一種制備西瓜霜的方法及其抗感染的醫(yī)藥用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種發(fā)酵、冷凍干燥法制備西瓜霜的方法，以及制備的西瓜霜用作抗感染的醫(yī)藥用途。所發(fā)明西瓜霜的制備方法特征在于：取新鮮西瓜，切碎后放入發(fā)酵罐或容器中，加入一定量濃度的芒硝，混合均勻，利用耐高鹽菌種或通過生物技術(shù)方法分離獲得的發(fā)酵菌種，在+5℃～+25℃條件下，發(fā)酵7～20天，期間需要定期攪拌，增加溶氧；發(fā)酵結(jié)束后，離心取上清液，對上清液冷凍干燥，而制成。此發(fā)明制備西瓜霜的方法與傳統(tǒng)生產(chǎn)方式明顯不同，具有諸多優(yōu)點(diǎn)。制備的西瓜霜及提取物具有明顯抗菌活性，可制成適宜的各種制劑，用于治療口腔、黏膜及皮膚感染性疾病，如：口腔炎、口腔潰瘍、急慢性咽喉炎、扁桃體炎及中耳炎的醫(yī)藥用途。
【專利說明】一種制備西瓜霜的方法及其抗感染的醫(yī)藥用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種發(fā)酵制備西瓜霜的方法，以及將該西瓜霜及其95%乙醇(或其他低分子醇)提取物用作抗菌活性的醫(yī)藥用途，用于治療口腔、黏膜及皮膚感染性疾病:口腔炎、口腔潰瘍、咽喉炎、扁桃體炎及中耳炎等。
【背景技術(shù)】 [0002]中醫(yī)傳統(tǒng)理論認(rèn)為，西瓜霜為葫蘆科植物西瓜Citrullus lanatus (Thunb.)Matsumu.et Nakai的成熟新鮮果實(shí)與皮硝(芒硝粗品)經(jīng)滲析制霜法加工得到的芒硝的細(xì)小結(jié)晶。傳統(tǒng)炮制方法為:取新鮮西瓜切碎，放入不帶釉的瓦罐內(nèi)，一層西瓜一層芒硝，將口封嚴(yán)，懸掛于陰涼通風(fēng)處，數(shù)日后即自瓦罐外面析出白色結(jié)晶物，隨析隨收集，至無結(jié)晶析出為止。也可以直接用西瓜加入芒硝懸吊于陰涼通風(fēng)處制作。西瓜霜具有清熱解毒，消腫止痛的功效，用于咽喉腫痛，喉痹，口瘡。西瓜霜藥用歷史悠久，被歷代醫(yī)家視為咽喉和口腔的良藥，有“喉科圣藥”之稱。
[0003]傳統(tǒng)觀念認(rèn)為西瓜霜清熱瀉火，消腫止痛的功效是因?yàn)槲鞴夏芮鍩峤馐?，芒硝能清熱瀉火，兩藥合制，性味增強(qiáng)，起到協(xié)同作用而發(fā)揮藥效。目前，對于西瓜霜的研究主要集中在西瓜霜復(fù)方藥物的臨床療效觀察及新用途方面，臨床上多用西瓜霜復(fù)方進(jìn)行治療，如桂林西瓜霜(噴劑)、西瓜霜潤喉片、西瓜霜清咽含片和桂林西瓜霜膠囊等中成藥。
[0004]由于西瓜霜傳統(tǒng)制備方法存在各地加工隨意性較大，工藝不統(tǒng)一，污染嚴(yán)重，生產(chǎn)時(shí)間長、效率低，工藝繁雜，生產(chǎn)中常見人體致病菌的污染，而且機(jī)制不清，質(zhì)量不穩(wěn)定、不適應(yīng)現(xiàn)代化生產(chǎn)的需要，使得大多數(shù)西瓜霜生產(chǎn)廠家在20世紀(jì)70年代相繼停產(chǎn)，古藥瀕臨絕境。本發(fā)明采用發(fā)酵法制備西瓜霜，明確了發(fā)酵菌種為耐高鹽的天然菌種，確定了最佳發(fā)酵時(shí)間，生產(chǎn)周期縮短，減少了污染，闡明了西瓜霜的藥效機(jī)制和藥效作用。所發(fā)明的方法中采用冷凍干燥技術(shù)，與傳統(tǒng)制備方法一樣在低溫條件下制備，防止對有效成分的加熱破壞。