一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合及其使用方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合及其使用方法,其中,藥物組合包括由以下原料藥材組成的中藥藥物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟絲子、女貞子、紅花和香附。藥物組合還可以進一步包括促卵泡素和/或人絨毛膜促性腺激素。本發(fā)明的有益效果是:中藥藥物能夠?qū)⒛格R排卵數(shù)由自然狀態(tài)下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵2.6枚,實現(xiàn)了母馬的超數(shù)排卵;還可以與外源激素組合使用,采用中西藥結(jié)合的方法,更好的克服馬卵巢排卵位點受限而難實現(xiàn)超數(shù)排卵的弊端,將母馬排卵時間精確控制在36-48小時內(nèi),并將排卵數(shù)由自然狀態(tài)下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵4.87枚,實現(xiàn)了母馬的超數(shù)排卵。
【專利說明】一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合及其使用方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明涉及馬胚胎工程【技術(shù)領(lǐng)域】,特別涉及一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合及其使用方法。
[0003]【背景技術(shù)】
[0004]目前,誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵是馬胚胎工程【技術(shù)領(lǐng)域】的新技術(shù)。在自然狀態(tài)下,動物卵巢上約有99%的有腔卵泡發(fā)生閉鎖而退化,只有1%能發(fā)育成熟而排卵。超數(shù)排卵是通過外援補充促卵泡激素等刺激卵泡發(fā)育的激素或者通過外援激素或藥物刺激下丘腦和垂體使其分泌高于正常水平的內(nèi)源性促卵泡激素等刺激卵泡發(fā)育的激素,從而使將要閉鎖的有腔卵泡發(fā)育成熟而排卵。超數(shù)排卵是通過在一次發(fā)情周期獲得多枚卵泡而提高胚胎移植效率和成功率的有效方法。實驗證明,促卵泡素(FSH)、孕馬血清促性腺激素(PMSG)能使大量卵泡不閉鎖而發(fā)育成熟;在排卵之前注射促黃體生成素(LH)或人絨毛膜促性腺激素(hCG)可以保證大量成熟卵母細胞同時排卵。通過FSH/PMSG與LH/hCG協(xié)作促進超排在牛、羊、豬等家畜已經(jīng)應(yīng)用廣泛且成熟。但是由于馬屬動物卵巢具有獨特的排卵窩結(jié)構(gòu),其排卵位點受到限制,只能排出排卵窩附近發(fā)育成熟的卵泡;且由于機體正常激素水平及營養(yǎng)狀況限制,每個發(fā)情周期排卵窩附近一般只有一個卵泡發(fā)育成熟,因此廣泛應(yīng)用于牛、羊等家畜的常規(guī)超排方法無法實現(xiàn)馬屬動物的超數(shù)排卵。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005]為了使供體母馬在一次發(fā)情周期排出多枚成熟卵泡,為胚胎移植工作奠定基礎(chǔ),本發(fā)明實施例提供了一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合及其使用方法。
[0006]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其中,所述藥物組合至少包括由以下原料藥材組成的中藥藥物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟絲子、女貞子、紅花和香附。
[0007]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比可以優(yōu)選為:淫羊藿20~30份、益母草15~25份、蛇床子15~25份、英絲子15~25份、女貞子7~15份、紅花7~15份和香附20~30份。
[0008]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比也可以優(yōu)選為:淫羊藿25~30份、益母 草20~25份、蛇床子20~25份、菟絲子18~23份、女貞子10~15份、紅花10~15份和香附25~30份。
