生物學(xué)標(biāo)記和對疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷治療的響應(yīng),以及使用方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了治療疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷的方法和試劑盒，以及生物標(biāo)記在評估生物學(xué)活性或疾病狀態(tài)中的應(yīng)用。在一個實(shí)施例中，試劑盒包含生物膜密封劑，如PEG，生物活性劑，如鎂化合物，和用于測量生物標(biāo)記的檢測。在治療前、治療中和治療后測量生物標(biāo)記，并且比較測量結(jié)果以評價治療、治療方案和治療成果。
【專利說明】生物學(xué)標(biāo)記和對疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷治療的 響應(yīng)，以及使用方法
[0001] 本申請是國際申請PCT/US2009/040316,國際申請日2009年4月13日，中國國家 階段申請?zhí)?00980113809. 2,名為"生物學(xué)標(biāo)記和對疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷治 療的響應(yīng)，以及使用方法"的發(fā)明專利申請的分案申請。

【背景技術(shù)】
[0002] 影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的臨床適應(yīng)癥如外傷性腦損傷（TBI)、脊髓損傷（SCI)和中風(fēng) 是工業(yè)化世界死亡率和發(fā)病率的主要因素。例如，每年大約有1百萬個美國人在急診室接 受腦損傷治療。約有5%的TBI患者死亡，而30%的生還者通常會留下中度至重度殘疾，這 會消弱他們重返職場或獨(dú)立生活的能力。在神經(jīng)元損傷之后，很大一部分患者也患有慢性 疼痛病。
[0003] 疼痛通常伴隨著無數(shù)的醫(yī)學(xué)疾病，而且影響了數(shù)百萬的美國人。如美國疼痛基金 會（American Pain Foundation)所報(bào)道的，超過5千萬的美國人遭受慢性疼痛，其中包括 20 %受關(guān)節(jié)病，如關(guān)節(jié)炎侵襲的60歲及以上個體。此外，每年接近有2500萬美國人由于損 傷或外科手術(shù)而遭受急性疼痛。除經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)之外，疼痛對受疾病侵襲個體的生活質(zhì)量還具 有極大的影響，并且是殘疾的最常見因素之一。
[0004] 因而，需要治療疼痛或炎癥的新改良的方法和組合物以減輕這些衰弱的狀態(tài)。另 夕卜，在體組織或體液中生物學(xué)標(biāo)記的檢測可以對有關(guān)神經(jīng)元損傷或血管損傷提供評估，或 者評估個體是否會對特殊的干預(yù)做出響應(yīng)，并因此可以選擇適當(dāng)?shù)闹委煼椒ā?br> [0005] 發(fā)明概述
[0006] 通過提供用于治療與疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷有關(guān)的疾病或者神經(jīng)元 損傷伴隨的病理疾病的新試劑盒和方法，各種實(shí)施例實(shí)現(xiàn)這些需要和其它的需要。具體的 實(shí)施例提供了通過使用生物學(xué)標(biāo)記評估或確定損傷、或評估治療后恢復(fù)、或預(yù)測治療結(jié)果 的方法，以及確定適當(dāng)?shù)闹委燁愋秃椭委熕降姆椒?。一方面，提供了用以處理與疼痛、炎 癥或神經(jīng)元損傷相關(guān)的病理疾病的試劑盒，其包含至少一種生物膜密封劑和至少一種生物 活性劑。另外，試劑盒包括了對生物標(biāo)記的檢測。生物標(biāo)記可以提供損傷的水平和類型，以 及個體是否會對特殊的治療做出響應(yīng)。定期測量生物標(biāo)記可以提供損傷的發(fā)展或消退，以 及改變干預(yù)參數(shù)以改進(jìn)治療形式的機(jī)會。在一個實(shí)施例中，組合物不能形成凝膠。
[0007] 在不同的實(shí)施例中，所述至少一種生物膜密封劑選自聚氧乙烯、聚（亞烷基）二 醇、聚乙二醇或PEG、聚乙烯醇、普朗尼克（pluronics)、泊洛沙姆、甲基纖維素、羧甲基纖維 素鈉、羥乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、葡聚糖、泊洛沙姆P-188及其任意組合。
[0008] 所述至少一種生物活性劑選自至少一種鎂化合物、抗氧化劑、神經(jīng)遞質(zhì)和受體調(diào) 節(jié)劑、消炎藥、抗細(xì)胞凋亡藥劑；促智藥和生長劑；脂質(zhì)形成和運(yùn)輸?shù)恼{(diào)節(jié)劑；血流量調(diào)節(jié) 齊U;電剌激；及其任意組合。
[0009] 在其它實(shí)施例中，所述至少一種生物活性化合物包含至少一種肌苷、地塞米諾 (dexanabinol)、電刺激或磁刺激、CP 101、606、RPR117824、CDllb/CD18 抗體、CD95 阻隔 齊[|、ATL-146e、CM101、利魯唑（Riluzole)、托批酯（Topiramate)、金剛燒胺（Amantadine)、 加環(huán)利定（Gacyclidine)、BAY-38-7271、S-1749、YM872、IL-1、IL-8 和 TNF-a 阻隔劑、 IL-10、DFU、NXY-059、依達(dá)拉奉（Edaravone)、N-叔丁基-a -苯基硝酸靈、谷胱甘肽及其 衍生物、P激酶抑制劑、促紅細(xì)胞生成素、類固醇、抑制素IGF-1、⑶NF、膽堿或⑶P-膽堿、 肌酸、AIT-082、環(huán)孢霉素A、FK-506、二甲胺四環(huán)素、曲安西龍（Triamcinolone)、甲潑尼龍 (Methylprednisolone)或其任意組合。
[0010] 在不同的實(shí)施例中，所述至少一種鎂化合物包含硫酸鎂、氯化鎂、葡萄糖酸鎂、ATP 鎂鹽或其任意組合。
[0011] 另一方面，提供了用以治療與疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷相關(guān)的病理疾 病，或者神經(jīng)元損傷伴隨的病理疾病的方法。該方法包括在治療病理疾病前直接或間接測 量生物標(biāo)記。然后，通過給予其需要的對象治療有效量的至少一種生物膜密封劑和治療有 效量的至少一種含有鎂的生物活性劑來治療病理疾病。生物標(biāo)記接著被再次測量，并且比 較治療前和治療后的測量以評定所述治療。
[0012] 在某些實(shí)施例中，生物學(xué)標(biāo)記評定神經(jīng)元損傷或血管損傷，或者原發(fā)性或繼發(fā)性 神經(jīng)元損傷伴隨的病理疾病的類型、水平或嚴(yán)重性。
[0013] 在其它實(shí)施例中，生物學(xué)標(biāo)記可以提供與手術(shù)或其它介入治療相聯(lián)系的前攝療法 的評定，介入治療影響神經(jīng)元或血管結(jié)構(gòu)或疼痛因素。
[0014] 在某些實(shí)施例中，一種或更多種生物標(biāo)記被使用，其包含離子，如鎂、鈉、鈣、氯化 物、磷酸鹽或鉀，或由受損細(xì)胞釋放的蛋白質(zhì)，包括T、C- T、神經(jīng)絲、膜或細(xì)胞骨架元素，降 解產(chǎn)物或元素，其為細(xì)胞降解過程的部分，失去體內(nèi)穩(wěn)態(tài)的蛋白質(zhì)指示劑或由壞死或細(xì)胞 凋亡導(dǎo)致的細(xì)胞死亡的蛋白質(zhì)指示劑，神經(jīng)元活性的指示劑，其包括神經(jīng)元遞質(zhì)和降解產(chǎn) 物，如谷氨酸和降解產(chǎn)物谷氨酰胺，炎癥反應(yīng)、細(xì)胞或體液免疫應(yīng)答的指示劑，或其任意組 合。
[0015] 另一個實(shí)施例方法包括執(zhí)行第一次測量程序以測量與病理疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo) 記或與治療病理疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記。然后，根據(jù)第一次測量程序的一次或更多次結(jié)果， 通過給予治療有效量的的治療化合物治療病理疾病，治療化合物包含鎂作為所述治療化合 物的至少一種活性成分。在一些實(shí)施例中，用第一次測量程序確定治療的潛在效果，如對治 療中使用的一種或多種活性成分的生物適應(yīng)性。
[0016] 在一些實(shí)施例中，執(zhí)行第二次測量程序以檢測與病理疾病相關(guān)的生物標(biāo)記，并且 用該第二次測量程序的結(jié)果來評價病理疾病的治療。
