寡糖化合物在預防和治療病理性疤痕中的用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種選自具有1-4個糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物及其鹽和絡合物，其用于治療產(chǎn)生選自增生性疤痕、收縮性傷痕或萎縮性疤痕的病理性疤痕的傷口。所述用途在具有形成增生性、收縮性或萎縮性疤痕傾向的患者中是特別優(yōu)選的。根據(jù)第二方面，本發(fā)明還涉及所述化合物用于在產(chǎn)生選自增生性、收縮性或萎縮性疤痕的病理性疤痕的傷口愈合期間抑制成纖維細胞分化成肌纖維母細胞。
【專利說明】寡糖化合物在預防和治療病理性疤痕中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明的主題是一種選自具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物、其鹽或其絡合物，其用于治療產(chǎn)生病理性疤痕的傷口。
【背景技術(shù)】
[0002]傷口愈合是自然的生物學現(xiàn)象，人和動物組織能夠通過其特定的修復和再生過程修復局部損傷。
[0003]傷口愈合的速度和質(zhì)量取決于受影響有機體的整體狀況、傷口的病因、傷口的狀況和位置、可能發(fā)生的感染以及可能誘發(fā)愈合障礙的遺傳因素。
[0004]傷口的自然愈合主要按照三個連續(xù)階段進行，這些階段中每一個的特征在于使修復過程根據(jù)精確時間順序而進行的具體細胞活動:炎癥階段、肉芽發(fā)生階段(或增生階段)和疤痕形成階段。
[0005]一旦血管破裂，第一階段(炎癥階段)就開始了，其觸發(fā)形成主要由纖維蛋白和纖維連接蛋白組成的凝塊(血凝固)，并且其將構(gòu)成一個臨時基質(zhì)。該基質(zhì)部分填充所述損傷，并將使所募集的炎癥細胞能夠在受損區(qū)域內(nèi)遷移，以進行傷口的凈化(detersion)。血小板的存在也會釋放能夠募集愈合細胞如炎癥細胞(中性多形核細胞和巨噬細胞)、成纖維細胞和內(nèi)皮細胞的因子 (例如細胞因子、生長因子)。
[0006]第二階段對應于肉芽組織的形成。首先觀察到由成纖維細胞增生引起的傷口的定植。然后，來自健康血管的內(nèi)皮細胞的遷移將啟動受損組織的新血管形成或血管生成。在肉芽組織中，成纖維細胞被活化并將分化成由肌動蛋白微絲產(chǎn)生、使傷口能夠收縮的具有顯著收縮特性的肌纖維母細胞。這些微絲通過蛋白質(zhì)α-平滑肌肌動蛋白表達。因此，這些肌纖維母細胞在會導致?lián)p傷愈合的肉芽組織的形成和成熟中發(fā)揮重要作用。然后發(fā)生角化細胞遷移和表皮的重建。
[0007]修復過程的第三階段(其為疤痕的形成或成熟)伴隨有肉芽組織的重塑。部分細胞外基質(zhì)通過蛋白酶(本質(zhì)上為基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)和彈性蛋白酶)消化，并且觀察到細胞外基質(zhì)的逐漸重組。逐漸地，在肉芽組織中占優(yōu)勢的III型膠原蛋白被真皮的主要基質(zhì)成分I型膠原蛋白代替。在成熟期結(jié)束時，成纖維細胞、肌纖維母細胞和血管細胞經(jīng)歷其增生和/或其活性的降低。然后過量的細胞死于細胞凋亡。在細胞外基質(zhì)的重塑和過量細胞凋亡的同時，炎性狀態(tài)逐漸減退。該階段是最長的:在約I年后，所述疤痕變成重塑的，其不再是紅色，也不僵硬，不再引起疼痛，并且其變平整。
[0008]然而，在某些情況下，愈合不是如此的成功，并且可能形成病理性疤痕。然后使用術(shù)語愈合障礙。后者通常定義為愈合的中斷，且集合了幾種現(xiàn)象:
[0009]-慢性潰瘍，其是花費非常長時間愈合或根本不愈合的傷口。在某些情況下，靜脈性潰瘍例如，傷口可以在不形成肉芽組織或愈合未開始的情況下保持弛緩幾個月("Managing chronic venous leg ulcers: time for a new approach?〃Brown A.J WoundCare.2010 年 2 月;19 (2):70-4.Review)；[0010]-萎縮性疤痕，呈現(xiàn)物質(zhì)損失，特別是由外部創(chuàng)傷或皮膚病如嚴重的痤瘡或水痘造成的。這些疤痕或多或少地呈現(xiàn)皮膚表面的深度收縮，從而產(chǎn)生坑坑洼洼的外觀(M.Chivot, H.Pawin, C.Beylot, 0.Chosidow, B.Dreno, M.Faure, F.Poli, J.Revuz-Cicatrices cT acne:epidemiologie, physiopathologie, clinique, traitement [Acne scars: epidemiology, physiopathology, clinical aspect, treatment]-Ann.Dermatol.Venereol.2006;133:813-24)；
