連續(xù)工藝的微球制備方法及由此制備的微球的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種連續(xù)工藝的微球制備方法及由此制備的微球。更詳細地說，可連續(xù)實現(xiàn)將第一乳劑和第二乳劑同時投入而瞬間形成微球，并向形成的上述微球施加高壓后投入到攪拌機的過程的連續(xù)工藝的微球制備方法及由此制備的微球。利用本發(fā)明的方法制備微球時，可顯著減少現(xiàn)有技術(shù)的微球制備方法中成為最大缺點的規(guī)模變量(scale?variable)，可提升藥物封裝率，還可獲得小且均一的粒子。
【專利說明】連續(xù)工藝的微球制備方法及由此制備的微球

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種連續(xù)工藝的微球制備方法及由此制備的微球，更詳細地說，涉及一種可連續(xù)實現(xiàn)將第一乳劑和第二乳劑同時投入而瞬間形成微球，并向形成的上述微球施加高壓后投入到攪拌機的過程的連續(xù)工藝的微球制備方法以及由此制備的微球。

【背景技術(shù)】
[0002]微球制備技術(shù)的一般的制備方法中典型的為在溶劑中溶解生物降解性高分子載體，并將水溶性藥物溶解于水相形成第一乳劑后，在溶解有聚乙烯醇(PVA)的第二溶液中加入上述第一乳劑，從而形成微球。通常將這種方法稱為非連續(xù)式工藝(discontinuousprocess)。上述非連續(xù)式工藝是在包含有第二溶液的同一反應(yīng)器中添加第一乳劑而制備微球的方法，目前大部分工業(yè)化生產(chǎn)工藝均是采用這種非連續(xù)式工藝。
[0003]武田(Takeda)公司最先獲得了關(guān)于雙重乳化法的非連續(xù)式工藝的專利(US4652441)，并自進行大量生產(chǎn)形成產(chǎn)品化之后，有大量相關(guān)的專利出現(xiàn)。然而，非連續(xù)式工藝存在微球的分布度過寬(分布度為1-400 μ m)，微球間易發(fā)生凝聚，發(fā)生非球形微球的可能性高，且為了進行工業(yè)化生產(chǎn)而擴大規(guī)模時，每次都需要控制工藝變量的難題。
[0004]最具代表性的生物降解性高分子載體為聚丙交酯-乙交酯共聚物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA),或者聚丙交酯(poly (lactic acid)),它們?yōu)樗蝗苄晕镔|(zhì)，具有溶解于有機溶劑后加入到水溶液時，很快就析出的性質(zhì)。利用上述性質(zhì)使水溶性藥物形成乳劑后加入至第二溶液時，具有隨著粒子迅速的固化，可迅速將藥物封裝的優(yōu)點。但是由于粒子會迅速的固化，而具有難以控制粒子形狀或大小的缺點。尤其是當(dāng)制備規(guī)模以及體積擴大時，更難控制迅速的粒子固化。
[0005]一般，為了控制迅速的粒子固化，可采用瞬間施加高能量的方法，例如將第二乳劑進行高速循環(huán)、使用均質(zhì)機、使用超聲波處理等方法。然而隨著制備規(guī)模的擴大，第二乳劑的體積也將成比例的增加，這時存在很難將能量增加至可獲得均勻粒子的能量水平的問題。
[0006]同時，制備第二乳劑時，在同一個反應(yīng)器中加入第一乳劑而形成粒子，此時第一乳劑的加入時間、溫度、第一乳劑和第二水溶液的體積比、高分子載體的濃度、第一乳劑的加入位置、第二乳劑的循環(huán)與否以及溶劑的蒸發(fā)時間等多種變化因素發(fā)揮著重要的作用。
[0007]因此，很難從實驗室規(guī)模擴大至中試規(guī)?；蛘呱a(chǎn)規(guī)模，這也是導(dǎo)致失敗的最主要原因。并且，通過非連續(xù)式工藝制備的粒子具有寬的分布度，且粒子大小的分布度隨著規(guī)模的變化而變化，因此無法實現(xiàn)重現(xiàn)。
[0008]這種背景之下，本發(fā)明人確認了通過連續(xù)實現(xiàn)將第一乳劑和第二乳劑同時投入而瞬間形成微球，并向形成的上述微球施加高壓的過程，可制備出納米大小等所需要粒子大小的微球，且具有重現(xiàn)性，從而完成了本發(fā)明。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題
[0010]本發(fā)明的目的在于，提供一種具有優(yōu)異的粒度分布(particle sizedistribut1n),可以控制不同的粒子大小,且適于大量生產(chǎn)的微球的制備方法。
[0011]本發(fā)明的另一目的在于，提供通過上述制備方法制備的微球。
[0012]本發(fā)明的又一目的在于，提供一種包含上述微球作為有效成分的藥物遞送載體。
[0013]技術(shù)方案
[0014]為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種通過雙重乳化法制備在載體用高分子內(nèi)封裝生理活性物質(zhì)的微球的方法，其特征在于，包括下述步驟:
