一種海棠果提取物的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種海棠果提取物的應(yīng)用，所述的海棠果提取物是由乙醇水溶液或丙酮水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行提取而得或?qū)Ｌ墓M(jìn)行水煎煮而得；所述的應(yīng)用是指以海棠果提取物作為活性成分用于制備預(yù)防或/和治療高膽固醇疾病的藥物制劑或保健食品。
【專利說明】一種海棠果提取物的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種海棠果提取物的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]高脂血癥是指血中總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和/或甘油三脂(TG)過聞。聞脂血癥包括聞膽固醇血癥、聞甘油二脂血癥及二者都聞的復(fù)合性聞脂血癥。流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，我國20~45歲城市居民高脂血癥總發(fā)病率為22.47%，其中男性為28.78%，女性為12.03% ;其中高膽固醇血癥占患病率的26.05%，復(fù)合型高脂血癥占總患病率的20.59%。高膽固醇，特別是高低密度脂蛋白膽固醇血癥，是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化癥，進(jìn)而導(dǎo)致冠心病和腦中風(fēng)的主要病因。大量的研究證明，預(yù)防和治療高膽固醇血癥是有效的防治動(dòng)脈粥樣硬化癥和冠心病的手段。目前臨床用于治療高膽固醇血癥的藥物主要有以下幾類:膽汁酸螯合劑、他汀類HMG-CoA還原酶抑制劑、煙酸及其衍生物、魚油制劑等。這幾類藥物具有顯著性降低膽固醇作用。同時(shí)，長(zhǎng)期服用這些藥物有可能引起肝損傷等副作用。因此，研發(fā)高效低毒的降膽固醇血癥的藥物仍是世界醫(yī)學(xué)界面臨的一項(xiàng)艱巨任務(wù)和難題。
[0003]海棠果又名楸子、海紅，為薔蔽科蘋果屬植物的果實(shí)，廣泛分布于我國大部分地區(qū)。除食用外，海棠果還具有清涼瀉火，生津止渴、健脾開胃等藥用作用。用于治療消化不良食積腹脹之癥及泄瀉下痢，大便搪薄等病癥?！侗静菥V目》就有“酸，甘，平，無毒。主治泄痢。”的記載。海棠果含有大量的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如糖類、多種維生素、有機(jī)酸等，能夠補(bǔ)充人體所需的營(yíng)養(yǎng)，提高機(jī)體功能，增強(qiáng)對(duì)疾病的抵抗力。傳統(tǒng)應(yīng)用是將海棠果釀酒、做蜜餞，做果醬、果醋、果酒、果丹皮，或制成海棠干，作為清涼瀉火、健脾開胃的休閑食品。
[0004]中國專利CN201010152792.6公開了一種水溶性海棠果多酚作為功能性飲料和化妝品添加劑，發(fā)揮抗氧化作用的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提供一種海棠果提取物的應(yīng)用，以拓展海棠果的應(yīng)用價(jià)值。
[0006]本發(fā)明所述的海棠果提取物，是由乙醇水溶液或丙酮水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行提取而得或?qū)Ｌ墓M(jìn)行水煎煮而得；所述的應(yīng)用是指以海棠果提取物作為活性成分用于制備預(yù)防或/和治療高膽固醇疾病的藥物制劑或保健食品。
[0007]所述的高膽固醇疾病包括高脂血癥和脂肪肝。
[0008]作為優(yōu)選方案，海棠果提取物中的總多酚含量> 50wt%。
[0009]作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，總多酚含量> 50wt%的海棠果提取物的制備，包括如下步驟:
[0010]a)用乙醇水溶液或丙酮水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行提取；