[0011]-肉芽組織異常過度增生(hyperproliferates)的增生性癥痕("Cellularandmolecular pathology of HTS:basis for treatment."Armour A,Scott PG,TredgetEE.Wound Repair Regen.2007 年 9-10 月；15Suppl 1:S6-17.Review.Erratum in:WoundRepair Regen.2008年7-8月；16 (4): 582)，并且在傷口到達膠原蛋白豐富的網(wǎng)狀真皮(也稱為深層真皮)時，其尤其會出現(xiàn)；
[0012]-收縮性疤痕，對于它們來說，是由牽拉鄰近組織的愈合區(qū)域的收縮造成的。它們是某些特定解剖區(qū)域中最常見的燒傷結(jié)果。
[0013]因此，愈合障礙集合了完全不同于正常愈合過程的病理學。
[0014]本發(fā)明對形成增生性疤痕和收縮性疤痕或甚至萎縮性疤痕(嚴重的痤瘡疤痕)的傷口尤其感興趣。
[0015]一旦形成所述疤痕，治療病理性疤痕的方法就廣泛地在文獻中描述。這可以，例如，包括用彈性壓縮衣進行的〃按壓療法〃，或通過將基于可的松的產(chǎn)品注射入疤痕的〃皮質(zhì)激素療法"。對于萎縮性疤痕， 經(jīng)常使用激光或剝離治療。然而，這些治療有時是侵入性的，且最通常要求隨訪幾個月或甚至幾年，這對患者是有限制的。
[0016]Birol Civelek 發(fā)表在 European Journal of Plastic Surgery (2007)第 30卷 25-28 頁的文獻〃The effect of sucralfate, an agent for gastroprotection onthe healing of split thickness graft donor sites〃描述了用硫糖招治療為了移植除去皮膚而產(chǎn)生的傷口。然而，所述文獻中研究的傷口不能產(chǎn)生增生性疤痕。例如 Revol 等在 Techniques chirurgicales-Chirurgie plastique reconstructriceet esthetique[Surgical techniques-Reconstructive and esthetic plasticsurgery], (2010)，45-070 中發(fā)表的文獻〃Greffes cutan6es〃 [Skin grafts]中所解釋的，這是因為薄皮移植必須以使上皮細胞片段保持在供體部位中并且從移植物中的基礎(chǔ)層獲取角化細胞的方式來進行。因此，電動植皮器必須在真皮波峰或乳突的水平下穿過，這意味著在乳突真皮(即真皮的表層)中形成傷口。因此，進行薄皮移植產(chǎn)生的傷口未到達網(wǎng)狀真皮，即深層真皮，因而不會產(chǎn)生真皮深部的組織破壞。因此，獲取薄皮樣品不能產(chǎn)生增生性疤痕。另一方面，眾所周知，當進行全層皮膚移植時，即在獲取包含表皮、真皮及其毛囊皮脂腺附屬物的皮膚層時，這不是所述現(xiàn)有技術(shù)文獻中那種情況，增生性疤痕可能出現(xiàn)在供體部位上。
[0017]最后，應注意，在Birol Civelek等的文獻中，不論是否用硫糖招治療所述傷口，它們隨后均不形成增生性疤痕，這明確證實這些傷口不能產(chǎn)生增生性疤痕，與它們的治療無關(guān)。
[0018]因此，將期望在上游預防性治療產(chǎn)生病理性疤痕的傷口，以限制肉芽組織在愈合期間的異常過度增生或異常纖維化，從而降低病理性疤痕形成的風險。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0019]根據(jù)第一方面，本發(fā)明的主題是一種選自具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物、其鹽或其絡合物，其用于治療產(chǎn)生優(yōu)選選自增生性或收縮性疤痕或甚至萎縮性疤痕的病理性疤痕的傷口。
[0020]根據(jù)第二方面，本發(fā)明的主題還是一種選自具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物、其鹽或其絡合物，其用于治療具有形成增生性或收縮性疤痕或甚至萎縮性疤痕傾向的受試者的傷口。
[0021]根據(jù)另一個實施方式，本發(fā)明由蔗糖八硫酸酯鉀鹽組成，其用于治療產(chǎn)生選自嚴重痤瘡疤痕的病理性疤痕的傷口。
[0022]該治療特別適合于治療所有類型和所有尺寸的病理性疤痕，無論它們的位置。此外，與在疤痕形成后施用的普通治療相比，根據(jù)本發(fā)明的治療預防性地使用于具有病理性疤痕形成風險的傷口上。[0023]在正常傷口愈合過程中，重要的是促進傷口愈合現(xiàn)象以避免例如微生物或外來物質(zhì)侵入傷口，從而感染傷口。舉例來說，文獻FR-A-2916355教導使用特別的提升愈合速度的共聚物來促進成纖維細胞增殖和/或分化。然后，期望促進角化細胞遷移以重建表皮。
