磁性納米顆粒-SAMiRNA復(fù)合物及其制備方法
【專利摘要】提供了能夠向細(xì)胞有效遞送雙鏈寡RNA和磁性納米顆粒的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物以及能夠同時進(jìn)行診斷和治療諸如癌癥等疾病的包含所述SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的組合物。更具體地，提供一種包括雙鏈寡RNA-聚合物結(jié)構(gòu)和磁性納米顆粒的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中親水性材料和第二疏水性材料通過簡單的共價鍵或連接分子介導(dǎo)的共價鍵結(jié)合到雙鏈寡RNA，在作為核心的磁性納米顆粒中，第一疏水性材料結(jié)合到磁性材料表面上。SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物可通過本發(fā)明的第一疏水性材料與雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體的第二疏水性材料之間的疏水性相互作用而具有均勻尺寸。此外，結(jié)合到雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體的第二疏水性材料和親水性材料可提高雙鏈寡RNA的體內(nèi)穩(wěn)定性，即使在相對較低濃度的劑量下，額外結(jié)合的配體也可將SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物遞送到靶細(xì)胞，并且磁性納米顆粒的磁性材料可用作診斷的造影劑。
【專利說明】磁性納米顆粒-SAM i RNA復(fù)合物及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及包含SAMiRNA和用于診斷的磁性納米顆粒的SAMiRNA-磁性納米顆粒 復(fù)合物、其制備方法、利用它遞送雙鏈寡RNA的方法以及對包括癌癥和感染性疾病在內(nèi)的 疾病治療和/或診斷技術(shù)，所述SAMiRNA是由雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體組成的納米顆粒，在所述雙 鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體中親水性材料和疏水性材料彼此結(jié)合，以便提高有效地用于治療癌癥、感 染性疾病等的雙鏈寡RNA的遞送。

【背景技術(shù)】
[0002] 診斷和治療是疾病臨床應(yīng)用中的兩個主要類別，最近，在抗腫瘤藥物中引入了診 療（theragnosis)的概念，診療是一種利用成像功能同時進(jìn)行診斷和治療的技術(shù)。對于成 功的診療來說，需要將造影劑和藥物有效地遞送到目標(biāo)疾病區(qū)域。在許多病例中，在藥物遞 送過程中沒有遞送足以在目標(biāo)疾病區(qū)域顯示藥效的藥物，以致無法在臨床治療中獲得實(shí)際 效果，其中在嚴(yán)重的病例中，藥物被施用到體內(nèi)并遞送至正常組織而不是相應(yīng)的組織，由此 引起嚴(yán)重的副作用。
[0003] 此外，由于僅在造影劑被遞送到目標(biāo)特定區(qū)域時，才有可能進(jìn)行相應(yīng)疾 病的診斷，因此需要一種將藥物和造影劑有效遞送至目標(biāo)區(qū)域的方法（Acc. Chem. Res. ,2011，44 (10)，pp 1018 - 1028)。
[0004] 關(guān)于成像模式，已應(yīng)用了熒光光學(xué)成像、磁共振成像（MRI)、正電子發(fā)射斷層顯像 技術(shù)（PET)和計算機(jī)斷層成像技術(shù)（CT)等。已開發(fā)了多種用于成像設(shè)備的造影劑。特別 地，針對疾病的診斷和治療，磁性納米顆粒具有以下優(yōu)點(diǎn)：無毒、具有優(yōu)異的生物相容性、 經(jīng)血管注射以及在人體組織中以高含量累積（Taeeok Kim, nano-biotechnology, Biotech Policy Research Center, 2009)〇
[0005] 磁性納米顆粒在納米生物領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用，例如生物材料的分離、磁共振成像 診斷造影劑、包括巨型磁阻傳感器的生物傳感器、藥物/基因遞送、高溫磁療等。具體地，磁 性納米顆?？捎米鞣肿哟殴舱癯上裨\斷的造影劑。磁性納米顆粒目前被廣泛應(yīng)用于共振成 像診斷，其縮短納米顆粒周圍水分子中的氫原子的自旋_自旋弛豫時間以放大MRI信號。