[0015]I)分散或者混合載體用高分子和生理活性物質(zhì)形成第一乳劑的步驟(步驟I)；
[0016]2)分別將一定量的上述第一乳劑及溶解有表面活性劑的第二溶液進行連續(xù)混合而形成第二乳劑的步驟(步驟2);及
[0017]3)向上述第二乳劑施壓的步驟(步驟3)。
[0018]優(yōu)選地，本發(fā)明的微球制備方法在上述步驟3)后可進一步包含攪拌上述第二乳劑的步驟(步驟4)。
[0019]本發(fā)明的微球制備方法，其特征在于，使一定量的第一乳劑和第二溶液發(fā)生連續(xù)的接觸，從而瞬間形成微球后，進行高壓處理工藝，因此可以以連續(xù)工藝，大量生產(chǎn)納米大小等所需要大小的微球，且具有重現(xiàn)性。
[0020]并且，本發(fā)明的微球制備方法連續(xù)進行攪拌過程，因此能夠期待通過連續(xù)工藝使規(guī)模變量最小化的更大的效果。
[0021]作為與微球制備方法相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)，已開發(fā)出多種方法。其中最具代表性的方法為雙重乳化法，而雙重乳化法的最具代表性的制備工藝為非連續(xù)式工藝。然而，現(xiàn)有方法中制備具有均勻粒子分布的所需大小的粒子成為最大的技術(shù)挑戰(zhàn)。例如，大量生產(chǎn)時，普遍采用的非連續(xù)式雙重乳化工藝中可生成I μ m至100 μ m，有時也可產(chǎn)生其以上大小的不均勻的粒子。
[0022]為了解決上述粒子不均勻的問題，一般采用通過繼續(xù)循環(huán)第二乳劑，從而施加能量的方法，但是這種方法存在隨著規(guī)模的擴大所需要的能量也要隨之增加的問題，因此在克服該問題上受到限制。特別是制備納米大小的粒子時，需要瞬間施加非常大能量的情況下更為如此。因此，為了制備納米大小，嘗試了大幅提高表面活性劑的濃度，或者通過高分子的聚乙二醇化制備為膠粒(micelle)形態(tài)等方式，然而這樣的現(xiàn)有技術(shù)的情況下，一種制備條件的變化，可影響其它所有的變量，因此很難在不易控制變量的大型工藝中，作為能夠獲得由納米大小至微米大小的所需的大小的微球的方法而使用。
[0023]然而，驚奇的是，本發(fā)明中在第二乳劑中瞬間形成微球后，向上述第二乳劑施壓，且僅通過改變所施加的壓力便可輕易調(diào)節(jié)成從納米大小至微米大小的不同的粒子大小。
[0024]上述步驟I為分散或者混合載體用高分子和生理活性物質(zhì)形成第一乳劑的步驟，即為形成包含生理活性物質(zhì)和載體用高分子的第一乳劑的步驟。
[0025]本發(fā)明中使用的術(shù)語“生理活性物質(zhì)”是生物維持生命的過程當(dāng)中，增進或者抑制機體功能的物質(zhì)，是指由于生物體內(nèi)與功能調(diào)節(jié)相關(guān)的物質(zhì)缺乏或者過度分泌，引起非正常的病態(tài)時，可發(fā)揮糾正作用的物質(zhì)。
[0026]本發(fā)明中的生理活性物質(zhì)可為選自促黃體激素釋放激素(luteini zinghormone-release hormone, LHRH)同族體,肽及它們的鹽組成的組中的一種以上。具體地說，上述生理活性物質(zhì)中，作為LHRH同族體中的激動劑(agonist)可使用戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林、那法瑞林等，作為拮抗劑可使用西曲瑞克以及argitide等。此外，還可使用蛋白質(zhì)、DNA、化學(xué)藥物(chemical drug)等水溶性以及非水溶性藥物,對此并無特別的限制。并且，上述生理活性物質(zhì)可單獨或者組合兩種以上而使用。
[0027]本發(fā)明中用于溶解生理活性物質(zhì)的溶劑的例子可例舉水，但并不僅限于水，可使用可溶解藥物的所有溶劑。
[0028]本發(fā)明中使用的術(shù)語“載體用高分子”是指為傳遞生理活性物質(zhì)，發(fā)揮將其裝載的功能的聞分子。
[0029]本發(fā)明中作為上述載體用高分子，可使用通常的高分子。優(yōu)選地，上述載體用高分子可為生物降解性高分子。具體地說，上述載體用高分子可為選自聚丙交酯(polylactide, PLA)、聚乙交酯(polyglycoli de, PGA)、聚丙交酯-乙交酯共聚物(polyIactide-co-glycolide, PLG A)等聚酯(polyester)，聚原酸酉旨(polyorthoester),聚酐(polyanhyd ride),聚氨基酸(polyaminoacid),聚輕基丁酸(polyhydroxybutyricacid)、聚縮醒(polyacetal),聚丙烯酸氰基酯(polycyanoacrylate),聚己內(nèi)酯(polycaprolactone),聚對二氧環(huán)己酮(polyd1xanone),聚亞燒基燒基化物(polyalkylene alkylate)、聚碳酸燒基酯(polyalkyl carbonate)、脂質(zhì)、脂肪酸、臘、白蛋白、明膠、膠原蛋白、纖維酸、海藻酸、甲殼素、殼聚糖、右旋糖酐、透明質(zhì)酸及淀粉等組成的組中的一種以上，但并不僅限于此。
