蓮子心總生物堿的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及蓮子心總生物堿的提取方法。該方法包括步驟：將蓮子心粉浸泡于醇的水溶液中進(jìn)行超聲波提取，得提取液；所述超聲時間不少于10分鐘；所述醇為甲醇和/或乙醇，其具有提取效率高、提取時間短的優(yōu)點。本發(fā)明超聲波提取再結(jié)合酸溶堿沉和有機(jī)溶劑萃取的步驟，最終獲得總生物堿，進(jìn)一步，該方法溶劑可回收循環(huán)利用，生產(chǎn)成本低，操作簡單易行，設(shè)備投入小，適合工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。
【專利說明】蓮子心總生物堿的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及從蓮子心中提取總生物堿的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]蓮子心(Nelumbo nucifera)為睡蓮科植物蓮的成熟種子的綠色胚芽。干燥的蓮心略成棒狀，長1.2~1.6厘米，頂端膏綠色，有2個分歧，一長一短，先端反折，緊密互貼，用水浸軟后展開，可見2片盾狀卷曲的幼葉；中央的胚芽直立，長約2毫米；基部胚根黃綠色，略呈圓柱形，長2~ 4毫米；質(zhì)脆，易折斷，斷面有多數(shù)小孔。蓮子心作為一味常用中藥，功能包括清心、祛熱、止血、澀精，用于治療心煩、口渴、吐血、遺精、目赤腫痛等癥，被2005年版中華人民共和國藥典收載。
[0003]現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，蓮子心具有抗多種實驗性心率失常及降壓等作用。其中，蓮子心的總生物堿為主要的活性成分，包括蓮心堿、異蓮心堿、甲基蓮心堿、荷葉堿、前荷葉堿、蓮心季銨堿等，而其中又以蓮心堿為主。我國有豐富的蓮子心資源，并且價廉質(zhì)優(yōu)，但是，由于蓮子心總生物堿受到分離條件和工藝的制約，純品的價格昂貴，制劑也僅在小范圍內(nèi)應(yīng)用。
[0004]現(xiàn)已有多篇文獻(xiàn)對蓮子心生物堿的提取方法進(jìn)行了報道，按所采用的溶劑不同可分為水提取法和有機(jī)溶劑提取法，其中水提取法包括純水提取法、酸水提取法、堿水提取法。按提取條件不同分為浸潰法、滲漉法、煎煮法、回流提取法及連續(xù)回流提取法等；另外還有一些新技術(shù)也應(yīng)用到生物堿的提取與分離當(dāng)中。具體如:
[0005]袁小紅(袁小紅.蓮子心4種提取方法的比較研究[J].中國藥房，2006，17(8):637-638)用水提回流法對蓮子心總堿進(jìn)行了提取。他采用常壓加熱回流的方法結(jié)合乙醚萃取得到連心總堿的干浸膏。水提法雖然是一種成本低廉、操作簡便的提取方法，但蓮心堿在水中的溶解度較低，直接采用純水提取蓮心，用水量大，提取效率低，而且提取過程需要加熱，耗時耗能。
[0006]CN1117735C公開了一種從蓮子心中提取純化異蓮心堿和蓮心堿的方法，其主要采用的就是甲(乙)醇溶劑冷浸法，即采用甲醇浸泡后再進(jìn)行多步萃取提取蓮心堿的有機(jī)溶劑提取法。主要是根據(jù)蓮心堿不溶于水而溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)，先將蓮子心浸泡液中的水溶性總堿和非水溶性總堿分離；由于蓮心堿屬于酚性生物堿，因此再通過萃取法將非水溶性總堿中酚性生物堿成分提取出來。冷浸法則是最原始的提取方法，具有成本低、品質(zhì)優(yōu)等特點，但是其溶媒用量大，耗時長，提取率也有待進(jìn)一步提高。
[0007]滲漉法是將藥材粉在滲漉器中浸潰膨脹24~48h，然后不斷添加新溶劑，自上而下使其滲透過藥材后從滲漉器下部流出并收集浸出液的一種浸出方法。黃先菊等(黃先菊，羅順德，楊健，酸液滲漉法提取分離蓮心堿[J].湖北省衛(wèi)生職工醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2002，15 (3):51-52)用2%。HCl溶液滲漉，后用10%氨水堿化得到蓮心總堿。此法與浸潰法相比，提取工藝簡單，操作時間大大縮短，浸出液濃度較高，效果較好；與回流法相比，使用溶劑量少、提取率高。但是，滲漉法的操作技術(shù)要求較高，蓮子心的粉碎粒度也會影響提取率，提取總耗時仍較長。
[0008]CN100560569C公開了一種以層析法為主提取制備蓮子心生物堿的方法，它以蓮子心為原料，含水低級醇提取，將提取液先后通過非極性大孔樹脂和大孔強(qiáng)酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂，再用高濃度含水低級醇洗脫，將洗脫液濃縮至干，經(jīng)干燥粉碎得蓮子心生物堿。該方法雖然工藝簡單，易獲得純度較高的生物堿，但是生物堿提取率低，樹脂還存在前期投入成本高、維護(hù)繁瑣、使用周期有限等缺點。
