專利名稱：降血壓劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含有肽作為有效成分的降血壓劑。
背景技術(shù)：
在全世界，高血壓和起因于高血壓的疾病已成為第I位死因，可以說(shuō)在全世界，在相當(dāng)于約10億人的成人中，每4個(gè)人中就有I個(gè)人罹患這些疾病。特別是糖尿病患者由高血壓引起的心血管系統(tǒng)并發(fā)癥的危險(xiǎn)性比不患糖尿病的患者高2倍至4倍，因而在國(guó)際糖尿病聯(lián)盟中提倡嚴(yán)格控制血壓的必要性。但是實(shí)際情況是，盡管進(jìn)行各種治療，仍然有約70%的高血壓患者、還有近90%的并發(fā)糖尿病和高血壓的患者不能將血壓降到目標(biāo)值。雖然認(rèn)識(shí)到高血壓是腦中風(fēng)和心肌梗塞等心血管疾病的主要危險(xiǎn)因素，但是不能充分控制血壓的情況(特別是隱性高血壓)是更加危險(xiǎn)的這一情況卻并不廣為人知。事實(shí)上有報(bào)告，約有9成發(fā)生腦梗塞的高血壓患者在發(fā)病前正在進(jìn)行血壓治療，這正表明因?yàn)榻祲褐委煵怀浞侄鹆四X中風(fēng)。另外，根據(jù)臨床試驗(yàn)的結(jié)果，也明確了即使將收縮期血壓僅僅只降低IOmmHg,就可以將腦中風(fēng)的發(fā)病減少約40%，由此也可知血壓“高lOmmHg”具有非常大的危險(xiǎn)性。

在現(xiàn)在的高血壓藥物治療中，根據(jù)其作用機(jī)理，大致使用著下述6種藥物:(A)利尿藥、(B)鈣拮抗藥、(C)血管緊張素受體拮抗藥、(D)血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制藥、(E) β 阻滯劑、(F) α 阻滯劑。另外，在最近，具有降低血壓作用的降壓肽受到關(guān)注。作為降壓肽，具體而言，除了作為機(jī)體所產(chǎn)生的肽的利尿鈉肽(ANP、BNP, CNP)(參照非專利文獻(xiàn)I 3等)和腎上腺髓質(zhì)素(參照非專利文獻(xiàn)4)之外，還可以列舉白蛋白的酶水解物Arg-Pro-Leu-X-Pro-Trp (X是His、Lys或Arg)(序列號(hào)7)(參照專利文獻(xiàn)I)和大豆蛋白質(zhì)的酶水解物(參照非專利文獻(xiàn)5)。高血壓的發(fā)病認(rèn)為與生活習(xí)慣密切相關(guān)，在飲食生活正在被重新評(píng)價(jià)的現(xiàn)在，特別是專利文獻(xiàn)I和非專利文獻(xiàn)5所記載的來(lái)自白蛋白和大豆蛋白質(zhì)的肽，不僅安全，而且在攝入白蛋白或大豆后，在體內(nèi)由消化而生成肽，因此認(rèn)為其利用價(jià)值高。非專利文獻(xiàn) I:F.Yoshihara, et al., Plasma atrial natriuretic peptideconcentration in versely correlates with left atrial collagen volumefraction in patients with atrial fibrillation.Plasma ANP as a possiblebiochemical marker to predict the outcome of the maze procedure.J Am CollCardiol, 39，288-294，2002非專利文獻(xiàn) 2:Τ.Horio, et al.Gene expression, secretion, and autocrineaction of C—type natriuretic peptide in cultured adult rat cardiac fibroblasts.Endocrinology, 144, 2279-2284，2003非專利文獻(xiàn) 3:Y.Takami, et al.Diagnostic and prognostic