[0017] 治療病理疾病的又一個實(shí)施例包括：首先通過給予治療有效量的治療化合物治療 病理疾病，治療化合物包含鎂作為所述治療化合物的至少一種活性成分，然后執(zhí)行第一次 測量程序以測量與病理疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記或與治療病理疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記。然后 用第一次測量程序的結(jié)果評價病理疾病的治療。
[0018] 在某些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括：執(zhí)行第二次測量程序以檢測與病理疾病相 關(guān)的生物標(biāo)記，然后用第二次測量程序進(jìn)一步評價病理疾病的治療。在一些實(shí)施例中，該方 法進(jìn)一步包括：根據(jù)第二次測量程序改變病理疾病的治療。
[0019] 發(fā)明詳述
[0020]各個方面提供了新試劑盒和方法，其用于治療與疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損 傷相關(guān)的疾病或神經(jīng)元損傷伴隨的病理疾病。PEG、生物膜密封劑和鎂之間協(xié)同效應(yīng)的發(fā)現(xiàn) 意義重大，因?yàn)樗梢詫?dǎo)致這樣的治療制劑的開發(fā)，所述治療制劑對于治療炎癥、疼痛病和 神經(jīng)元損傷或與神經(jīng)元損傷有關(guān)的病理疾病具有改善的療效。
[0021] 定義
[0022] 為了有助于更好的理解各個實(shí)施例，提供了以下非限制性定義：
[0023] 術(shù)語"治療（treating) "疾病或疾病的"治療（tratment) "指為了減輕疾病征兆 或癥狀實(shí)施一種方案，其可以包括給予患者（人類或其它）一種或多種藥。減輕可以發(fā)生 在疾病征兆或癥狀出現(xiàn)前，也可以發(fā)生在它們出現(xiàn)后。因此，"治療（treating)"或"治療 (treatment)"包括"預(yù)防（preventing)"疾病或疾病的"預(yù)防（prevention)"。此外，"治 療（treating)"或"治療（treatment)"并不要求征兆或癥狀的完全減輕，不要求痊愈，并明 確地包含對病人只有微小效果的方案。
[0024]術(shù)語"對象"包括對其使用實(shí)施例方法和/或試劑盒的活的體系或培養(yǎng)的體系。該 術(shù)語無限制地包括人類。
[0025]術(shù)語"實(shí)踐者"意為對對象實(shí)踐實(shí)施例方法、試劑盒和組合物的人。該術(shù)語無限制 地包括醫(yī)生、其它醫(yī)務(wù)人員和研究人員。
[0026]術(shù)語"神經(jīng)性疼痛"和"神經(jīng)源疼痛（neural origin pain) "指由神經(jīng)系統(tǒng)病理疾 病引發(fā)或引起的疼痛，其無限制地包括慢性或急性損傷產(chǎn)生的病狀。
[0027] 神經(jīng)性疼痛的特點(diǎn)是慢性異常性疼痛和痛覺增敏。因此，術(shù)語"異常性疼痛"指由 平常并不引起疼痛應(yīng)答的刺激造成的疼痛。
[0028]術(shù)語"痛覺增敏"指對正常的疼痛刺激敏感性增強(qiáng)。原發(fā)性痛覺增敏影響損傷的 直接部位。
[0029]術(shù)語"繼發(fā)性痛覺增敏"或"牽涉性疼痛"通常用于這種情況，即當(dāng)敏感作用已延 伸到圍繞損傷的更廣泛的部位。
[0030]術(shù)語"神經(jīng)元損傷"指對中央或周圍神經(jīng)系統(tǒng)元素的損傷。神經(jīng)元損傷可以來自 物理的（包括機(jī)械的、電的或熱的）、缺血的、出血的、化學(xué)的、生物學(xué)的、生物化學(xué)的或血管 的損傷。神經(jīng)元損傷的例子無限制地包括缺血和出血中風(fēng)、脊髓、腦、顱神經(jīng)和周圍神經(jīng)損 傷。
[0031]術(shù)語"生物活性劑"指分子和物理刺激。
[0032] 所有對化學(xué)化合物--無限制地包括生物活性劑、生物膜密封劑和標(biāo)記--的引 用包括這些化學(xué)化合物的所有形式（即，鹽、酯、氫氧化物、乙醇鹽、放射性同位素、顯像探 針等），其中，所述形式具有各化學(xué)化合物的至少部分活性。
[0033]身體疼痛有兩種基本形式：急性的和慢性的。急性疼痛大部分由疾病、炎癥或組織 損傷引起。它由感覺纖維--也被稱為傷害感受神經(jīng)元--的激活作用調(diào)節(jié)。傷害感受性 疼痛通常會在康復(fù)后消失，例如，在外傷性疼痛或手術(shù)后疼痛的情況下。不幸地，在一些個 體中發(fā)生了病理變化，其增加了感覺神經(jīng)元的敏感性。在這些病例中，癥狀性疼痛可以變成 慢性的，并在初始損傷后持續(xù)數(shù)月或者甚至數(shù)年。
[0034]神經(jīng)元損傷是復(fù)雜的臨床狀況，其由于影響損傷嚴(yán)重性并最終影響恢復(fù)過程和程 度的各種直接原因而加重。對中央和/或周圍神經(jīng)系統(tǒng)的組件（component)的原發(fā)性損傷 在本質(zhì)上可以是機(jī)械的、化學(xué)的、生物學(xué)的或電的。在原發(fā)性損傷之后，會發(fā)生一系列的生 物化學(xué)或生理學(xué)事件，其常常導(dǎo)致病理學(xué)變化，而病理學(xué)變化被認(rèn)為是造成不可逆性損傷 發(fā)展的主要原因。這種自體破壞級聯(lián)（autodestructive cascade)被稱為繼發(fā)性損傷，因 為它在創(chuàng)傷事件之后隨著時間而發(fā)展，因而為藥理學(xué)干預(yù)打開了機(jī)會之窗。與持續(xù)進(jìn)行的 組織損傷相聯(lián)系的各種慢性疾病也可能引起神經(jīng)元組件和癥狀性疼痛的繼發(fā)性損傷，持續(xù) 進(jìn)行的組織損傷歸因于例如炎癥反應(yīng)、自體免疫或血管病或血管損傷。
[0035] 在外傷性腦損傷（TBI)病狀和其它神經(jīng)元損傷的繼發(fā)性階段中有至少三大類決 定性的事件。其中之一是對細(xì)胞的膜損傷，所述細(xì)胞設(shè)法幸免于最初沖擊（first impact)。 膜完整性和/或細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)的小變化能消弱跨膜電位、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和ATP生成，導(dǎo)致細(xì)胞 骨架瓦解、線粒體功能紊亂、能量耗竭和自由基生成，從而由或者凋亡機(jī)制或者壞死機(jī)制導(dǎo) 致細(xì)胞死亡。在一些例子中，即將死亡的細(xì)胞可以釋放自由基和分解代謝酶（蛋白酶、肽 酶、胱天蛋白酶），其可以對周圍的細(xì)胞造成損害，并能增加受損細(xì)胞的數(shù)目。不幸地是，神 經(jīng)元細(xì)胞特別易受膜損傷的攻擊，這是因?yàn)樗鼈兊母吣芰啃枨蠛退鼈儶?dú)特的解剖結(jié)構(gòu)，其 獨(dú)特的解剖結(jié)構(gòu)需要并成倍地增加維持有效膜完整性和細(xì)胞內(nèi)（尤其是軸突的）運(yùn)輸?shù)奶?戰(zhàn)性。
[0036] 在神經(jīng)元損傷繼發(fā)性階段，起主要作用的其它事件類型是神經(jīng)遞質(zhì)釋放的爆發(fā)， 根據(jù)機(jī)制普遍地被稱為"興奮性中毒"，在范圍遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過最初損傷直接侵襲部位的部位，"興 奮性中毒"能增加神經(jīng)元對額外損傷的易受損性。例如，細(xì)胞外谷氨酸水平的顯著增加常 常與神經(jīng)元損傷有關(guān)。因?yàn)楣劝彼崾侵袠猩窠?jīng)系統(tǒng)最突出的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)，幾乎所有的 神經(jīng)元都有谷氨酸受體，并會受由過量的細(xì)胞外谷氨酸引發(fā)的中毒事件的影響。興奮性 中毒損傷被認(rèn)為主要由Ca 2+經(jīng)過特定亞型的谷氨酸受體，即N-甲基-D-天冬氨酸鹽受體 (NMDAR)的過量流入引發(fā)。高濃度的細(xì)胞內(nèi)Ca 2+能激活分解代謝酶和自由基的生成，這會 干擾細(xì)胞的修復(fù)機(jī)制或細(xì)胞應(yīng)付額外的挑戰(zhàn)的能力，或者甚至促使細(xì)胞死亡。
[0037] 第三類決定性事件與血管損傷和血腦屏障故障有關(guān)。在TBI和SCI的動物模型中， 血腦屏障在受損后的很多天仍然是中斷的（Schnell等，1999)，使得血漿蛋白質(zhì)外滲，以及 血液和免疫細(xì)胞侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)（CNS)。
