一種異煙肼緩釋微球的制備方法【專利摘要】本發(fā)明提供一種異煙肼緩釋微球的制備方法，該方法包括如下步驟：步驟a，將異煙肼固體成分（S）與油相（O）、有機溶劑混勻，形成油包固體（S/O）混懸液；步驟b，將步驟a的混懸液進行噴霧干燥，制得緩釋微球。該方法采用油包固體-噴霧干燥的方法制備異煙肼緩釋微球，解決了現(xiàn)有技術存在的微球粒徑大、藥物突釋、包封率低、制備工藝復雜、制備時間長等不足。本發(fā)明方法操作簡單可控，微球粒徑大小適宜，包載(封)率高，緩釋效果好，無明顯突釋。【專利說明】一種異煙肼緩釋微球的制備方法【
技術領域：
】[0001]本發(fā)明涉及一種異煙肼緩釋微球的制備方法，具體涉及一種采用油包固體-噴霧干燥法制備異煙肼緩釋微球的方法，屬于醫(yī)藥領域?！?br>背景技術：
】[0002]結核病治療重點和難點在于復治、難治及耐多藥肺結核。常規(guī)的給藥途徑化療效果差，多年遷延不愈，痰菌持續(xù)陽性或成為終生排菌者。目前肺結核的介入療法通常選用注射劑或混懸劑作為給藥的劑型，這類制劑釋藥速率快，患者需要頻繁接受介入操作，導致其順應性不佳。[0003]異煙肼（isoniazid，IN)為水溶性小分子藥物，包裹水溶性小分子藥物是長效緩釋制劑制備中的難點技術問題，制備得到的微球普遍存在包載率低及突釋的問題。[0004]現(xiàn)有技術[Sustainedreleaseofisoniazidfromasingleinjectabledoseofpoly(DL-lactide-c0-glycolide)microparticlesasatherapeuticapproachtowardstuberculosis,ManishaDutt,G.K.Khuller.[J]InternationalJournalofAntimicrobialAgentsl7(2001)115-122;Techniquetoencapsulatealowmolecularweighthydrophilicdruginbiodegradablepolymerparticlesinaliquid-liquidsystem,FuminoriIto,etal.[J]ColloidsandSurfacesA:Aspects384(2011)368-373]報道的異煙肼乳酸-乙醇酸共聚物（PLGA)緩釋微球制備方法，多采用復乳化-溶劑揮發(fā)法制備存在著微球粒徑大（11-70微米)，藥物突釋，包封率低，制備工藝復雜，制備時間長等不足°也有文獻報道[Inhalablemicroparticlescontaininglargepayloadofanti-tuberculosisdrugs.PavanMuttil,etal.[J]Europeanjournalofpharmaceuticalsciences32(2007)140-150;Inhalablebiodegradablemicroparticlesfortarget-specificdrugdeliveryintuberculosisandaprocessthereof.US2007/0154562A1]采用藥物溶液噴霧干燥法制備異煙肼和利福布汀聚乳酸微球，但該法制備工藝復雜，條件不易控制，且微球在體內的緩釋效果不明確。[0005]因此，能制備出具有微球粒徑小且能適于肺部介入給藥，包封率高，無藥物突釋效應，藥物在體內持續(xù)緩慢釋放，制備工藝簡單之特性的異煙肼緩釋微球的制備方法，尚未見類似報道。[0006]本發(fā)明目的在于建立經氣管鏡肺部介入治療藥物的緩釋給藥系統(tǒng)，解決局部介入治療中緩釋系統(tǒng)尚未建立的難題，有針對性的介入治療難治、復治和耐多藥的肺結核，縮短空洞閉合時間，促進遠端病灶吸收、減少復發(fā)和播散，力爭明顯提高肺結核的治愈率。將抗結核藥物制備成緩釋給藥系統(tǒng)應用于介入治療，能夠提高患者順應性，提高治療效果?！?br/>發(fā)明內容】[0007]本發(fā)明的目的在于提供一種異煙肼緩釋微球的制備方法，該方法采用油包固體-噴霧干燥技術制備異煙肼緩釋微球，制得的微球粒徑小，包封率高，緩釋效果好，無明顯突釋效應。