[0009]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比還可以優(yōu)選為:淫羊藿28份、益母草22份、蛇床子22份、菟絲子22份、女貞子13份、紅花13份和香附28份。
[0010]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比又可以優(yōu)選為:淫羊藿25份、益母草25份、蛇床子20份、菟絲子22份、女貞子15份、紅花10份和香附26份。
[0011]其中,所述藥物組合還可以進一步包括促進卵泡快速發(fā)育的外源激素。
[0012]其中,所述外源激素為1000-2500單位的促卵泡素和/或1000-2500單位的人絨毛膜促性腺激素。
[0013]其中,所述中藥藥物的劑型為散劑時,其制備方法包括以下步驟:
步驟(1):將所述原料藥材按比例混合,粉碎成60-150目的粉末。
[0014]其中,所述制備方法還可以進一步包括以下步驟:
步驟(2):將步驟(1)獲得的粉末加入冷水中浸泡6~12小時,以文火煎煮,煎煮時間為2~5小時,將煎煮液過濾,獲得第一濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的3~6倍;
步驟(3):將步驟(2)過濾獲得的濾渣再次加入冷水中,以文火煎煮2~4小時,過濾獲得第二濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的2~5倍;
步驟(4):將步驟(2)獲得的第一濾液和步驟(3)獲得的第二濾液混合,減壓濃縮除去水,干燥,粉碎成粉末,粒度為80~120目。
[0015]為了更好的實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明又提供了一種上述任意一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合的使用方法,其中,所述中藥藥物的使用方法為:對進入發(fā)情季節(jié)且有正常發(fā)情周期的空懷母馬 ,將所述中藥藥物和飼料攪拌均勻后飼喂母馬,每天一劑直至發(fā)情季節(jié)結(jié)束;
所述促卵泡素的使用方法為:對進入發(fā)情期的母馬肌肉注射,使用劑量為1000-2500單位/匹,每天一次直至母馬進入發(fā)情后期;
所述人絨毛膜促性腺激素的使用方法為:對進入發(fā)情后期、多數(shù)卵泡直徑在35mm以上的母馬一次性靜脈注射,使用劑量為1000-2500單位/匹。
[0016]本發(fā)明實施例提供的技術(shù)方案帶來的有益效果是:中藥藥物具有營養(yǎng)母馬的下丘腦和垂體、促進生殖細胞生長發(fā)育,并影響其與卵泡發(fā)育相關(guān)激素和細胞因子的合成分泌的作用,能夠有效克服馬卵巢排卵位點受限而難實現(xiàn)超數(shù)排卵的弊端,將母馬排卵數(shù)由自然狀態(tài)下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵2.6枚,實現(xiàn)了母馬的超數(shù)排卵;還可以將本發(fā)明的中藥藥物與能夠促進卵泡快速發(fā)育的外源激素組合使用,采用中西藥結(jié)合的方法,更好的克服馬卵巢排卵位點受限而難實現(xiàn)超數(shù)排卵的弊端,將母馬排卵時間精確控制在36-48小時內(nèi),并將排卵數(shù)由自然狀態(tài)下的平均排卵1.12枚提高到平均排卵4.87枚,實現(xiàn)了母馬的超數(shù)排卵。本發(fā)明原理簡單,工藝過程易控,控制目標(biāo)準(zhǔn)確,效率高,效果好,可在馬的繁殖和胚胎移植技術(shù)中廣泛應(yīng)用,提高胚胎移植效率和成功率。
[0017]
【具體實施方式】
[0018]本發(fā)明實施例提供了一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其中,所述藥物組合至少包括由以下原料藥材組成的中藥藥物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟絲子、女貞子、紅花和香附。
[0019]其中,上述原料藥材的藥理藥性如下:
淫羊藿:辛、甘,溫。歸肝、腎經(jīng)。補腎陽,強筋骨,祛風(fēng)濕。用于陽痿遺精,筋骨痿軟,風(fēng)濕痹痛,麻木拘攣;更年期高血壓。