[0030]本發(fā)明中對用于溶解載體用高分子而使用的溶劑的種類沒有特別的限制。作為例示，上述第一乳劑可通過將上述載體用高分子溶解于選自由二氯甲烷、氯仿、乙腈、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺以及乙酸乙酯組成的組中的一種以上的溶劑而制備，但并不僅限于此。
[0031]上述步驟2為分別將一定量的上述第一乳劑以及溶解有表面活性劑的第二溶液進行連續(xù)混合而形成第二乳劑的步驟，即為通過分別將一定量的將第一乳劑和第二溶液連續(xù)混合，而形成第二乳劑的步驟。
[0032]本發(fā)明中使用的術(shù)語“表面活性劑”是指在第二乳劑中可發(fā)揮使粒子的形成較易實現(xiàn)的功能的，溶解于第二溶液中的物質(zhì)。
[0033]通常在雙重乳化法的第二乳劑中，為了較易的實現(xiàn)粒子的形成而添加表面活性齊U。例如，聚乙烯醇是最具代表性的非離子型表面活性劑，但并不僅限于此。還可使用聚山梨醇酯、泊洛沙姆、聚乙二醇等。
[0034]本發(fā)明中使用的術(shù)語“第二溶液”是指為了形成第二乳劑而與第一乳劑進行混合的物質(zhì)。
[0035]本發(fā)明中形成上述第二溶液的溶劑，即溶解表面活性劑的溶劑可使用水性介質(zhì)，具體可例舉水，但并不僅限于此，可溶解生理活性物質(zhì)的所有溶劑均可使用。
[0036]本發(fā)明中上述步驟2)是通過液體移送泵分別將一定量的上述第一乳劑以及上述第二溶液連續(xù)移送至形成第二乳劑的反應(yīng)器中，混合上述第一乳劑以及上述第二溶液，形成第二乳劑，從而實施。
[0037]本發(fā)明中的上述反應(yīng)器內(nèi)部可配置篩網(wǎng)，可使上述第一乳劑以及上述第二溶液通過篩網(wǎng)后形成第二乳劑。
[0038]本發(fā)明中上述篩網(wǎng)的孔徑可為0.1 μ m至1mm,優(yōu)選為I μ m至50 μ m。
[0039]上述步驟3)為向上述第二乳劑施加壓力的步驟，即為向第二乳劑施加一定壓力，從而控制微球的粒子大小、粒度分布等的步驟。
[0040]本發(fā)明中的上述壓力可為Opsi至30，000psi，優(yōu)選為500psi至30，000psi，更優(yōu)選為 500psi 至 25，OOOpsi。
[0041]本發(fā)明中上述步驟3)可通過高壓均質(zhì)機或者高壓泵等能施加高壓的裝置施加壓力，從而實施。
[0042]一般來說，微球制備工藝中高壓處理工藝的目的在于，在形成乳劑時，通過高壓均質(zhì)提聞均質(zhì)混合的效率。尤其，最具代表性為使用聞壓均質(zhì)機實現(xiàn)上述目的。但實際上，聞壓均質(zhì)機不適用于微球的工業(yè)化生產(chǎn)，且通過高壓均質(zhì)過程也不易生產(chǎn)微球。如想通過通常的利用高壓均質(zhì)機的方式形成微球，需要在將第一乳劑和第二溶液混合而形成第二乳劑后，添加至高壓均質(zhì)機的注入部中，并按順序通過高壓單元。高壓均質(zhì)機通過高壓單元的平均速度為70mL/min左右，根據(jù)速度決定時間，且隨著制備規(guī)模的擴大需要更長的時間。在這期間，注入部的第二乳劑隨著第一乳劑的溶劑脫離，聚合物發(fā)生固化，發(fā)生不均勻的聚合物凝聚(aggregat1n),還發(fā)生相分離，因此無法實現(xiàn)粒子的形成。尤其是使用PLGA等疏水性聚合物，并使用水作為第二溶劑時，固化的速度急劇加快，不僅無法形成粒子，還可發(fā)生凝聚體堵住高壓單元的現(xiàn)象。
[0043]本發(fā)明的高壓處理工藝與通常的工藝不同，其具體步驟為(i)瞬間形成第二乳劑后，(ii)在第一乳劑的溶劑蒸發(fā)之前使其經(jīng)過高壓處理工藝，從而防止高壓處理工藝過程中發(fā)生聚合物的固化，或者乳劑發(fā)生相分離而無法形成微球的現(xiàn)象。
[0044]根據(jù)本發(fā)明的連續(xù)工藝，第二乳劑以及微球的瞬間形成步驟可無限反復(fù)地應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)工藝中。即本發(fā)明可將篩網(wǎng)設(shè)置于例如高壓均質(zhì)機注入部位等第一乳劑和第二溶液接觸并反應(yīng)的部位(反應(yīng)部)，使得第一乳劑滴定至篩網(wǎng)的瞬間，高壓均質(zhì)機的內(nèi)部泵將第一乳劑和第二溶液泵出，使其通過篩網(wǎng)從而瞬間形成微粒(圖la)。或者，還可附帶均質(zhì)機替代篩網(wǎng)，調(diào)節(jié)第一乳劑和第二溶液接觸的速度，從而瞬間形成微粒(圖lb)。
[0045]現(xiàn)有技術(shù)中也有采用連續(xù)工藝概念的方法，但其僅單純地使形成粒子并移送至攪拌機的過程連續(xù)化，并沒有像本發(fā)明一樣可重現(xiàn)性地獲得至納米大小的微球。