[0011]b)減壓蒸餾除去提取液中的乙醇或丙酮，然后加適量水稀釋濃縮液，得粗提液；
[0012]c)用乙酸乙酯萃取粗提液，合并萃取得到的乙酸乙酯層，減壓濃縮。
[0013]上述的乙醇水溶液和丙酮水溶液的體積百分比濃度均為20 %~95 %。[0014]上述的提取包括冷浸提取、溫浸提取和回流提取。
[0015]作為優(yōu)選方案，步驟a)中，每次提取時(shí)間為I~3小時(shí)，共提取I~3次。
[0016]作為優(yōu)選方案，步驟a)中，每次提取時(shí)，I克海棠果使用5~50毫升的乙醇水溶液或丙酮水溶液。
[0017]作為優(yōu)選方案，步驟c)中，用乙酸乙酯萃取粗提液2~6次，每次用于萃取的乙酸乙酯的體積為被萃取的粗提液體積的0.5~1.5倍。
[0018]本發(fā)明中所述的藥物制劑包括:顆粒劑、膠囊劑、注射劑、酊劑、口服液、片劑、口含劑、沖劑、丸劑、散劑等常見劑型或納米制劑等緩釋劑型。
[0019]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:本發(fā)明所述的海棠果提取物能夠明顯降低小鼠血清中的總膽固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白及肝臟中的總膽固醇和甘油三酯，可望作為活性成分用于制備預(yù)防或/和治療高膽固醇疾病的藥物制劑或保健食品，尤其可望開發(fā)成高效低毒的治療高脂血癥和脂肪肝的藥物制劑，具有顯著的臨床應(yīng)用價(jià)值。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0020]圖1體現(xiàn)了各組小鼠血清中的血脂水平；圖中:*表示與高脂組比較，N = 7。
[0021]圖2-a體現(xiàn)了各組小鼠肝臟中的甘油三酯的含量，圖2-b體現(xiàn)了各組小鼠肝臟中的膽固醇的含量；圖中表示與高脂組比較，p〈0.05, N = 7。
[0022]圖3體現(xiàn)了海棠 果提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞H印G2中的甘油三酯水平的影響，圖中:*表示 ρ〈0.05, N = 4。
[0023]圖4體現(xiàn)了海棠果提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞H印G2中的膽固醇水平的影響，圖中:*表示 ρ〈0.05, N = 4。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)、完整地說明，但并不因此限制本發(fā)明；本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)下述內(nèi)容所作的一些非本質(zhì)的改進(jìn)或替換均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0025]實(shí)施例中所用的海棠果產(chǎn)自吉林長(zhǎng)春，實(shí)施例中關(guān)于提取物中的總多酚含量的測(cè)定是參照文獻(xiàn)“上海中醫(yī)藥雜志，2011年第45卷第5期第83頁”中所述方法。
[0026]實(shí)施例1
[0027]取新鮮海棠果，用體積百分比濃度為50%的乙醇水溶液進(jìn)行回流提取2小時(shí)，過濾；對(duì)濾渣再用體積百分比濃度為95%的乙醇水溶液進(jìn)行回流提取2小時(shí)，過濾；合并濾液，減壓濃縮，得海棠果提取物的浸膏。經(jīng)測(cè)定，該提取物中的總多酚含量為16%。
[0028]向上述浸膏中加入糊精，噴霧干燥使成細(xì)粉，可制成粉劑或干法制粒成顆粒劑；或向上述細(xì)粉中加入羥甲基淀粉鈉、微分硅膠、可溶性淀粉、乳糖、硬脂酸鎂等，混合均勻后，以95%乙醇制顆粒劑或80°C干燥后壓片劑；或向上述細(xì)粉中加入適量微粉硅膠，混勻后，裝入膠囊，制成膠囊劑；或?qū)⑸鲜霾糠旨?xì)粉加入枸櫞酸、淀粉制成顆粒，其余細(xì)粉加入碳酸氫鈉、淀粉制成顆粒，向兩種顆粒中加入硬脂酸鎂后，再混合均勻，壓片；或向上述浸膏中，加入適量體積百分比濃度為50%~85%的乙醇水溶液進(jìn)行溶解，然后用水稀釋至其中的乙醇量符合規(guī)定，靜置，待澄清，濾過，制成酊劑等。