[0038] 盡管在腦損傷和其它形式的神經(jīng)元損傷中，炎癥的作用仍然受爭議，但在血腦屏 障和腦血管被修復(fù)前，不能實(shí)現(xiàn)正確地分配營養(yǎng)到神經(jīng)組織中。
[0039] 炎癥是機(jī)體對包括組織壞死組件的疾病的正常保護(hù)性應(yīng)答。組織壞死可以來自物 理的（包括機(jī)械的、電的或熱的）、化學(xué)的、生物學(xué)的或生物化學(xué)的損傷。發(fā)炎組件的臨床狀 況包括：創(chuàng)傷性組織損傷、外科手術(shù)、變性疾病，如關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)病，以及刺激、過敏癥 和自體免疫反應(yīng)。
[0040] 在這種自然"防御"過程中，血流量和毛細(xì)血管通透性的局部增加，導(dǎo)致液體、蛋白 質(zhì)和免疫細(xì)胞在發(fā)炎部位的積聚。這些細(xì)胞中的一部分能釋放炎癥的化學(xué)介質(zhì)，其包括組 胺、細(xì)胞因子、緩激肽和前列腺素，這些化學(xué)介質(zhì)能在發(fā)炎的位置吸引更多的免疫細(xì)胞和/ 或在受侵襲的部位增加疼痛纖維的敏感性。因?yàn)闄C(jī)體具有這種保護(hù)性應(yīng)答，產(chǎn)生了炎癥的 癥狀。這些癥狀無限制地包括：疼痛、腫脹和皮膚發(fā)熱發(fā)紅。炎性應(yīng)答必需被緊密調(diào)節(jié)，否 貝1J，它會導(dǎo)致組織壞死和慢性疼痛的發(fā)展。
[0041] 生物學(xué)標(biāo)記
[0042] 生物學(xué)標(biāo)記（biological marker)或生物標(biāo)記（biomarker)是在身體組織和/或 體液中發(fā)現(xiàn)的，而它們可以包括簡單分子到復(fù)雜結(jié)構(gòu)。例如，生物學(xué)標(biāo)記可以包括：離子、氨 基酸、神經(jīng)遞質(zhì)、糖、脂質(zhì)、碳水化合物、蛋白質(zhì)、肽、酶、細(xì)胞因子、受體、激素、類固醇、基因、 核糖核苷酸等，或其任意組合。其它更具體的生物標(biāo)記包括鎂、鈣、谷氨酸、谷氨酰胺、膽堿、 乙酰膽堿酯酶、T、C- T、神經(jīng)元特異性烯醇酶、泛素和泛素酶，如泛素水解酶、n-乙酰天冬 氨酸、神經(jīng)絲、肌醇、S100B、白細(xì)胞介素、聚合物抗體如PEG抗體。實(shí)質(zhì)上，生物標(biāo)記具備作 為特殊的身體或疾病狀態(tài)的指示劑的特征。也就是說，生物學(xué)標(biāo)記可以是有機(jī)體處于體內(nèi) 穩(wěn)態(tài)還是處于疾病狀態(tài)的狀態(tài)指示劑。例如，生物標(biāo)記能指示神經(jīng)元損傷后繼發(fā)性階段的 進(jìn)展。因此，生物標(biāo)記通常是對個體的組織、細(xì)胞或體液中細(xì)胞的、生物化學(xué)的、生理學(xué)的或 分子的狀態(tài)或者這些參數(shù)的變化的測量。
[0043]除了測量機(jī)體常規(guī)的生物學(xué)過程或發(fā)病過程，生物學(xué)標(biāo)記也是對治療干預(yù)引起的 生理學(xué)或生物學(xué)應(yīng)答的主觀測量。隨著時間定期測量生物標(biāo)記，可以在治療干預(yù)過程中為 評估疾病狀態(tài)情況或疾病狀態(tài)發(fā)展提供生物學(xué)基礎(chǔ)。選擇的生物標(biāo)記結(jié)構(gòu)、活性和/或水 平的變化能指示原發(fā)性或繼發(fā)性損傷的性質(zhì)。這種生物標(biāo)記可以確定損傷的位置、復(fù)雜性 或嚴(yán)重性。生物標(biāo)記也可以評估個體對某些反應(yīng)或治療的感受性。也就是說，適當(dāng)?shù)剡x擇 生物標(biāo)記可以幫助識別對特殊治療表現(xiàn)或不表現(xiàn)預(yù)期反應(yīng)的個體。
[0044]關(guān)于其活性水平的生物標(biāo)記信息也可以用于調(diào)節(jié)治療的一種或多種成分。也就是 說，改變活性成分和賦形劑的濃度、劑量、服用方法（regimen)和傳輸速度以產(chǎn)生某些藥動 學(xué)參數(shù)值等等。在個體基礎(chǔ)上，生物標(biāo)記信息可以幫助調(diào)節(jié)治療成分，或者在臨床試驗(yàn)中， 生物標(biāo)記信息可以提供數(shù)據(jù)以修改群體治療方案。生物標(biāo)記可以提供治療后不同時間點(diǎn)恢 復(fù)程度的主觀測量和可計(jì)量的測量。
[0045] 生物標(biāo)記的檢測和評估可以基于各種顯像技術(shù)、體內(nèi)、體外技術(shù)（如身體組織或 體液取樣和評估各種化學(xué)或生物學(xué)組件或結(jié)構(gòu)），或其各種組合。這些技術(shù)可以直接檢測生 物標(biāo)記，或者可以檢測與生物標(biāo)記互相作用的分子以顯示和/或放大生物標(biāo)記信號。一種 或多種生物標(biāo)記的使用和評估可以進(jìn)一步用于促進(jìn)研發(fā)神經(jīng)元損傷的新治療，如神經(jīng)保護(hù) 治療，類似聚合物溶液中的鎂用于治療脊髓損傷、腦損傷、中風(fēng)或周圍損傷。這些生物標(biāo)記 也可以用于確定前攝治療的基礎(chǔ)。也即，生物學(xué)標(biāo)記可以用于確定治療的基礎(chǔ)，其與可以影 響神經(jīng)元或血管結(jié)構(gòu)、或者疼痛或炎癥減輕的外科或其它介入治療有關(guān)。
[0046] 生物標(biāo)記也可以被分類以便形成連續(xù)統(tǒng)一體（continuum)，用于識別在暴露于試 劑或所述疾病過程之前或期間可以發(fā)生的系列事件（生理的、細(xì)胞的、生化的或分子的）。 此外，一類生物標(biāo)記也可以識別一系列影響藥理學(xué)有效給藥水平和早期應(yīng)答的事件。
[0047] 生物標(biāo)記也可以識別通過暴露于各種病原體已經(jīng)發(fā)生病理改變的靶組織。非靶 (替代的）組織和體液的生物標(biāo)記水平也可以用于估計(jì)靶組織中的生物標(biāo)記水平。具體生 物標(biāo)記及其檢測的敏感性、特異性和可靠性或可預(yù)測性，將部分決定選擇標(biāo)準(zhǔn)。
[0048] 而且，具體標(biāo)記可以在干預(yù)前或干預(yù)過程中被引入機(jī)體以監(jiān)測靶組織。通過監(jiān)測 引入的具體標(biāo)記，或者通過監(jiān)測組織或體液生物標(biāo)記對干預(yù)響應(yīng)，可以評估祀組織的狀況。
[0049]例如，生物標(biāo)記如總T蛋白質(zhì)、P淀粉樣40和42肽的檢測，與一些發(fā)生在阿爾 茨海默?。ˋlzheimer' s disease)的典型神經(jīng)病理學(xué)變化緊密相關(guān)。而前列腺特定抗原 (PSA)被認(rèn)為是前列腺癌的生物標(biāo)記。
[0050] 生物膜密封劑
[0051] 40多年以來，各種分子量的生物膜密封劑已經(jīng)被用作培養(yǎng)基的助劑，這是由于 它們保護(hù)細(xì)胞免于流體-機(jī)械損傷的能力。這些試劑包括：親水性聚合物，如聚氧乙烯、 聚（亞烷基）二醇、聚乙二醇（PEG)、聚乙烯醇；兩性聚合物，如普朗尼克或泊洛沙姆，包 括泊洛沙姆P-188 (也稱為CRL-5861，可從CytRx公司，洛杉磯，CA購買）（Michaels和 Papoutsakis, 1991);以及甲基纖維素（Kuchler等，1960)、羧甲基纖維素鈉、輕乙基淀粉、 聚乙烯批咯燒酮和葡聚糖（Mizrahi 和 Moore, 1970 ;Mizrahi, 1975 ;Mizrahi, 1983)。
[0052] 在器官移植研究中，一些包括羥乙基淀粉（Badet等，2005)和PEG (Faure 等，2002 ;Hauet等，2001)在內(nèi)的生物膜密封劑已經(jīng)表現(xiàn)出有效的冷凍保藏能力。泊洛沙 姆P-188被顯示保護(hù)關(guān)節(jié)細(xì)胞免于膝關(guān)節(jié)機(jī)械損傷后的繼發(fā)性損傷，其會導(dǎo)致急性疼痛和 炎癥，并可能發(fā)展成更慢性的疾病，被稱為骨關(guān)節(jié)炎（Phillips和Haut，2004)。泊洛沙姆 P-188和中性葡聚糖保護(hù)了肌細(xì)胞免于電穿孔或熱驅(qū)動細(xì)胞膜通透化（Lee等，1992)。PEG 的直接應(yīng)用被顯示在解剖學(xué)上和功能上再接合橫切或壓碎的軸突（Bittner等，1986)、周 圍神經(jīng)（^Donaldson 等，2002)和體外（Lore 等，1999 ;Shi 等，1999 ;Shi 和 Borgens, 1999; Shi 和 Borgens, 2000 ;Luo 等，2002)或體內(nèi)（Borgens 等，2002)的脊髓制劑。PEG 或泊 洛沙姆P-188的靜脈或皮下施用改善了豚鼠實(shí)驗(yàn)性脊髓挫傷后皮膚軀干肌肉（cutaneous trunchi muscle)反射性應(yīng)答（Borgens 和 Bohnert, 2001 ;Borgens 等，2004)，并提高了狗 自然發(fā)生的脊髓損傷模型的功能恢復(fù)（Laverty等，2004)。1，400-20000Da的各種分子量 的PEG--具有線性的或多臂結(jié)構(gòu)--被顯示改善了組織損傷后的恢復(fù)（Hauet等，2001 ; DetlofT 等，2005 ;Shi 等，1999)。