本發(fā)明創(chuàng)新提出西瓜霜發(fā)酵過程中微生物產(chǎn)生的生物轉(zhuǎn)化及次生代謝產(chǎn)物是主要的藥效物質(zhì)，而不是傳統(tǒng)上認(rèn)為的藥效物質(zhì)是芒硝的細(xì)小結(jié)晶。本發(fā)明進(jìn)行的抑菌、殺菌實(shí)驗(yàn)表明:所制備的西瓜霜對引起咽喉腫痛，口舌熱瘡等疾病的常見致病菌產(chǎn)生較強(qiáng)的抑制、殺滅作用，從而發(fā)揮療效。本發(fā)明亦對西瓜霜抗菌有效部位進(jìn)行了化學(xué)研究、菌種的分離鑒定研究。本發(fā)明所制備西瓜霜提取物可以治療感染性疾病:口腔炎、口腔潰瘍、急慢性咽喉炎、扁桃體炎及中耳炎等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的之一是提供一種發(fā)酵制備西瓜霜的方法。
[0006]本發(fā)明的目的之二是提供上述西瓜霜抗感染有效部位的制備方法。
[0007]本發(fā)明的目的之三是將上述西瓜霜分離制成抗感染有效部位，將有效部位提取物制成各種劑型的抗感染藥物，用于治療口腔、黏膜及皮膚感染性疾病，如:口腔炎、口腔潰瘍、急慢性咽喉炎、扁桃體炎及中耳炎的醫(yī)藥用途。[0008]本發(fā)明的上述目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
[0009]一種西瓜霜的制備方法，其特征在于采用發(fā)酵、冷凍干燥法制備而成。其發(fā)酵方法為:以西瓜為培養(yǎng)基，在一定量濃度的Na2SO4.IOH2O存在的情況下，即高鹽狀態(tài)下，溫度為+5°C~+25°C，發(fā)酵7~20天，攪拌增加溶氧；發(fā)酵結(jié)束后，離心取上清液，冷凍干燥，而制成。
[0010]一種采用發(fā)酵、冷凍干燥法制備西瓜霜的方法，其包括以下具體步驟:
[0011]取新鮮西瓜，切碎后放入發(fā)酵罐或容器中，加入芒硝(西瓜:芒硝=100:10~25kg)，混合均勻，接入菌種或直接用耐高鹽自然菌種，在+5°C~+25°C條件下，發(fā)酵7~20天，期間需要定期攪拌，以增加溶氧。發(fā)酵結(jié)束后，4000r離心10~20min，取上清液。將上清液在溫度為一40°C、真空度<13Pa條件下，冷凍干燥2天，制得西瓜霜。
[0012]本發(fā)明中西瓜霜的制備方法，與傳統(tǒng)西瓜霜的制備存在明顯不同，本方法中采用直接發(fā)酵法，以西瓜和芒硝的混合物作為培養(yǎng)基，置于發(fā)酵罐或容器中，利用耐高鹽的自然菌種及通過生物技術(shù)分離得到的菌種接種進(jìn)行發(fā)酵，規(guī)定了確切的發(fā)酵時(shí)間、發(fā)酵溫度，成霜不需要從瓦罐或西瓜流出液中刷取，減少了污染環(huán)節(jié)，簡化了操作。再采用冷凍干燥技術(shù)，使發(fā)酵液最終除去水分成疏散的粉末。該方法保存了傳統(tǒng)西瓜霜加工上需要在低溫條件下成霜的特點(diǎn)，能排除95%~99%以上的水分，不破壞西瓜霜的化學(xué)成分，適合工業(yè)化的大生產(chǎn)。
[0013]按照上述方法制備的西瓜霜的抗菌有效部位的獲得，其特征在于:將所得西瓜霜用6~10倍量的95%乙醇冷浸提取I~3次，攪拌，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇得到西瓜霜提取物。