value of plasmabrain natriuretic peptide in non-dialysis-dependent chronic renal failure.Am JKidney Dis, 44，419-429，2004非專利文獻(xiàn)4:F.Yoshihara, et al.Possible involvement of oxidative stressin hypoxia-1nduced adrenomedullin secretion in cultured rat cardiomyocytes.EurJ Pharmacol, 436, 1-6, 2002非專利文獻(xiàn)5:松井利郎，((7S V 口 I 'J Oh O血壓低下 7°千K SVY ^高度生成i O生理機(jī)能評(píng)価》，大豆t h白質(zhì)研究Vol.6 (2003)，73-77專利文獻(xiàn)1:日本特開(kāi)2002·-80496號(hào)公報(bào)

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種含有低分子量的肽、特別是來(lái)自珠蛋白分解物的肽作為有效成分的降血壓劑。另外，鑒于糖尿病患者起因于高血壓的心血管系統(tǒng)并發(fā)癥的危險(xiǎn)性比未患糖尿病的患者高2倍至4倍的實(shí)際情況，本發(fā)明的目的還在于提供一種除了降血壓作用以外還具有抗糖尿病作用、可以特別適合地用于改善糖尿病患者或處于糖尿病前期階段的患者的高血壓的降血壓劑。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的發(fā)明人進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)已知具有抑制血糖上升作用或胰島素分泌亢進(jìn)作用、對(duì)糖尿病的治療有效的珠蛋白分解物(參照W02006/052031A1)、以及其中所包含的由Val-Val-Tyr-Pro (序列號(hào)I)、Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列號(hào) 2)、Trp-Gly-Lys_Val (序列號(hào) 3)、Trp_Gly_Lys (序列號(hào) 4)、Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列號(hào)5)和Phe-Glu-Ser (序列號(hào)6)的氨基酸序列構(gòu)成的各肽，對(duì)血壓高的患者發(fā)揮降血壓的效果，確認(rèn)作為解決上述課題的生理活性肽是有效的。本發(fā)明的發(fā)明人還確認(rèn)，在上述肽中，由Val-Val-Tyr-PiO (序列號(hào)I)的氨基酸序列構(gòu)成的肽和包含該肽的珠蛋白分解物，如在W02006/052031A1中的記載，具有抑制血糖上升的作用或胰島素分泌亢進(jìn)作用，因此，是能夠適合用于對(duì)糖尿病患者或處于糖尿病前期階段的患者改善高血壓的生理活性肽。本發(fā)明就是基于這樣的見(jiàn)解而完成的發(fā)明，是具有下述形態(tài)的發(fā)明。( T )降血壓劑(1-1) 一種降血壓劑，含有選自來(lái)自珠蛋白分解物的由下述(I) (6)所示的氨基酸序列構(gòu)成的肽中的至少I種肽、或者含有這些肽中的至少I種肽的珠蛋白分解物作為有效成分:(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列號(hào) I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列號(hào) 2)