[0053] 在下列不同運(yùn)輸模式中，生物膜密封劑可以是有效的，不同的運(yùn)輸模式包括：局部 或延長的細(xì)胞暴露、直接和短期的組織或器官暴露或全身給藥。生物膜融合劑的有效濃度 可以根據(jù)運(yùn)輸?shù)哪康暮?或模式而變化。例如，約〇. 05%的濃度在組織培養(yǎng)應(yīng)用中是有效 的（Michaels和Papoutsakis, 1991)，而約30%到約50%的濃度對器官保存和動物體內(nèi)注 射是有效的（Hauet 等，2001 ;Shi 等，1999 ;Borgens 和 Bohnert, 2001 ;Borgens 等，2004)。
[0054] 生物活性劑
[0055] 如上所討論的，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了生物膜密封劑和鎂化合物的組合對治療神經(jīng) 元損傷和疼痛病是有用的。因此，在本發(fā)明的一個實(shí)施例中，至少一種生物活性劑包含鎂化 合物。鎂在很多各種細(xì)胞功能中具有重要的作用。例如，鎂是醣酵解和氧化磷酸化--其 支持細(xì)胞中的能量產(chǎn)生和能量消耗反應(yīng)--所必須的。蛋白質(zhì)合成以及膜結(jié)構(gòu)和功能也是 鎂依賴性的。鎂的水平將會影響神經(jīng)遞質(zhì)釋放，其包括谷氨酸和乙酰膽堿釋放。它還調(diào)節(jié) 鈣轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性以及非-甲基-D-天冬氨酸鹽（NMDA)谷氨酸受體的開放（opening)。已 知鎂具有抗氧化劑、抗細(xì)胞凋亡作用和調(diào)整脂質(zhì)形成和運(yùn)輸。除了它的細(xì)胞作用，鎂還能調(diào) 整血流量和水腫發(fā)展調(diào)節(jié)中涉及的生理功能。
[0056] 在過去十年中，許多研究已經(jīng)報(bào)道了在動物模型和臨床環(huán)境（clinical setting) 下，腦游離鎂水平隨TBI而下降。已經(jīng)在各種TBI動物模型，包括液壓模型（Vink等，1991; Headrick 等，1994)、病灶影響模型（focal impact model) (Suzuki 等，1997)、以及腦損傷 的更多擴(kuò)散模型（Heath和Vink, 1996 ;Smith等，1998)中觀察到了 40% -60%腦游離鎂水 平的下降。此外，在嚙齒目動物液壓TBI模型中，在腦游離鎂水平變化和能量勢（energetic potential)(磷酸化勢）以及功能的（運(yùn)動）結(jié)果之間建立了線性相關(guān)（在Vink和 Cernak，2000中綜述的）。在實(shí)驗(yàn)性脊髓損傷中也報(bào)道了鎂水平的下降（Vink等，1989)。
[0057] 在TBI患者中，這種生物標(biāo)記，即鎂水平和恢復(fù)水平之間也建立了正相關(guān)（Mendez 等，2005)。TBI患者以及遭受急性缺血和/或腦血管事件的人類更容易患一種被稱為低鎂 血癥的疾病，其中游離鎂的可用性被削弱（Polderman等，2000)。低鎂血癥通常也與需要特 別護(hù)理組照顧的患者的死亡率增加有關(guān)系（Chernow等，1989 ;Rubeiz等，1993)。
[0058] 在CNS外傷發(fā)生后數(shù)分鐘到數(shù)小時開始的鎂補(bǔ)充在TBI動物模型（Heath和 Vink, 1999 ;Esen 等，2003 ;Vink 等，2003 ;Feng 等，2004 和 Turner 等，2004)、脊髓損傷動物 模型（Suzer 等，1999 ;Kaptanoglu 等，2003)和中風(fēng)動物模型（Yang 等，2000 ;Westermaier 等，2003和2005)中表現(xiàn)出神經(jīng)保護(hù)的作用。
[0059] 直到中風(fēng)發(fā)生后12小時靜脈施用硫酸鎂的臨床評價在包括2589名患者的多中心 試驗(yàn)中并沒有表現(xiàn)出顯著的改善（Muir等，2004)。已經(jīng)開始了繼續(xù)研究，以察看更早干預(yù) 的可能作用，其中會在中風(fēng)發(fā)生2小時內(nèi)施用硫酸鎂（Saver等，2004)。在華盛頓大學(xué)（西 雅圖）1999年開始的另一臨床試驗(yàn)一直在評價對TBI患者的硫酸鎂療法，而該試驗(yàn)中的初 步數(shù)據(jù)也是否定的。
[0060] 鎂補(bǔ)充在動物和人類中也已經(jīng)被廣泛地研究，因?yàn)樗袦p輕急性疼痛和慢性疼 痛的能力。然而，臨床試驗(yàn)已經(jīng)報(bào)道了混合的結(jié)果，所述臨床試驗(yàn)評價鎂（單獨(dú)的或組合 的）在減輕與各種外科手術(shù)（Bolcal 等，2005 ;Apan 等，2004 ;Bathia 等，2004 ;McCartney 等，2004)、頭痛和急性偏頭痛發(fā)作（Cete 等，2005 ;Corbo 等，2001 ;Bigal et al，2002)、周 圍神經(jīng)病變（Brill等，2002 ;Felsby等，1996)、癌癥（Crosby等，2000)、原發(fā)性纖維肌痛綜 合癥（Moulin, 2001 ;Russel等，1995)和慢性肢痛（Tramer和Glynn, 2002)有關(guān)的疼痛中的 功效。另外，鎂的止痛效應(yīng)看起來可能是短期的，如4小時或更短（Crosby等，2000)。鎂也 可引起副作用，如臉紅和疼痛，這會減小鎂的治療窗（Tramer和Glynn, 2002)。通過使用各 種鹽，包括硫酸鎂、氯化物、葡萄糖酸鹽和鎂-ATP，可以實(shí)現(xiàn)鎂補(bǔ)充療法，這些鹽在CNS損傷 動物模型中產(chǎn)生相似的神經(jīng)保護(hù)作用（McIntosh等，1989 ;Izumi等，1991 ;Hoane等，2003 ; Turner 等，2004 ;在 Vink 和 McIntosh, 1990 中綜述）。
[0061] 本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)施用PEG或單獨(dú)施用鎂對腦損傷后認(rèn)知功能的喪失沒有 作用，然而，在同時用PEG和鎂方案的動物中，認(rèn)知功能，或者更精確地說認(rèn)識新的空間任 務(wù)的能力，得到了超過30 %的改善。在SCI動物模型中，PEG和鎂聯(lián)合治療也明顯比單獨(dú)用 任意成分治療更有效，聯(lián)合治療減小了一半的損害范圍、改善了運(yùn)動恢復(fù)并減少了神經(jīng)性 疼痛的發(fā)生。在急性組織炎癥模型中，聯(lián)合的PEG和鎂方案在減輕癥狀性疼痛中也比單獨(dú) 的PEG或鎂更有效。PEG、生物膜密封劑和鎂之間協(xié)同效應(yīng)的發(fā)現(xiàn)意義重大，因?yàn)樗梢詫?dǎo) 致這樣的治療制劑的開發(fā)，所述治療制劑對于治療神經(jīng)元外傷、炎癥和疼痛病具有改善的 療效。
[0062] 這些結(jié)果表明，生物膜密封劑，例如PEG，也可以加強(qiáng)其它治療劑的有利作用。在不 同的實(shí)施例中，這樣的生物活性劑包括：神經(jīng)遞質(zhì)和受體調(diào)節(jié)劑、消炎藥、抗氧化劑、抗細(xì)胞 凋亡藥劑、促智藥和生長劑；脂質(zhì)形成和運(yùn)輸?shù)恼{(diào)節(jié)劑、電剌激、血流量調(diào)節(jié)劑及其任意組 合。
[0063] 合適的抗氧化劑的例子無限制地包括：自由基清除劑和蟄合劑酶、輔酶、自旋捕捉 齊II、離子和金屬螯合劑、脂質(zhì)過氧化抑制劑，如類黃酮（flavinoids)、N_叔丁基-a -苯基硝 酸靈、NXY-059、依達(dá)拉奉（Edaravone)、谷胱甘肽及其衍生物、及其任意組合。
[0064] 合適的消炎藥的例子無限制地包括：類固醇，如甲基脫氫皮質(zhì)甾醇、曲安西龍 (Triamcinolone)、炎性細(xì)胞因子調(diào)節(jié)劑，如IL-10、IL-l、IL-8、TNF-a及其受體、COX抑制 齊U，如DFU及免疫細(xì)胞功能調(diào)節(jié)劑，如CDllb/CD18抗體。
