Irf7基因在動(dòng)脈粥樣硬化中的功能及其抑制劑的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種IRF7基因在動(dòng)脈粥樣硬化中的功能及其抑制劑的應(yīng)用，屬于基因的功能與應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明以ApoE-/-小鼠和IRF7-/-ApoE-/-小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)高脂誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化模型，進(jìn)行了AS模型小鼠斑塊面積測(cè)定和內(nèi)含物分析，結(jié)果表明與ApoE-/-小鼠對(duì)比，IRF7-/-ApoE-/-小鼠的主動(dòng)脈斑塊面積顯著減少。這提示一種IRF7基因在動(dòng)脈粥樣硬化疾病中的功能，主要體現(xiàn)在其具有促使主動(dòng)脈斑塊形成的作用，特別是IRF7基因能夠惡化動(dòng)脈粥樣硬化。針對(duì)IRF7的上述功能，IRF7可作為藥物靶標(biāo)篩選治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物；IRF7的抑制劑可用于制備治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物。
【專利說(shuō)明】IRF7基因在動(dòng)脈粥樣硬化中的功能及其抑制劑的應(yīng)用
[0001]【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于基因的功能與應(yīng)用領(lǐng)域,特別涉及一種IRF7(interferon regulatoryfactor 7)基因在動(dòng)脈粥樣硬化中的功能及其抑制劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003]心腦血管疾病在許多發(fā)達(dá)國(guó)家中是主要致死性病因，在我國(guó)的發(fā)病率和致死率也逐年升高。心腦血管疾病的基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化(Atheosclersisis, AS),動(dòng)脈粥樣硬化可使動(dòng)脈管壁增厚、變硬、管腔狹窄，導(dǎo)致很多心腦血管事件發(fā)生。而動(dòng)脈粥樣硬化不穩(wěn)定斑塊的破裂、血小板的聚集及血栓形成造成的冠狀動(dòng)脈急性狹窄和閉塞是導(dǎo)致急性冠狀動(dòng)脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)的重要原因。
[0004]動(dòng)脈粥樣硬化是多種遺傳基因、危險(xiǎn)因素及免疫機(jī)制共同參與的一種慢性炎癥性疾病，局部和全身的炎癥免疫反應(yīng)在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起著重要作用，固有免疫和適應(yīng)性免疫共同參與調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化病變，病理上表現(xiàn)為大、中動(dòng)脈多處斑塊形成，好發(fā)于血液分流、動(dòng)脈彎曲及動(dòng)脈分支等區(qū)域，其病變特征是血中脂質(zhì)在動(dòng)脈內(nèi)膜沉積，弓丨起內(nèi)膜灶性纖維性增厚，病灶深部為由壞死組織和細(xì)胞外脂質(zhì)池形成的粥樣物質(zhì)。動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中存在著多種免疫細(xì)胞，其中以巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞最為常見(jiàn)，此外還有少量的樹突狀細(xì)胞(Dentritic cell,DC)、自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell,NK cell)和肥大細(xì)胞(mast cell)等,偶有B淋巴細(xì)胞。