[0020]益母草:苦、辛,微寒。歸肝、心包經(jīng)?;钛{(diào)經(jīng),利尿消腫。用于月經(jīng)不調(diào),痛經(jīng),經(jīng)閉,惡露不盡,水腫尿少;急性腎炎水腫。
[0021]蛇床子:辛、苦,溫;有小毒。歸腎經(jīng)。溫腎壯陽,燥濕,祛風(fēng),殺蟲。用于陽痿,宮冷,寒濕帶下,濕痹腰痛;外治外陰濕疹,婦人陰癢;滴蟲性陰道炎。
[0022]菟絲子:甘,溫。歸肝、腎、脾經(jīng)。滋補肝腎,固精縮尿,安胎,明目,止瀉。用于陽痿遺精,尿有余浙,遺尿尿頻,腰膝酸軟,目昏耳鳴,腎虛胎漏,胎動不安,脾腎虛瀉;外治白癜風(fēng)。
[0023]女貞子:甘、苦,涼。歸肝、腎經(jīng)。滋補肝腎,明目烏發(fā)。用于眩暈耳鳴,腰膝酸軟,須發(fā)早白,目暗不明。
[0024]紅花:辛,溫。歸心、肝經(jīng)。活血通經(jīng),散瘀止痛。用于經(jīng)閉,痛經(jīng),惡露不行,癥瘕痞塊,跌撲損傷,瘡瘍腫痛。
[0025]香附:辛、微苦、微甘,平。歸肝、脾、三焦經(jīng)。行氣解郁,調(diào)經(jīng)止痛。用于肝郁氣滯,胸、脅、脘腹脹痛,消化不良,胸脘痞悶,寒疝腹痛,乳房脹痛,月經(jīng)不調(diào),經(jīng)閉痛經(jīng)。
[0026]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比可以優(yōu)選為:淫羊藿20~30份、益母草15~25份、 蛇床子15~25份、英絲子15~25份、女貞子7~15份、紅花7~15份和香附20~30份。
[0027]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比也可以優(yōu)選為:淫羊藿25~30份、益母草20~25份、蛇床子20~25份、菟絲子18~23份、女貞子10~15份、紅花10~15份和香附25~30份。
[0028]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比還可以優(yōu)選為:淫羊藿28份、益母草22份、蛇床子22份、菟絲子22份、女貞子13份、紅花13份和香附28份。
[0029]其中,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比又可以優(yōu)選為:淫羊藿25份、益母草25份、蛇床子20份、菟絲子22份、女貞子15份、紅花10份和香附26份。
[0030]其中,所述藥物組合還可以進一步包括促進卵泡快速發(fā)育的外源激素。
[0031]其中,所述外源激素為1000-2500單位的促卵泡素和/或1000-2500單位的人絨毛膜促性腺激素。
[0032]其中,所述中藥藥物的劑型為散劑時,其制備方法包括以下步驟:
步驟(1):將所述原料藥材按比例混合,粉碎成60-150目的粉末。
[0033]其中,所述制備方法還可以進一步包括以下步驟:
步驟(2):將步驟(1)獲得的粉末加入冷水中浸泡6~12小時,以文火煎煮,煎煮時間為2~5小時,將煎煮液過濾,獲得第一濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的3~6倍;
步驟(3):將步驟(2)過濾獲得的濾渣再次加入冷水中,以文火煎煮2~4小時,過濾獲得第二濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的2~5倍;
步驟(4):將步驟(2)獲得的第一濾液和步驟(3)獲得的第二濾液混合,減壓濃縮除去水,干燥,粉碎成粉末,粒度為80~120目。
[0034]為了更好的實現(xiàn)上述發(fā)明目的,本發(fā)明又提供了一種上述任意一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合的使用方法,其中,所述中藥藥物的使用方法為:對進入發(fā)情季節(jié)且有正常發(fā)情周期的空懷母馬,將所述中藥藥物和飼料攪拌均勻后飼喂母馬,每天一劑直至發(fā)情季節(jié)結(jié)束;
所述促卵泡素的使用方法為:對進入發(fā)情期的母馬肌肉注射,使用劑量為1000-2500單位/匹,每天一次直至母馬進入發(fā)情后期;
所述人絨毛膜促性腺激素的使用方法為:對進入發(fā)情后期、多數(shù)卵泡直徑在35mm以上的母馬一次性靜脈注射,使用劑量為1000-2500單位/匹。
[0035]以下采用具體實施例來詳細說明本發(fā)明的中藥藥物的實施方式,借此充分理解本發(fā)明如何應(yīng)用技術(shù)手段來解決技術(shù)問題,達成技術(shù)效果并據(jù)以實施。
[0036]中藥藥物實施例1:散劑一