[0024]然而，在增生性疤痕的特定情況下，由成纖維細胞形成的肉芽組織異常過度增生。當成纖維細胞分化成肌纖維母細胞時，該過量的纖維組織收縮，導致真皮中長出更致密的組織。
[0025]因此，對于這類產(chǎn)生增生性或收縮性病理性疤痕的特定傷口，不期望促進成肌纖維細胞增殖和分化。
[0026]相反地，對于這類產(chǎn)生病理性疤痕的傷口，為了限制真皮纖維化的形成，期望控制成肌纖維母細胞。
[0027]因此，根據(jù)另一個方面，本發(fā)明的主題是一種選自具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物、其鹽或其絡合物，其用于在產(chǎn)生選自增生性或收縮性疤痕或甚至萎縮性疤痕的病理性疤痕的傷口愈合期間抑制成纖維細胞分化成肌纖維母細胞。
[0028]令人驚訝地，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，向能夠產(chǎn)生病理性疤痕的傷口施用根據(jù)本發(fā)明化合物，使有效預防增生性、收縮性或萎縮性疤痕的形成成為可能。
[0029]在具有病理性疤痕型發(fā)展傾向的受試者中，這種施用是特別優(yōu)選的。
[0030]事實上，在本申請的上下文中，發(fā)明人表明，抑制成纖維細胞分化成肌纖維母細胞，使在產(chǎn)生病理性疤痕的傷口愈合期間控制和/或限制肉芽組織的異常過度增生、和/或限制傷口收縮成為可能，從而改進形成的疤痕的質(zhì)量。
[0031]本發(fā)明還表明，特定硫酸化寡糖化合物的使用影響成纖維細胞分化成肌纖維母細胞。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0032]圖1示出蔗糖八硫酸酯鉀鹽KSOS對成纖維細胞分化成肌纖維母細胞的影響。
[0033]特別是，圖1 (A)顯示在4種條件(不含TGF- β的無分化對照、含有TGF- β的分化對照、不含TGF-β但含有KSOS的無分化對照以及含有TGF-β和KSOS的分化對照)下通過定量RT-PCR的a -SMA信使RNA的表達。
[0034]圖1(B)顯示通過蛋白質(zhì)印跡法的a-SMA蛋白質(zhì)表達。
[0035]圖1 (C)顯示通過免疫熒光目測的a -SMA蛋白質(zhì)表達。
[0036]圖1⑶示出表達a -SMA的分化細胞的百分比。
[0037]圖2通過各種條件下的Dl和D7上的膠原蛋白晶格的照片示出在培養(yǎng)I和7天后，含蔗糖八硫酸酯鉀鹽(KSOS)的Urgotu】? Start敷料的膠原蛋白晶格收縮抑制效果。
[0038]病理件疤痕
[0039]本發(fā)明涉及產(chǎn)生3種病理性疤痕——±曾生性疤痕、收縮性疤痕和萎縮性疤痕的傷□。
[0040]增生性或收縮性疤痕具有高強度和/或長持續(xù)時間的最初增生階段作為共同起點，該階段導致非重組真皮中過量的致密纖維組織。這些病理性疤痕大、腫脹、紅和硬，且引起瘙癢。它們的特征在于，來源于表皮的受損深層的真皮膠原蛋白、蛋白聚糖和纖維連接蛋白和上皮下組織水的沉積增加。
[0041]增生性或收縮性疤痕通常在燒傷后形成，但也可以在深入損害(例如，外科切口)后形成。它們保持限制在原始傷口的范圍內(nèi)。在顯微鏡下，它們呈現(xiàn)薄的膠原蛋白纖維和大量表達α-平滑肌肌動蛋白的肌纖維母細胞。在增生性或收縮性疤痕中觀察到的收縮是由肌纖維母細胞的收縮性活動引起的。因此，肌纖維母細胞是真皮深層中膠原蛋白束組織破壞的原因。實際上，膠原蛋白束通常是平坦的，但在肌纖維母細胞收縮的作用下，它們呈現(xiàn)導致在上皮下形成膠原蛋白結(jié)節(jié)的線圈形狀。
[0042]增生性疤痕，當它們位于連接(彎曲褶皺)或拉伸線的水平時，可以像收縮性疤痕一樣導致不能收縮。它們比正常皮膚更豐富地血管化，且血管更加膨脹。在可持續(xù)一至兩年的活性階段后，增生性疤痕可能逐漸退化，但它們很少完全消失。
[0043]在其限制它們所出現(xiàn)的區(qū)域的功能的意義上，收縮性疤痕是無功能的疤痕。它們導致愈合區(qū)域和鄰接區(qū)域的活動性的損失，這可以完全限制移動(例如手臂的推擠和活動性)。
[0044] 萎縮性疤痕位于圍繞皮膚的水平面的下面。它們形成小的凹陷，并且在愈合過程中生成太少新的結(jié)締組織纖維時出現(xiàn)。嚴重的痤瘡疤痕或水痘疤痕是萎縮性疤痕的典型實例。為了本發(fā)明的目的，術(shù)語"嚴重的痤瘡疤痕"用來表示作為到達真皮層而不是表皮的損傷結(jié)果的痤瘡疤痕。嚴重的痤瘡疤痕最常見是引起炎性損傷的痤瘡形式的結(jié)果，所述痤瘡例如結(jié)節(jié)性痤瘡、爆發(fā)性痤瘡或聚合性痤瘡，所述炎性損傷例如直徑大于5mm的硬化癤瘡樣結(jié)節(jié)(結(jié)節(jié)性痤瘡)，其可發(fā)展為瘺(聚合性痤瘡)。嚴重的痤瘡疤痕可以采取完全不同的形式。稱為〃火山口〃的第一種形式對應于具有模擬平底火山口的凹陷的寬而圓的疤痕?！ūF〃痤瘡疤痕小且通常比〃火山口 〃疤痕更深，其給出皮膚被尖銳器具刺傷的印象。它們是最難以治療的疤痕。這些疤痕是使疤痕僵硬并妨礙常規(guī)治療的纖維化的位置。