[0005]動(dòng)脈粥樣硬化最早期肉眼可見(jiàn)的損傷是脂質(zhì)條紋，主要由攝取了大量膽固醇的巨噬細(xì)胞源性泡沫細(xì)胞構(gòu)成 。血液循環(huán)中的單核細(xì)胞在動(dòng)脈易損部位黏附到活性內(nèi)皮細(xì)胞，啟動(dòng)了脂質(zhì)條紋的形成，黏附的單核細(xì)胞隨后受局部產(chǎn)生的化學(xué)趨附分子的吸引遷移到內(nèi)膜下，并進(jìn)一步分化為巨噬細(xì)胞。大量膽固醇脂在巨噬細(xì)胞內(nèi)積聚，形成泡沫細(xì)胞，這是動(dòng)脈粥樣硬化形成早期的特征性病理生理過(guò)程。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生是多因素共同作用的結(jié)果。目前已發(fā)現(xiàn)的動(dòng)脈粥樣硬化危險(xiǎn)性因素很多，但相關(guān)針對(duì)治療及控制效果均不理想，降脂和抗炎治療是目前最主要的治療措施。越來(lái)越多的證據(jù)顯示免疫反應(yīng)參與動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)展的各個(gè)環(huán)節(jié)，因此探索調(diào)控免疫細(xì)胞功能的基因?qū)刂苿?dòng)脈粥樣硬化具有重要意義。
[0006]干擾素(interferon，IFN)是一類具有多種功能的細(xì)胞因子，具有廣譜抗病毒活性，是機(jī)體抵抗病毒感染的第一道防線；對(duì)癌細(xì)胞的免疫監(jiān)控、抑制細(xì)胞增殖和免疫調(diào)控等方面也有著重要的作用。干擾素調(diào)節(jié)因子最重要的功能是誘導(dǎo)IFN的產(chǎn)生、誘導(dǎo)機(jī)體抗病毒的作用，以及其在IFN信號(hào)途徑中的作用。IRF7是干擾素調(diào)節(jié)因子(interferonregulatory factor, IRF)家族中的一個(gè)成員，有研究表明IRF7與腫瘤、肝炎、自身免疫性疾病等有著密切的關(guān)系。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為解決現(xiàn)有技術(shù)的缺陷和不足，本發(fā)明的目的在于提供一種IRF7及其抑制劑在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物中的應(yīng)用。[0008]本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
本發(fā)明以ApoE基因敲除(ApoE+)小鼠與IRF7/ApoE雙基因敲除(IRF7+APOE+)小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，通過(guò)高脂飲食誘導(dǎo)獲得動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型(AS)模型，進(jìn)行了 AS模型小鼠斑塊面積測(cè)定和內(nèi)含物分析，結(jié)果表明與ApoE+小鼠對(duì)比，IRF7+APOE+小鼠動(dòng)脈粥樣硬化主動(dòng)脈斑塊面積明顯低于同種飼料飼養(yǎng)的ApoE+小鼠。這提示IRF7基因敲除會(huì)抑制動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，說(shuō)明IRF7基因能夠惡化動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生，為研究防治動(dòng)脈粥樣硬化的新靶點(diǎn)和新策略提供了理論依據(jù)和臨床基礎(chǔ)。
[0009]一種IRF7基因在動(dòng)脈粥樣硬化中的功能，主要體現(xiàn)在IRF7基因具有惡化主動(dòng)脈斑塊形成的作用，特別是IRF7具有惡化動(dòng)脈粥樣硬化的作用。
[0010]針對(duì)IRF7的上述功能，提供IRF7作為藥物靶標(biāo)在篩選抑制主動(dòng)脈斑塊形成的藥物中的應(yīng)用。
[0011]針對(duì)IRF7的上述功能，提供IRF7作為藥物靶標(biāo)在篩選治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物中的應(yīng)用。[0012]針對(duì)IRF7的上述功能，提供IRF7的抑制劑在制備抑制主動(dòng)脈斑塊形成的藥物中的應(yīng)用。
[0013]一種抑制主動(dòng)脈斑塊形成的藥物，包含IRF7的抑制劑。
[0014]針對(duì)IRF7的上述功能，提供IRF7的抑制劑在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物中的應(yīng)用。
[0015]一種治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物，包含IRF7的抑制劑。
[0016]所述的IRF7的抑制劑優(yōu)選為IRF7基因的siRNA、IRF7基因的RNA干擾載體，IRF7的抗體及其他能夠抑制IRF7表達(dá)的抑制劑中的一種。
