì)人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞的體內(nèi)抑制活性
[0015] 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人甲狀腺導(dǎo)管癌TT細(xì)胞，生理鹽水稀釋，臺(tái)盼藍(lán)染色后用血球計(jì) 數(shù)板在倒置式顯微鏡下計(jì)數(shù)，活細(xì)胞數(shù)為98%以上，調(diào)整細(xì)胞濃度4X l〇Vml，裸鼠腋下右 側(cè)皮下接種〇. Iml細(xì)胞，待小鼠瘤體積長(zhǎng)至50mm3時(shí)，隨機(jī)分為4組：腫瘤模型組，TT-I低、 中、高劑量治療組，每組6只。TT-I低、中、高三個(gè)劑量組分別為0. 04,0. 2, lmg/kg，每5天 給藥1次,每次注射藥物50 μ 1，腫瘤模型組每次注射等量生理鹽水，給藥方式均為瘤內(nèi)注 射。每天觀察老鼠活動(dòng)情況，每次給藥時(shí)秤老鼠體重并測(cè)量瘤體積，一共給藥4次，末次給 藥4天后，頸椎脫白處死小鼠，剖瘤，稱瘤重，計(jì)算抑瘤率。公式如下：
[0016]

【權(quán)利要求】
1.抗腫瘤多肽ττ-l在制備抗腫瘤藥物中的用途，其氨基酸序列如SEQ ID :No. 1所示。
【文檔編號(hào)】A61K38/08GK104258373SQ201410478733
【公開(kāi)日】2015年1月7日 申請(qǐng)日期:2014年9月17日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月17日
【發(fā)明者】張大奇, 萬(wàn)蘭蘭, 張金男, 劉曉莉, 孫輝 申請(qǐng)人:吉林大學(xué)