金蓮花提取物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種金蓮花提取物的制備工藝將金蓮花(毛茛科植物金蓮花Trollius?chinensis?Bunge的干燥花)加5-50倍量的10%-100%乙醇水溶液回流提取1-6次,每次0.5-8小時(shí);濾過后合并乙醇水提取溶液備用;將乙醇水提取液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度為1.00-1.20的濃縮液,靜置,濾過,濾液備用;將濃縮后的乙醇水溶液或直接將乙醇水溶液用大孔吸附樹脂、聚酰胺等樹脂吸附;吸附物用水洗,再用10-100%醇洗脫;收集醇洗脫液;回收醇,干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物。金蓮花提取物可用于制備抗病毒、抗菌、抗炎的藥物。
【專利說明】金蓮花提取物的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】,具體地說是一種金蓮花提取物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中國(guó)藥典1977年版、北京市藥材標(biāo)準(zhǔn)、上海市藥材標(biāo)準(zhǔn)以及山西省藥材標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定金蓮花為毛茛科植物金蓮花Trollius chinensis Bunge的干燥花。夏季花開時(shí)采摘,除去雜質(zhì),陰干???,寒。歸肝經(jīng)。具有清熱散風(fēng),解毒消腫,平肝明目。用于口瘡喉腫,浮熱牙宣,耳疼目痛,山嵐瘴氣,疔瘡火毒,上呼吸道感染,急性腸炎,泌尿系統(tǒng)感染及瘡癤膿腫等作用。
[0003]金蓮花中含有多種化學(xué)成分,現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)主要以黃酮類成分為主,同時(shí)還含有生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油等成分。藥理作用顯示具有:抗病毒、抑菌與抗炎作用等作用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是提供一種從中藥金蓮花中提取一種總黃酮含量在20%以上的金蓮花提取物的制備方法,通過簡(jiǎn)單的工藝過程得到總黃酮含量大于20%的金蓮花提取物。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)方案是:其具體方法步驟為:
將金蓮花斤o77ii/5.chinensis Bunge的干燥花用10%_100%乙醇水或甲醇水回流提取,加入相當(dāng)于藥材重量的5-50倍溶劑,回流提取1-6次,每次0.5至8小時(shí),合并提取液;用各種方式濾過,合并乙醇水或甲醇水提取溶液備用;
將乙醇水或甲醇水提取液回收·乙醇或甲醇,并濃縮至相對(duì)密度為1.00-1.20的濃縮液,靜置,濾過,濾液備用;
將濃縮后的乙醇水或甲醇水溶液或者直接將乙醇水或甲醇水溶液用大孔吸附樹脂或聚酰胺等樹脂吸附;
吸附物用水洗,再用10-100%醇洗脫;
收集醇洗脫液;
回收醇,浸膏干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物;
金蓮花提取物總黃酮含量在20%以上(紫外-可見分光光度法或HPLC法測(cè)定)。
[0006]所述的金蓮花提取物,是從毛茛科植物金蓮花chinensis Bunge的干燥花中提取出來的一大類物質(zhì)。用該金蓮花提取物做為藥效成分來制備用于治療病毒性疾病的藥物制劑,可單獨(dú)或與制藥工藝中可接受的賦形劑結(jié)合,按照常規(guī)方法制成口服給藥、腔道、黏膜給藥、肌肉或靜脈給藥的藥物劑型。所述金蓮花提取物總黃酮含量大于50%以上。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了中藥金蓮花提取物治療病毒性疾病的藥效物質(zhì),為其臨床應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù),使金蓮花提取物可做為一個(gè)天然的抗病毒劑,具有無成癮性、用量小的特點(diǎn)。金蓮花提取物采用體外培養(yǎng)法篩選實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明:在625μ8/πι1的濃度時(shí)對(duì)甲型流感病毒Al的抑制率為75.6%、212.5 μ g/ml的濃度時(shí)對(duì)呼吸道合胞病毒RSV的抑制率為62.3%,39.07 μ g/ml的濃度時(shí)對(duì)腺病毒Adv3的抑制率為67.1%。目前臨床治療病毒性疾病以化學(xué)合成和半合成的藥物為主。但是,由于半個(gè)多世紀(jì)以來化學(xué)合成和半合成抗菌、抗病毒藥物的廣泛
使用,已誘發(fā)病菌產(chǎn)生了耐藥性菌株,且日漸增多條件性致病菌。加之其毒副作用較大等
缺點(diǎn),致使該類藥物盡管作為一線治療藥、但已存在諸多不足。因此,抗病毒中藥具有副作
用小而具有廣闊的應(yīng)用前景,用本發(fā)明工藝提取的提取物的開發(fā)成功將產(chǎn)生重大的社會(huì)效
Mo
[0007]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:工藝簡(jiǎn)單,提取率也較高,能夠得到總黃酮含量大于20%的金蓮花提取物。
【具體實(shí)施方式】
[0008]下面結(jié)合實(shí)施例來更詳細(xì)的說明本發(fā)明,但本發(fā)明并不受這些實(shí)施例的限制。
