靶向adgb的抑制性rna及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥與基因治療領(lǐng)域，本發(fā)明提供了一種可以特異性抑制ADGB蛋白表達(dá)的siRNA或shRNA，并且提供了siRNA或shRNA在制備ADGB靶蛋白表達(dá)抑制劑中的應(yīng)用，以及在制備預(yù)防或治療膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】靶向ADGB的抑制性RNA及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥及基因治療領(lǐng)域，特別是設(shè)計(jì)靶向ADGB(Androglobin，ADGB)的抑制性多核苷酸及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]Androglobin (ADGB)是一種新發(fā)現(xiàn)的珠蛋白。ADGB的mRNA參考序列(genebankaccession:NM_024694.3)有5300bp，是一個(gè)包含1667個(gè)氨基酸殘基的蛋白。它包括一個(gè)calpain-7蛋白大亞基的催化結(jié)構(gòu)域II樣結(jié)構(gòu)域、一個(gè)globin結(jié)構(gòu)域、一個(gè)可供鈣調(diào)蛋白結(jié)合的IQ樣結(jié)構(gòu)域。IQ樣結(jié)構(gòu)域位于globin結(jié)構(gòu)域之內(nèi)，把globin結(jié)構(gòu)域分為了C-H段和A-B段兩部分。雖然重組表達(dá)人ADGB的珠蛋白結(jié)構(gòu)域表現(xiàn)出血紅素鐵原子的六配位的吸收光譜特性，但ADGB對(duì)組織缺氧并不敏感(David Hoogewijs等，AndroglobiniAChimeric Globin in Metazoans That Is Preferentially Expressed in MammalianTestes, Molecular Biology and Evolution,2012, April, 29 (4):1105 - 1114)0
[0003]當(dāng)前有關(guān)ADGB的研究報(bào)道極為有限，在腫瘤中的作用未見(jiàn)報(bào)道。
[0004]Small interfering RNA(siRNA)是一種小 RNA 分子(~21-25 核苷酸)，由 Dicer(RNAase III家族中對(duì)雙鏈RNA具有特異性的酶)加工而成。SiRNA是siRISC的主要成員，激發(fā)與之互補(bǔ)的目標(biāo)mRNA的沉默。
[0005]小發(fā)夾RNA (short hairpin RNA, shRNA)是一種形成急轉(zhuǎn)彎結(jié)構(gòu)的RNA序列,可以經(jīng)由RNA干擾使基因沉默。
[0006]腫瘤是威脅人類健康的疾病之一，至今缺少理想的治療手段和藥物，開(kāi)發(fā)新的藥物迫在眉睫?；蛑委熓欠浅有前景的，在不久的將來(lái)或許會(huì)成為腫瘤治療的一個(gè)有效手段。RNA干擾技術(shù)是一種沉默基因表達(dá)的技術(shù)，兩名美國(guó)科學(xué)家Andrew Z.Fire和CraigC.Mello因?qū)Υ隧?xiàng)技術(shù)的貢獻(xiàn)于2006年被授予諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)。RNA干擾技術(shù)的原理是較長(zhǎng)雙鏈RNA被特異核酸酶Dicer切割加工成21_23nt的由正義和反義鏈組成的小干擾RNA。小干擾RNA隨后形成沉默復(fù)合體(RNA-1nduced silencing complex, RISC)解旋成單鏈。反義鏈引導(dǎo)該沉默復(fù)合體通過(guò)堿基配對(duì)特異性結(jié)合到目標(biāo)mRNA上，使mRNA分解。
[0007]膠質(zhì)瘤是一種發(fā)生于腦或脊髓的腫瘤，最常發(fā)生部位為腦，因其來(lái)源神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞而被稱為膠質(zhì)瘤。膠質(zhì)瘤占腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的30%、占腦惡性腦腫瘤的80%，是人類健康的嚴(yán)重威脅。腦膠質(zhì)瘤的治療通常采用手術(shù)，放療和化療相結(jié)合。膠質(zhì)瘤常發(fā)生于腦，手術(shù)需要開(kāi)顱，手術(shù)時(shí)間長(zhǎng)。