[0017]本發(fā)明的研究結(jié)果表明，IRF7+APOE+小鼠在高脂飲食誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化中，與ApoE+小鼠相比，主動(dòng)脈斑塊面積明顯減少而膠原含量增多，說(shuō)明IRF7基因在動(dòng)脈粥樣硬化疾病模型中有著重要的惡化作用。
[0018]本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果:
(I)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)IRF7基因的新功能，即IRF7基因具有惡化動(dòng)脈粥樣硬化疾病的作用。
[0019](2)基于IRF7在惡化動(dòng)脈粥樣硬化疾病中的作用，其可為研制動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物提供靶標(biāo)，IRF7的抑制劑可用于制備治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0020]圖1是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠體重變化結(jié)果圖(NS代表組間無(wú)差異)。
[0021]圖2是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠的斑塊染色結(jié)果圖；A為小鼠主動(dòng)脈樹油紅0染色圖及斑塊面積統(tǒng)計(jì)柱狀圖是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠主動(dòng)脈竇HE染色圖及斑塊面積統(tǒng)計(jì)柱狀圖。
[0022]圖3是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠的斑塊內(nèi)含物的分析結(jié)果圖；A是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠的巨噬細(xì)胞標(biāo)志物(⑶68 )和平滑肌細(xì)胞標(biāo)志物(SMA)免疫熒光染色及結(jié)果統(tǒng)計(jì)柱狀圖(圖中m代表主動(dòng)脈中膜，L代表主動(dòng)脈管腔);B是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠的天狼星紅染色及結(jié)果統(tǒng)計(jì)柱狀圖?！揪唧w實(shí)施方式】
[0023]下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。
[0024]實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物及飼養(yǎng):
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬，性別，周齡及來(lái)源=ApoE基因敲除(ApoE+)小鼠與IRF7/ApoE雙基因敲除(IRF7+APOE+)小鼠，雄性，8周齡，體重19-25g。ApoE基因敲除小鼠(ApoE+小鼠，C57BL/6J 背景，購(gòu)自 Jackson Laboratory，貨號(hào) 002052)。IRF7+ApoE+小鼠由 IRF7 基因敲除小鼠(IRF7基因敲除小鼠，C57BL/6J背景，購(gòu)自RIKEN BRC公司，BRC編號(hào):RBRC01420)和ApoE基因敲除小鼠雜交得到。
[0025]實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料配方:高脂飼料(HFD，購(gòu)自北京華阜康生物科技有限公司，按AIN-76 A Western Diets配方，熱量百分比:蛋白質(zhì)15.8%，脂肪40%，碳水化合物44.2%);低脂飼料(NC，購(gòu)自北京華阜康生物科技有限公司，貨號(hào)D12450B):熱量百分比:蛋白質(zhì)20%，碳水化合物70%，脂肪10%。
[0026]動(dòng)物飼養(yǎng)及環(huán)境條件:所有的實(shí)驗(yàn)小鼠均飼養(yǎng)在武漢大學(xué)心血管病研究所SPF級(jí)動(dòng)物房(許可證號(hào)=SYXK (鄂):2009-0053)。每12小時(shí)交替照明，溫度24±2°C，濕度40%-70%，小鼠自由飲水進(jìn)食。
[0027]實(shí)施例1小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型(AS)獲得
1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:選用8周齡，體重19-25g，雄性，ApoE+小鼠和IRF7+APOE+小鼠，分別給予高脂飼料(Western Diets, HFD)和低脂飼料(Normal chow, NC)飼養(yǎng),ApoE+ HFD組，ApoE+ NC 組，IRF7+APOE+ HFD 組，IRF7+APOE+ NC 組共 4 個(gè)組別。