[0045]存在許多促進病理性疤痕外觀的因素；在病理性疤痕形成的風險因子之中，可提及:
[0046]-膚色:與白種人相比，黑皮膚的人(北非或非洲裔)更加有增生性疤痕的傾向。此外，具有非常蒼白的膚色的受試者也具有形成增生性疤痕的傾向；
[0047]-年齡:增生性疤痕常見于兒童，但在老年受試者中是罕見的；[0048]-激素:與強烈的激素爆發(fā)相關(guān)的生命的某些時期(青春期、妊娠期)也更有利于形成異常疤痕和痤瘡疤痕；
[0049]-在身體上的位置:身體的一些部位更有形成病理性疤痕的傾向，例如存在皺褶的區(qū)域、連接區(qū)域、拉伸區(qū)域(如肘部、肩部、胸部)、胸骨、頸部、耳朵或面部；
[0050]-產(chǎn)生萎縮性疤痕的傳染性疾病(水痘、嚴重的痤瘡)。
[0051]為了本申請的目的，產(chǎn)生病理性疤痕的傷口定義為到達真皮的傷口，優(yōu)選到達網(wǎng)狀真皮(也稱為真皮深層)的傷口。因此，產(chǎn)生病理性疤痕的傷口可定義為深度大于
0.30mm、更優(yōu)選大于0.35mm和甚至更優(yōu)選大于0.40mm的傷口。
[0052]為了本申請的目的，產(chǎn)生病理性疤痕的傷口也可定義為位于身體某些部位的傷口，例如存在皺褶的區(qū)域、連接區(qū)域、拉伸區(qū)域(如肘部、肩部、胸部)、胸骨、頸部、耳朵或面部。
[0053]為了本申請的目的，產(chǎn)生病理性疤痕的傷口也可定義為具有形成增生性疤痕、收縮性疤痕或萎縮性疤痕傾向的受試者，例如具有黑色皮膚或非常蒼白膚色的受試者、兒童、青春期的青少年或孕婦中出現(xiàn)的開放式傷口。
[0054]因此，根據(jù)本發(fā)明的特定寡糖化合物特別有利于治療具有形成增生性或收縮性或萎縮性疤痕傾向的受試者，例如具有黑色皮膚或非常蒼白膚色的受試者者、兒童、青春期的青少年或孕婦的傷口。
[0055]具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖
[0056]在本發(fā)明上下文中 使用的寡糖是由1-4個單糖單元、優(yōu)選由I個或2個單糖單元構(gòu)成的合成低聚物，所述單糖單元通常通過α或β糖苷鍵相互連接。換句話說，它們是單糖、二糖、三糖或四糖，優(yōu)選是單糖或二糖。
[0057]對于這些多糖的單糖單元的性質(zhì)并無特別限制。它們將優(yōu)選是戊糖或己糖。作為單糖的實例，可提及葡萄糖、半乳糖或甘露糖。作為二糖的實例，可提及麥芽糖、乳糖、蔗糖或海藻糖。作為三糖的實例，可提及松三糖。作為四糖的實例，可提及水蘇糖。
[0058]所述寡糖優(yōu)選是二糖，和更優(yōu)選蔗糖。
[0059]為了本申請的目的，術(shù)語"多硫酸化寡糖"用來表示每個單糖的至少兩個羥基、優(yōu)選全部羥基被硫酸酯基團取代的寡糖。
[0060]在本申請上下文中使用的多硫酸化寡糖優(yōu)選是蔗糖八硫酸酯。
[0061]在本發(fā)明上下文中使用的多硫酸化寡糖可以是鹽或絡合物形式。
[0062]作為鹽的實例，可提及:堿金屬鹽，例如鈉鹽、鈣鹽或鉀鹽；銀鹽；或氨基酸鹽。
[0063]作為絡合物的實例，可提及羥基鋁絡合物。
[0064]在本發(fā)明的上下文中，特別優(yōu)選的化合物如下:
[0065]-蔗糖八硫酸酯鉀鹽；
[0066]-蔗糖八硫酸酯銀鹽；和
[0067]-蔗糖八硫酸酯的羥基鋁絡合物，通常稱為硫糖鋁。
[0068]特別是，在本發(fā)明的上下文中，所使用的多硫酸化寡糖優(yōu)選是蔗糖八硫酸酯的鉀鹽而不是鋁鹽。
[0069]在本發(fā)明上下文中使用的多硫酸化寡糖可以是微?；勰┬问交蛉芙獾男问?。
[0070]在本發(fā)明上下文中使用的多硫酸化寡糖的實例是蔗糖八硫酸酯鉀鹽(以縮寫KSOS 所知)，由 Laboratoires URGO 以產(chǎn)品 Ul'gOtul? Start 銷售。
[0071]另外的活性物質(zhì)
[0072]通常，根據(jù)本發(fā)明的寡糖化合物可單獨使用，或者以它們的兩種或多種的混合物使用，或者與一種(或多種)其它活性物質(zhì)組合使用。
[0073]通常，所述活性劑選自抗菌劑、殺菌劑、止痛藥、抗炎藥、促進愈合的活性劑、脫色劑、止癢劑、紫外線遮蔽劑、鎮(zhèn)靜劑、保濕劑和抗氧化劑，以及它們的混合物。
[0074]通常，所述活性劑選自:
[0075]-抗菌劑，如多粘菌素B、青霉素(阿莫西林)、克拉維酸、四環(huán)素、二甲胺四環(huán)素、氯四環(huán)素、氨基糖苷類、阿米卡星、慶大霉素、新霉素、銀及其鹽(磺胺嘧啶銀)、益生菌、銀鹽；
