一種結(jié)核桿菌lam寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用。結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，結(jié)構(gòu)通式如下：本發(fā)明還涉及上述結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物在制備肺結(jié)核疫苗中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物中，寡糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)是明確且單一的，而非混合物，可通過化學(xué)方法合成，它能夠解決卡介苗免疫保護(hù)力低的問題，對(duì)某些免疫力低下的人群同樣會(huì)產(chǎn)生較好的免疫效果，同時(shí)能夠避免抗生素的大量使用而帶來的細(xì)菌耐藥性的問題。
【專利說明】—種結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用，屬于肺結(jié)核疫苗研制【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]肺結(jié)核是由結(jié)核分枝桿菌引起的傳染性疾病，具有較高的致死率。結(jié)核病主要通過呼吸道傳染，也可以通過消化道、皮膚和子宮傳染。大部分感染者通常沒有任何癥狀，只有部分機(jī)體免疫力較低或細(xì)胞介導(dǎo)的變態(tài)反應(yīng)增高的感染者才會(huì)發(fā)病，如果不及時(shí)治療，大約有一半的感染者會(huì)死亡。近幾年這一疾病的發(fā)病率逐年上升。造成這一現(xiàn)象的原因主要有:(1)抗生素的濫用導(dǎo)致病菌耐藥性的不斷增強(qiáng)；(2)與艾滋病的交叉感染；(3)不發(fā)達(dá)國家較差的基礎(chǔ)醫(yī)療設(shè)施和環(huán)境(J.1nfect.Dis.，1999，179，S461 ；Drugs, 1997，53:40 ；Pharmacotherapy, 1998，18:738)。因此,研制新型、有效、安全的結(jié)核病藥物成為國內(nèi)外學(xué)者共同關(guān)注的一個(gè)重要課題。
[0003]結(jié)核病的治療方法主要是抗生素和免疫治療?？股刂委熤芷谳^長，不但給患者的免疫系統(tǒng)造成了非常大的傷害，而且使病菌的耐藥性不斷增強(qiáng)。免疫治療是預(yù)防結(jié)核病的非常有效的措施，不存在細(xì)菌耐藥性和削弱患者免疫力的問題。目前，預(yù)防結(jié)核病的主要疫苗是卡介苗(BCG)。但是，研究發(fā)現(xiàn)BCG對(duì)結(jié)核病的免疫保護(hù)力低于80% (TrendsMicrobiol.，2008，16:456)，對(duì)于有免疫缺陷的病人，BCG接種還有可能導(dǎo)致結(jié)核的全身播散。因此，人們迫切需要一種新的疫苗來替代BCG。為了達(dá)到這個(gè)目的，人們對(duì)結(jié)核桿菌的細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行了深入的研究。研究發(fā)現(xiàn)，其細(xì)胞壁的最外層含有結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜和特殊的糖聚合物，主要包括分枝酸-阿拉伯半乳糖復(fù)合物(mAG)和脂肪阿拉伯甘露聚糖(LAM)(Tuberculosis, 2003, 83:91) 0其中，LAM在結(jié)核桿菌感染人體細(xì)胞的免疫學(xué)過程中扮演了非常重要的作用，它能夠促進(jìn)宿主巨噬細(xì)胞中有機(jī)體的存活，同時(shí)在結(jié)核桿菌細(xì)胞中LAM是高度保守的(FEMS Microbiol.Rev.，2011，35:1126)。因此，可以根據(jù)LAM的結(jié)構(gòu)特征，設(shè)計(jì)合成LAM寡糖片段，并將其作為半抗原與蛋白質(zhì)綴合，來制備復(fù)合糖綴合物疫苗。
[0004]目前，相關(guān)的研究工作主要集中在LAM寡糖片段的合成方法學(xué)上，只有少數(shù)人將寡糖片段與蛋白質(zhì)連接。Peter H.Seeberger 等(J.Am.Chem.Soc., 2008, 130:16791)高效的合成了磷脂酰肌醇(PD和含有1-6個(gè)甘露糖苷的磷脂酰肌醇(PIM1-PIM6)，在每一個(gè)PIM的還原端都有一個(gè)硫醇作為連接基團(tuán)與血藍(lán)蛋白(keyholelimpet hemocyanin, KLH)連接，但是，這些糖蛋白的免疫活性測試結(jié)果并不理想。David R.Bundle等(BioconjugateChem.，2014, 25:685)將LAM非還原端阿拉伯分支六糖通過點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)連接在一個(gè)共聚維酮上，這一聚合物是由乙酸乙烯酯和N-乙烯基-2吡咯烷酮通過共聚合反應(yīng)得到的，然后脫去聚合物上的乙?；?，再通過引入氨基、疊氮以及炔基等功能基團(tuán)作為墜與糖或肽連接在一起。結(jié)果表明，最終的絡(luò)合物能夠作為較好的非蛋白抗原，很容易在ELISA板上產(chǎn)生吸附作用，在分析抗體與 半抗原的連接方面表現(xiàn)出較好的特性。
[0005]當(dāng)前，結(jié)核桿菌糖綴合物疫苗的研究仍然停留在試驗(yàn)階段，有許多問題函待解決。目前，以結(jié)核分枝桿菌LAM非還原端含有甘露糖片段的阿拉伯寡糖為半抗原，與載體連接制備結(jié)核桿菌復(fù)合寡糖綴合物疫苗，尚未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物及其制備方法與應(yīng)用，其中的寡糖是結(jié)核桿菌細(xì)胞表面夾膜多糖的寡聚衍生物。
[0007]本發(fā)明通過如下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0008]一種結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，結(jié)構(gòu)通式如下:
[0009]
【權(quán)利要求】
1.一種結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，結(jié)構(gòu)通式如下:
2.如權(quán)利要求1所述的結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，其特征在于，所述結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物的結(jié)構(gòu)通式為如下之一:
3.如權(quán)利要求1所述的結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，其特征在于，所述的載體選自:牛血清白蛋白、人血清白蛋白、血藍(lán)蛋白、破傷風(fēng)類毒素或白喉毒素?zé)o毒突變體之一。
4.如權(quán)利要求2或3所述的結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，其特征在于，所述結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物的結(jié)構(gòu)通式如下:
5.如權(quán)利要求2或3所述的結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，其特征在于，所述結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物的結(jié)構(gòu)通式如下:
6.如權(quán)利要求2或3所述的結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物，其特征在于，所述結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物的結(jié)構(gòu)通式如下:
7.權(quán)利要求1所述結(jié)核桿菌LAM寡糖綴合物在制備肺結(jié)核疫苗中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/48GK104004085SQ201410231237
【公開日】2014年8月27日 申請(qǐng)日期:2014年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月28日
【發(fā)明者】郭忠武, 王利振, 顧國鋒, 安蓮 申請(qǐng)人:山東大學(xué)