藏藥巖生鳶尾抗氧化提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及含有抗氧化作用的巖生鳶尾有效提取物及其制備方法，所述有效提取物選自從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物、氯仿提取物、乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物之一或其其組合，研究證明，其中石油醚提取物、氯仿提取物和正丁醇提取物具有明顯的體外清除羥基自由基能力；乙酸乙酯提取物和水提取物具有明顯體外清除DPPH（二苯代苦味肼）脂性自由基的能力，因此，所述有效提取物可用于制備抗氧化藥物和化妝品。
【專利說(shuō)明】藏藥巖生鳶尾抗氧化提取物及其制備方法和用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藏藥巖生鳶尾抗氧化提取物及其制備方法；本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述提取物的藥物組合物；本發(fā)明還涉及所述提取物在抗氧化藥物或化妝品中的應(yīng)用；屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]1956年，英國(guó)人Harman提出“自由基學(xué)說(shuō)”，該學(xué)說(shuō)認(rèn)為自由基攻擊生命大分子造成組織損傷，是引起機(jī)體衰老的根本原因，也是誘發(fā)腫瘤惡性疾病的重大原因。隨著人們對(duì)自由基研究的深入，這一學(xué)說(shuō)也為越來(lái)越多的人接受。自由基是指“任何包含一個(gè)未成對(duì)電子的原子或原子團(tuán)”，對(duì)人體健康影響極大。在生理情況下，氧處于較低水平，其產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡，但在某些病理情況下，自由基過(guò)剩，導(dǎo)致機(jī)體損傷。自由基除本身對(duì)生物大分子(蛋白質(zhì)、DNA)有損傷作用外，還會(huì)造成多不飽和脂肪酸的脂質(zhì)過(guò)氧化(LP0)，而LPO反應(yīng)的終產(chǎn)物是丙二醛(MDA)，從而使蛋白質(zhì)、核酸、腦磷脂發(fā)生交聯(lián)并喪失其活性。大量研究表明，與老化相關(guān)的疾病和基因的突變，如癌癥、心血管疾病、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、糖尿病、神經(jīng)性疾病、衰老等都同自由基導(dǎo)致的損傷相關(guān)，清除了體內(nèi)多余的自由基就能預(yù)防衰老和疾病。因此尋求利用人體易于吸收的、能清除體內(nèi)過(guò)量自由基的外源抗氧化劑成為一個(gè)新的研究熱點(diǎn)。然而，隨著合成抗氧化劑日益突出的潛在毒性和致癌作用被人們排斥，從植物中尋找天然、高效、低毒的抗氧化劑就成為了目前抗氧化劑發(fā)展的一個(gè)必然趨勢(shì)，同時(shí)也為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和保健行業(yè)的指明了方向。
[0003]鳶尾屬(Iirs)是鳶尾科的一個(gè)大屬，全世界約有300余種植物，該屬植物被廣泛作為傳統(tǒng)的民間藥物，用來(lái)治療多種疾`病，例如，癌癥、炎癥、細(xì)菌和病毒感染。據(jù)報(bào)道，已從鳶尾屬植物中分離得到具有抗腫瘤、抗氧化、抗結(jié)核、坑瘧原蟲等活性的化合物。其中鳶尾(Jris tectorum Maxim)、喜喊鸞尾(Zris halophila Pall)、香豐艮鸞尾(Ζτ? pallida)、輸〒QBelamcanda chinensis (L.) DC)均有抗氧化活性報(bào)道,特別是香根鳶尾根部提取物被用于某些化妝品中。巖生鳶尾(/ris uni flora Pall),藏名則合紀(jì)澤瑪,是鳶尾科鳶尾屬多年生草本植物，產(chǎn)于西藏、青海、內(nèi)蒙等地，常以種子入藥，能殺蟲，解毒，藏醫(yī)中用于驅(qū)蟲；外敷撒瘡口，可去腐生肌，治燒傷；其花能明目，根可治雀斑和癬，全草燒灰存性可烏發(fā)。其化學(xué)成分和活性并無(wú)報(bào)道，更未見到巖生鳶尾及其有效部位抗氧化作用研究與應(yīng)用方面的報(bào)道。我們對(duì)其總提物及不同溶劑極性部位進(jìn)行了抗氧化活性的初步研究，活性實(shí)驗(yàn)表明:其總提物和某些極性部位具有良好抗氧化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的之一是，提供一種巖生鳶尾的抗氧化提取物及其制備方法。本發(fā)明的目的之二是，提供一種以所述提取物為有效成分的藥物組合物。本發(fā)明的目的之三是，提供所述提取物在制備抗氧化及其相關(guān)藥物和化妝品中的應(yīng)用。
[0005]本發(fā)明比較了不同溶劑的萃取物的抗氧化活性，確定了具有抗氧化作用的提取物及其制備方法。
[0006]本發(fā)明所述巖生鳶尾提取物選自從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物(YS-1)、氯仿提取物(YS-2)、乙酸乙酯提取物(YS-3)、正丁醇提取物(YS-4)和水提取物(YS-5)之一或其組合；優(yōu)選從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物(YS-1)、氯仿提取物(YS-2)或其組合；或者優(yōu)選從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的乙酸乙酯提取物、水提取物或其組合；或者優(yōu)選從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的正丁醇提取物。