[0076]-殺菌劑，如硫柳汞、曙紅、洗必泰、硼酸苯汞、過氧化氫水溶液、達金溶液、三氯生、雙胍、己脒定、百里酚、盧戈溶液、聚維酮碘、汞溴紅、苯扎氯銨、氯化芐乙氧銨、乙醇或異丙醇；
[0077]-止痛藥，如撲熱息痛、可待因、右旋丙氧芬、曲馬多、嗎啡及其衍生物，或腎上腺皮質(zhì)激素和衍生物；
[0078]-抗炎藥，如糖皮質(zhì)激素、非留體抗炎藥、阿司匹林、布洛芬、酪洛芬、氟比洛芬、雙氯芬酸、醋氯芬酸、酮咯酸、美洛昔康、吡羅昔康、替諾昔康、萘普生、吲哚美辛、萘普西諾、尼美舒利、塞來昔布、依托昔布、帕瑞昔布、羅非昔布、伐地考昔、保泰松、尼氟滅酸或甲滅酸；
[0079]-促進愈合的活性劑，如視黃醇、維生素A、維生素E、N-乙酰羥基脯氨酸、積雪草(Centella asiatica)提取物、木瓜蛋白酶、娃酮、百里香的精油、綠花白千層的精油、迷迭香的精油和鼠尾草的精油`、透明質(zhì)酸、二甲雙胍、尿囊素、Hema'tite? (Gattefosse)、維生素 C、Tego? P印4-17(Evonik)、Toniskin? (silab)、Collageneer翁(Expanscience)、Timecode? (Seppic)、GatU丨iile? 皮膚修復(Gattefosse)、泛酰醇、PhytoCel丨TeC? Alp Rose (Mibelle Biochemistry)、EfclSyal? (Libragen)、
Serilesine? (Lipotec)、Talapetraka 的葡萄苷(Bayer)、Stoechiol (Codif)、macarose (Sensient)、Dermaveil (Ichimaru Pharcos)、phycosaccharide Al (Codif)或二甲雙胍；
[0080]-脫色劑，如曲菌酸(KojicAcid SL* -Quimasso (Sino Lion))、熊果苷(oievatiII? "Quimasso (sino Lion))、棕櫚酰脯氨酸鈉和歐洲睡蓮提取物(Sepicalm?
-Seppic)或—^一碳烯?；奖彼?SepiwMte.-Seppic)的混合物；
[0081]-止癢劑:氫化可的松、甘草次酸、苯海拉明、局部施用的抗Hl抗組胺藥；
[0082]-保濕活性劑,如Xpermoist?(Lipotec)、透明質(zhì)酸、尿素、脂肪酸、甘油、蠟或Exossine⑩(Unipex)；
[0083]-紫外線遮蔽劑，如Parsol? MCX 或 Parsol? 1789 ；
[0084]-鎮(zhèn)靜劑，如甘菊、紅沒藥醇、Zanthalene?、式元甘草次酸(glycyrrhetenicacid)、tanactin (CPN)或 Calmigkin? (Silab)；
[0085]-抗氧化劑，如維生素E。
[0086]根據(jù)一個優(yōu)選的實施方式，根據(jù)本發(fā)明的寡糖化合物可與抗氧化劑組合使用。
[0087]蓋侖形式
[0088]在本發(fā)明上下文中使用的化合物可以以蓋侖制劑使用，例如凝膠、溶液、乳劑、霜齊?、可變粒度從納米或微米變化至毫米的顆?；蚰z囊，這允許將它們直接施用至傷口。或者，在本發(fā)明上下文中使用的化合物可以以皮下注射用溶液使用。
[0089]如果它們以它們中兩種或多種的混合物或者與一種或多種其它活性物質(zhì)組合而使用，則這些化合物可加入至相同的蓋侖制劑或不同的蓋侖制劑中。
[0090]當然，根據(jù)期望的動力學以及與其特性、溶解性、耐熱性等有關(guān)的具體限制來調(diào)整蓋侖制劑中使用的根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖的量。
[0091]通常，當其用于蓋侖制劑時，根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖可以以相對于所述制劑的總重量的0.1至50重量％的量加入。
[0092]敷料
[0093]優(yōu)選地，在本發(fā)明上下文中使用的合成多硫酸化寡糖化合物或含有它們的蓋侖制劑將整合入敷料中。
[0094]所述合成多硫酸化寡糖化合物，特別是蔗糖八硫酸酯鉀鹽或含有其的蓋侖制劑，可加入到敷料結(jié)構(gòu)的任何組件中，條件是該化合物可直接地或間接地與傷口表面接觸。
[0095]優(yōu)選并且為了促進快速作用，將該化合物(或包含其的蓋侖制劑)加入到與傷口接觸的敷料層中，或沉積在與傷口接觸的敷料表面上。
[0096]有利地，蔗糖八硫酸酯鉀鹽(或含有其的蓋侖制劑)因而可連續(xù)或不連續(xù)地沉積在用來與傷口接觸的表面上:
[0097]-以液體形式，例如通過噴霧含有其的溶液或懸浮液；
[0098]-或者以固體形式，例如通過篩選含有其的粉末。
[0099]與傷口接觸的層或表面可以例如由以下材料組成:吸收性材料，如親水的吸收性聚氨酯泡沫；紡織材料如敷布，例如無紡布、膜、纖維網(wǎng)；吸收性或非吸收性的粘合材料；粘著或非粘著的界面結(jié)構(gòu)。