膠質(zhì)瘤和正常神經(jīng)組織交錯(cuò)生長(zhǎng)，邊界不清，瘤組織不易清理干凈，膠質(zhì)瘤易復(fù)發(fā)。對(duì)于化療，由于血腦屏障的存在，使普通的抗腫瘤藥物療效不佳。對(duì)于放療，也存在定位困難和對(duì)神經(jīng)損傷的擔(dān)心。目前膠質(zhì)瘤仍是醫(yī)學(xué)界的一個(gè)難題。因此尋求新的治療方法和藥物迫在眉睫。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目的在于提供了一種可以特異性抑制ADGB的表達(dá)siRNA或shRNA，本發(fā)明的另一目的在于，提供siRNA或shRNA在制備ADGB靶蛋白表達(dá)抑制劑中的應(yīng)用，以及在制備預(yù)防或治療膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明人在前期研究發(fā)現(xiàn)ADGB可影響細(xì)胞凋亡信號(hào)，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)干擾ADGB的表達(dá)能抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞系的增殖，是治療膠質(zhì)瘤潛在的靶點(diǎn)。
[0010]發(fā)明結(jié)合ADGB分子在瘤細(xì)胞中的功能，利用RNA干擾技術(shù)開(kāi)發(fā)新的治療藥物。
[0011]本發(fā)明首先設(shè)計(jì)了靶向ADGB的siRNA，之后再設(shè)計(jì)成shRNA分子，特異性抑制ADGB的表達(dá)，從而抑制膠質(zhì)瘤的增殖。該siRNA和shRNA分子可能會(huì)成為治療膠質(zhì)瘤的藥物。
[0012]本發(fā)明的第一方面，是提供一種可以特異性抑制ADGB的表達(dá)siRNA或shRNA，
[0013]本發(fā)明提供了一種特異性抑制Androglobin表達(dá)的siRNA,包括正義鏈和反義鏈，此siRNA序列為:
[0014]正義鏈:5’-GCAUUUACAGGCGACACAUAU-3’ (SEQ ID N0.1)
[0015]反義鏈:5，-AUAUGUGUCGCCUGUAAAUGC-3，(SEQID N0.2)
[0016]本發(fā)明還提供了一種特異性抑制Androglobin表達(dá)的shRNA,該shRNA包含上述的siRNA序列，也包括正義鏈和反義鏈，此shRNA序列為:
[0017]正義鏈:
[0018]5，-CCGGGCAUUUACAGGCGACACAUAUUUCAAGAGAAUAUGUGUCGCCUGUAAAUGCUUUU-3，(SEQID N0.3)
[0019]反義鏈:
[0020]5，-AAUUCAAAAAAGCAUUUACAGGCGACACAUAUUCUCUUGAAAUAUGUGUCGCCUGUAAAUGC-3，(SEQ ID N0.4)
[0021]本發(fā)明還提供了一種轉(zhuǎn)錄上述的shRNA的DNA序列，此DNA序列為:轉(zhuǎn)錄正義鏈的DNA:
[0022]5，-CCGGGCATTTACAGGCGACACATATTTCAAGAGAATATGTGTCGCCTGTAAATGCTTTT-3，(SEQID N0.5)
[0023]轉(zhuǎn)錄反義鏈的DNA:
[0024]5，-AATTCAAAAAAGCATTTACAGGCGACACATATTCTCTTGAAATATGTGTCGCCTGTAAATGC-3，(SEQ ID N0.6)
[0025]本發(fā)明的第二方面，是提供上述的siRNA、shRNA，或DNA序列在制備Androglobin蛋白表達(dá)抑制劑中的應(yīng)用。
[0026]進(jìn)一步地，本發(fā)明還提供了上述的siRNA、shRNA，或DNA序列在制備預(yù)防或治療膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。
[0027]本發(fā)明的主要技術(shù)方案包括:
[0028]1.siRNA的設(shè)計(jì)和干擾載體的制備；
[0029]2.干擾慢病毒顆粒的包裝；
[0030]3.干擾效率在mRNA水平的驗(yàn)證；
[0031]4.MTT法檢測(cè)干擾ADGB后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373、U87、U251增殖的影響；
[0032]5.克隆形成法檢測(cè)干擾ADGB后對(duì)U87、U252細(xì)胞系的影響