[0029]實(shí)施例2[0030]取新鮮海棠果，加水煎煮2小時(shí)，過濾，重復(fù)煎煮2次，合并水煎液，適量濃縮得海棠果提取物的湯劑。經(jīng)測(cè)定，該提取物中的總多酚含量為12%。
[0031 ] 上述湯劑可通過醇沉、過濾等工藝加工成口服液。
[0032]實(shí)施例3
[0033]a)用體積百分比濃度為70%的乙醇水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行回流提取2次，每次提取2小時(shí)；每次提取時(shí)，I克海棠果用20毫升乙醇水溶液；
[0034]b)減壓蒸餾除去提取液中的乙醇，然后加適量水稀釋濃縮液，得粗提液；
[0035]c)用乙酸乙酯萃取粗提液，每次萃取所用的乙酸乙酯的體積為被萃取的粗提液體積的I倍，共萃取3次；合并萃取得到的乙酸乙酯層，減壓濃縮，得到總多酚的含量為78wt%的海棠果提取物。
[0036]實(shí)施例4
[0037]a)在40°C下，用體積百分比濃度為50%的丙酮水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行溫浸提取3次，每次提取2小時(shí)；每次提取時(shí)，I克海棠果用15毫升丙酮水溶液；
[0038]b)減壓蒸餾除去提取液中的丙酮，然后加適量水稀釋濃縮液，得粗提液；
[0039]c)用乙酸乙酯萃取粗提液，每次萃取所用的乙酸乙酯的體積為被萃取的粗提液體積的0.5倍，共萃取4次；合并萃取得到的乙酸乙酯層，減壓濃縮，得到總多酚的含量為50wt%的海棠果提取物。
[0040]實(shí)施例5
[0041]實(shí)驗(yàn)?zāi)康?研究實(shí)施例1-4所制備的海棠果提取物對(duì)高脂餐誘導(dǎo)肥胖小鼠血脂的影響。
[0042]實(shí)驗(yàn)方法:
[0043]a) 8周齡C57BL/6小鼠，體重約22_25克共42只；分為兩組，一組7只，用低脂飼料(購自ResearchDiet)進(jìn)行喂養(yǎng)；另一組35只,用含60% (w/w)脂肪的高脂飼料(購自Research Diet)進(jìn)行喂養(yǎng)。飼養(yǎng)條件為SPF級(jí)，飼養(yǎng)溫度22_23°C，12小時(shí)晝夜交替。經(jīng)高脂食物喂養(yǎng)的C57BL/6小鼠可出現(xiàn)聞脂血癥等癥狀，其發(fā)病機(jī)制與人聞脂血癥相似。
[0044]b)將經(jīng)3個(gè)月高脂食物喂養(yǎng)的35只小鼠隨機(jī)分為五組:高脂對(duì)照組、海棠果醇提取物(由實(shí)施例1制備)治療組、海棠果水提取物(由實(shí)施例2制備)治療組、海棠果多酚提取物I (由實(shí)施例3制備)治療組及海棠果多酚提取物2 (由實(shí)施例4制備)治療組，再分別用高脂飼料、按lwt%配比混有實(shí)施例1制備的海棠果醇提取物的高脂飼料、按lwt%配比混有實(shí)施例2制備的海棠果水提取物的高脂飼料、按lwt%配比混有實(shí)施例3制備的海棠果多酚提取物I的高脂飼料及按lwt%配比混有實(shí)施例4制備的海棠果多酚提取物2的高脂飼料進(jìn)行相應(yīng)喂食，使小鼠自由進(jìn)食、飲水，均再喂食4周。
[0045]c)使經(jīng)過4周再喂食后的小鼠禁食12小時(shí)，以心臟采血的方式收集禁食后小鼠的血樣，測(cè)定各組小鼠血清中的總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)水平。
[0046]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示:經(jīng)高脂餐誘導(dǎo)3個(gè)月后，高脂對(duì)照組小鼠呈現(xiàn)明顯的高脂血癥癥狀，其血清中的TG、TC、HDL-c和LDL-c均顯著高于低脂對(duì)照組。實(shí)施例1_4所制備的海棠果提取物均能夠明顯降低小鼠血清中的TC、TG和LDL-c的水平，但對(duì)高密度脂蛋白均無明顯作用(圖1，P〈0.05);而且，隨著海棠果提取物中的總多酚含量的提高，效果越顯著。[0047]取上述各組小鼠(包括低脂組)的肝臟約lOOmg，超聲粉碎，進(jìn)行氯仿抽提、異丙醇溶解后，進(jìn)行各組肝臟中所含甘油三酯和膽固醇含量的檢測(cè)。