[0100]通常，將可根據(jù)需要調(diào)整蓋侖形式或敷料的結(jié)構(gòu)，以獲得快速或延遲的蔗糖八硫酸酯鉀鹽的特定釋放曲線。
[0101]當然，將根據(jù)期望的動力學以及與其特性、溶解性、耐熱性等有關(guān)的具體限制來調(diào)整在蓋侖制劑中或敷料中使用的蔗糖八硫酸酯鉀鹽的量。
[0102]為了本申請的目的，術(shù)語"敷料"用來表示用于治療傷口的任何類型的敷料。
[0103]典型地，敷料包含至少一種粘合性或非粘合性的層或基質(zhì)。
[0104]根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖化合物或含有它們的蓋侖制劑，可加入到敷料結(jié)構(gòu)的任何組件例如基質(zhì)中。
[0105]優(yōu)選并且為了促進快速作用，可將該化合物(或包含其的蓋侖制劑)加入到與傷口接觸的敷料層中，或沉積在與傷口接觸的敷料層的表面上。
[0106]這種沉積技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且一些技術(shù)例如在專利申請W02006/007814 中描述。[0107]在其以敷料的組件形式使用的情況下，根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖將以使釋放進入傷口滲出液的多硫酸化寡糖的量為0.001g/l至50g/l、優(yōu)選0.01至10g/l的量加入。
[0108]根據(jù)本發(fā)明的一個變體，根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖化合物可加入至基于膠凝纖維如Convatec公司銷售的產(chǎn)品Aquacel?的吸收性敷料中。
[0109]當施用這些敷料時，護理人員經(jīng)常使用繃帶將它們固定在適當位置，或用次級組件如第二吸收性敷料或支撐繃帶將它們覆蓋。因此，將敷料保持固定對傷口很有用，使得護理人員的手保持自由以設(shè)置這些次級組件。通常，常用于敷料的任何類型的粘合劑可用于該目的。
[0110]為了特別在除去敷料過程中不改變健康組織或者傷口邊緣，優(yōu)選具有粘附至皮膚而不粘附至傷口這一特性的粘合劑。
[0111]作為這種粘合劑的實例，可因此提及基于聚硅氧烷或聚氨酯彈性體的粘合劑，如聚硅氧烷或聚氨酯凝膠，以及水膠體粘合劑。
[0112]這種水膠體粘合劑特別地由基于一種或多種彈性體的彈性體基質(zhì)組成，所述彈性體選自與一種或多種選自增塑劑如礦物油、增粘樹脂和抗氧化劑(如果有必要)的化合物組合的聚(苯乙烯-烯烴-苯乙烯)嵌段聚合物，向所述基質(zhì)中加入優(yōu)選少量的水膠體(3重量％_20重量％)，例如羧甲基纖維素鈉或超強吸收性聚合物，如由BASF公司以
Luquasorb?名稱銷售的產(chǎn)品。
[0113]根據(jù)一個優(yōu)選的實施方式，將在本發(fā)明上下文中使用的合成多硫酸化寡糖化合物或含有它們的蓋侖制劑整合入包含水膠體粘合劑的敷料中，所述多硫酸化寡糖優(yōu)選以相對于所述粘合劑重量的I重量％至15重量％、更優(yōu)選5重量％至10重量％的量加入至所述粘合劑中。
[0114]這種水膠體粘合劑的制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，其例如在專利申請FR2 783412、FR2 392 076 和 FR2 495 473 中描述。
[0115]在無紡布上使用粘合劑網(wǎng)可以特別有利地減少或避免紡織材料的小纖絲(fibrils)接觸傷口并附著于組織上、從而造成除去時的疼痛感甚至阻礙傷口愈合過程的風險。其也可以更好地調(diào)節(jié)紡織材料水平上的液體流動，并減少或消除使用實際上限制無紡布吸收能力的超強吸收纖維所導致的凝膠阻塞的風險。
[0116]根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選的實施方式變體，根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖以與其溶解性和耐熱性相容的濃度加入至這種粘合劑中。
[0117]基于這些標準，根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖化合物優(yōu)選以相對于粘合劑總重量的I重量％至15重量％、更優(yōu)選5重量％至10重量％的量使用。
[0118]如果期望增加這種無紡布敷料的吸收性，可以將后者與另外的吸收層組合，所述
另外的吸收層優(yōu)選不發(fā)生膠凝的吸收層，例如特別是敷布，如以產(chǎn)品UrgOtlil? Duo或
Urgotul? Trio使用的那些;吸收性的親水性泡沫，優(yōu)選吸收能力大于無紡布的親水性聚氨酯泡沫，如以產(chǎn)品Cellosorb形式使用的那些。