[0033]本發(fā)明經(jīng)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的siRNA、shRNA，或DNA序列可以有效地抑制人ADGB基因的表達(dá)，治療膠質(zhì)瘤疾病，減少病人由于放療、化療帶來(lái)的痛苦以及疾病的復(fù)發(fā)。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0034]圖1是定量PCR法檢測(cè)U373細(xì)胞系的ADGB mRNA水平情況；
[0035]圖2是MTT法檢測(cè)干擾ADGB抑制U251 (圖2A)、U87 (圖2B)、U373 (圖2C)細(xì)胞系生長(zhǎng)情況；
[0036]圖3克隆形成法檢測(cè)干擾ADGB抑制U251和U87細(xì)胞形成克??；
[0037]圖1-3中含有空載體的病毒(control)和干擾ADGB的病毒(shADGB)。
【具體實(shí)施方式】
[0038]下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步說(shuō)明。以下實(shí)施方式只是較佳的實(shí)施方式中的一種，并非對(duì)本發(fā)明的限制。其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。未作特殊說(shuō)明的實(shí)驗(yàn)試劑和方法，均指常規(guī)試劑和方法。
[0039]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得或可按文獻(xiàn)方法制備。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件如Sambrook等人《分子克隆:實(shí)驗(yàn)室指南》(NewYork:Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照常規(guī)條件，或按照制造廠商所建議的條件。 [0040]實(shí)施例1:siRNA的設(shè)計(jì)和干擾載體的制備
[0041]從NCBI 網(wǎng)站(http://www.ncb1.nlm.nih.gov/)下載 ADGB mRNA (GenebankAccession:NM_024694.3)的互補(bǔ) DNA(Complementary DNA, cDNA)序列信息。使用 LifeTechnologies 的 BLOCK-1T?RNAi Designer 設(shè)計(jì)針對(duì) ADGB 的 shRNA,得到 10 條祀點(diǎn)序列。
[0042]在NCBI的同源序列比對(duì)分析nucleotide blast中輸入祀點(diǎn)序列進(jìn)行比對(duì)分析，要求靶點(diǎn)序列和人的其它mRNA基因沒(méi)有高度同源性，可作特異性干擾ADGB的干擾靶點(diǎn)。再根據(jù)這些序列按Sense-1oop-Antisense的順序人工設(shè)計(jì)shRNA, sense是指祀點(diǎn)序列的正義鏈，antisense是指祀點(diǎn)序列的反義鏈,loop是指形成環(huán)的序列,這里使用UUCAAGAGA。再在兩端加上限制性內(nèi)切酶AgeI和EcoRI識(shí)別的序列，得到如下所示針對(duì)一個(gè)靶點(diǎn)的兩條shRNA序列:
[0043]正義鏈:5’-CCGG-sense-UUCAAGAGA-antisense-UUUU-3’
[0044]反義鏈:5’-AAUUCAAAAAA-sense-UCUCUUGAA-antisense-3，
[0045]把上面的RNA序列對(duì)應(yīng)的DNA序列委托invitrogen公司合成得到DNA01 igo。
[0046]DNA Oligo 加入 ddH20 溶解，濃度 10mM。各別取 22.5ul 的 DNA Oligo 與 5ul 的IOX 退火緩沖液(成分為 IOOmM Tris-HCl (pH7.5), IOmM EDTA, ImM NaCl)混合，95°C水浴12min后拿出，在室溫下冷卻至室溫。25°C下，用T4連接酶(日本TAKARA公司生產(chǎn))將互補(bǔ)雙鏈與Age1、EcoRI酶切的pLKD-CMV-GFP-U6_shRNA載體連接30min，體系按說(shuō)明書配制(DNA4 μ I,載體 2 μ 1，PEG40002 μ I, IOXT4buffer2 μ I, Τ4 連接酶 I μ I, ddH209 μ I)。
[0047]取連接產(chǎn)物加入裝有大腸桿菌DH5 α感受態(tài)細(xì)胞的1.5ml規(guī)格離心管使其混合，置于冰上30分鐘,然后放入42°C水浴90秒,再放回冰上2分鐘后加入800 μ I不含抗生素的培養(yǎng)基，置37°C細(xì)菌培養(yǎng)箱中搖I小時(shí)。4500轉(zhuǎn)/分離心收集得到的細(xì)菌后涂固體LB培養(yǎng)基平板，37°C細(xì)菌培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)至長(zhǎng)出菌落。挑取單克隆置1.5ml規(guī)格離心管進(jìn)行培養(yǎng)，用PCR方法鑒定是否轉(zhuǎn)化成功，鑒定所用的引物為:
[0048]PLKD-F: CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA ；
[0049]PLKD-R:GAAATACGGTTATCCACGCG ；
[0050]轉(zhuǎn)化成功的取樣送測(cè)序(華大基因有限公司提供測(cè)序服務(wù))，測(cè)序使用的引物是:PLKD-F: CCTATTTCCCATGATTCCTTCATA。
[0051]取測(cè)序正確的細(xì)菌和5ml添加抗生素的培養(yǎng)基加入50ml規(guī)格離心管培養(yǎng)6小時(shí)，然后與200ml添加了抗生素的培養(yǎng)基一起倒入IL規(guī)格的培養(yǎng)瓶中擴(kuò)大培養(yǎng)，使用QIAGENPlasmid Maxi Kit大抽試劑盒(德國(guó)凱杰生物技術(shù)有限公司生產(chǎn))抽提出質(zhì)粒,質(zhì)粒抽提按QIAGEN Plasmid Maxi Kit說(shuō)明書進(jìn)行操作。通過(guò)以上操作得到pLKD_CMV-GFP-U6_shRNA質(zhì)粒。
[0052]實(shí)施例2:干擾慢病毒顆粒的包裝
[0053]在37 °C 5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)HEK293T細(xì)胞(下簡(jiǎn)稱293T，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù))，培養(yǎng)基使用添加了 10%胎牛血清(美國(guó)紐約Gibco公司生產(chǎn))的DMEM(美國(guó)紐約Gibco公司生產(chǎn))培養(yǎng)基。傳代培養(yǎng)293T細(xì)胞于直徑為IOcm的培養(yǎng)皿中，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到匯合度為50%左右，用無(wú)血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)4小時(shí)。按Lipofectamine2000 (美國(guó)Invitrogen公司生產(chǎn))說(shuō)明書操作,準(zhǔn)備好22.5 μ g上面得到的pLKD-CMV-GFP-U6-shRNA質(zhì)粒(或不含shRNA的空載體質(zhì)粒)、7.9 μ g病毒外殼質(zhì)粒psPAX2(中國(guó)上海紐恩生物科技有限公司提供)、14.6 μ g包裝質(zhì)粒pMD2.G(中國(guó)上海紐恩生物科技有限公司提供)的轉(zhuǎn)染混合物。
[0054]把混合物添加到已經(jīng)饑餓培養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)染，4-6小時(shí)后更換為正常的培養(yǎng)基。分別在換液培養(yǎng)24和48小時(shí)后收集培養(yǎng)基，經(jīng)0.22 μ m孔徑的膜過(guò)濾后，再用CP80MX離心機(jī)(日本日立公司生產(chǎn))經(jīng)4°C、100000g超速離心2小時(shí)，得到病毒沉積塊。用OPT1-MEM(美國(guó)紐約Gibco公司生產(chǎn))培養(yǎng)基重懸收集得到干擾ADGB的慢病毒(shADGB)和含有空載體的慢病毒(control)。
[0055]慢病毒的滴度測(cè)定采用稀釋計(jì)數(shù)法，把293T細(xì)胞鋪96孔板，每孔約5000個(gè)細(xì)胞，過(guò)夜培養(yǎng)。準(zhǔn)備好用培養(yǎng)基10倍梯度稀釋的病毒共10份，即最低、最高濃度分別為原液的1/10-10、1/10-1，每份100 μ I換掉對(duì)應(yīng)孔的培養(yǎng)基培養(yǎng)過(guò)夜后更換正常培養(yǎng)基。換掉新鮮培養(yǎng)基再培養(yǎng)兩天后，置熒光顯微鏡下觀察最后兩個(gè)有熒光的孔的熒光細(xì)胞的克隆數(shù)，用以下公式計(jì)算病毒滴度:滴度(TU/ml)= (X+Y*10)*10/ (2*Ζ)其中X是指倒數(shù)第二個(gè)有熒光的孔的熒光細(xì)胞克隆數(shù)，Y是指倒數(shù)第一個(gè)有熒光的孔的熒光細(xì)胞克隆數(shù)，Z是指X對(duì)應(yīng)孔所加病毒的稀釋率。
[0056]實(shí)施例3:干擾效率在mRNA水平的驗(yàn)證