[0006] 此外，磁性納米顆粒也可通過藥物或基因的遞送而用于體內(nèi)治療。藥物或基因通 過化學(xué)鍵或吸附作用被裝載到磁性納米顆粒上，并通過外部磁場移動到所需位置，在特定 區(qū)域釋放藥物和基因以帶來選擇性的治療效果（參見韓國專利公開No 0819378)。目前， 作為使用磁性納米顆粒遞送藥物的一種方式，磁性脂質(zhì)體已經(jīng)成為了最強(qiáng)大的工具。磁 性脂質(zhì)體具有這樣的形式，其中磁性納米顆粒包含在被磷脂層包圍的脂質(zhì)體中，且在脂質(zhì) 體中含有待遞送至特定區(qū)域的藥物、基因等（Toshihiro Matsuo et al.，J. Biomedical Materials Research Part A, 66A(4) :747-754, 2003)。此外，磁性納米顆?？删哂型ㄟ^脂 質(zhì)體表面的化學(xué)療法追蹤特定組織的功能。為了使磁性脂質(zhì)體有效地追蹤癌細(xì)胞，最近開 發(fā)了一種增加生物組織中的吸附和累積特性的磁性陽離子脂質(zhì)體（MCL) (XiaoliZheng et al.，International J. Pharmaceutics, 366:211-217, 2009)。然而，仍需要具有改良的生物 相容性和穩(wěn)定性的穩(wěn)定磁性納米顆粒。
[0007] 此外，當(dāng)將納米顆粒注入體內(nèi)時，需要納米顆粒具有很好地分散并循環(huán)適當(dāng)時間 而不在血液中凝聚的長循環(huán)特性。然而，由于納米顆粒具有較大的表面積，納米顆粒因 多種血漿蛋白、鹽等充分附著至納米顆粒的生物淤積現(xiàn)象而很易凝聚，因此很容易被諸 如肝臟Kuffer細(xì)胞、脾臟巨噬細(xì)胞這樣的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞（網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)：RES)移除。因 此，在將納米顆粒注入體內(nèi)的幾分鐘內(nèi)，納米顆粒在血液中消失并可能到達(dá)不了所需組 織。此外，當(dāng)氧化鐵納米顆粒在體內(nèi)不夠穩(wěn)定時，其原始結(jié)構(gòu)改變，使得磁性可能改變或 可能迅速發(fā)生生物降解。因此，研究出一種利用諸如聚乙二醇（PEG)的聚合物來包被納 米顆粒表面以增加生物相容性和穩(wěn)定性的技術(shù)（Polymer Science and Technology. Vol 19(2). 2008. 116-124)。
[0008] 同時，發(fā)現(xiàn)siRNA在抑制動物細(xì)胞中特定基因的表達(dá)方面具有顯著效果，因此， SiRNA作為基因治療劑而受到重視，并且由于其高活性和精確的基因選擇性，SiRNA有望成 為作為過去20年的研究結(jié)果的目前用作治療劑的反義寡核苷酸（ODN)的替代治療劑（Dana J. Gary et al. Journal of Controlled Release 121:64-73, 2007)〇
[0009] 特別地，與其它醫(yī)療產(chǎn)品相比，用于治療目的的siRNA技術(shù)具有易于設(shè)計的一大 優(yōu)勢，并有效抑制特定基因的表達(dá)、具有高靶向選擇性、通過siRNA的RNAi等抑制基因表 達(dá)、利用體內(nèi)自然存在的機(jī)制而具有低毒性。此外，其中的物質(zhì)能結(jié)合到存在于特定區(qū)域 中的受體的納米顆粒與能夠殺死癌細(xì)胞等的藥物結(jié)合，可將藥物遞送至作為靶標(biāo)的特定細(xì) 胞。
[0010] 在治療如癌癥等疾病中需要克服的最大挑戰(zhàn)是開發(fā)這樣一種技術(shù)，該技術(shù)選擇 能夠準(zhǔn)確地并且選擇性地將含有治療劑的納米顆粒遞送至癌細(xì)胞的靶組織的適當(dāng)?shù)?靶 物質(zhì)（靶向劑）"，并將靶物質(zhì)與納米顆粒結(jié)合。與納米顆粒結(jié)合的靶物質(zhì)或配體需要通 過適當(dāng)?shù)姆椒ńY(jié)合到腫瘤細(xì)胞的表面，以對受體起作用，從而使納米顆粒中所含的抗癌劑 內(nèi)吞入細(xì)胞中(Junung, Lee, nanoparticles and target tracking system for cancer therapy, a high-tech information analysis report, Korea Institute of Science and Technology Information, 2004)〇
[0011] 為了提1? siRNA的細(xì)胞內(nèi)遞送效率，最近開發(fā)了一種利用siRNA綴合物的技術(shù)，在 所述siRNA綴合物中，作為生物相容性聚合物的親水性材料（例如，聚乙二醇（PEG))通過 簡單的共價鍵或連接分子介導(dǎo)的共價鍵結(jié)合到siRNA，從而確保siRNA的穩(wěn)定性并使siRNA 具有有效的細(xì)胞膜透性（參見韓國專利公開No. 883471)。然而，聚乙二醇（PEG)與siRNA 的綴合（聚乙二醇化）仍存在體內(nèi)穩(wěn)定性低以及向靶組織的遞送不順利的缺點(diǎn)。