[0009]實(shí)施例1:
金蓮花100克,加16倍量的60%乙醇回流提取3次,每次1.5小時(shí),濾過,合并乙醇提取液,回收乙醇溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.15的濃縮液,靜置,濾過,備用。將濃縮液后的藥液加入已處理好的DlOl大孔吸附樹脂200g吸附6小時(shí)。吸附藥液的大孔吸附樹脂柱用5倍柱床體積水洗后再用10倍柱床體積的50%乙醇洗脫,收集醇洗脫液,回收醇,干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物,總黃酮含量在59% (紫外-可見分光光度法測(cè)定)。
實(shí)施例2:
金蓮花100克,加10倍量的45%乙醇回流提取2次,每次1.5小時(shí),濾過,合并乙醇提取液,回收乙醇溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1.05-1.10的濃縮液,靜置,濾過,備用。將濃縮液后的藥液加入已處理好的聚酰胺樹脂100g吸附5小時(shí)。吸附藥液的聚酰胺樹脂柱用3倍柱床體積水洗后再用6倍柱床體積的70%乙醇洗脫,收集醇洗脫液,回收醇,干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物,總黃酮含量在40% (HPLC法測(cè)定)。
[0010]實(shí)施例3:
金蓮花100克,加16倍量的78%乙醇回流提取3次,每次1.5小時(shí),濾過,合并乙醇提取液,回收乙醇溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.15的濃縮液,靜置,濾過,備用。將濃縮液后的藥液加入已處理好的DlOl大孔吸附樹脂200g吸附6小時(shí)。吸附藥液的大孔吸附樹脂柱用5倍柱床體積水洗后再用10倍柱床體積的50%乙醇洗脫,收集醇洗脫液,回收醇,干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物,總黃酮含量在75% (紫外-可見分光光度法測(cè)定)。
[0011]實(shí)施例4:
金蓮花100克,加30倍量的65%甲醇回流提取2次,每次2小時(shí),濾過,合并甲醇提取液,回收甲醇溶劑并濃縮至相對(duì)密度為1.00-1.10的濃縮液,靜置,濾過,備用。將濃縮液后的藥液加入已處理好的DlOl大孔吸附樹脂300g吸附3小時(shí)。吸附藥液的大孔吸附樹脂柱用4倍柱床體積水洗后再用15倍柱床體積的70%甲醇洗脫,收集醇洗脫液,回收醇,干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物,總黃酮含量在50% (紫外-可見分光光度法測(cè)定)。
[0012]實(shí)施例5:金蓮花提取物體外對(duì)流感病毒(HlNl)抑制活性檢測(cè) 材料與方法
1.體外宿主細(xì)胞=MDCK (狗腎傳代細(xì)胞)細(xì)胞。
[0013]2.病毒株:流感病毒A型(HlNl) (A3/京科/30/95)。
[0014]3.CPE法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。[0015]4.CPE法(細(xì)胞病變)檢測(cè)藥物對(duì)流感病毒的抑制作用。
試驗(yàn)過程
(I).藥物的細(xì)胞毒性檢測(cè)
MDCK細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)形成單層后,加入不同濃度的藥液,繼續(xù)培養(yǎng)3天,用CPE法檢測(cè)藥物對(duì)MDCK細(xì)胞的毒性。
[0016](2).藥物抗流感病毒作用檢測(cè)
MDCK細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)形成單層后,用100TCID50的流感病毒感染細(xì)胞,再加入無毒濃度下的系列濃度的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3天,經(jīng)CPE法確定藥物對(duì)流感病毒的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明金蓮花提取物體對(duì)MDCK細(xì)胞的無毒濃度為625ug/ml,即(TC0=625ug/ml),金蓮花提取物在625ug/ml的濃度時(shí)對(duì)流感病毒A型(H1N1)的抑制率分別為75.6%。
[0017]實(shí)施例6:金蓮花提取物體外對(duì)呼吸道合胞病毒(RSV)抑制活性檢測(cè)材料與方法 1.體外宿主細(xì)胞=Vero (非洲綠猴腎細(xì)胞)細(xì)胞。
[0018]2.病毒株:呼吸道合胞病毒(RSV)。
[0019]3.CPE法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。
[0020]4.CPE法(細(xì)胞病變)檢測(cè)藥物對(duì)呼吸道合胞病毒的抑制作用。
試驗(yàn)過程
(I).藥物的細(xì)胞毒性檢測(cè)
Vero細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)形成單層后,加入不同濃度的藥液,繼續(xù)培養(yǎng)3天,用CPE法檢測(cè)藥物對(duì)Vero細(xì)胞的毒性。
[0021](2).藥物抗呼吸道合胞病毒作用檢測(cè)
