大蒜中提取得到的抗腫瘤活性的多肽的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及從大蒜中分離得到的活性多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1-7所示。該多肽具有較好的治療乳腺癌的效果，同時(shí)對(duì)正常細(xì)胞無(wú)毒副作用。
【專(zhuān)利說(shuō)明】大蒜中提取得到的抗腫瘤活性的多肽

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物領(lǐng)域，具體地涉及一種從大蒜中提取得到的能夠治療乳腺癌的抗 腫瘤活性的多肽。

【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥，亦稱(chēng)惡性腫瘤，為由控制細(xì)胞生長(zhǎng)增殖機(jī)制失常而引起的疾病。癌細(xì)胞除了 生長(zhǎng)失控外，還會(huì)局部侵入周遭正常組織甚至經(jīng)由體內(nèi)循環(huán)系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移到身體其 他部分。
[0003] 癌癥是一大類(lèi)惡性腫瘤的統(tǒng)稱(chēng)。癌細(xì)胞的特點(diǎn)是無(wú)限制、無(wú)止境地增生，使患者體 內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)被大量消耗；癌細(xì)胞釋放出多種毒素，使人體產(chǎn)生一系列癥狀；癌細(xì)胞還可 轉(zhuǎn)移到全身各處生長(zhǎng)繁殖，導(dǎo)致人體消瘦、無(wú)力、貧血、食欲不振、發(fā)熱以及嚴(yán)重的臟器功能 受損等等。與之相對(duì)的有良性腫瘤，良性腫瘤則容易清除干凈，一般不轉(zhuǎn)移、不復(fù)發(fā)，對(duì)器 官、組織只有擠壓和阻塞作用，但癌癥（惡性腫瘤）還可破壞組織、器官的結(jié)構(gòu)和功能，引起 壞死出血合并感染，患者最終由于器官功能衰竭而死亡。到了科學(xué)高速發(fā)展的今天，我們有 理由相信癌癥并非不治之癥。致力于自然醫(yī)學(xué)研究的醫(yī)學(xué)專(zhuān)家們研究發(fā)現(xiàn)：負(fù)離子對(duì)抑制 癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移有令人鼓舞的效果，重要的是利用自然因子負(fù)離子對(duì)癌癥患者治療對(duì)機(jī)體無(wú)任 何損害，沒(méi)有任何毒副作用。
[0004] 在常規(guī)的癌癥治療中，主要有藥物治療、手術(shù)治療、放射治療以及化學(xué)治療。目前 已使用的抗腫瘤藥物雖對(duì)大多數(shù)腫瘤有一定療效，但仍存在著治療有效率低、選擇性差、毒 副作用明顯、易產(chǎn)生細(xì)胞耐藥等問(wèn)題。因此，尋找高效、低毒、作用靶點(diǎn)明確的抗腫瘤藥物仍 是生物、醫(yī)學(xué)科研領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
[0005] 大蒜為百合科蔥屬植物蒜，植物學(xué)名稱(chēng)為AliurnSatlrum和AlliumCepa。多年生 草木，具有強(qiáng)烈的臭辣味，為人工栽培。我國(guó)南北備省均有出產(chǎn)。大蒜在我國(guó)被用作藥物有 著悠久的歷史，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，大蒜具有抗菌、抗腫瘤、降血脂、抗血小板聚集等作用。 而且已經(jīng)分離得到了多種具有癌癥抑制效果的蛋白質(zhì)、脂類(lèi)、多糖等。但是現(xiàn)實(shí)現(xiàn)有技術(shù)中 還沒(méi)有一種特別有限的針對(duì)癌癥具有較好抑制活性的大蒜多肽。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種抗乳腺癌活性物質(zhì)的大蒜系列多肽。該多 肽是從剛出土的大蒜蒜瓣中通過(guò)提取獲得的。
[0007] 本發(fā)明還提供了一種提取大蒜中活性多肽的方法，該方法包括，將新鮮出土的大 蒜蒜瓣冷藏，成粉末，水提，超濾膜過(guò)濾，雙向電泳分離，質(zhì)譜，分離，干燥得到。
[0008] 本發(fā)明還提供所述具體的肽的氨基酸序列為：
[0009]NB-DS-5：RCPSIGICLTT
[0010]NB-DS-8：LRMKSPPGGSRTT
[0011]NB-DS-9 :SRLLMKGRRSPPMTT
[0012] NB-DS-10：GSPYLRMKGVGGSMRT
[0013] NB-DS-13：MYVSRLGSSGIGL
[0014] NB-DS-14：CPSRGSSAMARL
[0015] NB-DS-16：MARTSPYGEQSRP
[0016] 本發(fā)明提供的一個(gè)技術(shù)方案是：
[0017] 一種多肽，其序列為SEQIDNO:1至7任一所示的具有30%以上同源性的多肽。
[0018] -種多肽，其序列為SEQIDNO:1至7任一所不。