[0028]2.動(dòng)脈粥樣硬化模型通過(guò)高脂飼料誘導(dǎo)操作流程:
采用ApoE+小鼠和IRF7+APOE+小鼠，建立AS模型，進(jìn)行表型相關(guān)分析，明確IRF7基因?qū)?dòng)脈粥樣硬化發(fā)病發(fā)揮重要作用。小鼠從8周齡開始喂養(yǎng)飼料直至28周處死并收集樣本。
[0029]實(shí)施例2 AS模型小鼠斑塊面積測(cè)定 1.小鼠終末組織取材 小鼠喂養(yǎng)高脂飼料直至28周時(shí)，稱重，用3%戊巴比妥鈉，90mg/kg麻醉小鼠，用針頭固定于取材板，用紗布濕潤(rùn)小鼠胸腹部皮膚，用眼科剪剪開胸腔，暴露心臟，剪開右心耳，把輸液器的針頭刺進(jìn)左心室，用50mL注射器緩慢推注10-15mL PBS緩沖液，待右心耳流出液清亮，換上4%多聚甲醛繼續(xù)推注10-15mL。灌流結(jié)束后，清除胸腹腔臟器，僅保留心臟。將小鼠置于顯微鏡下，分離主動(dòng)脈弓周圍筋膜、脂肪組織，剪下頭臂干，放入裝有4%多聚甲醛的5mlEP管中，在升主動(dòng)脈起始部剪下心臟，在胸主動(dòng)脈中部剪斷，并在頸總和鎖骨下約3mm處剪斷，把主動(dòng)脈弓放入上述EP管中。
[0030]2.主動(dòng)脈樹斑塊面積測(cè)定
主動(dòng)脈樹置于4%多聚甲醛中隔夜固定一純水漂洗30min — 60%異丙醇處理10 min —油紅0染液染色60 min — 60%異丙醇漂洗IminX 3次至背景干凈一解剖鏡下去除殘余外壁脂肪一將染色好的動(dòng)脈平鋪于黑色解剖蠟板上，染色后用數(shù)碼相機(jī)拍照，并使用IPP圖像分析軟件進(jìn)行斑塊面積定量測(cè)定。(油紅0原液=0.5克油紅0+100毫升100%異丙醇，油紅0染液(工作液)=V (油紅0原液)/V (H2O) =3/2)主動(dòng)脈樹斑塊面積(％)=斑塊總面積/主動(dòng)脈樹總面積*100%。
[0031]3.病理組織處理
3.1石蠟標(biāo)本
心臟標(biāo)本在4%多聚甲醛中隔夜固定后拿出，將頭臂干、主動(dòng)脈弓用濾紙小心包好，以防從包埋框間隙中漏出。流水沖洗30min后放入脫水機(jī)，30%乙醇15min — 50%乙醇15min — 75% 乙醇 15min — 85% 乙醇 15min — 95% 乙醇 15min — 100% 乙醇 15min — 100%乙醇15min — 二甲苯15min — 二甲苯15min —石臘30min —石臘30min。頭臂干及主動(dòng)脈弓脫水完成后，從脫水機(jī)拿出。頭臂干呈Y直立于石蠟中，主動(dòng)脈弓平躺于石蠟中。
[0032]3.2主動(dòng)脈組織切片
蠟塊固定于切片機(jī)頭上的夾座內(nèi)，調(diào)整到稍離開切片能夠切到的位置上，蠟塊組織切面與切片刀口要垂直平行，調(diào)整切片厚度(5微米)。切下的片子，右手用彎鑷子輕輕鉗牢石蠟切片，左手用干燥毛筆將切片從切片取下，放入盛溫水(約30°C )的玻璃皿內(nèi)，將切片攤于溫水面上，光亮的切面向下，待切片在恒溫水內(nèi)充分?jǐn)傞_展平后(大約不超過(guò)10秒鐘)，將載玻片垂直插入水中輕靠切片，并用鑷子將切片一邊撥于玻片上，并調(diào)整好切片的位置，隨即將玻片直立提起。用鉛筆在玻片一端的磨砂玻璃上寫上標(biāo)本編號(hào)。將切片晾干過(guò)夜。
[0033]4.主動(dòng)脈竇斑塊面積測(cè)定
蘇木素伊紅染色染色):石蠟白片65°C烘烤30分鐘一二甲苯5分鐘X3次一100%乙醇I分鐘一95%乙醇I分鐘一70%乙醇I分鐘一純水漂洗(以玻片上不掛有水珠為標(biāo)準(zhǔn))—甩盡載玻片上的水分，蘇木素溶液(珠海貝索，BA-4021)浸染5分鐘一自來(lái)水漂洗(去除玻片上蘇木素的浮色)一1%鹽酸乙醇1-3秒一自來(lái)水漂洗(去除玻片上鹽酸乙醇)一Scott液(碳酸氫鈉0.35g，硫酸鎂2g，蒸餾水100ml)l分鐘一自來(lái)水浸洗(去除玻片上的Scott液)—甩盡在玻片上的水分，伊紅溶液(珠海貝索，BA-4024)染色10秒鐘一純水漂洗(去除玻片上伊紅的浮色)一70%乙醇一下一95%乙醇一下一100%乙醇30秒，3次一二甲苯2分鐘，3次一趁二甲苯未干時(shí)封片(每拿出一張封一張，以切片無(wú)氣泡為原則)一顯微鏡拍照。直接用IPP圖像分析軟件圈主動(dòng)脈竇斑塊面積(mm2)。
[0034]為了觀察IRF7是否對(duì)ApoE+小鼠的基礎(chǔ)體重產(chǎn)生影響，我們測(cè)了各組小鼠的體重。圖1結(jié)果顯示，HFD組ApoE+小鼠的體重要明顯高于其NC組，而無(wú)論NC組還是HFD組，組內(nèi)的ApoE+小鼠與IRF7+APOE+小鼠體重均無(wú)明顯差異，表明IRF7基因未影響ApoE+小鼠的體重變化。