(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列號(hào) 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列號(hào) 6)。(1-2)如(1-1)所記載的降血壓劑，含有選自由(I)Val-Val-Tyr-PiO的氨基酸序列(序列號(hào)I)構(gòu)成的肽或者含有該肽的珠蛋白分解物作為有效成分。(1-3)如(1-1)或(1-2)所記載的降血壓劑，其特征在于，對(duì)輕癥高血壓患者口服給藥。(1-4)如(1-2)所記載的降血壓劑，其特征在于，對(duì)罹患起因于高血糖的疾病或處于其前期狀態(tài)的高血壓病患者給藥。(1-5)如(1-1)至(1-4)中任一項(xiàng)所記載的降血壓劑，其特征在于，通過(guò)口服給藥途徑，對(duì)成人每日以總量Img 500mg的比例每日投與由(I) (6)所示的氨基酸序列構(gòu)成的肽，或者以0.1g 5g的比例每日投與珠蛋白分解物。(II)改善高血壓狀態(tài)或者預(yù)防或治療起因于高血壓狀態(tài)的疾病的方法(I1-1) 一種改善高血壓狀態(tài)或者預(yù)防或治療起因于高血壓狀態(tài)的疾病的方法，包括對(duì)高血壓患者投與降血壓劑的步驟，該降血壓劑含有選自來(lái)自珠蛋白分解物的由下述
(I) (6)所示的氨基酸序列構(gòu)成的肽中的至少I種肽、或者含有這些肽中的至少I種肽的珠蛋白分解物作為有效成分:`
(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列號(hào) I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列號(hào) 2)(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列號(hào) 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列號(hào) 6)。(I1-2)—種改善高血壓狀態(tài)或者預(yù)防或治療起因于高血壓狀態(tài)的疾病的方法，包括對(duì)患有起因于高血糖狀態(tài)的疾病的高血壓患者投與降血壓劑的步驟，該降血壓劑含有由
(I)Val-Val-Tyr-Pro的氨基酸序列(序列號(hào)I)構(gòu)成的肽或者含有該肽的珠蛋白分解物作為有效成分。(I1-3)如(I1-1)或(I1-2)所記載的方法，其特征在于，對(duì)輕癥高血壓患者口服給藥。(I1-4)如(I1-2)所記載的方法，其特征在于，對(duì)罹患起因于高血糖的疾病或處于其前期狀態(tài)的高血壓癥患者給藥。(I1-5)如(I1-1)至(I1-4)中任一項(xiàng)所記載的方法，其特征在于，通過(guò)口服給藥途徑，對(duì)成人每日以總量Img 500mg的比例每日投與由(I) (6)所示的氨基酸序列構(gòu)成的肽，或者以0.1g 5g的比例每日投與珠蛋白分解物。(III)肽和珠蛋白分解物的用途(II1-1)選自來(lái)自珠蛋白分解物的由下述(I) (6)所示的氨基酸序列構(gòu)成的肽中的至少I種肽、或者含有這些肽中的至少I種肽的珠蛋白分解物在降血壓劑的調(diào)制中的使用:
(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列號(hào) I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列號(hào) 2)(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列號(hào) 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列號(hào) 6)。(II1-2)含有由(I)Val-Val-Tyr-PiO的氨基酸序列(序列號(hào)I)構(gòu)成的肽或者含有該肽的珠蛋白分解物 在針對(duì)患有起因于高血糖狀態(tài)的疾病的高血壓患者的降血壓劑的調(diào)制中的使用。