Egcg棕櫚酸酯在制備治療或預防腸道病毒71型感染藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)藥新用途【技術領域】，具體公開了一種EGCG棕櫚酸酯在制備治療或預防腸道病毒71型感染藥物中的應用。本發(fā)明證實了EGCG棕櫚酸酯在體外對腸道病毒71型感染細胞試驗中具有良好的抗病毒作用，能夠預防腸道病毒71型的感染，其作用效果比陽性對照藥普可那利更為明顯，揭示該藥物有開發(fā)成抗腸道病毒71型藥物的前景。
【專利說明】EGCG棕櫚酸酯在制備治療或預防腸道病毒71型感染藥物 中的應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥新用途【技術領域】，更具體涉及一種EGCG(表沒食子兒茶素沒食子 酸酯）棕櫚酸酯在制備治療或預防腸道病毒71型（EV71)感染藥物中的應用。

【背景技術】
[0002] 腸道病毒71型（human enterovirus 71，EV71)是小RNA病毒科腸道病毒屬成員， 1969年首次從加利福尼亞患有中樞神經系統(tǒng)疾病的嬰兒糞便標本中分離出來。通常EV71 感染會引起手足口病，病情較輕且多呈自限性，與柯薩奇A16引起的手足口病難以區(qū)別。除 此之外，EV71還能引起無菌性腦膜炎、腦干腦炎、急性弛緩性麻痹、急性心肺功能紊亂等多 種嚴重的神經系統(tǒng)疾病，甚至死亡。近年來，EV71在世界范圍內多次引起疾病暴發(fā)或流行， 如1997年馬來西亞Sarawak地區(qū)、1998年中同臺灣地區(qū)及2008年中國安徽等地均出現較 大規(guī)模的EV71暴發(fā)流行，并引起死亡。在腸道病毒家族中，EV71和脊髓灰質炎病毒這兩類 能引起嚴重神經癥狀的嗜神經性病毒，隨著脊髓灰質炎病毒在全球臨近消滅，EV71有可能 成為引起嚴重疾病暴發(fā)的病原，有關EV71的研究越來越受到人們的重視。
[0003] EV71病毒基因組為7408個核苷酸的單股正鏈RNA，基因組中僅有一個開放閱讀 框，編碼含2194個氨基酸的多聚蛋白，該多聚蛋白可進一步被水解成PI、P2、P33個前體蛋 白，P1前體蛋白編碼VP1、VP2、VP3、VP44個病毒外殼蛋白；P2和P3前體蛋白編碼7個非結 構蛋白（2A?2C和3A?3D)。病毒粒子的衣殼由60個亞單位構成，后者由4種衣殼蛋白 (VP1?VP4)拼裝成五聚體樣結構。4種結構蛋白中，除VP4包埋在病毒粒子外殼的內側與 病毒核心緊密連接以外，其他3種結構蛋白均暴露在病毒顆粒的表面，因而抗原決定簇基 本上位于VP1?VP3上。EV71感染可在同一家庭多成員中傳播，成人癥狀一般較輕，而患兒 發(fā)病中，并發(fā)癥和死亡率較高。
[0004] EV71感染多發(fā)生于5歲以下嬰幼兒，但其易感因素、傳播途徑、發(fā)病機制及流行趨 勢等均未明確。目前仍沒有安全有效的疫苗來預防EV71的感染。EV71感染患者的治療主 要以對癥治療為主，目前缺乏特異、高效的抗病毒藥物。現階段報道較多并且療效相對明顯 的則是用干擾素或是靜脈注射丙種球蛋白IV IG。
[0005] EGCG是茶多酚中最有效的活性成分，屬于兒茶素。EGCG具有抗菌、抗病毒、抗氧 化、抗動脈硬化、抗血栓形成、抗血管增生、抗炎以及抗腫瘤作用，由于其是低毒性和存在于 綠茶中的天然化合物，使它成為一種具有極大吸引力的開發(fā)對象。EGCG是從中國綠茶中提 取的一種成份，它是綠茶主要的活性和水溶性成份，是兒茶素中含量最高的組分，占綠茶毛 重的9% -13%，因為具有特殊的立體化學結構，EGCG具有非常強的抗氧化活性，抗氧化活 性至少是維生素 C的100多倍，是維生素 E的25倍，能夠保護細胞和DNA不受損害，這種損 害相信與癌癥、心臟疾病和其他重大疾病有關，EGCG的這些功效歸結于它們對氧自由基的 清除（抗氧化）能力。
[0006] EGCG在抗癌和心血管疾病方面擔當了重要角色。此外，它也用作腫瘤多藥耐藥性 的逆轉劑，能夠改善癌細胞對化療的敏感性并減輕對心臟的毒性。
[0007] 此前人們已知道EGCG具有抑制病毒的作用，但直接飲用綠茶，EGCG會立刻在體內 分解，無法發(fā)揮作用。EGCG在水中不穩(wěn)定，而且容易氧化導致損失。為此，我們用的是經過 修飾的脂溶性的EGCG棕櫚酸酯。不但將水溶性的EGCG改性成為脂溶性，同時提高了化合 物的穩(wěn)定性。由于穩(wěn)定性的提高，降低了因分解和氧化導致的損失，EGCG棕櫚酸酯大大提 高了殺滅病毒的活性。雖然EGCG及其衍生物對于流感病毒的抑制作用被研究和提及過，然 而對現在較為流行且致病力較強的腸道病毒71型（EV71)的預防與治療作用卻尚未提及和 應用。故本發(fā)明技術方案是對其新藥用價值的發(fā)現，為腸道病毒71型（EV71)的預防和治 療提供了 一種新的有效藥物。