[0009]基于上述原因，本發(fā)明對蓮子心總生物堿的提取方法進(jìn)行了探索，以期尋找一種提取率高，易于操作，提取成本又低的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010]有鑒于此，本發(fā)明提供一種能增加提取率和縮短提取時間的蓮子心總生物堿的提取方法。
[0011]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為:
[0012]蓮子心總生物堿的提取方法，包括以下步驟:將蓮子心粉浸泡于醇的水溶液中進(jìn)行超聲波提取，得提取液；所述超聲時間不少于10分鐘；所述醇為甲醇和/或乙醇。
[0013]所述超聲波提取是利用超聲波的空化作用、機(jī)械效應(yīng)和熱效應(yīng)等加速胞內(nèi)有效物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，顯著提高提取效率的提取方法。其原理為:當(dāng)大能量的超聲波作用于介質(zhì)時，介質(zhì)被撕裂成許多小空穴，這些小空穴瞬時閉合，并產(chǎn)生高達(dá)幾千個大氣壓的瞬間壓力，即空化現(xiàn)象；超聲空化中微小氣泡的爆裂會產(chǎn)生極大的壓力，使植物細(xì)胞壁及整個生物體的破裂在瞬間完成，縮短了破碎時間，同時超聲波產(chǎn)生的振動作用加強(qiáng)了胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散和溶解，從而顯著提高提`取效率。
[0014]所述蓮子心可選用市售睡蓮科蓮屬植物蓮干燥的種子幼葉及胚根制成的蓮子心飲片，或新鮮采集的蓮或同屬其他植物的種子幼葉及胚根干燥后的物質(zhì)為原料。超聲提取所用的溶劑甲醇和/或乙醇所起的作用類似，只是甲醇的極性強(qiáng)于乙醇，而乙醇較甲醇更為安全，優(yōu)選乙醇。
[0015]提取前先對蓮子心進(jìn)行粉碎，粉碎得越細(xì)，越有利于其中成分的溶出，并縮短提取時間。超聲波提取獲得的提取液，可結(jié)合已有的酸溶堿沉、有機(jī)溶劑萃取、色譜分離、膜分離等技術(shù)，對蓮子心總生物堿進(jìn)行濃縮和分離純化。
[0016]本發(fā)明將超聲波提取技術(shù)應(yīng)用于蓮子心總生物堿的提取，加快了蓮子心中生物堿溶出速度，并提高了溶出率。與現(xiàn)有技術(shù)相比，浸潰法需近I個月才能得到蓮心總堿，滲漉法需近I個星期才能得到蓮心總堿，而本發(fā)明方法即使加上后續(xù)對提取液的分離操作時間，也僅需1-2天即可得到蓮心總堿。另外，通過對比實驗得知，采用超聲波提取的總生物堿的收率可達(dá)到12%以上，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于未采用超聲波提取的總生物堿的收率?？梢姡景l(fā)明蓮子心總生物喊的提取方法具有提取效率聞、提取時間短的優(yōu)點。
[0017]經(jīng)過進(jìn)一步實驗探索，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明中料液比、超聲時間、超聲功率、超聲溫度、提取次數(shù)表現(xiàn)為正效應(yīng)，乙醇濃度和浸泡時間表現(xiàn)為負(fù)效應(yīng)；而在整個提取工藝中，影響提取率的主要因素為料液比、乙醇濃度、超聲時間和提取次數(shù)。
[0018]為獲得更好的提取效果，進(jìn)一步，所述醇的水溶液中醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%_90%，蓮子心粉與醇的水溶液的料液比為lg:10-60ml ;所述超聲波功率不少于60W，超聲波頻率不少于40KHz。更進(jìn)一步，所述醇的水溶液中醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%-70%，蓮子心粉與醇的水溶液的料液比為lg:35-45ml，超聲時間為35-45分鐘，超聲波功率為60W-90W，超聲波頻率不少于40KHz。超聲波提取時，提取的溫度不易過高，優(yōu)選在30°C左右。
[0019]為充分提取蓮子心中的生物堿，并考慮提取的效率，優(yōu)選超聲波提取的次數(shù)為2次。
[0020]進(jìn)一步，所述蓮子心粉于醇的水溶液中浸泡20-120分鐘，再進(jìn)行超聲波提取。該預(yù)處理使蓮子心粉充分浸潤，有助于生物堿的快速溶出，進(jìn)一步縮短提取時間。
[0021]進(jìn)一步，所述蓮子心粉浸泡于醇的水溶液前，先用石油醚和/或乙醚進(jìn)行脫脂處理?，F(xiàn)有技術(shù)中其他的脫脂溶劑也可用于本發(fā)明，并且，脫脂操作不限于在醇的水溶液浸泡前進(jìn)行，也可浸泡后，或者超聲波提取后對提取液進(jìn)行脫脂操作。