(II1-3)在改善高血壓狀態(tài)的方法或者在預(yù)防或治療起因于高血壓狀態(tài)的疾病的方法中使用的、選自來(lái)自珠蛋白分解物的由下述(I) (6 )所示的氨基酸序列構(gòu)成的肽中的至少I種肽、或者含有這些肽中的至少I種肽的珠蛋白分解物:(I) Val-Val-Tyr-Pro (序列號(hào) I)(2) Trp-Gly-Lys-Val-Asn (序列號(hào) 2)(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列號(hào) 3)(4) Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 4)(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列號(hào) 5)(6) Phe-Glu-Ser (序列號(hào) 6)。(II1-4)在改善患有起因于高血糖狀態(tài)的疾病的高血壓患者的高血壓狀態(tài)的方法或者在預(yù)防或治療該患者的起因于高血壓狀態(tài)的疾病的方法中使用的、由(I)Val-Val-Tyr-Pro氨基酸序列(序列號(hào)I)構(gòu)成的肽、或者含有該肽的珠蛋白分解物。發(fā)明的效果如果根據(jù)本發(fā)明，就可以提供能夠使血壓下降、改善高血壓狀態(tài)的降血壓劑。特別是含有由(I) Val-Val-Tyr-PiO的氨基酸序列(序列號(hào)I)構(gòu)成的肽或者含有該肽的珠蛋白分解物作為有效成分的本發(fā)明的降血壓劑，不僅具有降血壓作用，而且還具有抑制血糖上升的作用或胰島素分泌亢進(jìn)作用，因此能夠?qū)μ悄虿』蛱幱谄淝捌跔顟B(tài)的高血壓患者更有效地使用。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的降血壓劑的特征在于,含有選自由(I) Val-Val-Tyr-Pro的氨基酸序列(序列號(hào)I)構(gòu)成的肽(以下簡(jiǎn)稱為“肽(VVYP)”)、由(2)Trp-Gly-LyS-Val-ASn的氨基酸序列(序列號(hào)2)構(gòu)成的肽(以下簡(jiǎn)稱為“肽(WGKVN)”)、由(3) Trp-Gly-Lys-Val (序列號(hào)3)構(gòu)成的肽(以下簡(jiǎn)稱為“肽(WGKV)”)、由(4) Trp-Gly-Lys (序列號(hào)4)構(gòu)成的肽(以下簡(jiǎn)稱為“肽(WGK)”)、由(5) Ala-Ala-Trp-Gly-Lys (序列號(hào)5)構(gòu)成的肽(以下簡(jiǎn)稱為“肽(AAWGK)”)和由(6) Phe-Glu-Ser (序列號(hào)6)構(gòu)成的肽(以下簡(jiǎn)稱為“肽(FES)”)中的至少I種肽、或者含有這些肽中的至少I種肽的珠蛋白分解物作為有效成分。這些肽都可以使用公知的肽合成法通過(guò)化學(xué)合成調(diào)制。例如，作為肽合成法，可以例示疊氮法、?；确?、酸酐法、混合酸酐法、DCC法、活性酯法、碳酰咪唑(carboimidazole)法、氧化還原法、DCC-加成(HOMB、HOBt> HOSu)法(《The Peptide))第 I卷(1966 年)，Schreder&Luhke 著，Academic Press, New York, USA ;或((^ 7。千 F合成》泉谷等著，丸善株式會(huì)社(1975年)等)等肽合成法。這些肽合成法能夠采用固相合成法或液相合成法的任意一種方法進(jìn)行。在上述肽合成法中，具有側(cè)鏈官能團(tuán)的氨基酸，例如酪氨酸和蘇氨酸，優(yōu)選將該側(cè)鏈官能團(tuán)保護(hù)起來(lái)。作為保護(hù)基，可以使用公知的保護(hù)基，例如可以使用芐氧羰基(Cbz-)、叔丁氧基羰基(Boc-)、芐基(Bz-)等。在本發(fā)明的肽合成工序中，該保護(hù)基可以由公知的方法進(jìn)行脫保護(hù)。另外，由于這些肽均被包含在血紅蛋白和肌紅蛋白等珠蛋白的水解物(以下稱為“珠蛋白分解物”)中，所以也能夠從該珠蛋白分解物中分離精制而獲得。