[0014]芒硝為可溶性鹽類，無論古法還是所發(fā)明的發(fā)酵、凍干法制備的西瓜霜中均含有大量的Na2SO4,純品Na2SO4雖有一定的藥理作用，但是經(jīng)過活性篩選對感染性疾病并無作用，所以需要把西瓜霜中大量的Na2SO4除去，以制取真正的抗菌有效成分。西瓜霜抗菌有效部位提取物的制備方法，包括以下具體步驟:
[0015]將所得的西瓜霜用6~10倍量的95%乙醇(或其他低分子醇)在20°C條件下冷浸提取I~3次，充分?jǐn)嚢?，將不溶性的Na2SO4濾過，合并濾液，30°C~50°C溫度下減壓回收乙醇，制得西瓜霜提取物。
[0016]本發(fā)明發(fā)酵時(shí)采用的菌種為耐高鹽的自然菌種及通過生物技術(shù)分離得到的菌種，包括:鐮孢霉屬、青霉屬、毛霉屬、交鏈孢霉屬的6種菌種，詳細(xì)見實(shí)驗(yàn)例。
[0017]所述西瓜霜提取物，對常見人體致病菌具有顯著地抑菌、殺菌活性，為西瓜霜抗菌有效部位。該提取物對常見致病菌具有明顯的抑菌、殺菌作用，所選菌種是常見的口腔、呼吸道、消化道致病菌，包括:金黃色葡萄球菌、檸檬葡萄球菌、白葡萄球菌、綠膿桿菌、乙型副傷寒桿菌、乙型溶血性鏈球菌、福氏痢疾桿菌和大腸桿菌，詳見實(shí)驗(yàn)例。
[0018]西瓜霜抗菌有效部位提取物，其醫(yī)藥用途為具有抗菌活性，用于制備治療感染性疾病的藥物中的應(yīng)用。用于治療口腔炎、口腔潰瘍、急慢性咽喉炎、扁桃體炎及中耳炎等。
[0019]本發(fā)明西瓜霜提取物可以加入制備不同劑型時(shí)所需的各種輔料和藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或稀釋劑后 ，以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種適宜的臨床制劑，例如可以是口腔凝膠劑、膜劑、氣霧劑、粉霧劑和滴耳劑等，而用于醫(yī)藥用途。【具體實(shí)施方式】
[0020]下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。
[0021]本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術(shù)方案的細(xì)節(jié)和形式進(jìn)行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0022]實(shí)施例一:西瓜霜的制備
[0023]取IOkg新鮮西瓜，切碎后放入發(fā)酵罐中，加入1.5kg芒硝，混合均勻，在20°C條件下，發(fā)酵15天，期間定期攪拌。發(fā)酵結(jié)束后，4000r離心lOmin，得上清液7kg，冷凍干燥，得到西瓜霜1.57kg。
[0024]實(shí)施例二:西瓜霜的制備:
[0025]取30kg新鮮西瓜，切碎后放入發(fā)酵罐中，加入5kg芒硝，混合均勻，接入菌種，在20°C條件下，發(fā)酵20天，期間定期攪拌，發(fā)酵結(jié)束后，4000r離心15min，得上清液24kg，冷凍干燥，得到西瓜霜5.52kg。
[0026]實(shí)施例三:西瓜霜甲醇提取物的制備
[0027]取自制西瓜霜3kg，用8倍量的甲醇在20°C條件下冷浸提取2次，每次8h，攪拌，濾過不溶性的Na2SO4，合并濾液，35°C減壓回收甲醇，得西瓜霜提取物206g。
[0028]實(shí)施例四:西瓜霜乙醇提取物的制備
[0029]取西瓜霜2kg，用10倍量的95%乙醇在20°C條件下冷浸提取2次，每次24h，濾過不溶性的Na2SO4，合并濾液，40°C減壓回收乙醇得西瓜霜提取物120g。