[0035]通過(guò)主動(dòng)脈樹油紅0染色可大體評(píng)估動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成的多少、分布情況及斑塊面積大小。圖2A是小鼠AS模型后油紅0染色結(jié)果圖，頭皮干和主動(dòng)脈根部是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊最明顯的部位。圖2B是小鼠AS模型后HE染色結(jié)果圖，結(jié)果表明，與ApoE+小鼠相比，IRF7+APOE+小鼠主動(dòng)脈樹內(nèi)斑塊面積明顯減少，IRF7+APOE+小鼠主動(dòng)脈竇斑塊面積明顯減少，表明IRF7基因的缺失可顯著降低動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的大小。
[0036]實(shí)施例3 AS模型小鼠斑塊內(nèi)含物的分析
1.巨噬細(xì)胞及 平滑肌細(xì)胞表達(dá)測(cè)定
免疫熒光染色檢測(cè)巨噬細(xì)胞(⑶68)、平滑肌肌動(dòng)蛋白(Smooth Muscle Actin, SMA)的表達(dá)。所需一抗信息:CD68 (MCA1957; 1:100; rat; AbD Serotec), SMA (ab5694;1:100; rabbit; Abeam);所需二抗信息:Alexa Flour? 568 goat ant1-rat IgG (Al 1077;Invitrogen, Carlsbad, CA), Alexa Fluor 488-conjugated goat ant1-rabbit IgG(Al1008; Invitrogen, Carlsbad, CA)。
[0037]主要步驟為:
I)烤片:將石蠟切片置于烤箱中30min以上。
[0038]2)脫蠟:二甲苯 5minX3 次。
[0039]3)水合:100% 乙醇 5minX2 次；95% 乙醇 5min ；70% 乙醇 5min ;ddH20浸洗 5minX2次。
[0040]4)檸檬酸鹽組織抗原修復(fù)(高壓修復(fù)):取一定量的pH6.0檸檬酸鹽抗原修復(fù)工作液于修復(fù)盒中，修復(fù)工作液的量必須能足夠浸沒(méi)整張切片，將修復(fù)盒放入已加入適量自來(lái)水的高壓鍋中，大火加熱至沸騰，將脫蠟水合后的組織切片置于耐高溫染色架上，再將染色架緩慢放入修復(fù)盒中，蓋上鍋蓋，扣上壓力閥，繼續(xù)加熱至噴氣，開始計(jì)時(shí)5min后，壓力鍋斷開電源，去閥開蓋，取出修復(fù)盒；室溫放置20min自然冷卻后取出切片。
[0041]5) ddH20 漂洗 5minX2 次，PBS 漂洗 5minX2 次。
[0042]6)組化筆劃圈，滴加10%羊血清(GTX27481，GeneTex)封閉，于濕盒中37°C封閉60mino
[0043]7)棄封閉液,滴 加適當(dāng)比例稀釋的一抗，4°C孵育過(guò)夜,37°C復(fù)溫30min,棄去一抗，PBS 洗 IOminX 3 次。
[0044]8)滴加二抗，于濕盒中37°C孵育60min，棄去二抗，PBS浸洗5minX3次。
[0045]9) SlowFade Gold antifade reagent with DAPI (S36939, Invitrogen)封片。
[0046]10)熒光鏡下觀察，拍照。若需保存，于暗濕盒中4°C保存。
[0047]熒光統(tǒng)計(jì)方法:SMA (%)=斑塊內(nèi)SMA陽(yáng)性吸光度值/斑塊總面積*100% KD68 (%)=斑塊內(nèi)CD68陽(yáng)性吸光度值/斑塊總面積*100%。
[0048]2.天狼星紅(PSR)染色
主要步驟為:55 0C烘烤30min — 二甲苯2min，3次一100%酒精I(xiàn)min — 95%酒精I(xiàn)min — 70%酒精I(xiàn)min —流水沖洗IOmin —雙蒸水Imin —質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.2%磷鑰酸2min — 0.1%天狼猩紅苦味酸溶液滴于組織上,濕盒中染色90min —去除殘液一0.01N鹽酸4s — 70%酒精I(xiàn)次一90%酒精I(xiàn)次一100%酒精30s，3次一二甲苯2min，3次一趁二甲苯未干立即蓋玻片封片,顯微鏡拍照。
[0049]統(tǒng)計(jì)方法:膠原(％)=斑塊內(nèi)膠原陽(yáng)性總面積/斑塊總面積*100%。