[0012] 為了解決這一問題，開發(fā)了一種親水性材料和疏水性材料與雙鏈寡RNA結(jié)合的雙 鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體，所述雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體通過疏水性材料的疏水相互作用而形成自組裝納 米顆粒。該自組裝納米顆粒被稱為"SAMiRNA"（韓國專利公開No. 2009-0042297)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0013] 本發(fā)明的一個目的在于提供一種SAMiRNA，一種包括用于診斷的磁性納米顆粒的 SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物及其制備方法，所述SAMiRNA是由雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體組成的 納米顆粒，其中親水性材料和疏水性材料與用于治療的雙鏈寡RNA結(jié)合。在本發(fā)明中，通過 將靶特異性配體額外結(jié)合到雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體的親水性材料，可提高向期望靶標(biāo)的遞送能 力。SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物可通過SAMiRNA中的疏水性材料與包被到磁性納米顆粒 的磁性材料表面上的疏水性材料之間的相互作用而形成。
[0014] 此外，本發(fā)明的另一個目的在于提供一種用于治療和/或診斷的包括SAMiRNA-磁 性納米顆粒復(fù)合物的組合物，以及一種利用所述組合物治療和/或診斷疾病的方法，其中 根據(jù)本發(fā)明的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物在包括癌癥和感染性疾病在內(nèi)的各種疾病的 治療和/或診斷方面具有顯著作用。
[0015] 進(jìn)一步，在SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物中，可將SAMiRNA形成技術(shù)應(yīng)用于單鏈 寡核苷酸，特別是應(yīng)用于治療目的的單鏈反義寡核苷酸（ASO)，以及應(yīng)用于雙鏈寡RNA。
[0016] 由于雙鏈寡RNA的體內(nèi)穩(wěn)定性提高以及納米顆粒的均勻尺寸，SAMiRNA-磁性納米 顆粒復(fù)合物可增加細(xì)胞遞送效率而具有優(yōu)異的治療效果，并且由于磁性納米顆粒的特性而 可用于診斷目的。就是說，SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物能夠在所謂的治療和診斷同時進(jìn) 行的診療中使用，因而作為一種用于診斷和治療疾病的新型雙鏈寡RNA遞送體系,在遍及 諸如生物技術(shù)的基礎(chǔ)研究、醫(yī)藥工業(yè)等各種工業(yè)領(lǐng)域中具有顯著作用。
[0017] 此外，可利用額外結(jié)合的配體通過靶細(xì)胞特異性遞送將用于治療的雙鏈寡RNA有 效遞送到包括腫瘤在內(nèi)的靶細(xì)胞中，使得通過被遞送的雙鏈寡RNA同時進(jìn)行癌癥的診斷和 治療。含有與之結(jié)合的配體的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物可抑制向其它器官和細(xì)胞的 非特異性遞送，以有效地并特定地對癌癥進(jìn)行診斷和治療。
[0018] 特別地，當(dāng)所述復(fù)合物由磁性納米顆粒和雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體組成時，為了提高磁 性納米顆粒的體內(nèi)遞送,納米顆?？杀粌?nèi)吞入SAMiRNA中而形成更均勻的SAMiRNA-磁性納 米顆粒復(fù)合物。SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物被用來以癌癥特異性方式遞送雙鏈寡RNA， 從而即使在相對較低濃度的劑量下，也可以在靶組織中展現(xiàn)雙鏈寡RNA的活性。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0019] 圖1是SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的示意圖；
[0020] 圖2是示出通過實(shí)施例1-3制備的SAMiRNA-磁性納米顆粒的多分散指數(shù)（PDI) 的曲線圖；
[0021] 圖3是SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的透射電子顯微鏡（TEM)照片：
[0022] (A)磁性納米顆粒的電子顯微照片，以及
[0023] (B) SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的透射顯微照片；以及
[0024] 圖4是SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的磁共振成像（MRI)圖像（將SAMiRNA-磁 性納米顆粒復(fù)合物施用到KB異種移植小鼠模型的腫瘤并通過MRI掃描儀來確診癌組織 (用虛線標(biāo)記））：
[0025] (A)未施用的組，以及
[0026] (B)施用SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的組（在MRI中，以黑色、掃描角-冠狀 面、冠狀面軸向截面、垂直于側(cè)面的截面示出癌組織的成像信號）。

【具體實(shí)施方式】