取淫羊藿280g、益母草220g、蛇床子220g、菟絲子220g、女貞子130g、紅花130g和香附280g;
其制備方法包括以下步驟:
步驟(1):將上述原料藥材按比例混合,粉碎成120目的粉末。
[0037]中藥藥物實施例2:散劑二
取淫羊藿250g、益母草250g、蛇床子200g、菟絲子220g、女貞子150g、紅花100g和香附260g;
其制備方法包括以下步驟:
步驟(1):將上述原料藥材按比例混合,粉碎成80目的粉末;
步驟(2):將步驟(1)獲得的粉末加入冷水中浸泡10小時,以文火煎煮,煎煮時間為4小時,將煎煮液過濾,獲得第一濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的6倍;步驟(3):將步驟(2)過濾獲得的濾渣再次加入冷水中,以文火煎煮3小時,過濾獲得第二濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的4倍;
步驟(4):將步驟(2)獲得的第一濾液和步驟(3)獲得的第二濾液混合,減壓濃縮除去水,干燥,粉碎成粉末,粒度為120目。
[0038]中藥藥物毒性實驗:
急性毒性實驗:應(yīng)用小鼠80只,雌雄各半,體重18~26g,進行急性毒性試驗。小鼠隨機分為兩組,即對照組和給藥組,實驗前禁食12小時,將本發(fā)明的實施例2制備的中藥散劑二溶解在水中,(濃度為6.48g生藥/ml,最高濃度)灌胃,灌胃容積為5ml/kg (即單次給藥劑量為32.4生藥/kg),對照組給予等量生理鹽水,一天給藥2次,給藥間隔時間6小時,給藥后連續(xù)觀察14天,并記錄小鼠的的毒性反應(yīng)及死亡數(shù)。實驗結(jié)果表明:與對照組比較,給藥后小鼠未見明顯差異,實驗連續(xù)觀察14天,小鼠全身狀況、飲食、飲水、體重增長均正常。小鼠口服灌胃本發(fā)明的散劑藥物L(fēng)D50>32.4生藥/kg,每日最大給藥量為64.8生藥/kg/日。本發(fā)明的中藥藥物臨床用藥量為58g生藥/日/馬,成年馬匹體重以600KG計,平均用藥劑量為0.097g生藥/kg/日。按體重 計:小鼠(平均體重以22g計)口服灌胃本發(fā)明的中藥藥物的耐受量為臨床用量的668倍。因此本發(fā)明的中藥藥物急性毒性極低,臨床用藥安全。
[0039]長期毒性實驗:本發(fā)明中藥藥物實施例2的散劑二對小鼠按14.28、22.56和38.62g生藥/kg連續(xù)用藥15周(1.0ml/100g體重,每天2次)及停藥3周后,結(jié)果表明:本發(fā)明中藥藥物對小鼠的毛發(fā)、行為、大小便、體重、臟器重量、血象、肝腎功能、血糖、血脂等指標(biāo)均無明顯影響,臟器肉眼沒有發(fā)現(xiàn)異樣變化和組織學(xué)檢查結(jié)果表明,用藥15周及停藥3周后,小鼠各臟器均無明顯改變。說明本發(fā)明中藥藥物對小鼠長期用藥后毒性小,停藥后也沒有異樣反應(yīng),應(yīng)用安全。
[0040]對比試驗:
選擇2.5^3.5歲的成年蒙古母馬和伊犁馬母各40匹,隨機分成4組,每組10匹蒙古馬、10匹伊犁馬。
[0041]其中,對照組1:20匹,采用自然狀態(tài)排卵;
對照組2:20匹,采用本發(fā)明中注射外源激素的促排卵方法:使用超聲波B超診斷儀檢查并跟蹤母馬卵泡發(fā)育情況;對進入發(fā)情期的母馬肌肉注射促卵泡素,使用劑量為1500單位/匹,每天一次直至母馬進入發(fā)情后期;對進入發(fā)情后期、多數(shù)卵泡直徑在35mm以上的母馬一次性靜脈注射人絨毛膜促性腺激素,使用劑量為1000單位/匹。
[0042]實施例組1:20匹,采用本發(fā)明中飼喂中藥藥物的促排卵方法:選擇進入發(fā)情季節(jié)且有正常發(fā)情周期的空懷母馬,將中藥藥物實施例1的散劑一和飼料攪拌均勻,飼喂母馬,每日一劑直至發(fā)情季節(jié)結(jié)束。
[0043]實施例組2:20匹,采用本發(fā)明中飼喂中藥藥物和注射外源激素的促排卵方法:選擇進入發(fā)情季節(jié)且有正常發(fā)情周期的空懷母馬,將中藥藥物實施例2的散劑二和飼料攪拌均勻,飼喂母馬,每日一劑直至發(fā)情季節(jié)結(jié)束;使用超聲波B超診斷儀檢查并跟蹤母馬卵泡發(fā)育情況;對進入發(fā)情期的母馬肌肉注射促卵泡素,使用劑量為1500單位/匹,每天一次直至母馬進入發(fā)情后期;對進入發(fā)情后期、多數(shù)卵泡直徑在35mm以上的母馬一次性靜脈注射人絨毛膜促性腺激素,使用劑量為1000單位/匹。
