作為瘧疾疫苗的惡性瘧原蟲表面蛋白的偶聯(lián)物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了作為瘧疾疫苗的惡性瘧原蟲表面蛋白的偶聯(lián)物。本發(fā)明提供了動合子表面蛋白Pfs25的偶聯(lián)物，該動合子表面蛋白Pfs25的偶聯(lián)物作為抵抗最嚴(yán)重形式的瘧疾——惡性瘧原蟲的疫苗是有效的。本發(fā)明還提供了用作抵抗間日瘧原蟲的疫苗的動合子表面蛋白Pvs25的偶聯(lián)物。并提供了制備所述偶聯(lián)物的方法，該偶聯(lián)物含有通過連接基團結(jié)合到自身或者結(jié)合到其它蛋白質(zhì)上的動合子表面蛋白。
【專利說明】作為瘧疾疫苗的惡性瘧原蟲表面蛋白的偶聯(lián)物
[0001]本申請是原申請的申請日為2007年10月15日，申請?zhí)枮?00780042474.0，發(fā)明名稱為《作為瘧疾疫苗的惡性瘧原蟲表面蛋白的偶聯(lián)物》的中國專利申請的分案申請。
[0002]相關(guān)申請的交叉引用
[0003]本申請要求2006年10月16日遞交的美國臨時申請N0.60/851，961的利益，該申請以其整體而將其公開的內(nèi)容明確地結(jié)合于此。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004]本發(fā)明提供了動合子表面蛋白Pfs25的偶聯(lián)物，該動合子表面蛋白Pfs25的偶聯(lián)物作為抵抗引發(fā)最嚴(yán)重形式的痕疾的惡性痕原蟲(Plasmodium falciparum)的疫苗是有效的。本發(fā)明還提供了用作抵抗間日痕原蟲(Plasmodium vivax)的疫苗的動合子表面蛋白Pvs25的偶聯(lián)物。并提供了制備偶聯(lián)物的方法，該偶聯(lián)物含有通過連接基團(linkinggroup)結(jié)合到自身或者結(jié)合到其它蛋白質(zhì)上的動合子表面蛋白。
【背景技術(shù)】
[0005]疫苗抵抗瘧疾的一種途徑就是阻斷寄生蟲從蚊向人類的傳播。當(dāng)?shù)挚褂行缘奈秒A段特異性的表面抗原的抗體被蚊從血餐(blood meal)中攝入時，所述抗體能阻斷寄生蟲在該媒介中的發(fā)育(卡特，R.等人2000自然醫(yī)學(xué)6:241-244 (Carter, R.et al.2000NatMed6:241-244))。已經(jīng)確定了四種蛋白質(zhì)作為傳播阻斷抗體(transmission-blockingantibodies)的潛在誘導(dǎo)物(威廉姆森，KC.等人1993生蟲學(xué)雜志58:355-358(Williamson, KC.et al.19 93Mol Biochem Parasitol58:355-358);卡特，R.等人 1990 寄生蟲免疫學(xué) 12:587-603 (Carter, R.et al.1990Parasite Immmunol 12:587-603);卡斯羅，DC.等人 1998 自然 333:74-76 (Kaslow, DC.et al.1998Nature333:74-76);達(dá)菲，PE.等人 1993 實驗醫(yī)學(xué) 177:505-510 (Duffy, PE.et al.1993J Exp Medl77:505-510))。上述中的兩種在配子表面上和胞內(nèi)配子母細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。另外兩種是在蚊階段的感染過程中專有地表達(dá)于接合子和動合子表面的表觀分子量為25kDa的惡性瘧原蟲表面蛋白(Pfs25)和表觀分子量為28kDa的惡性瘧原蟲表面蛋白(Pfs28)。感染了瘧疾并生活在地方性疾病國家(endemic countries)的人中沒有顯示出對這兩種蛋白質(zhì)的進(jìn)行應(yīng)答的抗體(卡特，R.等人1989 實驗醫(yī)學(xué) 169:135-147(Carter，R.et al.1989J Exp Medl69:135-147))。世界各地的Pfs25的氨基酸序列中表現(xiàn)出極小的變化(卡斯羅，DC.等人1989生蟲學(xué)雜志32:101-104(Kaslow, DC.et al.1989MoI Biochem Parasitol32:101-104))。這種很可能是由于在人宿主中內(nèi)沒有遭受免疫壓力(immune pressure)而導(dǎo)致的相對的同次性(homogeneity),使得Pfs25成為用于瘧疾傳播阻斷疫苗的具有吸引力的候選(巴爾，PJ.