[0065] 合適的神經(jīng)遞質(zhì)和受體調(diào)節(jié)劑的例子無限制地包括：谷氨酸受體調(diào)節(jié)劑、大麻素 (cannabinoid)受體調(diào)節(jié)劑及其任意組合。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會理解受體調(diào)節(jié)劑之一 是對象機(jī)體自然發(fā)生的配體。例如，谷氨酸受體調(diào)節(jié)劑包含谷氨酸。
[0066] 在另一個實(shí)施例中，至少一種生物活性劑是谷氨酸傳輸調(diào)節(jié)劑，如 (IS, 2S) -1- (4-羥苯基）-2- (4-羥基-4-苯基哌啶子基）-1-丙醇（也稱為CP-101，606)、利 魯唑（Rilutek?)、托吡酯、金剛烷胺、加環(huán)利定、BAY-38-7271、S-1749、YM872 和 RPR117824。
[0067] 在另一個實(shí)施例中，至少一種生物活性劑是大麻類受體調(diào)節(jié)劑，如地塞米諾（法 莫斯公司，Pharmos Corporation,愛生林，Iselin, NJ, USA)。
[0068] 抗細(xì)胞凋亡藥劑無限制地包括：前細(xì)胞調(diào)亡信號抑制劑（例如，胱天蛋白酶、蛋白 酶、激酶、死亡受體，如CD-95,細(xì)胞色素C釋放調(diào)節(jié)劑、線粒體孔開放和膨脹抑制劑）；細(xì)胞 循環(huán)調(diào)節(jié)劑；抗-細(xì)胞調(diào)亡化合物（例如，B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2 (bcl-2));免疫親和 素包括：環(huán)孢霉素A、二甲胺四環(huán)素和P激酶調(diào)節(jié)劑及其任意組合。合適的P通路調(diào)節(jié) 劑非限制性的例子包括：Cethrin，其是改良的細(xì)菌C3胞外酶（可從生物軸突治療公司， BioAxone Therapeutics, Inc.，圣勞倫，魁北克，加拿大購買）和六氫化-1-(5-異喹啉基 磺酰4-二氮雜卓（也稱為法舒地爾（Fasudil)，可從朝日凱斯公司，Asahi Kasei Corp.，日本東京購買）。
[0069] 促智藥和生長劑無限制地包括：生長因子；肌苷、肌酸、膽堿、⑶P-膽堿、IGF、 ⑶NF、AIT-082、促紅細(xì)胞生成素、藤霉素（Fujimycin) (IUPAC 命名[3S-[3R*[E(1S*，3S*，4S* )]，4S*，5R*，8S*，9E，12R*，14R*，15S*，16R*，18S*，19S*，26aR*]]-5,6,8, 11，12, 13, 14, 15, 16, 17 ，18, 19, 24, 25, 26, 26a-十六氫化-5, 19-二羥基-3- [2- (4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基）-1-甲 基乙烯基]-14, 16-二甲氧基-4, 10, 12, 18-四甲基-8-(2-丙烯基）-15, 19-環(huán)氧-3H-吡啶 并[2, 1-c] [1，4]嗯氮雜環(huán)二十三烯-1，7, 20, 21 (4H，23H)-四酮一水化物，也稱為FK-506， 及其任意組合。
[0070] 合適的脂質(zhì)形成、儲存和釋放通路調(diào)節(jié)劑的非限制性例子是阿樸脂蛋白；抑制素； 及其任意組合。
[0071] 合適的血流量調(diào)節(jié)劑的非限制性例子是腺苷受體調(diào)節(jié)劑，如ATL_146e和調(diào)節(jié)新 血管形成的試劑，如CMlOl。
[0072] 在又一實(shí)施例中，至少一種生物活性劑是電刺激或磁刺激。電刺激或磁刺激可以 從鄰近病理疾病（例如，外傷）的部位輸送。例如，如果病理疾病是C-6水平的脊髓損傷， 電刺激或磁刺激可以在創(chuàng)傷部位的上一節(jié)和下一節(jié)輸送（即C-5和C-7)。
[0073] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會理解存在輸送電刺激或磁刺激的多個來源。在一個實(shí)施 例中，來源是振蕩場刺激（OFS)，例如在Shapiro, J. Neurosurg. Spine, 2:3-10(2005)中所 述，在此將其全部內(nèi)容以引用的方式并入本發(fā)明。簡單地說，OFS外殼可以用已知的對人類 操作安全的材料制成，例如，氟聚合物和硅酮密封劑。殼內(nèi)部是電源組件、計(jì)時/開關(guān)組件、 電流調(diào)節(jié)組件和失效安全保護(hù)裝置。電源組件為包含一個具有2400毫安/小時額定功率 的單個3. 6伏有機(jī)鋰電池的裝置提供直流電源。計(jì)時/開關(guān)組件包括互補(bǔ)金屬氧化物半導(dǎo) 體14級二進(jìn)制紋波計(jì)數(shù)器裝置，其具有一個單刀雙擲模擬開關(guān)和裝載的每隔15分鐘計(jì)時 的振蕩器。失效安全保護(hù)半導(dǎo)體芯片被編程，以在電源低于2. 6伏、不能震蕩、或者有預(yù)示 內(nèi)部短路的電流變化的情況下關(guān)閉OFS。電流調(diào)節(jié)可以由另外的為每對電極輸送200微安 總共600微安電流的半導(dǎo)體裝置設(shè)置進(jìn)行調(diào)節(jié)。電極可以由標(biāo)準(zhǔn)起搏器電纜和具有4. 72 平方毫米表面積的鉬/銥端頭制成。磁體控制的簧片開關(guān)可以用于開啟或關(guān)閉該裝置。當(dāng) 磁體在開關(guān)上時，該裝置被關(guān)閉。當(dāng)該單元被開啟時，其為每一電極輸送500-600微伏/毫 米的磁場和42. 4微安/平方毫米的電流密度。
[0074] 因此，在一個實(shí)施例中，電刺激或磁刺激的總電流可以在約400微安到約700微安 之間、或者約450微安到約650微安之間、或者約500微安到約600微安之間。電刺激或磁 刺激的電流密度可以在約30微安/平方毫米到約50微安/平方毫米之間、約40微安/平 方毫米到約45微安/平方毫米之間、或者約43微安/平方毫米。
[0075] 在另一個實(shí)施例中，經(jīng)皮神經(jīng)電刺激（TENS)可被用作所述至少一種生物活性劑。 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會理解，TENS的一個優(yōu)點(diǎn)在于它是非入侵性的，并且提供了 TENS指 南，例如，在Resende等，Eur. J. Pharmacol. 504:217-222 (2004)中，在此將其全部內(nèi)容以引 用的方式并入本發(fā)明。實(shí)踐者可以很方便地使用市場上有售的裝備，例如，Neurodyn III設(shè) 備（IBRAMED,巴西）。
[0076] 如果TENS被選為所選的至少一種生物活性劑，在不同的實(shí)施例中，電刺激可以以 約4赫茲到約130赫茲之間的頻率被釋放，其中，單個電刺激持續(xù)時間在約60秒到約200 秒之間，或者在約100秒到約160秒之間，或者在約125秒到約135秒之間。
[0077] 因此，聯(lián)合治療--其包括給予生物膜密封劑，例如，以上公開的一種聚合物，和 至少一種生物活性劑，例如，鎂化合物--在減小損害范圍、提高功能恢復(fù)和減輕神經(jīng)元外 傷后的慢性痛，以及減輕與組織炎癥相關(guān)的急性疼痛方面具有積極效應(yīng)和協(xié)同效應(yīng)。
[0078] 因此，一方面，藥物組合物包括至少一種生物膜密封劑和至少一種生物活性劑。如 上所討論的，在一個實(shí)施例中，所述至少一種活性劑包含至少一種鎂化合物。
[0079] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無疑會認(rèn)識到，至少一種鎂化合物可以僅僅是任意提供鎂 離子源的分子，例如，鎂鹽。在優(yōu)選的實(shí)施例中，鎂鹽是無毒的。所述至少一種鎂化合物合 適的非限制性的例子包括：硫酸鎂、氯化鎂、葡萄糖酸鎂、ATP鎂鹽及其任意組合。
[0080] 治療制劑
[0081] 通過混合所述至少一種生物膜密封劑和所述至少一種生物活性劑與可選的生 理上可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，可以制備包含實(shí)施例藥物組合物的治療制劑（參 見，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition(雷明頓藥物科學(xué)第 16 版），Osol, A.編（1980))，并以凍干制劑或水溶劑的形式儲存。所用劑量和濃度的可接受的 載體、賦形劑或穩(wěn)定劑對受體無毒，并且包括緩沖劑，如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機(jī)酸；抗 氧化劑，包括抗壞血酸和蛋氨酸；防腐劑（如十八烷基二甲基芐基氯化銨；氯化己烷雙銨； 苯扎氯銨、芐索氯銨；苯基、丁基或芐基醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如甲基或丙基對羥基苯 甲酸酯；兒茶酚；雷瑣芬；環(huán)己醇；3-戊醇；和m-甲酚）；低分子量（約少于10個殘基）多 肽；蛋白質(zhì)，如血清白蛋白、凝膠或免疫球蛋白；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺酸、 組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和包括葡萄糖、甘露糖或糊精的其它碳水化合物；螯 合劑，如EDTA ;糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽反荷離子，如鈉；和/或金屬絡(luò) 合物（例如，鋅-蛋白質(zhì)絡(luò)合物）。