[0119]根據(jù)一個優(yōu)選的實施方式，將根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖化合物加入至與另外的吸收層組合的無紡布敷料中，所述另外的吸收層優(yōu)選是不發(fā)生膠凝的吸收層，特別是例如敷布。
[0120]根據(jù)另一個優(yōu)選的實施方式，將根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖化合物加入至與另外的吸收層組合的無紡布敷料中，所述另外的吸收層優(yōu)選是不發(fā)生膠凝的吸收層，例如特別是吸收性的親水性泡沫，優(yōu)選吸收能力大于無紡布的親水性聚氨酯泡沫。
[0121]所述無紡布和泡沫可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)來組合，例如通過使用基于TPU/聚己酸內(nèi)酯聚合物的熱熔融粉末的熱軋光法。
[0122]該技術(shù)通常用于將用于醫(yī)藥品市場的無紡布粘合在一起。
[0123]最后，該泡沫或無紡布(當后者單獨使用時)可用支撐物覆蓋以保護傷口免受外部環(huán)境的影響。
[0124]該支撐物的尺寸可大于其它層，并可使得其與傷口接觸的一面連續(xù)或不連續(xù)地具有粘性，以最優(yōu)化地在使用期間將敷料固定在適當位置，特別是如果傷口位于不平整的身體區(qū)域。
[0125]該支撐物及其粘合劑優(yōu)選是不透液體的、但對水蒸氣透過性很好，以允許被敷料吸收的滲出液的優(yōu)化處理，并且避免浸潰問題。
[0126]這種支撐物是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，例如由可呼吸但不可滲透的膜如聚氨酯膜、或泡沫/膜或無紡布/膜復合物組成。
[0127]添加劑
[0128]除所述活性劑之外，根據(jù)本發(fā)明的寡糖化合物可與一種(或多種)其它活性物質(zhì)
組合使用。
[0129]常用于制備敷料的添加劑可特別選自芳香劑、防腐劑、維生素、甘油、檸檬酸等。
[0130]根據(jù)本發(fā)明的合成多硫酸化寡糖的活性已經(jīng)在以下非限制性的實施例中得到證實。
【具體實施方式】
[0131]實施例1:蔗糖八硫酸酯鉀鹽.(KSOS)對肌纖維母細胞分化的影響的i正明
[0132]1.1H常人真皮成纖維細胞(NHDF)的培養(yǎng)
[0133]在補充有10%的胎牛血清(由Invitrogen公司銷售)、5 μ g/ml的胰島素(由Promokine公司銷售)和lng/ml的bFGF (由Promokine公司銷售)的DMEM/F12培養(yǎng)基(由Invitrogen公司銷售)中制備正常人真皮成纖維細胞(NHDF)的培養(yǎng)物。
[0134]2.誘導分化
[0135]然后，誘導成纖維細胞分化成肌纖維母細胞。
[0136]為此，將NHDF培養(yǎng)物放置于包被有在DMEM/F12培養(yǎng)基中的5 μ g/ml膠原蛋白的PlOO平皿中，所述DMEM/F12培養(yǎng)基補充有10%的胎牛血清和補充有10ng/ml的TGF-β (由Promocell公司銷售)，其是控制細胞增殖和分化的生長因子(圖1中的分化對照)。
[0137]此外，使用補充有10%胎牛血清但不含TGF-β的DMEM/F12中的培養(yǎng)物來制備無分化對照。
[0138]將KSOS以2mg/ml的比例添加至所述對照和分化對照的培養(yǎng)物中，以測定其對分化的影響。
[0139]培養(yǎng)4天后分析結(jié)果。[0140]3.抑制成纖維細胞分化的證明
[0141]為了證明對成纖維細胞分化成肌纖維母細胞的抑制，通過定量RT-PCR測定α-SMA mRNA的表達，并通過蛋白質(zhì)印跡法檢測a-SMA蛋白質(zhì)的存在。為了測量根據(jù)本發(fā)明的化合物的抑制效果，將2mg/ml的KSOS添加至正進行分化的培養(yǎng)物中。
[0142]-通過定量的RT-PCR:使用Trizol、氯仿和異丙醇方法提取所述mRNA。
[0143]-通過蛋白質(zhì)印跡法:制備全部細胞抽提物，并進行蛋白質(zhì)印跡。使用的抗體為兔抗a -SMA和小鼠抗肌動蛋白抗體(由Promega銷售)。
[0144]在D4上的分化結(jié)果明確表明，在存在TGF-β的培養(yǎng)物誘導a-SMA表達，和在添加KSOS時抑制該誘導(圖1)。
[0145]-免疫熒光:在12孔板中，在包被有膠原蛋白的蓋玻片上制備細胞培養(yǎng)物。用4%的甲醛固定所述細胞，并用Triton透化。對于細胞核，使用DAPI染色(其產(chǎn)生藍色)進行免疫標記，兔抗ct -SMA抗體和抗兔次級抗體與Cys3(由Promega銷售)偶聯(lián)。
[0146]通過細胞計數(shù)測定基于細胞總數(shù)的分化細胞的數(shù)量。圖1(D)的圖表給出了分化細胞的百分比。
[0147]在這里再次，添加KSOS導致對通常由TGF- β產(chǎn)生的分化的抑制。