[0022]進(jìn)一步，對上述得到的提取液過濾得濾液I ;所述濾液I濃縮至干，得殘留物I ;所述殘留物I中再加入強(qiáng)酸溶液溶解，過濾得濾液II ;所述濾液II用氯仿或乙醚萃取，取水層。所述強(qiáng)酸可為硝酸、硫酸、磷酸等的稀釋溶液，優(yōu)選5%的鹽酸溶液。所述濃縮至干操作，可采用水浴蒸干、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、噴霧干燥等多種方式。優(yōu)選采用等量氯仿萃取3次。所得到的水層含有的物質(zhì)主要是生物堿，此步驟主要將提取液中的脂溶性成分去除。該步驟也可用其他方法替代。
[0023]進(jìn)一步，上述得到的水層用無機(jī)堿調(diào)pH至9-10，再用有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)層，濃縮至干，得殘留物II，所述有機(jī)溶劑為氯仿、乙醚、乙酸乙酯中的一種或多種；所述殘留物II用無水乙醇溶解，過濾得濾液III，濃縮至干，得殘留物III，即為蓮子心總生物堿。所述無機(jī)堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、石灰乳、氨水等，優(yōu)選氨水。所述有機(jī)溶劑萃取時，可采用生物堿反應(yīng)檢測萃取的情況，如碘化鉍鉀的生物堿沉淀反應(yīng)，萃取至生物堿反應(yīng)為陰性為止。該步驟也可用其他方法替代。
[0024]上述整個提取過程中，使用的溶劑可回收利用，投入少，成本低；總的提取過程由超聲波提取，結(jié)合酸溶堿沉和有機(jī)溶劑萃取組成，步驟少，條件易于控制，操作簡單。
`[0025]本發(fā)明還提供一種蓮子心總生物堿的提取方法，其提取率高，提取時間短，成本低。采用的技術(shù)方案為:
[0026]蓮子心總生物堿的提取方法，包括以下步驟:
[0027]A、取蓮子心粉用石油醚和/或乙醚進(jìn)行脫脂處理；
[0028]B、所述脫脂后的蓮子心粉于醇的水溶液中浸泡20-120分鐘，再進(jìn)行超聲波提取，得提取液；所述醇為甲醇和/或乙醇，醇的水溶液中醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%-90%，蓮子心粉與醇的水溶液的料液比為lg:10-60ml，超聲時間不少于10分鐘；
[0029]C、所述提取液過濾得濾液I ;所述濾液I濃縮至干，得殘留物I ;所述殘留物I中再加入強(qiáng)酸溶液溶解，過濾得濾液II ;所述濾液II用氯仿或乙醚萃取，取水層；
[0030]D、所述水層用無機(jī)堿調(diào)pH至9-10，再用有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)層，濃縮至干，得殘留物II，所述有機(jī)溶劑為氯仿、乙醚、乙酸乙酯中的一種或多種；所述殘留物II用無水乙醇溶解，過濾得濾液III，濃縮至干，得殘留物III，即為蓮子心總生物堿。
[0031]上述方法的工藝流程如圖1所示。進(jìn)一步，所述強(qiáng)酸可為硝酸、硫酸、磷酸等的稀釋溶液，優(yōu)選5%的鹽酸溶液。所述無機(jī)堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀、石灰乳、氨水等，優(yōu)選氨水。另外，前述提取方法的優(yōu)選參數(shù)也可用于本部分的發(fā)明。本方法提取率高，提取時間短；溶劑可回收循環(huán)利用，生產(chǎn)成本低；操作簡單易行，設(shè)備投入小，適合工業(yè)化生產(chǎn)應(yīng)用。
[0032]本發(fā)明的有益技術(shù)效果是:
[0033]本發(fā)明的蓮子心總生物堿的提取方法采用超聲波提取技術(shù)，克服了現(xiàn)有技術(shù)中蓮子心總生物堿提取率低、耗時長、設(shè)備投入多、操作復(fù)雜等缺點，具有提取效率高、提取時間短等優(yōu)點，為工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)提供了有效的工藝路徑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0034]圖1為蓮子心總生物堿提取方法的工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0035]以下結(jié)合優(yōu)選實施例和對比實施例，對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。優(yōu)選實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)條件進(jìn)行。
[0036]實施例1-12