[0030]實(shí)施例五:制成口腔凝膠劑
[0031]稱取卡波姆凝膠基質(zhì)至研缽中，加入甘油，研磨使?jié)駶櫍舆m量純化水研磨使充分溶脹，加三乙醇胺研磨成透明凝膠基質(zhì)。另稱取適量西瓜霜提取物，尼泊金乙酯，加純化水加熱溶解，趁熱將溶液與上述基質(zhì)混合，充分研磨均勻，放冷，即得西瓜霜凝膠劑。
[0032]實(shí)施例六:制成口腔膜劑
[0033]先將聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉分別用適量純化水浸泡，充分膨脹后水浴使之完全溶解，混勻二者，備用。取西瓜霜提取物適量溶于少量熱純化水中，加入糖精鈉、甘油攪拌溶解，再將此藥液與上述備用的聚乙烯醇、羧甲基纖維素鈉膠漿液混合，加適量純化水至規(guī)定量，混勻。靜置，待氣泡除盡后涂膜，干燥，脫膜，分割成所需大小的膜片，在紫外燈下照射15min滅菌，密封包裝，制得西瓜霜膜劑。
[0034]實(shí)施例七:西瓜霜提取物的臨床療效觀察一治療口腔潰瘍
[0035]藥物:西瓜霜凝膠劑
[0036]患者選擇:40例門診患者，男性患者23例，女性患者17例，年齡18~62歲。排除內(nèi)源性病因患者。
[0037]給藥方法:取西瓜霜凝膠劑適量，均勻涂于患處，每日4~6次，連續(xù)給藥5天。
[0038]療效標(biāo)準(zhǔn):①顯效:疼痛消失，口腔潰瘍基本愈合；②有效:疼痛減輕，口腔潰瘍面積縮小，紅腫減輕，未愈合；③無效:疼痛無減輕或加重，口腔潰瘍?nèi)耘f。
[0039]臨床治療結(jié)果:共40名患者，總有效率為92.5%。治療結(jié)果見表1。
[0040]表1.西瓜霜提取物治療口腔潰瘍結(jié)果
[0041]
【權(quán)利要求】
1.一種西瓜霜的制備方法，其特征在于采用發(fā)酵、冷凍干燥法制備而成。
2.—種西瓜霜的制備方法，其特征在于采用發(fā)酵法制備，其發(fā)酵方法為:以西瓜為培養(yǎng)基，在一定量濃度的Na2SO4.IOH2O存在的情況下，即高鹽狀態(tài)下，溫度為+5°C~+25°C，發(fā)酵7~20天，攪拌增加溶氧；發(fā)酵結(jié)束后，離心取上清液，冷凍干燥，而制成西瓜霜。
3.按照權(quán)利要 求1、2所述的制備方法，其特征在于:發(fā)酵法使用的菌種為耐高鹽的自然菌種及通過生物技術(shù)分離得到的菌種，包括:鐮孢霉屬、青霉屬、毛霉屬、交鏈孢霉屬的六種菌種。
4.按照權(quán)利要求1、2所述方法制備的西瓜霜，將其用6~10倍量的95%乙醇(或其他低分子醇)冷浸提取I~3次，攪拌，濾過，合并濾液，減壓回收乙醇，制得西瓜霜提取物。
5.按照權(quán)利要求1、2所述方法制備的西瓜霜及權(quán)利要求4所述的西瓜霜提取物，對常見致病菌具有顯著地抑菌、殺菌活性。
6.按照權(quán)利要求1、2所述方法制備的西瓜霜及權(quán)利要求4所述的西瓜霜提取物，其醫(yī)藥用途為具有抗菌活性，用于制備治療感染性疾病的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K36/42GK103550282SQ201310585681
【公開日】2014年2月5日 申請日期:2013年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月20日
【發(fā)明者】王秋紅, 辛萍, 薛娟, 蘇陽, 曹琦, 李斌, 匡海學(xué) 申請人:王秋紅, 匡海學(xué)