[0008]本發(fā)明的目的是通過如下技術方案實現(xiàn)的：[0009]-種異煙肼緩釋微球的制備方法，該方法包括如下步驟：[0010]步驟a，將異煙肼固體成分（S)與油相（0)、有機溶劑混勻，形成油包固體（S/0)混懸液；以及[0011]步驟b，將步驟a的混懸液進行噴霧干燥，制得緩釋微球。[0012]進一步，步驟a所述異煙肼固體成分為異煙肼微粉顆?；虬o料的異煙肼組合物；包含輔料的異煙肼組合物優(yōu)選異煙肼-殼聚糖組合物或異煙肼-海藻酸鈉組合物；[0013]更進一步，所述異煙肼微粉顆粒與油相的比例為S:0=1:15?20;更優(yōu)選為S:0=l:20;更進一步，所述異煙肼微粉顆粒為異煙肼原料藥經球磨法制備成的微粉顆粒；更優(yōu)選為，所述球磨法為濕法球磨法；更進一步，所述異煙肼微粉顆粒的粒徑為〇.l-5ym;更優(yōu)選為粒徑為〇.1-1μm;[0014]更進一步，所述異煙肼-殼聚糖組合物與油相的比例為S:0=l:10?15;更優(yōu)選為S:0=l:10;更進一步，所述異煙肼-殼聚糖組合物中異煙肼和殼聚糖的比例為1:1?2,殼聚糖分子量為Mw50000-190000,脫乙酰度為75-85%;[0015]更進一步，所述異煙肼-海藻酸鈉組合物與油相的比例為S:0=1:1?2;更優(yōu)選為S:0=1:1;更進一步，所述異煙肼-海藻酸鈉組合物中異煙肼與海藻酸鈉的比例為5:0.5?2；[0016]進一步，所述步驟a為先將異煙肼固體成分溶解于有機溶劑中，再加入油相；[0017]進一步，所述有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、三氯甲烷、丙酮中的至少一種；更進一步，所述有機溶劑為二氯甲烷。[0018]進一步，步驟a所述油相為聚乳酸（PLA)，聚乳酸-羥基乙酸（PLGA)，聚羥基乙酸（PGA)中的至少一種；更進一步，所述油相為聚乳酸；更進一步，所述PLA粘度為0·49-1.92dl/g(CHC13/25°C);更進一步，所述PLA粘度為0·49dl/g(CHC13/25°C)。[0019]進一步，步驟b所述噴霧干燥進口溫度為60_70°C，出口溫度50_60°C。[0020]本發(fā)明的創(chuàng)新點及有益效果在于：[0021]第一，采用油包固體-噴霧干燥的方法，克服了現(xiàn)有技術采用復乳化-溶劑揮發(fā)法制備的微球粒徑大（11-70微米)、突釋明顯、包封率低、工藝復雜、制備時間長等不足。本發(fā)明方法制備的微球表面光滑圓整、無明顯空隙、無粘連，包封率高、突釋小、載藥量高；并且，微球粒徑較小，一般為10μm以下，能夠滿足肺部給藥對粒徑的要求；再者，本發(fā)明方法制備過程中避免使用乳化劑，對于肺部給藥而言，能夠減少肺部負擔。[0022]第二，在異煙肼固體成分超聲分散的過程中，若按常規(guī)工藝先將PLA溶解于有機溶劑中，再加入異煙肼固體成分超聲分散，則固體成分不易分散，肉眼能看到微粉顆粒的聚集，即使在有機溶劑中加入一些表面活性劑，也不能起到明顯的分散效果；但是如果首先將IN固體成分超聲分散于有機溶劑中，然后再加入PLA超聲溶解，固體成分則能夠均勻分散于PLA的有機溶劑中。因此，本發(fā)明選擇先將IN固體成分超聲分散于有機溶劑中，再加入PLA超聲溶解?！緦＠綀D】【附圖說明】[0023]圖I:不同膜材體外釋放曲線；[0024]圖2:異煙肼聚乳酸微球電鏡掃描圖[0025]A:整體圖；B:放大圖；[0026]圖3:異煙肼聚乳酸微球體外釋放曲線（PBS，ρΗ=7·4,37.4°C;mean土SD，n=3);[0027]圖4:異煙肼-殼聚糖-聚乳酸微球電鏡掃描圖[0028]A:整體圖；B:放大圖；[0029]圖5:異煙肼-殼聚糖-聚乳酸微球與異煙肼-殼聚糖組合物藥體外釋放曲線(PBS，37°C)。（mean土SD，n=3)[0030]實驗例1緩釋微球制備方法考察[0031]1實驗方法[0032]1.1異煙肼緩釋微球的制備[0033]按如下方法制備異煙肼緩釋微球：[0034]方法一：水包油包固體（S/0/W)復乳化-冷凍干燥法[0035]稱取200mg異煙肼微粉顆粒（S)，將其超聲分散于2mll0%的PLGA(聚乳酸-羥基乙酸共聚物：（P〇ly(lactic-co_glycolicacid)，PLGA))二氯甲燒溶液（0)中，在磁力攪拌下將制備的S/0混懸液加入到2%聚乙烯醇（W)溶液中進行乳化，低轉速攪拌4h，揮發(fā)有機溶劑，離心分離微球，去離子水洗3次，冷凍干燥得到微球。