[0027] 以下，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0028] 為了提供對諸如癌癥等疾病同時進(jìn)行診斷和治療的新型診療技術(shù)，本發(fā)明提供了 一種包括磁性納米顆粒和SAMiRNA的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，所述磁性納米顆粒具 有第一疏水性材料包被到磁性材料表面的結(jié)構(gòu)，所述SAMiRNA包括其中親水性材料和第二 疏水性材料與雙鏈寡RNA結(jié)合的雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體。
[0029] 本發(fā)明的術(shù)語"第一疏水性材料"是指包被到磁性納米顆粒的磁性材料表面的疏 水性材料，術(shù)語"第二疏水性材料"是指通過共價鍵彼此連接的包括在SAMiRNA的雙鏈寡 RNA結(jié)構(gòu)體中的疏水性材料。第一疏水性材料和第二疏水性材料可以是彼此相同的或相似 的，或者可以是彼此不同的，以下將詳細(xì)描述。
[0030] 本發(fā)明提供的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物具有這樣的結(jié)構(gòu)，其中磁性材料表 面包被有第一疏水性材料的磁性納米顆粒作為核心被定位在所述復(fù)合物的最里側(cè)，在包被 到磁性材料表面的第一疏水性材料與包括在雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體中的第二疏水性材料（第二 疏水性材料與雙鏈寡RNA結(jié)合）之間形成疏水相互作用，而親水性材料以與雙鏈寡RNA相 反的方向結(jié)合到雙鏈寡RNA的最外側(cè)（參見圖1)。本發(fā)明的術(shù)語"包被"是指第一疏水性 材料物理吸附或化學(xué)鍵合到磁性材料上的所有情形。
[0031] 此外，SAMiRNA中的親水性材料和疏水性材料與包含在SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù) 合物中的雙鏈寡RNA之間的鍵優(yōu)選為共價鍵，但并不必然局限于此。
[0032] SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的磁性納米顆粒包含對利用磁性的診斷方法具有 顯著作用的磁性材料。具體地，磁性納米顆?？蓱?yīng)用于多種診斷方法，包括利用磁性的磁共 振成像（MRI)診斷方法。
[0033] 磁性納米顆粒的磁性材料的使用可不受限制，只要它是直徑為Inm至200nm的顆 粒，優(yōu)選為2nm至IOOnm,并且可以是磁性金屬或磁性金屬氧化物。
[0034] 更具體地，磁性金屬優(yōu)選地可由選自以下金屬構(gòu)成的組中的一種或多種金屬制 成：鐵族金屬元素 $6、附、&))、稀土元素（1^、〇6、？1'、恥、？111、5111311、6(1、113、〇7、11〇31'、1'111、 丫13、1^1)、貨幣金屬元素（(：11、48、411)、鋅族元素（211、0(1、取)、錯族元素（41、63、111、1'1)、堿土 金屬元素（Ca、Sr、Ba、Ra)以及鉬族元素（Pt、Pd等），或上述金屬的合金。
[0035] 磁性金屬氧化物優(yōu)選地可由選自以下金屬構(gòu)成的組中的一種或多種金屬的氧化 物制成：鐵族金屬元素（Fe、Ni、Co)、稀土元素（La、Ce、Pr、NcU Pm、Sm、Eu、GcU Tb、Dy、Ho、 ￡1'、！'111、￥13、1^1)、貨幣金屬元素（(：11、48、411)、鋅族元素（211、0(1、取)、錯族元素（41、63、111、 Tl)、堿土金屬元素（Ca、Sr、Ba、Ra)以及鉬族元素（Pt、Pd等），或上述金屬的合金。
[0036] 包被到磁性材料表面的第一疏水性材料的使用可不受限制，只要這種材料可以形 成本發(fā)明的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，作為其非限制性的實(shí)例，第一疏水性材料優(yōu)選 地可包括C6至C25芳香族化合物、C6至C25醚、C 6至C25脂肪族烴以及C6至C25胺，并且考慮 到納米顆粒復(fù)合物的形成，優(yōu)選地可使用飽和的或不飽和的脂肪酸和/或烷基胺。
[0037] 在本發(fā)明中構(gòu)造SAMiRNA的雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體具有下式（1)所示的結(jié)構(gòu)：
[0038] 式⑴
[0039] A-X-R-Y-B
[0040] 在上式⑴中，A和B之一是親水性材料，另一個是第二疏水性材料，R是雙鏈寡 RNA ;并且X和Y優(yōu)選為簡單的共價鍵或連接分子介導(dǎo)的共價鍵，但本發(fā)明并不限于此。 [0041] 特別地，在本發(fā)明中構(gòu)造SAMiRNA的雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體優(yōu)選具有下式（1'）所示的 結(jié)構(gòu)：
[0042]式（1，）

【權(quán)利要求】