[0057]膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373 (購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù))細(xì)胞培養(yǎng)在370C 5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)基為添加了 10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基。在直徑6cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞至大約30%匯合度，分別加入對(duì)照慢病毒感染顆粒和干擾ADGB的病毒感染顆粒(感染復(fù)數(shù)為10)，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞4天。用PBS漂洗兩次細(xì)胞，每次用PBS3ml，然后用2ml0.25%(w/v)胰蛋白酶消化細(xì)胞，1000轉(zhuǎn)/分離心收集細(xì)胞。之后用試劑Trizol (美國(guó)Invitrogen公司生產(chǎn))提取總RNA,按說(shuō)明書進(jìn)行操作。利用RT M-MLV (美國(guó)Promega公司生產(chǎn))反轉(zhuǎn)錄試劑盒把RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，按說(shuō)明書進(jìn)行操作。熒光定量PCR使用SYBRPremix Ex Taq試劑盒(日本Takara公司生產(chǎn)),操作按SYBR Premix Ex Taq試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，用到的儀器為CFX96型定量PCR儀(美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn))。
[0058]使用的引物序列:
[0059]ADGB:5’ -AGACCCTCATCAGAAGTGCAG-3’ ；5’ -GCTACCAGAGGACAAG ACCTA CT-3’。
[0060]GAPDH:5，-AAGGTGAAGGTCGGA GTCAAC-3，；5，-GGGGTCATTGATGGCAACAATA-3，。
[0061]經(jīng)過(guò)篩選，結(jié)果如圖1所示,表明使用本發(fā)明的干擾RNA后，膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373的ADGB mRNA水平明顯降低。
[0062]實(shí)施例4 =MTT法檢測(cè)干擾ADGB后對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373、U87、U251增殖的影響；
[0063]MTT法是檢測(cè)細(xì)胞增殖的一種經(jīng)典實(shí)驗(yàn)方法(Tim Mosmann, Rapid colorimetricassay for cellular growth and survival:Application to proliferation andcytotoxicity assays, Journal of Immunological Methods，，1983，65(1- 2):55 - 6，3)。膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U373、U87、U251 (購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù))細(xì)胞培養(yǎng)在37°C 5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)基為添加了 10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基。在直徑6cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞至大約30%匯合度，分別加入實(shí)施例2得到的對(duì)照慢病毒感染顆粒和干擾ADGB的病毒感染顆粒(感染復(fù)數(shù)為10)，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞4天。后用96孔板(美國(guó)Corning公司生產(chǎn))培養(yǎng)，每孔約1500個(gè)細(xì)胞，每孔培養(yǎng)基150 μ I。