[0082]本文的制劑也可以含有不止一種正在治療的特定適應(yīng)癥所必需的活性化合物，優(yōu) 選地那些具有互補(bǔ)活性的、彼此又不會產(chǎn)生不利作用的活性化合物。這樣的分子適宜以對 預(yù)期目的有效的量組合存在。
[0083]在膠體給藥系統(tǒng)（例如，脂質(zhì)體、白蛋白微球體、微乳劑、納米粒和納米膠囊）或 微乳劑中，所述至少一種生物活性劑和/或所述至少一種生物膜密封劑也可以被俘獲到 通過例如凝聚技術(shù)或界面聚合制備的微膠囊，分別例如，羥甲基纖維素或凝膠-微膠囊和 聚_(異丁烯酸甲酯）微膠囊中。雷明頓藥物科學(xué)第16版0sol，A.編（1980)中公開了這 種技術(shù)。
[0084] 持續(xù)釋放制劑也可以被制備。合適的持續(xù)釋放制劑的例子包括含有至少一種生物 膜密封劑和/或至少一種生物活性劑的固體聚合物的半透性基質(zhì)，基質(zhì)的形式是成形的制 品，例如，膜或微膠囊。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子無限制地包括：聚酯、水凝膠（例如，聚（2-羥 乙基-異丁烯酸）或聚（乙烯醇））、聚交酯（見，例如，美國專利號3, 773, 919)、L-谷胺酸 和y乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚合 物，如LUPRON DEPOT?(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林（leuprolide acetate)組 成的可注射微球體）和聚-D-(-)-3-羥丁酸。聚合物，如乙烯-乙酸乙烯和乳酸-乙醇酸 使分子的釋放能夠超過1〇〇天。
[0085]本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無疑會理解所述至少一種生物膜密封劑可以被包含到半 透性基質(zhì)中，或者作為半透性基質(zhì)使用。在該實(shí)施例中，所述至少一種生物膜密封劑和所述 至少一種生物活性劑隨著半透性基質(zhì)降解而被釋放。
[0086]此外，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會認(rèn)識到所述至少一種生物膜密封劑和/或所述至 少一種生物活性劑可以被植入到對象中，例如以泵或庫的形式。合適的庫植入物的非限 制性設(shè)計(jì)在2006年4月13日提出的共同未決美國申請?zhí)?1/403,373,發(fā)明名稱為Drug Depot Implant Designs And Methods Of Implantation (藥庫植入物設(shè)計(jì)和植入方法） 中，有詳細(xì)的討論。
[0087]在另一個實(shí)施例中，所述至少一種生物膜密封劑和/或所述至少一種生物試劑可 以通過位于或鄰近病理疾病，例如神經(jīng)元損傷部位的導(dǎo)管局部給予。在該實(shí)施例中，導(dǎo)管具 有一個近端和一個遠(yuǎn)端，近端有孔以原位輸送所述至少一種生物膜密封劑和/或所述至少 一種生物試劑，遠(yuǎn)端與藥物輸送泵是流體連接的。例如，導(dǎo)管近端在病理疾病部位10厘米 范圍內(nèi)輸送所述至少一種生物膜密封劑和/或所述至少一種生物試劑，更具體而言，在病 理疾病部位5厘米范圍內(nèi)，而且，甚至更具體而言，在病理疾病部位1厘米范圍內(nèi)。導(dǎo)管可 以通過最小入侵程序（minimally invasive procedure)被安置，例如，通過進(jìn)入到鄰近病 理疾病部位的血管或供給血液到病理疾病部位。
[0088] 認(rèn)識到所述至少一種生物膜密封劑和所述至少一種生物活性劑可以彼此獨(dú)立地 被輸送，這應(yīng)該屬于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員的專業(yè)知識范圍。在一個非限制性的例子中，所述 至少一種生物膜密封劑可以通過肌肉注射輸送，而所述至少一種生物活性劑通過植入物輸 送。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員無疑會認(rèn)識到，很多組合是可能的。
[0089] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會進(jìn)一步認(rèn)識到，在一些情況下，分別運(yùn)載和儲存所述至 少一種生物膜密封劑和所述至少一種生物活性劑，以及在期望的時間預(yù)先混合這些化合 物，例如，給藥前一小時，或者，甚至再沒有預(yù)先混合的情況下給予這些化合物是有利的。因 此，另一方面，實(shí)施例試劑盒包含至少一種生物膜密封劑、至少一種生物活性劑和生物標(biāo)記 的檢測。在本發(fā)明一個實(shí)施例中，由生物膜密封劑和生物活性劑形成的組合物不能形成凝 膠。
[0090] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會進(jìn)一步認(rèn)識到，試劑盒為實(shí)踐者在選擇至少一種生物膜 試劑和至少一種生物活性劑的比例中提供有利的靈活性。
[0091] 在另一方面，提供了治療病理疾病的方法，該方法包括測量與病理疾病相關(guān)的生 物標(biāo)記、給其需要的對象輸送治療有效量的至少一種生物膜密封劑和治療有效量的至少一 種生物活性劑、隨后再次測量生物標(biāo)記，然后比較測量程序的結(jié)果以評估所述治療。在不同 的實(shí)施例中，病理疾病選自由神經(jīng)元損傷、組織損傷、外科手術(shù)干預(yù)、炎癥及其任意組合。
[0092] 合適的病理疾病的例子無限制地包括：代謝性神經(jīng)病，如糖尿病性神經(jīng)病和酒精 性神經(jīng)病；帶狀皰疹后神經(jīng)痛；中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷，如中風(fēng)、創(chuàng)傷性腦、脊髓或馬尾神經(jīng)損 傷；源自機(jī)械或生化的神經(jīng)元損傷的疼痛，如腕管綜合征、幻肢痛和伴隨退化性疾病，如多 發(fā)性硬化癥、關(guān)節(jié)炎和其它關(guān)節(jié)病的癥狀性疼痛；源自外科手術(shù)和其它侵入性干預(yù)的持續(xù) 癥狀性疼痛；以及源自周圍神經(jīng)元或非神經(jīng)元組織損傷的慢性痛。
[0093]通過靜脈給藥、肌肉給藥、鞘內(nèi)給藥、皮下給藥、硬膜外給藥、關(guān)節(jié)內(nèi)給藥、腸胃外 投藥、直接應(yīng)用到病理疾病部位或其鄰近部位、及其任意組合，治療有效量的至少一種生物 膜密封劑和治療有效量的至少一種生物活性劑可以彼此獨(dú)立地被輸送。單個治療開始可以 間隔幾個小時，例如，達(dá)到約24小時，或者更優(yōu)選地，達(dá)到約16小時，或者更優(yōu)選地，達(dá)到 8小時，或甚至更優(yōu)選地，達(dá)到4小時。因此，所述至少一種生物膜密封劑和所述至少一種 生物活性劑可以從不同的來源和/或通過不同的方法被輸送，或者它們可以在輸送前被混 合。
[0094]本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員會進(jìn)一步認(rèn)識到，某一侵入程序，例如，腦或脊髓手術(shù)，給 對象留下神經(jīng)元損傷。因此，在本發(fā)明一個實(shí)施例中，所述至少一種生物膜密封劑和/或所 述至少一種生物活性劑在引發(fā)病理疾病發(fā)生事件之前被輸送給對象。在一個非限制性的例 子中，該事件是腦外科手術(shù)，并且該病理疾病是CNS神經(jīng)元損傷。
[0095] 生物標(biāo)記和治療干預(yù)
[0096] 可以通過首先識別與具體疾病相關(guān)的特定生物標(biāo)記執(zhí)行治療病理疾病的程序來。 生物標(biāo)記然后被測量和量化。進(jìn)行治療干預(yù)，然后再次量化識別的生物學(xué)標(biāo)記以確定病情 惡化或恢復(fù)狀態(tài)。比較干預(yù)前和治療后生物標(biāo)記的水平。治療干預(yù)可以包括通過腸胃外投 藥應(yīng)用聚合物溶液中的鎂，其中，鎂是以鹽的形式，該鹽包含硫酸鎂、氯化鎂、葡萄糖酸鎂或 ATP鎂鹽中的一種或多種。