[0048]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2-a和2-b所示:經(jīng)高脂餐誘導(dǎo)3個(gè)月后，高脂對(duì)照組小鼠的肝臟中含有大量甘油三酯和膽固醇，說明其脂肪變嚴(yán)重，已產(chǎn)生脂肪肝。實(shí)施例1-4所制備的海棠果提取物均能夠明顯降低小鼠肝臟中甘油三酯和膽固醇的含量(見圖2-a、圖2-b，P〈0.05);而且，隨著海棠果提取物中的總多酚含量的提高，效果越顯著。
[0049]實(shí)施例6
[0050]a)將人肝癌細(xì)胞株IfepG2用含10 %小牛血清及I %雙抗的DMEM高糖培養(yǎng)基于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞鋪板，細(xì)胞密度為IXlO5~2X IO5個(gè)/mL鋪板于24孔板中。
[0051]b)24h后，加入用完全培養(yǎng)基稀釋的0.01wt %實(shí)施例3所制備的海棠果提取物溶液，進(jìn)行干預(yù)，培養(yǎng)24小時(shí)后，裂解細(xì)胞，氯仿抽提，取氯仿層干燥，異丙醇溶解，測(cè)細(xì)胞中總膽固醇和甘油三酯含量。
[0052]檢測(cè)發(fā)現(xiàn):HepG2細(xì)胞中所含總膽固醇水平和甘油三酯水平得到明顯降低，與對(duì)照組相比具有顯著性(見圖3、圖4，P〈0.05)。表明海棠果提取物可能抑制肝細(xì)胞的膽固醇合成，具有降低人肝癌細(xì)胞HepG2總膽固醇合成的作用，并具有濃度依賴性。
[0053]綜上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可見:本發(fā)明所述的海棠果提取物可望作為活性成分用于制備預(yù)防或/和治療高膽固醇疾病的藥物制劑或保健食品。
【權(quán)利要求】
1.一種海棠果提取物的應(yīng)用，所述的海棠果提取物是由乙醇水溶液或丙酮水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行提取而得或?qū)Ｌ墓M(jìn)行水煎煮而得；其特征在于:所述的應(yīng)用是指以海棠果提取物作為活性成分用于制備預(yù)防或/和治療高膽固醇疾病的藥物制劑或保健食品。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的高膽固醇疾病包括高脂血癥和脂肪肝。
3.如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于:海棠果提取物中的總多酚含量^ 50wt%。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，總多酚含量>50wt%的海棠果提取物的制備，包括如下步驟: a)用乙醇水溶液或丙酮水溶液對(duì)海棠果進(jìn)行提取； b)減壓蒸餾除去提取液中的乙醇或丙酮，然后加適量水稀釋濃縮液，得粗提液； c)用乙酸乙酯萃取粗提液，合并萃取得到的乙酸乙酯層，減壓濃縮。
5.如權(quán)利要求1或4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的乙醇水溶液和丙酮水溶液的體積百分比濃度均為20%~95%。
6.如權(quán)利要求 1或4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的提取包括冷浸提取、溫浸提取和回流提取。
【文檔編號(hào)】A61P1/16GK104013695SQ201410272540
【公開日】2014年9月3日 申請(qǐng)日期:2014年6月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月18日
【發(fā)明者】黃誠, 李醫(yī)明, 周志欽, 姚勻聰, 李明霞, 譚飔, 秦曉曉, 范圣潔 申請(qǐng)人:上海中醫(yī)藥大學(xué)