Vero細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)形成單層后,用100TCID50的呼吸道合胞病毒(RSV)感染細(xì)胞,再加入無毒濃度下的系列濃度的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3天,經(jīng)CPE法確定藥物對(duì)呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明金蓮花提取物體對(duì)Vero細(xì)胞的無毒濃度為212.5ug/ml,即(TC0=625ug/ml),金蓮花提取物在212.5ug/ml的濃度時(shí)對(duì)呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制率分別為62.3%。
[0022]實(shí)施例7:金蓮花提取物體外對(duì)腺病毒(Adv3)抑制活性檢測(cè) 材料與方法
1.體外宿主細(xì)胞=Vero (非洲綠猴腎細(xì)胞)細(xì)胞。
[0023]2.病毒株:腺病毒(Adv3)。
[0024]3.CPE法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的毒性。
[0025]4.CPE法(細(xì)胞病變)檢測(cè)藥物對(duì)腺病毒的抑制作用。
試驗(yàn)過程
(I).藥物的細(xì)胞毒性檢測(cè)
Vero細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)形成單層后,加入不同濃度的藥液,繼續(xù)培養(yǎng)3天,用CPE法檢測(cè)藥物對(duì)Vero細(xì)胞的毒性。[0026](2).藥物抗腺病毒作用檢測(cè)
Vero細(xì)胞在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)形成單層后,用100TCID50的腺病毒(Adv3)感染細(xì)胞,再加入無毒濃度下的系列濃度的含藥培養(yǎng)液,繼續(xù)培養(yǎng)3天,經(jīng)CPE法確定藥物對(duì)腺病毒(Adv3)的抑制作用。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明金蓮花提取物體對(duì)Vero細(xì)胞的無毒濃度為39.07ug/ml,即(TC0=39.07ug/ml),金蓮花提取物在39.07ug/ml的濃度時(shí)對(duì)腺病毒的抑制率分別為67.1%。[0027]實(shí)施例8:
取金蓮花提取物25g,加入淀粉細(xì)粉200g,用等量遞增法混勻,加入滑石粉5g,硬脂酸鎂2g,混勻,用85%乙醇制粒,干燥,整粒,壓制成1000片,每日3次,每次2片。
[0028]實(shí)施例9:
取金蓮花提取物25g,加入淀粉細(xì)粉150g,滑石粉10g,硬脂酸鎂5g,混勻,制粒,干燥,裝入膠囊,制成1000粒,每日3次,每次2片。
[0029]實(shí)施例10:
取金蓮花提取物50g,加入微晶纖維素250g,交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮50g,混勻,加入90乙醇制粒,干燥,整粒,加入羧甲基淀粉鈉10g,硬脂酸鎂5g,混勻,壓制成1000片,每日服用3次,每次I片。
[0030]實(shí)施例11:
取金蓮花提取物50g,甘露醇150g,加注射用水2000ml,攪拌使溶解,用IM NaOH溶液調(diào)pH至9.60~10.0,攪拌使溶解,濾過,濾液按I %溶液體積量加入活性炭,在70~80°C下加熱30分鐘,粗濾過,管道及容器用400mL注射用水洗滌,加水到2500ml,藥液經(jīng)0.22 μ m無菌過濾器過濾,灌裝,凍干,壓塞,軋蓋,制成1000瓶,即得。實(shí)驗(yàn)顯示本發(fā)明的醫(yī)藥用途是制備治療急、慢性呼吸道疾病、支氣管炎、肺氣腫的藥物。
【權(quán)利要求】
1.一種金蓮花提取物的制備工藝,其特征在于:將金蓮花(毛茛科植物金蓮花Trollius chinensis Bunge的干燥花)加5-50倍量的10%_100%乙醇水溶液回流提取1-6次,每次0.5-8小時(shí); 濾過后合并乙醇水提取溶液備用; 將乙醇水提取液回收乙醇,并濃縮至相對(duì)密度為1.00-1.20的濃縮液,靜置,濾過,濾液備用; 將濃縮后的乙醇水溶液或直接將乙醇水溶液用大孔吸附樹脂、聚酰胺等樹脂吸附; 吸附物用水洗,再用10-100%醇洗脫; 收集醇洗脫液; 回收醇,干燥,粉碎,過篩,得金蓮花提取物。
2.如權(quán)利要求1所述方法提取的金蓮花提取物,其特征在于:金蓮花提取物中總黃酮含量為20~100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的金蓮花提取物,其特征還于:金蓮花提取物可以單獨(dú)或與各種中藥及其提取物制成各種藥用劑型。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的金蓮花提取物,其特征在于:所說的藥用劑型是肌肉或靜脈給藥制劑,如注射用粉針劑、水針劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的金蓮花提取物,所述的藥用劑型是口服給藥制劑,如膠囊劑、軟膠囊、顆粒劑、片劑、分散片和沖劑、口服液;陰道、肛門、鼻腔、滴眼劑黏膜給藥制劑。
6.權(quán)利要求1方法提取的金蓮花提取物,其特征還于:金蓮花提取物用于制備抗病毒、抗菌、抗炎的藥物。
【文檔編號(hào)】A61K133/00GK103623075SQ201310634820
【公開日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2013年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月3日
【發(fā)明者】張國(guó)剛 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)藥科大學(xué)