[0097] 生物標(biāo)記可以從血液、腦脊髓液、細(xì)胞間液、細(xì)胞或組織樣本中的一種或多種中檢 測。組織樣本可以包含神經(jīng)元組織或其它適當(dāng)?shù)纳眢w組織，其提供與特定病理疾病相關(guān)的 選擇的生物標(biāo)記。
[0098] 在一些情形中，評估靶組織的特定生物標(biāo)記可以被引入到機(jī)體中，因而提供用外 源物質(zhì)監(jiān)測病理疾病的途徑。
[0099] 治療干預(yù)前生物標(biāo)記的測量是第一次測量程序，而第二次測量程序包括檢測生物 標(biāo)記或者與生物標(biāo)記相互作用的分子的結(jié)構(gòu)、活性或水平的至少一種。比較第一和第二次 測量程序，并且可以從數(shù)量或質(zhì)量上評估生物標(biāo)記，因而提供了由干預(yù)引起的病理疾病中 有效性和變化的差分測量。在干預(yù)后繼續(xù)執(zhí)行的生物標(biāo)記進(jìn)一步的測量程序，會提供另外 的時間關(guān)系測量，其會得出病理疾病惡化或消退?？蛇x地，可以比較患者中生物標(biāo)記的水平 與體內(nèi)穩(wěn)態(tài)或病理疾病指示劑的參考標(biāo)準(zhǔn)值。
[0100] 根據(jù)生物標(biāo)記信息，可以改變治療或干預(yù)以提高對病理疾病的處理。給予治療有 效量的治療化合物，例如，鎂鹽，并且在這樣的干預(yù)前和后評估生物標(biāo)記。
[0101] 試劑盒可以包括治療有效量的治療化合物，例如，鎂、聚合物或其組合，以及用于 測量與病理疾病相關(guān)的特定生物標(biāo)記的檢測。此外，一些試劑盒除了鎂以外，還可以包括另 外的活性成分以促進(jìn)干預(yù)的治療有效性。
[0102] 識別并選擇一種或多種生物標(biāo)記，可以用行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)檢測程序測量生物標(biāo)記。檢測 程序可以是試劑盒用于測定生物標(biāo)記的一部分。
[0103] 舉例來說，患者可以表現(xiàn)出病理疾病，如疼痛、炎癥、神經(jīng)元損傷或血管損傷的癥 狀，或已知受其折磨的其它方面。當(dāng)考慮用公開的新組合物治療時，但在給予新的組合物之 前，收集體液或組織樣本并執(zhí)行第一次測量程序以測量一種或多種與病理疾病相關(guān)的生物 標(biāo)記。第一次測量執(zhí)行的具體程序可以依據(jù)正要被測量的生物標(biāo)記的類型。例如，第一次 測量程序可以包括測量的生物標(biāo)記的放大步驟，如DNA或RNA擴(kuò)增、或使用連接試劑，如抗 體、底物和信號分子，或者與特殊顯像技術(shù)連接的放大步驟，如核磁共振或磁共振波譜。或 者，測量程序可以包括給予患者外源生物標(biāo)記，其隨后被測量。例如，當(dāng)使用正電子放射斷 層造影術(shù)和其它顯像技術(shù)時，給予與生物標(biāo)記相互作用的分子，例如，底物、配體或抗體，用 于揭示與病理疾病相關(guān)的生物標(biāo)記的存在和水平。
[0104] 測量的生物標(biāo)記與即將治療的病理疾病理論上相關(guān)。在優(yōu)選的實(shí)施例中，例如，病 理疾病可以是神經(jīng)元疾病，并且正被測量的生物標(biāo)記可以在原發(fā)性或繼發(fā)性損傷時或在恢 復(fù)期間通過損傷的神經(jīng)元組織釋放。一種或多種生物標(biāo)記可以包括：鎂、鈣、谷氨酸、谷氨 酰胺、膽堿、乙酰膽堿酯酶、T、C- T、神經(jīng)元特異性烯醇酶、泛素和泛素酶，如泛素水解酶、 n-乙酰天冬氨酸、抗氧化分子或酶，神經(jīng)絲、肌醇、S100B、白細(xì)胞介素或聚合物抗體，如PEG 抗體。在其它實(shí)施例中，生物標(biāo)記可以是離子、氨基酸、糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、肽、受體、神經(jīng)遞 質(zhì)、基因或核糖核苷酸中的一種或多種。根據(jù)生物標(biāo)記預(yù)測病理疾病類型的能力、治療方 案、或者會對治療產(chǎn)生預(yù)期響應(yīng)的患者，選擇一種或多種生物標(biāo)記。例如，如果治療包括給 予包含鎂和PEG的組合物用于治療中度或重度神經(jīng)元損傷，生物標(biāo)記可以包括由損害的神 經(jīng)元組織釋放的分子如神經(jīng)絲以及生物體液里的鎂的治療前水平以確認(rèn)神經(jīng)元損傷的嚴(yán) 重性?？蛇x地，可以加入治療前水平的PEG抗體，以確?；颊卟粚EG過敏。這些生物標(biāo)記 是根據(jù)動物和人類研究選擇的，在這些研究中，生物標(biāo)記具體的治療前水平與積極治療相 關(guān)性恢復(fù)相關(guān)。
[0105] 在治療前和治療后評價的一種或多種生物標(biāo)記可以是不同的。例如，為了評估治 療后的恢復(fù)，可以評估神經(jīng)元損害指示劑如神經(jīng)絲和鎂水平，因?yàn)槟菚r血清PEG抗體的測 量可能是不相關(guān)的?？梢栽诮o予新的組合物幾分鐘到幾小時后執(zhí)行治療后評估，以確定是 否需要服用額外的新組合物，或者，是否應(yīng)該改變劑量（即，更高或更低的劑量）。可以在給 予新的組合物幾小時到幾周或幾月后執(zhí)行治療后評估，以評估神經(jīng)元損傷恢復(fù)和確定最佳 康復(fù)策略。
[0106] 生物學(xué)標(biāo)記的測量可以是直接的，例如當(dāng)檢測生物標(biāo)記的結(jié)構(gòu)、活性或水平時；或 者可以是間接的，例如通過檢測與生物標(biāo)記相互作用的分子。顯像技術(shù)，如核磁共振波譜和 核磁共振顯像技術(shù)可以直接顯示某些分子和離子，然而，其它顯像技術(shù)，如正電子放射斷層 造影術(shù)和大部分體外技術(shù)可以依靠與生物標(biāo)記相互作用的分子，例如底物、配體或抗體來 揭示與病理疾病相關(guān)的生物標(biāo)記的存在和水平。優(yōu)選的測量依賴于易于使用和快速體外檢 測的測驗(yàn)，如用于孕檢的測驗(yàn)。直接和間接的生物標(biāo)記測量通常都會包括從患者中提取體 液或組織樣本。例如，可以從患者中獲得血液、腦脊髓液、細(xì)胞間液、細(xì)胞或組織樣本中的一 種或多種，然后分析它們以檢測生物標(biāo)記。在具體的實(shí)施例中，組織樣本可以從脊髓中提 取，或者可以是血清樣本，它們隨后被分析以檢測需要的生物標(biāo)記。舉例來說，可以在體液 或組織樣本上執(zhí)行ELISA測驗(yàn)以檢測生物標(biāo)記。
[0107] -旦執(zhí)行了第一次測量程序，并且獲得了檢測生物標(biāo)記的結(jié)果，這些結(jié)果就可以 用于，例如確定可以給予什么樣的治療劑，或甚至，究竟是否應(yīng)該進(jìn)行任何一種治療。結(jié)果 可以揭示生物標(biāo)記的存在或缺失或水平或結(jié)構(gòu)變異，其通常在沒受神經(jīng)元損傷侵襲的患者 中、或者在對所述新組合物可能沒有預(yù)期響應(yīng)的神經(jīng)元損傷患者中不會發(fā)現(xiàn)。例如，具有輕 度損傷和僅僅正常神經(jīng)細(xì)絲和鎂水平的患者，或者在治療前具有高水平PEG抗體并可能表 現(xiàn)出過敏反應(yīng)的患者；在兩個病例中，生物標(biāo)記都表明這些患者不會對新組合物有預(yù)期的 治療相關(guān)性響應(yīng)。另一個例子中，在人類患者中的劑量遞增研究中，治療前和治療后的生物 標(biāo)記水平用于確定本申請所述的新組合物的最佳劑量?？梢栽趧游镅芯亢腿祟惻R床試驗(yàn)中 確定生物標(biāo)記的正常水平、或與體內(nèi)穩(wěn)態(tài)相關(guān)的水平，和與對治療積極響應(yīng)或消極響應(yīng)或 沒有響應(yīng)相關(guān)的生物標(biāo)記水平。
[0108] 第一次測量程序的結(jié)果可以表明，例如治療應(yīng)該應(yīng)用的給藥劑量和服用方法?；?者，結(jié)果可以表明，用特殊的治療劑治療對患者無益。