[0007]本發(fā)明的提取物可以經(jīng)過(guò)提取、濃縮、系列萃取得到，其制備方法包括以下步驟:
(1)取巖生鳶尾全草或地下部分粗粉，用乙醇浸泡，超聲波助溶提取，過(guò)濾，濾渣重復(fù)上述提取，過(guò)濾，合并提取液；
(2)將提取液減壓濃縮得到濃縮液，再將濃縮液與水混合，得到稀釋后的濃縮液；
(3)用不同極性的溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇梯度萃取，每種溶劑重復(fù)萃取，合并相同有機(jī)相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物。
[0008]所述方法優(yōu)選包括以下步驟:(I)取巖生鳶尾全草或地下部分粗粉，用30倍質(zhì)量的乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過(guò)濾，濾渣重復(fù)上述提取過(guò)程2次，過(guò)濾，合并三次提取液，其中所用乙醇優(yōu)選60-90%乙醇；(2)將提取液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.24mg/mL(50°C )，得到濃縮液，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液；(3)用與稀釋后濃縮液等體積的不同極性溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇梯度萃取，每種溶劑分別重復(fù)萃取2次萃取2次，合并相同有機(jī)相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物。
[0009]本發(fā)明還提供以所述方法制備的各溶劑提取物的藥物組合物。所述藥物組合物是以本發(fā)明的提取物為有效成分，與藥學(xué)上可接受的載體所組成，并以合適的藥用制劑形式存在，這些制劑可以是片劑(優(yōu)選糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑和緩釋片劑)、膠囊劑(優(yōu)選硬膠囊劑、軟膠囊劑或緩釋膠囊劑)、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴丸、滴丸劑、貼劑等。
[0010]本發(fā)明進(jìn)一步提供了各種提取物在制備治療和或預(yù)防氧化藥物和化妝品中的應(yīng)用。為此進(jìn)行的抗氧化相關(guān)實(shí)驗(yàn)以清除DPPH自由基、羥基自由基為活性指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，乙酸乙酯提取物和水提取物具有明顯體外清除DPPH脂性自由基的能力；石油醚提取物和氯仿提取物具有較好清除羥基自由基，具有抗氧化作用，可用于制備抗氧化藥物和化妝品O
[0011]具體實(shí)施方案:
實(shí)施例1:
各提取物的制備方法:
I)總提物提取
取巖生鳶尾全草粗粉20 g，用600 ml 90%乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過(guò)濾，濾渣重復(fù)上述提取過(guò)程2次，過(guò)濾，合并三次提取液。
[0012]2)濃縮
將提取液減壓回收乙醇得濃縮液(相對(duì)密度為1.12g/mL, 50°C)，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液(100 ml)。
[0013]3)梯度萃取依次用石油醚(100 ml/次X3次)、氯仿(100 ml/次X3次)、乙酸乙酯(100 ml/次X3次)、正丁醇(100 ml/次X3次)萃取稀釋后的濃縮液，合并相同有機(jī)相，減壓濃縮，得到石油醚提取物(YS-1，0.35 g,提取率:1.75%)、氯仿提取物(￥3-2，0.62 g,提取率:3.1%)、乙酸乙酯提取物(YS-3，0.23 g,提取率:1.15%)、正丁醇提取物(YS-4，0.14g，提取率:0.7%)和水提取物(YS-5，0.67 g,提取率:3.35%)。
[0014]實(shí)施例2:
各提取物的制備方法:
I)總提物提取
取巖生鳶尾全草粗粉20 g，用600 ml 80%乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過(guò)濾，濾渣重復(fù)上述提取過(guò)程2次，過(guò)濾，合并三次提取液。
[0015]2)濃縮
將提取液減壓回收乙醇得濃縮液(相對(duì)密度為1.16g/ml, 50°C)，再將濃縮液與水按體積比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液(80 ml)。
[0016]3)梯度萃取
依次用石油醚(80 ml/次X3次)、氯仿(80 ml/次X3次)、乙酸乙酯(80 ml/次X3次)、正丁醇(80 ml/次X3次)萃取稀釋后的濃縮液，合并相同有機(jī)相，減壓濃縮，得到石油醚提取物(YS-1，0.21 g,提取率:1.05%)、氯仿提取物(￥3-2，0.95 g,提取率:
4.75%)、乙酸乙酯提取物(YS-3，0.33 g,提取率:1.65%)、正丁醇提取物(YS-4，0.14 g，提取率:2.8%)和水提取物(YS-5，0.29 g，提取率:1.45%)。
`[0017]實(shí)施例3:
清除DPPH自由基活性實(shí)驗(yàn):
采用實(shí)施例1中所制備各極性部位進(jìn)行活性實(shí)驗(yàn)。
[0018]抗氧化活性以清除DPPH自由基能力大小表示。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的實(shí)驗(yàn)條件，測(cè)定巖生鳶尾不同樣品清除脂性自由基DPPH的活性。取不同濃度樣品溶液2.0 mL,iJPA2.0 mL