[0050]平滑肌細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞基質(zhì)，是動(dòng)脈粥樣硬化斑塊內(nèi)分泌膠原的細(xì)胞源，主要作用是修復(fù)被破壞的細(xì)胞基質(zhì)成分從而起到保護(hù)作用；巨噬細(xì)胞是斑塊內(nèi)最重要的細(xì)胞成分，它主要有血液循環(huán)單核細(xì)胞進(jìn)入內(nèi)皮下后分化而來(lái)，單核/巨噬細(xì)胞可分泌多種粘附、趨化因子如細(xì)胞黏附分子(ICAM-1)、單核細(xì)胞趨化和激活因子(MCP-1)等，增進(jìn)斑塊內(nèi)細(xì)胞的進(jìn)入，此外巨噬細(xì)胞還可分泌多種基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)，降低斑塊內(nèi)膠原面積，從而破壞斑塊的穩(wěn)定性；膠原成分是斑塊內(nèi)最重要的細(xì)胞外基質(zhì)，也是纖維帽的主要成分，具有抗血流沖擊防止斑塊破裂的作用，也是維護(hù)斑塊穩(wěn)定性的重要評(píng)估指標(biāo)。
[0051]圖3是ApoE+和IRF7+APOE+小鼠的斑塊內(nèi)含物的分析結(jié)果圖。為檢測(cè)斑塊內(nèi)巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的表達(dá)情況，我們將主動(dòng)脈竇切片分別進(jìn)行CD68 (巨噬細(xì)胞標(biāo)志)和SMA (平滑肌細(xì)胞標(biāo)志)等免疫熒光染色分析巨噬細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞成分。免疫熒光發(fā)觀察SMA、CD68在ApoE+小鼠和IRF7+ApoE+小鼠斑塊內(nèi)均有表達(dá)，SMA在IRF7+ApoE+小鼠斑塊內(nèi)表達(dá)量明顯高于ApoE+小鼠<D68在IRF7+AP0E+小鼠斑塊內(nèi)表達(dá)量則顯著低于ApoE+小鼠(A) ；PSR染色結(jié)果表明高脂飲食后的模型，IRF7+AP0E+組小鼠的膠原比例明顯高于ApoE+小鼠，說(shuō)明IRF7+AP0E+組小鼠的斑塊更穩(wěn)定(B)。結(jié)果表明IRF7基因敲除在AS模型中可降低斑塊內(nèi)面積，保護(hù)斑塊的穩(wěn)定性。
[0052]上述實(shí)施例結(jié)果顯示，ApoE+小鼠及IRF7+AP0E+小鼠在高脂飲食的誘導(dǎo)下發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化。IRF7/ApoE雙基因敲除后，小鼠主動(dòng)脈斑塊面積較ApoE+小顯著減少。這些結(jié)果提示，IRF7基因可促進(jìn)主動(dòng)脈斑塊的形成和動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。本發(fā)明證明了IRF7基因在動(dòng)脈粥樣硬化模型中有著重要的惡化作用，其可作為藥物靶標(biāo)篩選治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物。
[0053]上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化，均應(yīng)為等效的置換 方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1.1RF7作為藥物靶標(biāo)在篩選抑制主動(dòng)脈斑塊形成的藥物中的應(yīng)用。
2.1RF7作為藥物靶標(biāo)在篩選治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物中的應(yīng)用。
3.1RF7的抑制劑在制備抑制主動(dòng)脈斑塊形成的藥物中的應(yīng)用。
4.一種抑制主動(dòng)脈斑塊形成的藥物，其特征在于:包含IRF7的抑制劑。
5.1RF7的抑制劑在制備治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物中的應(yīng)用。
6.一種治療動(dòng)脈粥樣硬化疾病的藥物，其特征在于:包含IRF7的抑制劑。
7.根據(jù)權(quán)利要求3或5所述的應(yīng)用或權(quán)利要求4和6所述 的藥物，其特征在于所述的IRF7的抑制劑為IRF7基因的siRNA、IRF7基因的RNA干擾載體或IRF7的抗體中的一種。
【文檔編號(hào)】A61P9/10GK103784975SQ201410031612
【公開日】2014年5月14日 申請(qǐng)日期:2014年1月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月23日
【發(fā)明者】李紅良, 王丕曉, 向梅, 鄧克窮, 胡俊飛, 黃玲 申請(qǐng)人:武漢大學(xué)