[0148]實施例2:蔗糖八硫酸酯鉀鹽.(KSOS)對膠原蛋白晶格收縮的影響的i正明
[0149]1.制備膠原蛋白晶格
[0150]通過在最終濃度為1.3mg/ml的I型膠原蛋白的凝膠中接種0.8 X IO6個正常人真皮成纖維細胞(NHDF)來獲得膠原蛋白晶格。
[0151]2.蔗糖八硫酸酯鉀鹽.(KSOS)對膠原蛋白晶格收縮的影響的i正明
[0152]將包含7.5%的鹿糖八硫酸酯鉀鹽的敷料(以商品名Urgotul Start銷售)施加至所述膠原蛋白晶格的表面上。
[0153]為了評價由接種的NHDF引起的膠原蛋白凝膠的正常收縮，進行沒有敷料的對照系列。
[0154]同樣地，為了目測由高度分化成肌纖維母細胞的NHDF誘導的強烈收縮，通過添加濃度為10ng/ml的TGF-β進行陽性對照。
[0155]維持所述培育直到7天。
[0156]3.結(jié)果
[0157]通過對曾經(jīng)收縮的晶格面積的照相分析(圖2)和圖像分析測量來觀察蔗糖八硫酸酯鉀鹽對膠原蛋白晶格收縮的影響。
[0158]在下表中給出了膠原蛋白晶格的平均面積的測定結(jié)果。
[0159]
【權(quán)利要求】
1.一種選自具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物、其鹽或其絡合物，其用于治療產(chǎn)生病理性疤痕的傷口。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于所述病理性疤痕選自增生性或收縮性疤痕。
3.一種選自具有1-4個單糖單元的合成多硫酸化寡糖的化合物、其鹽或其絡合物，其用于在產(chǎn)生病理性疤痕的傷口的愈合期間抑制成纖維細胞分化成肌纖維母細胞，所述病理性疤痕選自增生性或收縮性疤痕。
4.如前述權(quán)利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，其選自具有I或2個單糖單元的合成多硫酸化寡糖，優(yōu)選選自戊糖和己糖，以及這些化合物的鹽和絡合物。
5.如前述權(quán)利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，其選自: -蔗糖八硫酸酯鉀鹽； -蔗糖八硫酸酯銀鹽；和 -蔗糖八硫酸酯的羥基鋁絡合物。
6.如前述權(quán)利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，其與選自下述物質(zhì)的一種或多種其它活性物質(zhì)組合:抗菌劑、殺菌劑、止痛藥、抗炎藥、促進愈合的活性劑、脫色劑、止癢劑、紫外線遮蔽劑、鎮(zhèn)靜劑、保濕劑和抗氧化劑，以及它們的混合物。
7.如前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于，所述其它活性物質(zhì)選自抗氧化劑。
8.如前述權(quán)利要求中任`一項所述的化合物，其特征在于，其優(yōu)選以相對于所述制劑總重量的0.1重量％至50重量％的量存在于允許直接施用至所述傷口的蓋侖制劑例如凝膠、溶液、乳劑、霜劑、顆?；蚰z囊中。
9.如前述權(quán)利要求中任一項所述的化合物，其特征在于，所述化合物或含有其的蓋侖制劑優(yōu)選以使釋放進入傷口滲出液的該化合物的量為0.001g/l至50g/l、更優(yōu)選0.01至10g/l的量整合入敷料的組件中。
10.如前述權(quán)利要求所述的化合物，其特征在于，所述敷料是與另外的吸收層組合的無紡布敷料，所述另外的吸收層優(yōu)選是不發(fā)生膠凝的吸收層，特別是如敷布。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，其特征在于，所述敷料是與另外的吸收層組合的包含無紡布的敷料，所述另外的吸收層優(yōu)選是不發(fā)生膠凝的吸收層，例如特別是吸收性的親水性泡沫，優(yōu)選吸收能力大于所述無紡布的親水性聚氨酯泡沫。
12.如權(quán)利要求9和10中任一項所述的化合物，其特征在于，所述敷料包含水膠體粘合劑，和所述多硫酸化寡糖優(yōu)選以相對于所述粘合劑重量的I重量％至15重量％、更優(yōu)選5重量％至10重量％的量加入至所述粘合劑中。
13.如前述權(quán)利要求中任一項所述的化合物，其用于治療在具有形成增生性或收縮性疤痕傾向的受試者的傷口。
14.蔗糖八硫酸酯鉀鹽，其用于治療產(chǎn)生選自嚴重痤瘡疤痕的病理性疤痕的傷口。
【文檔編號】A61Q19/00GK103732209SQ201280034089
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2012年7月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月13日
【發(fā)明者】M·布施巴舍爾, C·洛朗蘇 申請人:Urgo實驗室, 發(fā)展與工業(yè)研究公司