等人1991實驗醫(yī)學(xué) 174:1203-1208 (Barr, PJ.et al.1991J Exp Medl74:1203-1208))。然而，即使施用了佐劑，Pfs25在小鼠和人內(nèi)的免疫原性也很差(科萬，C.等人2004感染與免疫72:584-588(Coban, C.et al.2004Infect Immum72:584-588);卡斯羅，DC.等人 2002 化學(xué)免疫學(xué)80:287-307 (Kaslow, DC.2002Chem Immunol80:287-307))。通過其它蛋白獲得了蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的免疫原性的增加。細(xì)胞色素C的聚合物制劑在動物中的免疫原性比在相應(yīng)的單體蛋白質(zhì)中更高(賴希林，M.等人1970生物化學(xué)雜志245:947-954(Reichlin，M.et al.1970J Biol Chem245:947-954)),并且流感病毒血凝素-白喉類毒素(infIuenzahemagglutinin-diphtheria toxoid)偶聯(lián)物疫苗比單獨的血凝素對流感病毒感染更具有抵抗性(格拉文施泰因，S.等人1994美國老年醫(yī)學(xué)雜志42:245-251 (Gravenstein, S.etal.1994J Am Geriat Soc42:245-251 ))。也已經(jīng)對含有金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)型的偶聯(lián)物(5個和8個莢膜多糖通過己二酸二酰肼(adipic acid dihydrazide)或N-琥拍酰亞胺基-3-(-2-吡唳基二硫代基)丙酸酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio) propionate)和其它的連接基團而結(jié)合到載體蛋白上)進(jìn)行了研究(法桐，A.等人 1992 感染與免疫 60:584-589 (Fattom, A.et al.1992Infect Immun60:584-589);科薩克茲卡，Z.等人 1999 感染與免疫 67:5806-5810 (Kossaczka, Z.et al.1999InfectImmun67:5806-5810);斯奇爾松等人實驗醫(yī)學(xué) 1980152:361-76 (Schneerson et al J ExpMedl980, 152:361-76))。已經(jīng)用昆蟲媒介(insect vector)證實了對人病原體的抗體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)播阻斷。由螺旋體外膜蛋白A (OspA)疫苗誘導(dǎo)的對包柔式伯氏疏螺旋體(Borreliaburgdorferi)的抗體在硬蝶屬蝶(Ixodes ticks)的腸內(nèi)被活化(德席爾瓦，AM.等人1997感染與免疫 65:3146-3150 (DeSilva,AM.et al.1997Infect Immun65:3146-3150))。顯示所述OspA蛋白在寄生蟲的載體階段得到最大的表達(dá)，這意味著該疫苗誘導(dǎo)了傳播阻斷活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]特別需要一種抵抗瘧疾的有效疫苗。結(jié)合到自身上的或結(jié)合到其它蛋白質(zhì)上的Pfs25誘導(dǎo)了高水平的傳播阻斷抗體，表現(xiàn)出其作為抵抗惡性瘧原蟲(最嚴(yán)重的疾病形式)的疫苗的功效。還提供了抵抗間日瘧原蟲的疫苗包括結(jié)合到自身上的或結(jié)合到其它蛋白質(zhì)上的Pvs25。
[0007]因此，第一個方面，提供了含有惡性瘧原蟲表面蛋白Pfs25的結(jié)合物，所述Pfs25通過選自由酰胺鍵、腙鍵和硫醚鍵所組成的組中的至少一種鍵而結(jié)合到其它蛋白質(zhì)上，其中，所述結(jié)合物適合用作瘧疾疫苗。
[0008]在第一個方面的一種實施方式中，所述其它蛋白質(zhì)為惡性痕原蟲(Plasmodiumfalciparum)表面蛋白 Pfs25。
[0009]在第一個方面的一種實施方式中，所述其它蛋白質(zhì)為綠膿桿菌(Pseudomonasaeruginosa)重組外蛋白 A (recombinant exoprotein A)。