【發(fā)明內容】

[0008] 針對現有技術中存在的不足，本發(fā)明的目的是在于提供了一種EGCG棕櫚酸酯在 制備治療或預防腸道病毒71型感染藥物中的應用，該藥物是一種純天然化合物的酯修飾 物，無毒無副作用，有明顯的預防作用，可口服或皮膚、黏膜給藥，使用方便。 申請人:從細胞 和分子層面對EGCG棕櫚酸酯抗EV71病毒作用進行了評價，為其進一步開發(fā)應用奠定了良 好的基礎。表明該藥物具有開發(fā)成抗EV71病毒的有效藥物而應用于臨床的前景。
[0009] 為了實現上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術方案：
[0010] 通過CCK-8細胞活性檢測與Real-Time熒光定量PCR試驗，對前期篩選的有效藥 物的給藥劑量及有效性做出分析。藥物濃度是以EGCG棕櫚酸酯來計算質量體積比。同時 采用體外細胞模型一RD細胞，從直接殺病毒、抑制病毒的吸附與入侵、抑制病毒的復制、影 響病毒出膜等方面研究藥物的抗病毒機制。
[0011] 研究結果表明EGCG棕櫚酸酯在細胞水平上對EV71病毒具有良好的預防病毒感染 和抗病毒作用，表明該藥物可以作為臨床上潛在的抗EV71病毒藥物進一步開發(fā)。從而為臨 床上腸道病毒71型（EV71)疾病的治療提供一種安全有效、毒副作用小的藥物，為其進一步 開發(fā)應用奠定了良好的基礎。
[0012] 相對于目前其他抗EV71病毒藥物而言，本發(fā)明具有以下優(yōu)點和效果：
[0013] 1、EGCG棕櫚酸酯是一種純天然化合物的酯修飾物，具有毒副作用小等優(yōu)點；
[0014] 2、EGCG棕櫚酸酯中的EGCG是茶葉的主要組成成份，產量大、取材方便；
[0015] 3、可口服、經皮膚或黏膜給藥，使用方便；
[0016] 4、EGCG棕櫚酸酯是一種非抗生素藥物，不會產生耐藥性；
[0017] 5、EGCG棕櫚酸酯在較大濃度范圍內沒有細胞毒性；
[0018] 6、EGCG棕櫚酸酯能夠提高細胞對病毒感染的預防作用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1為實施例1EGCG棕櫚酸酯以及對照藥物對宿主RD細胞的細胞毒性測定。
[0020] 呈梯度濃度藥物加入到細胞之后培養(yǎng)48h時，采用CCK-8細胞毒性試劑盒測定細 胞存活率情況。由實驗結果可知，在一定濃度范圍內的EGCG棕櫚酸酯對RD細胞的毒性微 弱，沒有造成細胞大量死亡。
[0021] 圖2為實施例3先加藥物后加病毒的實驗步驟下，用熒光定量PCR檢測EGCG棕櫚 酸酯對EV-71病毒復制的抑制效果在mRNA水平上表達量的影響。由實驗結果可知，當先加 入藥物后感染病毒的情況下，在一定濃度范圍內的EGCG棕櫚酸酯對該病毒有很強的抑制 作用。
[0022] 圖3為實施例4藥物與病毒同時添加的試驗步驟下，用熒光定量PCR檢測EGCG棕 櫚酸酯對EV-71病毒復制的抑制效果在mRNA水平上表達量的影響。由實驗結果可知，當病 毒和藥物同時作用于宿主細胞時，在一定濃度范圍內的EGCG棕櫚酸酯對該病毒的抑制作 用不明顯。
[0023] 圖4為實施例5先添加病毒后添加藥物的實驗步驟下，用熒光定量PCR檢測EGCG 棕櫚酸酯對EV-71病毒復制的抑制效果在mRNA水平上表達量的影響。由實驗結果可知，當 先感染病毒后給藥的情況下，在一定濃度范圍內的EGCG棕櫚酸酯對該病毒的抑制作用不 明顯。

【具體實施方式】
[0024] 下面結合具體實施例，進一步闡明本發(fā)明的技術方案。應理解，這些實施例僅用于 說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明請求保護的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗 方法，通常按照常規(guī)實驗條件如Sambrook等人，分子克隆，實驗手冊（第三版）（New York : Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2002)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條 件。
[0025] 以下實施例中：
[0026] 所用的藥物EGCG棕櫚酸酯為一種結構式如下的單取代的EGCG棕櫚酸酯：
[0027]

【權利要求】
1. EGCG棕櫚酸酯在制備治療或預防腸道病毒71型感染藥物中的應用。 2. EGCG棕櫚酸酯在制備預防腸道病毒71型感染藥物中的應用。
3. 根據權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述的EGCG棕櫚酸酯為結構式如下 的單取代EGCG棕櫚酸酯：
【文檔編號】A61P1/00GK104095842SQ201410359356
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月25日 優(yōu)先權日:2014年7月25日
【發(fā)明者】吳建國, 徐德, 鄔開朗, 孫師, 劉映樂, 潭秋萍, 劉芳 申請人:武漢勝達康生物科技有限公司