[0044]按照上述分組和方法進行試驗,馬匹在其每個發(fā)情周期均進行配種和胚胎移植操作,跟蹤至四組馬匹均排卵并配種和移植三次,統(tǒng)計每組馬匹總排卵數(shù)、平均排卵數(shù)及獲得的胚胎數(shù)和胚胎移植獲得的后代數(shù)。
[0045]試驗結(jié)果:四組馬匹分別跟蹤至所有馬匹排卵三次,統(tǒng)計結(jié)果參見下表。
[0046]
【權(quán)利要求】
1.一種誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述藥物組合至少包括由以下原料藥材組成的中藥藥物:淫羊藿、益母草、蛇床子、菟絲子、女貞子、紅花和香附。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比為:淫羊藿20~30份、益母草15~25份、蛇床子15~25份、菟絲子15~25份、女貞子7~15份、紅花7~15份和香附20~30份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比為:淫羊藿25~30份、益母草20~25份、蛇床子20~25份、菟絲子18~23份、女貞子10~15份、紅花10~15份和香附25~30份。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比為:淫羊藿28份、益母草22份、蛇床子22份、菟絲子22份、女貞子13份、紅花13份和香附28份。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述中藥藥物中的各種原料藥材的重量份數(shù)比為:淫羊藿25份、益母草25份、蛇床子20份、菟絲子22份、女貞子15份、紅花10份和香附26份。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5任意一項所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述藥物組合還包括促進卵泡快速發(fā)育的外源激素。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述外源激素為1000-2500單位的促卵泡素和/或1000-2500單位的人絨毛膜促性腺激素。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至7任 意一項所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述中藥藥物的劑型為散劑時,其制備方法包括以下步驟: 步驟(1):將所述原料藥材按比例混合,粉碎成60-150目的粉末。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合,其特征在于,所述制備方法還包括以下步驟: 步驟(2):將步驟(1)獲得的粉末加入冷水中浸泡6~12小時,以文火煎煮,煎煮時間為2~5小時,將煎煮液過濾,獲得第一濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的3~6倍; 步驟(3):將步驟(2)過濾獲得的濾渣再次加入冷水中,以文火煎煮2~4小時,過濾獲得第二濾液,所加入的水的質(zhì)量是步驟(1)獲得的粉末質(zhì)量的2~5倍; 步驟(4):將步驟(2)獲得的第一濾液和步驟(3)獲得的第二濾液混合,減壓濃縮除去水,干燥,粉碎成粉末,粒度為80~120目。
10.一種根據(jù)權(quán)利要求1-9任意一項所述的誘導(dǎo)母馬超數(shù)排卵的藥物組合的使用方法,其特征在于,所述中藥藥物的使用方法為:對進入發(fā)情季節(jié)且有正常發(fā)情周期的空懷母馬,將所述中藥藥物和飼料攪拌均勻后飼喂母馬,每天一劑直至發(fā)情季節(jié)結(jié)束; 所述促卵泡素的使用方法為:對進入發(fā)情期的母馬肌肉注射,使用劑量為1000-2500單位/匹,每天一次直至母馬進入發(fā)情后期; 所述人絨毛膜促性腺激素的使用方法為:對進入發(fā)情后期、多數(shù)卵泡直徑在35mm以上的母馬一次性靜脈注射,使用劑量為1000-2500單位/匹。
【文檔編號】A61K36/8905GK103800603SQ201410085172
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月11日
【發(fā)明者】李中航, 鄒敬清, 鄒志鋼, 孫吉勝, 榮美潔, 馬玉萍 申請人:伊犁德瑞駿發(fā)生物科技有限公司, 青島德瑞駿發(fā)生物科技有限公司, 青島德瑞鰲瀾馬術(shù)有限公司