[0046]上述步驟4為攪拌上述第二乳劑的步驟，即是以一定速度攪拌第二乳劑，從而促進形成均勻粒度分布的微球的步驟。
[0047]本發(fā)明的上述步驟4可通過將上述第二乳劑從形成第二乳劑的反應(yīng)器連續(xù)加入至攪拌機，在攪拌機中攪拌，從而實施。本發(fā)明中將上述第二乳劑加入至攪拌機的速度優(yōu)選調(diào)節(jié)為與將第一乳劑以及第二溶液供給至反應(yīng)器的速度相同。
[0048]本發(fā)明中將上述第二乳劑加入至攪拌機的方法可為高壓泵或者液體移送泵，但并不僅限于此。
[0049]并且，本發(fā)明提供一種微球，其是通過上述方法制備的載體用高分子內(nèi)封裝有生理活性物質(zhì)的微球。
[0050]并且，本發(fā)明還提供一種藥物遞送載體，其是包含上述微球作為有效成分的藥物遞送載體。
[0051]本發(fā)明中，上述藥物遞送載體可為注射劑的形態(tài)，但并不僅限于此。
[0052]并且，本發(fā)明提供一種微球制備裝置，其為通過雙重乳化法制備在載體用高分子內(nèi)封裝有生理活性物質(zhì)的微球的裝置，該裝置包括:
[0053]a)第一容器，其容納分散或者混合有載體用高分子和生理活性物質(zhì)的第一乳劑；
[0054]b)第二容器，其容納溶解有表面活性劑的第二溶液；
[0055]c)反應(yīng)部，上述第一容器內(nèi)的第一乳劑以及第二容器內(nèi)的第二溶液連續(xù)加入至該反應(yīng)部，從而形成第二乳劑；
[0056]d)壓力部，向上述第二乳劑施加壓力；及
[0057]e)攪拌機，其對通過上述壓力部的溶液進行攪拌。
[0058]本發(fā)明中，上述壓力部可包括高壓均質(zhì)機或高壓泵。
[0059]圖1a中圖示了根據(jù)本發(fā)明的連續(xù)工藝制備微球的裝置的一體現(xiàn)例，且圖1b中圖示了另一體現(xiàn)例。
[0060]圖1a簡略地圖示了供給第二溶液的同時，第一乳劑滴定至第二溶液并通過篩網(wǎng)后形成微球的微球制備裝置。
[0061]根據(jù)圖la，本發(fā)明的微球制備裝置可包括:第一容器1，其容納分散或者混合有載體用高分子和生理活性物質(zhì)的第一乳劑；第二容器2，其容納溶解有表面活性劑的第二溶液；反應(yīng)部3，上述第一容器內(nèi)的第一乳劑以及第二容器內(nèi)的第二溶液連續(xù)加入至該反應(yīng)部，從而形成第二乳劑；壓力部4，向上述第二乳劑施加壓力；及攪拌機5，其對通過上述壓力部4的溶液進行攪拌。其中，壓力部4可包括內(nèi)部裝有高壓單元的高壓均質(zhì)機，并且，為了將第一乳劑以及第二溶液移送至反應(yīng)部，分別利用泵7、8。
[0062]其中，第二溶液以0.001mL/min 至 10OmT,/miη,優(yōu)選 lmL/min 至 50mL/min,更優(yōu)選2mL/min至30mL/min的流速供給時,第一乳劑滴定至反應(yīng)部3。滴定體積約為0.01 μ I至100ml，優(yōu)選為0.1 μ I至lmL，更優(yōu)選為20 μ I至100 μ I。滴定體積小于0.01 μ I時具有滴定量過少，從而導(dǎo)致制備體積過大的缺點。
[0063]為了便于粒子形成，反應(yīng)部3的內(nèi)部可配置有篩網(wǎng)6，但并不是必需的。其中，篩網(wǎng)的孔徑優(yōu)選為0.Ιμπι至10mm。篩網(wǎng)的孔徑是決定粒子的形態(tài)以及大小的變量之一，其為0.1ym以下時液相很難通過。通過篩網(wǎng)的個數(shù)也可調(diào)節(jié)粒子的大小，篩網(wǎng)的個數(shù)優(yōu)選為I至10個，篩網(wǎng)的個數(shù)為10個以上時，液相很難通過，但對個數(shù)沒有特別的限制。篩網(wǎng)的材質(zhì)也是決定粒子形態(tài)的重要因素之一。為了迅速固化，篩網(wǎng)的材質(zhì)優(yōu)選為具有親水性的不銹鋼(stainless steel)，而為了形成適當(dāng)?shù)那蛐涡螒B(tài)可優(yōu)選為聚四氟乙烯(teflon)或者尼龍(nylon)。但對篩網(wǎng)的材質(zhì)沒有特別的限制。
[0064]高壓均質(zhì)機的壓力可為Opsi至30，OOOpsi。其僅表示了目前工業(yè)上使用的高壓均質(zhì)機的機械性限度(即30，OOOpsi)，而實際上適用于本發(fā)明的壓力值并不僅限于此。根據(jù)高壓均質(zhì)機的壓力的不同，粒子的大小可在納米大小(至500nm)至微米大小(20-30 μ m)進行不同調(diào)節(jié)。為了獲得球形粒子，壓力可更加優(yōu)選為Opsi至25，OOOpsi。
[0065]根據(jù)制備設(shè)備的不同，可在高壓均質(zhì)外部的額外的反應(yīng)器中進行滴定以及形成第二乳劑后，將上述第二乳劑移動至高壓均質(zhì)機，而不是在高壓均質(zhì)機內(nèi)將第一乳劑滴定至第二溶液后，進行高壓單元處理工序。此時，篩網(wǎng)可配置于高壓均質(zhì)機外部的額外的反應(yīng)器內(nèi)。