[0019] 一種藥物組合物，包括治療有效量的SEQIDNO:1至7任一所示的多肽和其藥學(xué) 上可接受的鹽。
[0020] 一種藥物組合物，包括治療有效量的SEQIDNO: 1至7任一所示的多肽和藥學(xué)上 可接受的載體或稀釋劑。
[0021] 本發(fā)明的藥物組合物在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
[0022] 本發(fā)明的藥物組合物在制備用于治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0023] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0024] 本發(fā)明的一系列從大蒜中提取的活性多肽對(duì)各種癌癥均有良好的抑制效果，有望 進(jìn)一步制備成治療癌癥的藥物。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 實(shí)施例1大蒜多肽的提取
[0026] 取剛出土的新鮮的大蒜（2日齡以?xún)?nèi)），去皮，成蒜瓣，液氮冷凍lh。研磨成粉末， 加入pH7. 0的PBS進(jìn)行溶解，并過(guò)濾。上清采用超濾分離，超濾膜采用0. 3KDa、5KDa、50kDa 的超濾膜進(jìn)行過(guò)濾，獲得分子量〇. 3-5kDa和5-50kDa的不同組分，檢測(cè)各組分的抗腫瘤活 性，結(jié)果表明分子量0. 3-5kDa的組分抗腫瘤活性最佳。
[0027] 將超濾獲得的具有最佳抗腫瘤活性組分，過(guò)DEAEFF陰離子交換層析預(yù)裝柱，上樣 緩沖液為4mmol/LpH8. 5Tris-HCl緩沖液，每次上樣量為10mL，洗脫液為含lmol/LNaCl 的 4mmol/LpH8.5Tris-HCl，洗脫液先依次以 3% (v/v)、6% (v/v)、9% (v/v)、12% (v/v)、 24% (v/v)、100% (v/v)的濃度進(jìn)行梯度洗脫，流速為5mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm，層析圖 譜，收集各峰，檢測(cè)各峰組分的抗腫瘤活性，結(jié)果表明峰5、8、9、10、13、14、16組分具有最佳 抗腫瘤活性，把相應(yīng)的峰組分脫鹽后真空冷凍干燥保存。即為本申請(qǐng)所要求保護(hù)的抗腫瘤 活性多肽。
[0028] 實(shí)施例2所述多肽的抗乳腺癌活性檢測(cè)
[0029] 所述的各峰組分抗腫瘤活性分析為以MDA-MB-231細(xì)胞，采用MTT法追蹤抗腫瘤活 性組分。采用PBS緩沖液作為對(duì)照。
[0030]MTT法：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231細(xì)胞，用胰酶消化后，以4XIO4個(gè)/孔的密度 接種于96孔板中，每孔180μL，在37°C，培養(yǎng)24h。然后加樣，樣品溶液應(yīng)先經(jīng)過(guò)微孔濾膜 過(guò)濾除菌，用培養(yǎng)液將樣品稀釋成5個(gè)濃度梯度，每孔加入20μL，4個(gè)平行孔，置于細(xì)胞培 養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)48h。然后，加入MTT(5mg/mL)20yL，置CO2培養(yǎng)箱37°C培養(yǎng)4h。棄除孔 中培養(yǎng)液，然后每孔加入DMS0150yL，37°C恒溫振蕩30min以充分溶解甲瓚結(jié)晶。酶標(biāo)儀 檢測(cè)各孔在570nm波長(zhǎng)處吸光度（A)值，實(shí)驗(yàn)至少重復(fù)3次。細(xì)胞抑制率=[(A對(duì)照-A樣 品）/A對(duì)照]X100%。采用Excel分析軟件計(jì)算半數(shù)抑制濃度IC50。結(jié)果如表1所示：
[0031]

【權(quán)利要求】
1. 一種多肽，其序列為SEQ ID N0:1至7任一所示的具有30%以上同源性的多肽。
2. -種多肽，其序列為SEQ ID NO :1至7任一所示。
3. -種藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1-7中任一所述的多肽和其藥學(xué)上可 接受的鹽。
4. 一種藥物組合物，包括治療有效量的權(quán)利要求1-7中任一所述的多肽和藥學(xué)上可接 受的載體或稀釋劑。
5. 權(quán)利要求3-4任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用。
6. 權(quán)利要求3-4任一項(xiàng)所述的藥物組合物在制備用于治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K38/08GK104327158SQ201410460422
【公開(kāi)日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月5日
【發(fā)明者】馬恒標(biāo) 申請(qǐng)人:馬恒標(biāo)