[0064]分別在如圖2所示的時(shí)間點(diǎn)，每孔加入15 μ I濃度為5mg/ml的MTT (上海生工生物工程公司生產(chǎn))繼續(xù)孵育4小時(shí)。然后吸掉培養(yǎng)物，每孔加入150 μ 1DMS0，在酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Rad公司生產(chǎn)，iMarkl68-1130型)的490nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。
[0065]結(jié)果如圖2所示，表明干擾AD`GB能明顯抑制U373、U87、U251的生長(zhǎng)。
[0066]實(shí)施例5:克隆形成法檢測(cè)干擾ADGB后對(duì)U87、U252細(xì)胞系的影響
[0067]膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87、U251 (購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)細(xì)胞庫(kù))細(xì)胞培養(yǎng)在37°C 5%C02的細(xì)胞培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)基為添加了 10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基。在直徑6cm培養(yǎng)皿中培養(yǎng)細(xì)胞至大約30%匯合度，分別加入實(shí)施例2得到的對(duì)照慢病毒(control)感染顆粒和干擾ADGB的慢病毒(shADGB)感染顆粒(感染復(fù)數(shù)為10)，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞4天。后吹散為單個(gè)細(xì)胞，用6孔板培養(yǎng)(美國(guó)Corning公司生產(chǎn))，每孔約500個(gè)細(xì)胞。培養(yǎng)14天，中途按需要換培養(yǎng)基。之后棄掉培養(yǎng)基，用乙醇固定30分鐘，后用0.5%的結(jié)晶紫染色。
[0068]克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所示，表明干擾ADGB能明顯抑制U251和U87細(xì)胞克隆的形成。
[0069]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式不受上述實(shí)施例的限制。其他任何不脫離本發(fā)明之精神和原理下所作的變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1.一種特異性抑制Androglobin蛋白表達(dá)的siRNA,包括正義鏈和反義鏈,其特征在于，siRNA序列為: 正義鏈如SEQ ID N0.1所示； 反義鏈如SEQ ID N0.2所示。
2.—種特異性抑制Androglobin蛋白表達(dá)的shRNA,包括正義鏈和反義鏈,其特征在于，shRNA序列為: 正義鏈如SEQ ID N0.3所示； 反義鏈如SEQ ID N0.4所示。
3.一種轉(zhuǎn)錄如權(quán)利要求2所述的shRNA的DNA序列，其特征在于，DNA序列為: 轉(zhuǎn)錄正義鏈的DNA如SEQ ID N0.5所示； 轉(zhuǎn)錄反義鏈的DNA如SEQ ID N0.6所示。
4.一種如權(quán)利要求1所述的siRNA在制備Androglobin蛋白表達(dá)抑制劑中的應(yīng)用。
5.—種如權(quán)利要求2所述的shRNA在制備Androglobin蛋白表達(dá)抑制劑中的應(yīng)用。
6.—種如權(quán)利要求3所述的DNA序列在制備Androglobin蛋白表達(dá)抑制劑中的應(yīng)用。
7.—種如權(quán)利要求1所述的siRNA在制備預(yù)防或治療膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。
8.—種如權(quán)利要求2所述的shRNA在制備預(yù)防或治療膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。
9.一種如權(quán)利要求3所述的DNA序列在制備預(yù)防或治療膠質(zhì)瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK103773767SQ201410034855
【公開(kāi)日】2014年5月7日 申請(qǐng)日期:2014年1月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月24日
【發(fā)明者】胡澤嵐, 劉霽緯, 朱志川, 李奎, 鄭靜, 熊志奇, 劉永杰, 楊艷紅, 王紅濤, 祖勇, 張?chǎng)? 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)