[0066]將上述第二乳劑加入至攪拌機的方法包括利用高壓泵或者液體移送泵的方法。
[0067]圖1b簡略表示了根據(jù)本發(fā)明的微球制備裝置的另一體現(xiàn)例。
[0068]根據(jù)圖lb，本發(fā)明的微球制備裝置包括:第一容器10，其容納分散或者混合有載體用高分子和生理活性物質(zhì)的第一乳劑；第二容器20，其容納溶解有表面活性劑的第二溶液；反應(yīng)部30，上述第一容器內(nèi)的第一乳劑以及第二容器內(nèi)的第二溶液連續(xù)加入至該反應(yīng)部，從而形成第二乳劑；壓力部40，向上述第二乳劑施加壓力；及攪拌機50，其對通過上述壓力部的溶液進行攪拌。其中，反應(yīng)部30內(nèi)部配置有均質(zhì)機60。并且，為了將第一乳劑以及第二溶液移送至反應(yīng)部，可分別利用液體移送泵70、液體移送泵80，但根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員的判斷還可對其進行適當(dāng)選擇以及使用，即只要是本領(lǐng)域中以輸送液體為目的的其他常規(guī)方法均可使用。上述壓力部40可包括高壓泵90，此時，高壓泵90在向溶液施加壓力的同時，使其移動至攪拌機。
[0069]即在圖1b中，當(dāng)通過液體移送泵80將第二溶液供給至配置有均質(zhì)機60的反應(yīng)部30，且通過液體移送泵70將第一乳劑供給至配置有均質(zhì)機60的反應(yīng)部30時，均質(zhì)機60可瞬間形成微球。形成的微球由高壓泵90所施加的壓力，以一定的速度移至攪拌機50。
[0070]由于上述高壓泵90的壓力施加的瞬間能量，形成第二乳劑時，大且不均勻的粒子，變成非常小且均勻的粒子。高壓泵90所施加的瞬間能量越高，通過強沖擊力粒子得到分散，從而形成小的粒子。即本發(fā)明中的高壓泵90不僅僅是單純移送液體的手段，其還具有通過瞬間能量使粒子變?yōu)榉浅Ｐ?、均勻形態(tài)的效果。
[0071]高壓泵的壓力越小，溶液移動至攪拌機的速度越慢。在本發(fā)明的一體現(xiàn)例中，將高壓泵的壓力設(shè)定為25，OOOpsi時，溶液以70mL/min發(fā)生移動。壓力越小，溶液的移動速度越慢，導(dǎo)致制備時間增加；而壓力越高，溶液的移動速度越快，導(dǎo)致制備時間減少。
[0072]應(yīng)適當(dāng)調(diào)節(jié)好通過液體移送泵而發(fā)生移動的第二溶液速度和第一乳劑的移動速度，且形成的微球移動至攪拌機的速度和供給第二溶液的速度應(yīng)相似，才能使反應(yīng)部30中總是形成一定體積的第二乳劑。微球向攪拌機的移動速度約為lmL/min至100mL/min,優(yōu)選為20mL/min至70mL/min，但并不僅限于此。制備規(guī)模越大時，為了縮短時間可將移動速度設(shè)定成較快的速度。在一定容器中，維持一定體積的條件下持續(xù)形成微球時，對于獲得特定大小的微球，根據(jù)制備體積變化的變量僅為時間。制備時間可隨著制備規(guī)模成比例地增加。
[0073]有益效果
[0074]本發(fā)明可提供一種可連續(xù)產(chǎn)生一定量微球的微球制備方法。相比于采用通常的非連續(xù)式工藝制備粒子，即使制備體積變大，本發(fā)明也可制備出小、且均勻的粒子，從而不用因為制備體積的增大而更換容器或變化制備條件。通過以一定體積持續(xù)制備第二乳劑，并移動的過程，具有可始終維持一定的粒子形成條件的優(yōu)點。
[0075]如上所述，本發(fā)明由于可在維持一定的粒子形成條件的條件下，可通過成比例的增加時間，無限增加制備體積，制備體積越大，可確保更多的滿足所需要求的微球的絕對量。即具有制備體積越大，粒子的均勻性會越好的效果。
[0076]并且，本發(fā)明具有可通過調(diào)節(jié)粒子形成過程中所施加的壓力，從而可輕易地將納米或者微米等粒子的大小調(diào)節(jié)為所需要的水平的優(yōu)點。根據(jù)篩網(wǎng)的材質(zhì)、個數(shù)、篩網(wǎng)的孔徑大小，可決定粒子的形態(tài)和封裝率。
[0077]并且，非連續(xù)式工藝中為了實現(xiàn)高含量的封裝，需將高粘度的第一乳劑加入到第二溶液中，而加入高粘度的第一乳劑時，由于切應(yīng)力極高，加入較為困難，也無法進行0.2μπι的滅菌過濾。然而，本發(fā)明由于可瞬間形成微球，無需高粘度的第一乳劑，在可進行0.2 μ m滅菌過濾的濃度下也可實現(xiàn)高含量的封裝。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0078]圖1簡略圖示了用于形成微球的本發(fā)明連續(xù)工藝的裝置。其中，圖1a圖示了當(dāng)?shù)谝蝗閯┑味〞r，第二溶液通過液體移送泵以一定速度注入，且通過篩網(wǎng)形成第二乳劑，其通過壓力部(即高壓均質(zhì)機)而形成均質(zhì)化的粒子，且可通過攪拌機實現(xiàn)持續(xù)加入的制備裝置。并且，圖1b圖示了第二溶液通過液體輸送泵供給至配置有均質(zhì)機的反應(yīng)部，第一乳劑通過液體輸送泵供給至配置有均質(zhì)機的反應(yīng)部時，均質(zhì)機可瞬間形成微球，而形成的微球可由高壓泵移動至攪拌機的制備裝置。