1.52X 10_4 mmol/L的DPPH無(wú)水乙醇溶液充分混勻，室溫避光靜置30 min后，以溶劑為空白對(duì)照，517 nm處測(cè)吸光度A1 ；以同體積溶劑代替樣品溶液做陰性對(duì)照，測(cè)定吸光度A2 ；以同體積無(wú)水乙醇代替DPPH溶液做空白組，測(cè)定吸光度A3。以VC為對(duì)照，每組做3個(gè)重復(fù)，求其平均值。按下式計(jì)算清除率:
樣品對(duì) DPPH.的清除率(%) = [1- (A1-A3) /A2] X 100%
實(shí)施例4:
清除羥基自由基活性試驗(yàn):
采用實(shí)施例1中所制備各極性部位進(jìn)行活性實(shí)驗(yàn)。
[0019]抗氧化活性以清除羥基自由基能力大小表示。根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定的實(shí)驗(yàn)條件，測(cè)定巖生鳶尾不同樣品清除羥基自由基的活性。將1.5 mL 1.8 mo I/L水楊酸溶液與2.0 mL1.8 mol/L FeSO4溶液于試管中混勻后，加入I mL不同濃度樣品溶液，然后加入0.1 mL
0.03% H2O2，搖勻，于37 °C保溫30 min, 510 nm處測(cè)得樣品組吸光度Ai ;同時(shí)將樣品組中H2O2換成0.1 mL蒸餾水，測(cè)得樣品參照組吸光度Aj ;將樣品組中樣品換成1.0 mL溶劑，測(cè)得空白組吸光度以VC為對(duì)照，每組做3個(gè)重復(fù)，求其平均值。按下式計(jì)算清除率:
?0H 清除率(%) = [A0 — (A1-Aj)] /A0X 100%表I巖生鳶尾各部位體外清除DPPH自由基活性實(shí)驗(yàn)
【權(quán)利要求】
1.一種具有抗氧化作用的巖生鳶尾活性提取物，其特征是所述提取物選自從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物(YS-1)、氯仿提取物(YS-2)、乙酸乙酯提取物(YS-3)、正丁醇提取物(YS-4 )、水提取物(YS-5 )或其組合。
2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的巖生鳶尾活性提取物，其特征是所述提取物選自從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的石油醚提取物(YS-1)、氯仿提取物(YS-2)或其組合。
3.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的巖生鳶尾活性提取物，其特征是所述提取物選自從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的乙酸乙酯提取物、水提取物或其組合。
4.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的巖生鳶尾活性提取物，其特征是所述提取物選自從巖生鳶尾醇提物中萃取得到的正丁醇提取物。
5.一種制備如權(quán)利要求1-4任一所述的活性提取物的方法，其特征是所述方法包括以下步驟:(I)取巖生鳶尾全草或地下部分粗粉，用乙醇浸泡，超聲波助溶提取，過(guò)濾，濾渣重復(fù)上述提取，過(guò)濾，合并提取液；(2)將提取液減壓濃縮得到濃縮液，再將濃縮液與水混合，得到稀釋后的濃縮液；(3)用不同極性的溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇梯度萃取，重復(fù)萃取，合并相同有機(jī)相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物； 所述方法優(yōu)選包括以下步驟:(I)取巖生鳶尾全草或地下部分粗粉，用30倍質(zhì)量的乙醇浸泡24 h，超聲波助溶提取I h，過(guò)濾，濾渣重復(fù)上述提取過(guò)程2次，過(guò)濾，合并三次提取液，其中所用乙醇優(yōu)選60-90%乙醇；(2)將提取液減壓濃縮至相對(duì)密度為1.10-1.24 mg/mL(50°C )，得到濃縮液，再將濃縮液與水按體積 比1:1混合，得到稀釋后的濃縮液；(3)用與稀釋后濃縮液等體積的不同極性溶劑石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇梯度萃取，每種溶劑分別重復(fù)萃取2次，合并相同有機(jī)相，減壓濃縮得到各溶劑的提取物。
6.一種藥物組合物，其包含權(quán)利要求1-4任一所述活性提取物與藥學(xué)上可接受的載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述藥物組合物，所述藥物組合物的制劑形式可以是片劑、膠囊劑、口服液、合劑、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、粉針劑、凍干粉針劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)?、噴霧劑、滴丸、滴丸劑、貼劑等。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述藥物組合物，其特征在于:所述片劑選自糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑或緩釋片劑；所述膠囊劑選自硬膠囊劑、軟膠囊劑或緩釋膠囊劑。
9.權(quán)利要求1-4任一所述的活性提取物在制備治療和或預(yù)防氧化藥物和化妝品中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P39/06GK103446358SQ201310415408
【公開日】2013年12月18日 申請(qǐng)日期:2013年9月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月13日
【發(fā)明者】梁曉霞, 寸興莉, 范巧佳, 阿呷爾布 申請(qǐng)人:四川農(nóng)業(yè)大學(xué)