[0037]精確稱取1.0Og蓮子心粉末于具塞錐形瓶中，用30mL石油醚脫脂，除去石油醚，加A l/A ml質(zhì)量分?jǐn)?shù)為B的乙醇，浸泡C分鐘后，將錐形瓶固定在超聲波清洗器中，在溫度D、超聲波功率E下，提取F分鐘后取出。提取液用砂芯漏斗抽濾，濾渣重復(fù)提取G-1次，合并濾液用水浴蒸干，在殘渣中加入5%鹽酸溶液溶解，過濾，棄去不溶物。濾液加等量氯仿萃取3次，分出氯仿層，取水層用氨水調(diào)pH至9~10，再用氯仿萃取至生物堿反應(yīng)至陰性為止(采用碘化鉍鉀反應(yīng))。合并氯仿液，在水浴上蒸干，殘渣用無水乙醇溶解，過濾，濾液用無水乙醇定溶于50ml容量瓶中，進(jìn)行測試。所得無水乙醇溶液蒸干，即為蓮子心總生物堿。A、B、
C、D、E、F、G的取值，以及提取獲得總生物堿和蓮心堿的量，見表1。
[0038]表1實驗參數(shù)設(shè)置及實驗結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于，包括以下步驟:將蓮子心粉浸泡于醇的水溶液中進(jìn)行超聲波提取，得提取液；所述超聲時間不少于10分鐘；所述醇為甲醇和/或乙醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述醇的水溶液中醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%-90%，蓮子心粉與醇的水溶液的料液比為lg:10-60ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述超聲波功率不少于60W，超聲波頻率不少于40KHz。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述醇的水溶液中醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%-70%，蓮子心粉與醇的水溶液的料液比為lg:35-45ml，超聲時間為35-45分鐘，超聲波功率為60W-90W，超聲波頻率不少于40KHz。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述超聲波提取的次數(shù)為2次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述蓮子心粉于醇的水溶液中浸泡20-120分鐘，再進(jìn)行超聲波提取。
7.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述蓮子心粉浸泡于醇的水溶液前，先用石油醚和/或乙醚進(jìn)行脫脂處理。
8.根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述提取液過濾得濾液I ;所述濾液I濃縮至干，得殘留物I ;所述殘留物I中再加入強(qiáng)酸溶液溶解，過濾得濾液II ;所述濾液II用氯仿或乙醚萃取，取水層。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于:所述水層用無機(jī)堿調(diào)PH至9-10，再用有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)層，濃縮至干，得殘留物II，所述有機(jī)溶劑為氯仿、乙醚、乙酸乙酯中的一種或多種；所述殘留物II用無水乙醇溶解，過濾得濾液III，濃縮至干，得殘留物III，即為蓮子心總生物堿。
10.蓮子心總生物堿的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: A、取蓮子心粉用石油醚和/或乙醚進(jìn)行脫脂處理； B、所述脫脂后的蓮子心粉于醇的水溶液中浸泡20-120分鐘，再進(jìn)行超聲波提取，得提取液；所述醇為甲醇和/或乙醇，醇的水溶液中醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%-90%，蓮子心粉與醇的水溶液的料液比為lg:10-60ml，超聲時間不少于10分鐘； C、所述提取液過濾得濾液I;所述濾液I濃縮至干，得殘留物I ;所述殘留物I中再加入強(qiáng)酸溶液溶解，過濾得濾液II ;所述濾液II用氯仿或乙醚萃取，取水層； D、所述水層用無機(jī)堿調(diào)pH至9-10，再用有機(jī)溶劑萃取，合并有機(jī)層，濃縮至干，得殘留物II，所述有機(jī)溶劑為氯仿、乙醚、乙酸乙酯中的一種或多種；所述殘留物II用無水乙醇溶解，過濾得濾液III，濃縮至干，得殘留物III，即為蓮子心總生物堿。
【文檔編號】A61K131/00GK103610756SQ201310692616
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月17日
【發(fā)明者】羅平, 王莎莎, 孫俊杰, 彭德光, 張萌 申請人:重慶百農(nóng)網(wǎng)投資有限公司