[0079]圖2為通過實施例4以及5制備的微球表面的掃描電子顯微鏡(scanningelectron microscope, SEM)的圖片。其中，圖2a表示通過具有制備Ig規(guī)模的實施例4制備的微球，而圖2b表示通過具有制備1g規(guī)模的實施例5制備的微球。

【具體實施方式】
[0080]以下，將通過實施例更加具體地說明本發(fā)明的構(gòu)成以及效果，但下述實施例僅為本發(fā)明示例性記載，本發(fā)明的范圍并不限定于下述實施例。
[0081]實施例
[0082]實施例1至3根據(jù)圖1a的工藝制備了微球，而實施例4、5根據(jù)圖1b的工藝制備了微球。
[0083]實施例1:利用5，OOOpsi的高壓均質(zhì)機的壓力的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備方法
[0084]將180mg的醋酸亮丙瑞林溶解于300 μ I的蒸懼水中，并將720mg的PLGA (ResomerRG502H)溶解于3mL的二氯甲烷。將上述高分子溶液和醋酸亮丙瑞林溶液用均質(zhì)機進行混合而制備第一乳劑。將制備的第一乳劑裝至1mL的注射器，并將其配裝于注射器泵后，以0.6mL/min將第一乳劑滴定至高壓均質(zhì)機的注入部。作為第二溶液，將含有1%的聚乙烯醇(分子量為30，000-50，000)的蒸餾水溶液也以與高壓均質(zhì)機的泵使液體移動的速度相似的速度持續(xù)注入。高壓均質(zhì)機的壓力為5，OOOpsi，其中平均流速約為70mL/min。通過高壓均質(zhì)機的高壓泵，持續(xù)地將形成的微球加入至攪拌機，并以平均100-150rpm，在常溫下進行攪拌。攪拌4小時后，將制備的微球用蒸餾水洗滌數(shù)次后進行冷凍干燥。
[0085]實施例2:利用1，OOOpsi的高壓均質(zhì)機的壓力的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備
[0086]將180mg的醋酸亮丙瑞林溶解于300 μ I的蒸懼水中，并將720mg的PLGA (ResomerRG502H)溶解于3mL的二氯甲烷。將上述高分子溶液和醋酸亮丙瑞林溶液用均質(zhì)機進行混合而制備第一乳劑。將制備的第一乳劑裝至1mL的注射器，并將其配裝于注射器泵后，以0.6mL/min將第一乳劑滴定至高壓均質(zhì)機的注入部。作為第二溶液，將含有1%的聚乙烯醇(分子量為30，000-50，000)的蒸餾水溶液也以與高壓均質(zhì)機的泵使液體移動的速度相似的速度持續(xù)注入。高壓均質(zhì)機的壓力為1，OOOpsi，其中平均流速約為20-30mL/min。通過高壓均質(zhì)機的高壓泵，持續(xù)地將形成的微球加入至攪拌機，并以平均100-150rpm，在常溫下進行攪拌。攪拌4小時后，將制備的微球用蒸餾水洗滌數(shù)次后進行冷凍干燥。
[0087]實施例3:利用Opsi的高壓均質(zhì)機的壓力的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備
[0088]將180mg的醋酸亮丙瑞林溶解于300 μ I的蒸餾水中，并將720mg的PLGA (ResomerRG502H)溶解于3mL的二氯甲烷。將上述高分子溶液和醋酸亮丙瑞林溶液用均質(zhì)機進行混合而制備第一乳劑。將制備的第一乳劑裝至1mL的注射器，并將其配裝于注射器泵后，以0.6mL/min將第一乳劑滴定至高壓均質(zhì)機的注入部。作為第二溶液，將含有1%的聚乙烯醇(分子量為30，000-50，000)的蒸餾水溶液也以與高壓均質(zhì)機的泵使液體移動的速度相似的速度持續(xù)注入。高壓均質(zhì)機的壓力為Opsi，其中平均流速約為20-30mL/min。通過高壓均質(zhì)機的高壓泵，持續(xù)地將形成的微球加入至攪拌機，并以平均100-150rpm，在常溫下進行攪拌。攪拌4小時后，將制備的微球用蒸餾水洗滌數(shù)次后進行冷凍干燥。
[0089]實施例4:1g制備規(guī)模的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備方法