[0109]在優(yōu)選的實(shí)施例中，當(dāng)進(jìn)行治療時，其包括給予包含鎂作為活性成分的治療化合 物以治療神經(jīng)元疾病。鎂可以是，例如，以鎂鹽的形式。在其它實(shí)施例中，鎂是以硫酸鎂、氯 化鎂、葡萄糖酸鎂或ATP鎂鹽中的一種或多種的形式。鎂優(yōu)選的包含于聚合物溶液中，如包 含PEG的溶液。在PEG溶液中鎂的首次劑量被給予之前評價生物標(biāo)記水平。首次劑量之后 再次評價生物學(xué)標(biāo)記水平以決定是否應(yīng)該改良第二劑量。此外，在給予最后一劑后評價生 物標(biāo)記水平以確定最佳劑量，并作為長期性功能恢復(fù)的替代性標(biāo)記評價生物標(biāo)記水平。 [0110] 在治療病理疾病之后，執(zhí)行第二次測量程序以再次測量生物學(xué)標(biāo)記。為確定最佳 劑量和治療方案，可以在相當(dāng)于新組合物活性成分7個半衰期的時間內(nèi)評價生物標(biāo)記，而 更優(yōu)選地在3個半衰期內(nèi)。當(dāng)被用作長期性康復(fù)的早期指示時，生物標(biāo)記水平在治療后幾 周到幾月內(nèi)被評價，優(yōu)選地在1-12周內(nèi)，而更優(yōu)選地在治療后1-6周內(nèi)。優(yōu)選地以與第一 次測量程序相同的方式執(zhí)行第二次測量程序。可選地，治療前和治療后評價的生物標(biāo)記可 以變化。例如，在治療開始前評價PEG血清抗體水平對預(yù)防可能的過敏反應(yīng)會是有意義的， 但在治療后可能沒用。此外，在治療前確定患者是否對治療表現(xiàn)出預(yù)期響應(yīng)的最有用的生 物標(biāo)記，可以與作為長期性康復(fù)早期指示劑的最有用的生物標(biāo)記不同。例如，損害的神經(jīng)元 釋放的但不能穿過血腦屏障的生物標(biāo)記，只有血腦屏障在損傷后被打亂--其通常在損傷 后持續(xù)幾小時到幾天一在血液中才將是可測量的。這些生物學(xué)標(biāo)記對識別中樞神經(jīng)系統(tǒng) 損傷類型及其嚴(yán)重性非常有用，但作為潛在功能恢復(fù)的指示劑可能沒有用。另一方面，當(dāng)在 更晚的時間點(diǎn)，如治療后1-12周測量時，由損害的神經(jīng)元釋放的生物學(xué)標(biāo)記、或修復(fù)機(jī)制 相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記可能更有用。當(dāng)不能獲得治療前生物標(biāo)記的水平時，通過先前的非臨床 和臨床研究確定與對治療的響應(yīng)（即，積極響應(yīng)、消極響應(yīng)或沒有響應(yīng)）相關(guān)的具體水平。 然后比較第一次和第二次測量程序的結(jié)果以評價對患者的治療進(jìn)展如何。
[0111] 在某些實(shí)施例中，由于比較第一次和第二次測量程序的結(jié)果，可以改變病理疾病 的進(jìn)一步治療。例如，如果在新組合物的首次劑量之后，患者表現(xiàn)出表明對治療沒有響應(yīng)的 生物標(biāo)記水平，于是可以增加新組合物的第二劑量。在其它實(shí)施例中，作為患者中劑量遞增 范例的部分，治療前和治療后的生物標(biāo)記水平可以暗示必需改良治療方案。同樣，各種實(shí)施 例可以執(zhí)行不僅僅是兩次測量程序。例如，可以執(zhí)行一系列生物標(biāo)記測量程序及各自的治 療方案以追蹤病理疾病的進(jìn)展及其治療。每新一輪的測量結(jié)果可以用于追蹤病理疾病并據(jù) 此調(diào)整治療方案。
[0112] 沒有必要總是在第一次治療方案之前進(jìn)行生物學(xué)標(biāo)記測量。相反，在某些實(shí)施例 中，首先通過給予含有鎂的治療劑治療病理疾病，并隨后測量生物標(biāo)記。這種測量程序的 結(jié)果可以用于評價治療的有效性。例如，結(jié)果可以與已知的基線相比較?？梢詧?zhí)行更多輪 的測量和治療以分別評價和治療病理疾病，其中，可以根據(jù)前一輪生物標(biāo)記讀數(shù)（reading) 的結(jié)果調(diào)整每一輪新的治療。
[0113] 本公開內(nèi)容引用的所有專利和非專利出版物以如同這些專利和非專利出版物每 一篇以其全部內(nèi)容被引用到本文的程度并入本文。此外，盡管以參考具體的例子和實(shí)施例 描述了本發(fā)明，應(yīng)該理解這些例子和實(shí)施例僅僅是說明本發(fā)明原理和應(yīng)用的。因此，應(yīng)該理 解可以對說明性實(shí)施例做很多修改，并且可以設(shè)計(jì)其它排列而不偏離下列權(quán)利要求書限定 的本發(fā)明的精神和范圍。
【權(quán)利要求】
1. 用于治療病理疾病的方法，包括： 執(zhí)行第一次測量程序以測量與所述病理疾病相關(guān)的生物標(biāo)記； 通過給予治療有效量的治療化合物治療所述病理疾病，所述治療化合物包含鎂作為所 述治療化合物的至少一種活性成分； 執(zhí)行第二次測量程序以測量與所述病理疾病相關(guān)的所述生物標(biāo)記；和 比較所述第一次測量程序的至少一個結(jié)果和所述第二次測量程序的至少一個結(jié)果以 評價所述病理疾病的治療。
2. 權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述治療化合物包含聚合物溶液中的鎂，所述聚合物 溶液可選包含PEG，所述鎂可選以鎂鹽的形式。
3. 權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述治療化合物包含硫酸鎂、氯化鎂、葡萄糖酸鎂或 ATP鎂鹽中的一種或多種。
4. 權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述第一次和所述第二次測量程序包括在從血液、腦 脊髓液、細(xì)胞間液、細(xì)胞或組織樣本的一種或多種中獲得的樣本中檢測所述生物標(biāo)記。
5. 權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述生物標(biāo)記是下組中的至少一種：鎂、鈣、谷氨酸、 谷氨酰胺、膽堿、乙酰膽堿酯酶、T、c- T、神經(jīng)元特異性烯醇酶、泛素和泛素水解酶、n-乙酰 天冬氨酸、神經(jīng)絲、肌醇、S100B、白細(xì)胞介素、抗氧化劑、抗聚合物的抗體如抗PEG抗體，和/ 或所述生物標(biāo)記是下組中的至少一種：離子、氨基酸、糖、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、肽、受體、神經(jīng)遞質(zhì)、 酶、基因或核糖核苷酸。
6. 權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述第一次測量程序或所述第二次測量程序包括檢 測所述生物標(biāo)記或與所述生物標(biāo)記相互作用的分子的結(jié)構(gòu)、活性或水平中的至少一種。
7. 權(quán)利要求1所述的方法，其進(jìn)一步包括執(zhí)行第三次測量程序以檢測與所述病理疾病 相關(guān)的所述生物標(biāo)記，并比較至少所述第二次測量程序的至少一個結(jié)果和至少所述第三次 測量程序的至少一個結(jié)果以評價所述病理疾病的治療，以及可選地，進(jìn)一步包括針對至少 所述第二次測量程序的至少一個結(jié)果與至少所述第三次測量程序的至少一個結(jié)果或預(yù)定 的參考標(biāo)準(zhǔn)的比較，改變所述病理疾病的治療。
8. 權(quán)利要求1所述的方法，其中，通過給予所述治療有效量的所述包含鎂的治療化合 物治療所述病理疾病是根據(jù)所述第一次測量步驟的至少一個結(jié)果或預(yù)定的參考標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行 的。
9. 治療病理疾病的方法，包括： 執(zhí)行第一次測量程序以測量與所述病理疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記或?qū)λ霾±砑膊〉?治療；和 根據(jù)所述第一次測量程序的一個或多個結(jié)果，通過給予治療有效量的治療化合物治療 所述病理疾病，所述治療化合物包含鎂作為所述治療化合物的至少一種活性成分， 其中，所述生物標(biāo)記可選自下組中的至少一種：鎂、鈣、谷氨酸、谷氨酰胺、膽堿、乙酰膽 堿酯酶、T、C- T、神經(jīng)元特異性烯醇酶、泛素和泛素水解酶、n-乙酰天冬氨酸、神經(jīng)絲、肌 醇、S100B、白細(xì)胞介素、抗氧化劑和抗聚合物的抗體。
10. 治療病理疾病的方法，包括： 通過給予治療有效量的治療化合物治療所述病理疾病，所述治療化合物包含鎂作為所 述治療化合物的至少一種活性成分； 執(zhí)行第一次測量程序以測量與所述病理疾病相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記或?qū)λ霾±砑膊〉?治療；和 利用所述第一次測量程序的結(jié)果評價所述病理疾病的治療； 其中，所述生物標(biāo)記是選自下組中的至少一種：鎂、鈣、谷氨酸、谷氨酰胺、膽堿、乙酰膽 堿酯酶、T、c- T、神經(jīng)元特異性烯醇酶、泛素和泛素水解酶、n-乙酰天冬氨酸、神經(jīng)絲、抗氧 化劑、肌醇、S100B、白細(xì)胞介素和抗聚合物的抗體。
【文檔編號】A61K31/191GK104306395SQ201410471552
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2009年4月13日 優(yōu)先權(quán)日:2008年4月18日
【發(fā)明者】J·羅伊, T·D·金布爾 申請人:華沙整形外科股份有限公司