[0010]在第一個方面的一種實施方式中，所述鍵為酰胺鍵。
[0011]在第一個方面的一種實施方式中，所述結(jié)合物為下式:
[0012]`
[0013]其中，n為3-5的整數(shù)，X1為惡性瘧原蟲表面蛋白Pfs25，且X2選自由綠膿桿菌重組外蛋白A、卵白蛋白、惡性瘧原蟲表面蛋白Pfs25、破傷風(fēng)類毒素(tetanus toxoid)、白喉類毒素、霍亂毒素、難辨梭狀芽孢桿菌毒素A (Clostridium difficile toxin A)和難辨梭狀芽孢桿菌毒素B所組成的組中。在另一種實施方式中，n為4且X2為綠膿桿菌重組外蛋白A。在另一種實施方式中，n為4且X2為惡性瘧原蟲表面蛋白Pfs25。
[0014]在第一個方面的一種實施方式中,所述鍵為腙鍵。
[0015]在第一個方面的一種實施方式中，所述偶聯(lián)物為下式:
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種偶聯(lián)物，該偶聯(lián)物含有結(jié)合到第二蛋白質(zhì)上的第一蛋白質(zhì)，所述第一蛋白質(zhì)包括惡性瘧原蟲表面蛋白Pfs25或間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25，所述第二蛋白質(zhì)包括間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25或綠膿桿菌重組外蛋白A。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的偶聯(lián)物，其中，所述第一蛋白質(zhì)包括間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25，并且所述第二蛋白質(zhì)包括間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的偶聯(lián)物，其中，該偶聯(lián)物為下式:
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的偶聯(lián)物，其中，n為4。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的偶聯(lián)物，其中，X1為間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25且X2為間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的偶聯(lián)物，其中，該偶聯(lián)物為下式:
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的偶聯(lián)物，其中，p為2，q為2，且r為I。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的偶聯(lián)物，其中，X1為間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25且X2為間日瘧原蟲表面蛋白Pvs25。
9.一種用于誘發(fā)針對宿主內(nèi)瘧原蟲的抗體的傳播阻斷活性的藥用組合物，該藥用組合物含有: 至少一種權(quán)利要求1-8中任意一項所述的偶聯(lián)物；和 藥學(xué)上可接受賦形劑。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥用組合物，該藥用組合物還含有佐劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥用組合物，其中，所述佐劑為氫氧化鋁。
12.權(quán)利要求1-8中任意一項所述的偶聯(lián)物在產(chǎn)生用作試劑或用于被動免疫的血清中的應(yīng)用。
13.權(quán)利要求1-8中任意一項所述的偶聯(lián)物在制備用于治療或預(yù)防瘧疾的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P33/06GK103497255SQ201310190368
【公開日】2014年1月8日 申請日期:2007年10月15日 優(yōu)先權(quán)日:2006年10月16日
【發(fā)明者】雷切爾·施內(nèi)爾森, 喬安娜·庫布勒-基爾, 吳一民, 路易斯·米勒, 法蒂·D.·梅亞力, 約翰·B.·羅賓斯 申請人:美國國有健康與人類服務(wù)部(馬里蘭州)