1. 一種SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，包括： 磁性納米顆粒，包括包被到磁性材料表面上的第一疏水性材料；以及 雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體，包括第二疏水性材料、雙鏈寡RNA和親水性材料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述第一疏水性材料與 所述第二疏水性材料是相同的或不同的。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性納米顆粒通過 第一疏水性材料與第二疏水性材料之間的疏水性相互作用而位于其核心；并且雙鏈寡RNA 結(jié)構(gòu)體位于其外殼。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性納米顆粒與所 述雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體的質(zhì)量比為0. Ol: 1至100:1。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述SAMiRNA-磁性納 米顆粒復(fù)合物的直徑為50nm至300nm。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述SAMiRNA-磁性納 米顆粒復(fù)合物的多分散指數(shù)（PDI)為0. 01至0. 4。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性材料的直徑為 Inm 至 200nm。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性材料為磁性金 屬或磁性金屬氧化物。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性金屬為選自 以下金屬構(gòu)成的組中的一種或多種金屬：鐵族金屬元素$6、附、(：〇)、稀土元素0^、〇3、卩1'、 Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu)、貨幣金屬元素（c u、Ag、Au)、鋅族元素（Zn、Cd、 取)、錯族元素仏1、68、1]1、1'1)、堿土金屬元素(^3、51'、83、1^)以及鉑族元素（?1?(1等）， 或上述金屬的合金。 1〇?根據(jù)權(quán)利要求8所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性金屬氧化物 為選自以下金屬構(gòu)成的組中的一種或多種金屬的氧化物：鐵族金屬元素（Fe、Ni、Co)、稀土 元素（La、Ce、Pr、Nd、Pm、Sm、Eu、Gd、Tb、Dy、Ho、Er、Tm、Yb、Lu)、貨幣金屬元素（Cu、Ag、Au)、 鋅族元素（Zn、CcU Hg)、鋁族元素（Al、Ga、In、Tl)、堿土金屬元素（ca、Sr、Ba、Ra)以及鉑族 元素（Pt、Pd等），或上述金屬的合金的氧化物。 11?根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述磁性納米顆粒的 第一疏水性材料選自C6至C25芳香族化合物、C6至C25醚、C 6至C25脂肪族烴、C6至C25胺中 的一種或多種。 12?根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu) 體具有下式（1)所示的結(jié)構(gòu)： A-X-R-Y-B 式⑴ 其中，A和B之一是親水性材料，另一個是第二疏水性材料;X和Y優(yōu)選為簡單的共價鍵 或連接分子介導(dǎo)的共價鍵；并且R是雙鏈寡RNA。 '
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu) 體具有下式（1，）所示的結(jié)構(gòu)：
其中A和B之一是親水性材料，另一個是第二疏水性材料,x和Y各自彼此獨(dú)立地為簡 單的共價鍵或連接分子介導(dǎo)的共價鍵，S是雙鏈寡RNA的有義鏈，并且AS是雙鏈寡RNA的 反義鏈。
14. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述雙鏈寡RM結(jié)構(gòu) 體具有下式（2)所示的結(jié)構(gòu)：
其中A是第二疏水性材料，B是親水性材料，X和Y各自彼此獨(dú)立地為簡單的共價鍵或 連接分子介導(dǎo)的共價鍵，S是雙鏈寡RNA的有義鏈，并且AS是雙鏈寡RNA的反義鏈。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述雙鏈寡RNA具有 I9至31個核苷酸。
16. 根據(jù)權(quán)利要求12所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述共價鍵是不可降 解的鍵或可降解的鍵。
17. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述不可降解的鍵是 酰胺鍵或磷酸鍵。
18. 根據(jù)權(quán)利要求16所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述可降解的鍵選自 二硫鍵、酸可降解的鍵、酯鍵、酸酐鍵、可生物降解的鍵或酶促可降解的鍵中的一種或多種。
19. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述第二疏水性材料 的分子量為100至2, 000。
20. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述第二疏水性材料 選自類固醇衍生物、甘油酯衍生物、甘油醚、聚丙二醇、C 12-C5q不飽和烴或飽和烴、二?；?脂酰膽堿、脂肪酸、磷脂以及脂多胺中的一種或多種。
21. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述類固醇衍生物選 自膽固醇、膽留烷醇、膽酸、膽留烯基甲酸酯、膽留烷基甲酸酯和膽留烷基胺中的一種或多 種。
22. 根據(jù)權(quán)利要求20所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述甘油酯衍生物選 自甘油單酯、甘油二脂和甘油三酯中的一種或多種。 ^
23. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述親水性材料是具 有分子量1，〇〇〇至10, 〇〇〇的非離子型聚合物。
24. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述親水性材料選自 聚乙二醇（PEG)、聚乙烯基吡咯烷酮以及聚惡唑啉中的一種或多種。
25. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體包 括與其結(jié)合的配體。
26. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述配體以祀特^性 方式結(jié)合而發(fā)揮受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用（RME)，所述配體選自靶特異性抗體、適體、肽和受體 特異性化學(xué)物質(zhì)中的一種或多種。
27. 根據(jù)權(quán)利要求25所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述受體特異性化學(xué) 物質(zhì)選自葉酸、N-乙酰半乳糖胺（NAG)和甘露糖中的一種或多種。
28. -種SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物,包括： 磁性納米顆粒，包括包被到磁性材料表面上的第一疏水性材料；以及 單鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體，包括第二疏水性材料、單鏈反義寡核苷酸（AS〇)和親水性材料。
29. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的SAMiRM-磁性納米顆粒復(fù)合物,其中所述單鏈寡核苷酸結(jié) 構(gòu)體具有下式（7)所示的結(jié)構(gòu)： A-X-ASO-Y-B 式（7) 其中A和B之一是親水性材料，另一個是第二疏水性材料，ASO是單鏈反義寡核苷酸； 并且X和Y優(yōu)選且各自彼此獨(dú)立地為簡單的共價鍵或連接分子介導(dǎo)的共價鍵。
30. 根據(jù)權(quán)利要求28所述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物，其中所述ASO具有1〇至 50個寡核苷酸。 、 31?-種制備SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物的方法，所述方法包括： (1) 制備含有與其結(jié)合的親水性材料和第二疏水性材料的雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體； (2) 制備包括在磁性材料表面上包被有第一疏水性材料的磁性納米顆粒；以及 (3) 將包括所述雙鏈寡RNA結(jié)構(gòu)體的SAMiRNA和含有在磁性材料表面上包被有第一疏 水性材料的磁性納米顆?；旌?。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述方法進(jìn)一步包括將配體結(jié)合到雙鏈寡咖八 結(jié)構(gòu)體的親水性材料的步驟。 33?-種藥物組合物，包括任何一種根據(jù)權(quán)利要求1至30中所述的SAMiRNA-磁性納米 顆粒復(fù)合物。 34?-種診斷用組合物，包括任何一種根據(jù)權(quán)利要求1至30中所述的SAMiRNA-磁性納 米顆粒復(fù)合物。 35?-種用于同時進(jìn)行診斷和治療的組合物，包括任何一種根據(jù)權(quán)利要求1至3〇中所 述的SAMiRNA-磁性納米顆粒復(fù)合物。
【文檔編號】A61K31/7105GK104244928SQ201380011870
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2013年1月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年1月18日
【發(fā)明者】蔡濟(jì)旭, 鄭玄鎮(zhèn), 李寶凜, 樸翰浯 申請人:株式會社百奧尼