[0090]將125mg的醋酸亮丙瑞林溶解于300 μ I的蒸懼水中，并將840mg的PLGA (ResomerRG502H)溶解于3mL的二氯甲烷。將亮丙瑞林溶液和PLGA高分子溶液利用均質(zhì)機進行均質(zhì)化而制備第一乳劑。利用液體移送泵將制備的第一乳劑，以3.3mL/min的流速移動至反應(yīng)器的注入部。作為第二溶液，將含有I %的聚乙烯醇(分子量為30，000-50，000)的蒸餾水溶液也以70mL/min的流速，利用液體移送泵加入至反應(yīng)器的注入部。預(yù)先裝配于反應(yīng)器注入部的均質(zhì)機以平均20，OOOrpm使第一乳劑和第二溶液均質(zhì)化,從而形成第二乳劑。將上述形成的第二乳劑通過移送管移動至攪拌機。上述移送管內(nèi)配置了設(shè)定為25，OOOpsi的高壓泵，從而可使上述第二乳劑以平均70mL/min的速度加入至攪拌機。攪拌機的投入速度調(diào)節(jié)為與形成微球時第二溶液的投入速度相同或者類似的水平。將投入至攪拌機的微球以平均100-150rpm，在常溫下攪拌4小時后，利用蒸餾水洗滌數(shù)次，之后進行冷凍干燥。
[0091]實施例5:10g制備規(guī)模的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備
[0092]將1.25g的醋酸亮丙瑞林溶解于300mL的蒸懼水中，并將8.4g的PLGA(ResomerRG502H)溶解于30mL的二氯甲烷。將亮丙瑞林溶液和PLGA高分子溶液利用均質(zhì)機進行均質(zhì)化而制備第一乳劑。利用液體移送泵將制備的第一乳劑，以3.3mL/min的流速移動至反應(yīng)器的注入部。作為第二溶液，將含有I %的聚乙烯醇(分子量為30，000-50，000)的蒸餾水溶液也以70mL/min的流速，利用液體移送泵投入至反應(yīng)器的注入部。預(yù)先裝配于反應(yīng)器注入部的均質(zhì)機以平均20，OOOrpm使第一乳劑和第二溶液均質(zhì)化,從而形成第二乳劑。將上述形成的第二乳劑通過移送管移動至攪拌機。上述移送管內(nèi)配置了設(shè)定為25，OOOpsi的高壓泵，從而可使上述第二乳劑以平均70mL/min的速度加入至攪拌機。攪拌機的投入速度調(diào)節(jié)為與形成微球時第二溶液的投入速度相同或者類似的水平。將投入至攪拌機的微球以平均100-150rpm，在常溫下攪拌4小時后，利用蒸餾水洗滌數(shù)次，之后進行冷凍干燥。
[0093]比較例1:利用現(xiàn)有雙重乳化法的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備
[0094]將50mg的醋酸亮丙瑞林溶解于100 μ I的蒸餾水中后，與將450mg的PLGA (Lakeshore7525DLPLG2A)溶解于ImL的二氯甲烷的高分子溶液進行混合，從而制備第一乳劑。將制備的第一乳劑利用均質(zhì)器分散于預(yù)先制備的含有1%的聚乙烯醇(分子量為30，000-50，000)的200mL蒸餾水溶液中。形成第二乳劑后攪拌2小時去除溶劑。將固體化的微球用蒸餾水清洗數(shù)次后進行冷凍干燥。
[0095]比較例2:利用現(xiàn)有的雙重乳化法的含有醋酸亮丙瑞林的微球的制備
[0096]將10mg的醋酸亮丙瑞林溶解于100 μ I的蒸餾水中后，與將900mg的PLGA (Lakeshore 7525DLPLG2A)溶解于ImL的二氯甲烷的高分子溶液進行混合，從而制備第一乳劑。將制備的第一乳劑利用均質(zhì)器分散于預(yù)先制備的含有1%的聚乙烯醇(分子量為30，000-50, 000)的350mL蒸餾水溶液中。形成第二乳劑后攪拌2小時去除溶劑。將固體化的微球用蒸餾水清洗數(shù)次后進行冷凍干燥。
[0097]下述表I中示出了根據(jù)本發(fā)明實施例1至5以及比較例I至2制備時所有的制備體積以及粒子制備時間。
[0098]表I
[0099]
^ PLGA濃 ΑΡΓ添加量~制備規(guī)包含于第二第二溶液壓力粒子制
度(mg/ (重量％) 模(g)溶液的表面的體積 (Psi) 備時間
ml)活性劑(mL)(min)
實施例1 24010I聚乙烯醇 4005,000(高壓10
_______均質(zhì)機)__
實施例2 24010I聚乙烯醇 4001，000(高壓10
_______均質(zhì)機)__
實施例3 24010I聚乙烯醇 500O10
實施例4 280丨OI聚乙烯醇 15025,000 (高 2
_______壓均質(zhì)機)__
實施例5 2801010 聚乙烯醇 1500 25,000 (高 15
_______壓均質(zhì)機)__
比較例I 450100.5 聚乙烯醇 200-5
比較例2 9001I聚乙烯醇 300-5
[0100]實驗例1:微球的醋酸亮丙瑞林封裝量的測定
[0101]通過下屬方法測定藥物的封裝量。將一定量的微球完全溶解于二甲基亞砜(DMSO)后，用針筒式濾器過濾后作為檢測液使用，利用HPLC測定封裝于微球內(nèi)部的藥物的含量。其中，為了 HPLC 分析使用 C18 柱(150mm L.X 4.6mm 1.D.5 μ m)和 Gemin1-NX C18 柱(4.0mmL.X 3.0mm 1.D.)。樣品的溶劑以及移動相為碳酸鉀和25%乙腈(ACN)水溶液(pH7.0)，并在220nm的紫外波長下進行檢測。
[0102]測定制備的微球中的藥物含量，將其封裝量在下述表2中示出。
[0103]表2
[0104]
13?I藥物封裝量(藥物重量/所有粒子重量％)~
實施例112
實施例2?