[0036]方法二：油包固體（S/0)-噴霧干燥法[0037]稱取40mg異煙肼微粉顆粒（S)，超聲分散于50ml二氯甲烷中，加入800mgPLA(聚乳酸：polylacticacid,PLA)(0)超聲溶解的S/0混懸液，將制備的混懸液噴霧干燥制得微球。[0038]1.2包封率和載藥量的測定[0039]按如下方法測定異煙肼緩釋微球的包封率和載藥量。[0040]精密稱取樣品IOmg,加入2mL二氯甲燒超聲5min溶解微球表層的聚乳酸，加入4mL去離子水萃取,渦旋5min,靜置30min分層，吸取上清液。然后再加入去離子水萃取,萃取步驟重復三次。合并萃取液，離心（lOOOOrpm,IOmin)，稀釋適當倍數(shù)后，采用HPLC進行定量分析。包封率、載藥量按如下公式計算：[0041]包封率（EF)=(微球中藥物量/投藥量）X100%[0042]載藥量（DL)=(微球中藥物量/微球總重量）X100%[0043]1.3體外釋放測定[0044]體外釋放采用恒溫振蕩法。精密稱取樣品20mg，裝入預先處理好的透析袋，加入3mL釋放介質，兩端扎緊，放入裝有50mL釋放介質的錐形瓶中。在（37±0.5)°C條件下恒溫水浴，振蕩頻率為l〇〇rpm。定時取樣lmL，并即時補加同體積、同溫度的釋放介質。樣品經釋放介質適當稀釋，離心后，采用HPLC進行檢測，計算累積釋放率。[0045]2實驗結果[0046]2.1包封率和載藥量測定結果[0047]實驗結果見表1。[0048]表1包封率和載藥量結果[0049][0050]2·2體外釋放試驗結果【權利要求】1.一種異煙肼緩釋微球的制備方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：步驟a，將異煙肼固體成分（S)與油相（0)、有機溶劑混勻，形成油包固體（S/0)混懸液；以及步驟b，將步驟a的混懸液進行噴霧干燥，制得緩釋微球。2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述步驟a為先將異煙肼固體成分溶解于有機溶劑中，再加入油相。3.如權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述有機溶劑為二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、庚烷、三氯甲烷、丙酮中的至少一種。4.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟a所述油相為聚乳酸，聚乳酸-羥基乙酸，聚羥基乙酸中的至少一種。5.如權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述油相為聚乳酸。6.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟a所述異煙肼固體成分為異煙肼微粉顆?；虬o料的異煙肼組合物；包含輔料的異煙肼組合物優(yōu)選異煙肼-殼聚糖組合物或異煙肼-海藻酸鈉組合物。7.如權利要求6所述制備方法，其特征在于，所述異煙肼微粉顆粒與油相的比例為S:0=1:(15?20)。8.如權利要求7所述制備方法，其特征在于，所述異煙肼微粉顆粒為濕法球磨法制備的顆粒。9.如權利要求6所述制備方法，其特征在于，所述異煙肼-殼聚糖組合物與油相的比例為S:0=1:(10?15)。10.如權利要求6所述制備方法，其特征在于，所述異煙肼-海藻酸鈉組合物與油相的比例為S:0=1:(1?2)?！疚臋n編號】A61P31/06GK104367554SQ201310356858【公開日】2015年2月25日申請日期:2013年8月15日優(yōu)先權日:2013年8月15日【發(fā)明者】朱春燕,張麗梅,張運申請人:中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所