實施例312
實施例410

【權(quán)利要求】
1.一種微球制備方法，其是通過雙重乳化法制備在載體用高分子內(nèi)封裝有生理活性物質(zhì)的微球的方法，其特征在于，包括下述步驟: 分散或者混合載體用高分子和生理活性物質(zhì)而形成第一乳劑的步驟(步驟I); 分別將一定量的所述第一乳劑以及溶解有表面活性劑的第二溶液進行連續(xù)混合而形成第二乳劑的步驟(步驟2);以及 向所述第二乳劑施壓的步驟(步驟3)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微球制備方法，其特征在于，在所述步驟3)后進一步包括攪拌所述第二乳劑的步驟(步驟4)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微球制備方法，其特征在于，所述步驟2)通過分別將一定量的所述第一乳劑以及所述第二溶液連續(xù)移送至形成第二乳劑的反應(yīng)器，并對所述第一乳劑及所述第二溶液進行混合，形成第二乳劑，從而實施。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的微球制備方法，其特征在于，所述反應(yīng)器內(nèi)部配置有篩網(wǎng)，使得所述第一乳劑以及所述第二溶液通過篩網(wǎng)后形成第二乳劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的微球制備方法，其特征在于，所述篩網(wǎng)的孔徑為1-50μπι。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微球制備方法，其特征在于，所述壓力為Opsi至30，OOOpsi。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微球制備方法，其特征在于，所述步驟3)通過使用高壓均質(zhì)機或高壓泵中的任意一種施加壓力而實施。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的微球制備方法，其特征在于，所述步驟4)是通過將所述第二乳劑從形成第二乳劑的反應(yīng)器連續(xù)加入至攪拌機，在攪拌機內(nèi)攪拌而實施。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微球制備方法，其特征在于，將所述第二乳劑投入至攪拌機的速度與向反應(yīng)器供給第一乳劑及第二溶液的速度相同。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的微球制備方法，其特征在于，將所述第二乳劑投入至攪拌機的方法為使用高壓泵或者液體移送泵。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微球制備方法，其特征在于，所述生理活性物質(zhì)為選自由促黃體激素釋放激素同族體、肽及它們的鹽組成的組中的一種以上。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的微球制備方法，其特征在于，所述生理活性物質(zhì)為選自由戈舍瑞林、醋酸亮丙瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林、那法瑞林、西曲瑞克以及argitide組成的組中的一種以上。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微球制備方法，其特征在于，所述載體用高分子為生物降解性高分子。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的微球制備方法，其特征在于，所述載體用高分子為選自由聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-乙交酯共聚物、聚原酸酯、聚酐、聚氨基酸、聚羥基丁酸、聚己內(nèi)酯、聚碳酸烷基酯、脂質(zhì)、脂肪酸、蠟、白蛋白、明膠、膠原蛋白、纖維酸、海藻酸、甲殼素、殼聚糖、右旋糖酐、透明質(zhì)酸及淀粉組成的組中的一種以上。
15.一種微球，其特征在于，其為根據(jù)權(quán)利要求1至14中的任意一項所述的方法制備的在載體用高分子內(nèi)封裝有生物活性物質(zhì)的微球。
16.—種藥物遞送載體,其特征在于,其包含權(quán)利要求15的微球作為有效成分。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物遞送載體，其特征在于，其為注射劑形態(tài)。
18.—種微球制備裝置，其為通過雙重乳化法制備在載體用高分子內(nèi)封裝有生理活性物質(zhì)的微球的裝置，其特征在于，包括: 第I容器，其容納分散或者混合有載體用高分子和生理活性物質(zhì)的第一乳劑； 第2容器，其容納溶解有表面活性劑的第二溶液； 反應(yīng)部，所述第I容器內(nèi)的第一乳劑以及第2容器內(nèi)的第二溶液連續(xù)加入到該反應(yīng)部，從而形成第二乳劑； 壓力部，向所述第二乳劑施加壓力；以及 攪拌機，其對通過所述壓力部的溶液進行攪拌。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的微球制備裝置，其特征在于，所述壓力部包括高壓均質(zhì)機或高壓泵中的任意一種。
【文檔編號】A61J3/00GK104161731SQ201410206674
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2014年5月15日 優(yōu)先權(quán)日:2013年5月15日
【發(fā)明者】金有美, 任善敬, 樸美蘭, 樸映準, 白承姬, 申玄雨 申請人:Cj醫(yī)藥健康株式會社