另外，也可以將珠蛋白以外的例如魚(yú)肉蛋白、魚(yú)粉、玉米蛋白質(zhì)(zein)等的水解物作為原料分離精制。另外，當(dāng)該珠蛋白是動(dòng)物性蛋白質(zhì)時(shí)，其供給源沒(méi)有特別限定，可以廣泛地使用牛、豬、羊、人和馬等的血液。另外，也可以將包含大量畜肉或魚(yú)肉等的肌紅蛋白的肉類作為其供給源使用。關(guān)于珠蛋白水解的操作，可以按照在國(guó)際公開(kāi)號(hào)W089/06970公報(bào)中記載的方法進(jìn)行。水解通常使用酸性蛋白酶、中性蛋白酶或堿性蛋白酶中的I種或2種以上的水解酶進(jìn)行。具體而言，在水解珠蛋白時(shí)，可以例示下述方法:首先在水中加入含有珠蛋白的物質(zhì)，分散成5 30重量％ (作為固態(tài)成分)，用酸或堿調(diào)整至最適合蛋白酶的pH，一次性或逐次添加蛋白酶，在20 70°C的溫度下使該酶反應(yīng)3 48小時(shí)。從這樣得到的珠蛋白分解物中分離生成本發(fā)明的肽的方法可以采用蛋白質(zhì)或肽相關(guān)的公知的精制方法。例如，使用鹽析法、透析法、離子交換樹(shù)脂法、超濾法、反相色譜法等，另外，根據(jù)需要，通過(guò)適當(dāng)組合這些方法，能夠得到包含各肽[肽(WYP)、肽(WGKVN)、肽(WGKV) Ji(WGK)Ji(AAWGK)或肽(FES)]的成分，再?gòu)脑摮煞种蟹蛛x得到上述各肽。在上述精制方法中，反相色譜法優(yōu)選酸性下的反相色譜法、或者組合該酸性下的反相色譜法和中性下的反相色譜法。成分中的蛋白量能夠采用公知的蛋白定量法，例如茚三酮法等測(cè)定。另外，篩選出的成分中所含的肽的氨基酸序列可以采用公知的方法(氨基酸分析法)鑒定，由此，能夠確認(rèn)本發(fā)明作為對(duì)象的肽(VVYP )、肽(WGKVN)、肽(WGKV )、肽(WGK )、肽(AAWGK )或肽(FES )的存在。另外，在本發(fā)明的降血壓劑中，可以采用由上述方法分離精制后的形態(tài)分別配合上述各肽，但只要具有降血壓作用，則也可以采用包含各肽的粗精制物的形態(tài)配合。作為這樣的粗精制物，可以列舉包含上述各肽的珠蛋白分解物或其成分。本發(fā)明的降血壓劑可以是由上述各肽或包含該肽的上述粗精制物(珠蛋白分解物或其成分)組成的降血壓劑，但通常在上述有效成分以外，與藥學(xué)上可接受的載體或添加劑一起調(diào)制。在與這樣的藥學(xué)上可接受的載體或添加劑組合調(diào)制降血壓劑時(shí)，其中所配合的各肽的量只要是具有降血壓作用的有效量即可，沒(méi)有特別限制。此外，肽(VVYP)或含有該肽的珠蛋白分解物除降血壓作用以外，還具有抑制血糖上升的作用或胰島素分泌亢進(jìn)作用。因此，當(dāng)本發(fā)明的降血壓劑是以肽(WYP)或含有該肽的珠蛋白分解物作為有效成分而制成的降血壓劑時(shí)，所配合的該肽的量?jī)?yōu)選為具有降血壓作用、并且發(fā)揮抑制血糖上升的作用或胰島素分泌亢進(jìn)作用的有效量。在這里，在本發(fā)明的降血 壓劑中配合的載體，根據(jù)制劑的劑型，可以從通常所使用的賦形劑、稀釋劑、粘合劑、濕潤(rùn)劑、崩解劑、崩解抑制劑、吸收促進(jìn)劑、潤(rùn)滑劑、助溶劑、緩沖齊U、乳化劑和懸濁劑等中適當(dāng)選擇。另外，根據(jù)制劑的劑型，添加劑可以從通常所使用的穩(wěn)定劑、保存劑、緩沖劑、等滲劑、螯合劑、pH調(diào)整劑、表面活性劑、著色劑、香料、風(fēng)味劑和甜味劑等中適當(dāng)選擇。另外，這樣的降血壓劑的單位劑型可以根據(jù)給藥途徑進(jìn)行各種適當(dāng)選擇，這些劑型大致分類為口服劑、經(jīng)肺給藥齊 、經(jīng)鼻齊 、舌下劑、非口服劑(注射劑、點(diǎn)滴齊 )等。該降血壓劑可以按照通常方法調(diào)和成為片劑、丸劑、散劑、粉劑、顆粒劑和膠囊劑等固體劑型；或溶液、懸濁劑、乳劑、糖漿劑和酏劑等液體劑型。另外，也可以作為在使用時(shí)通過(guò)添加適當(dāng)?shù)妮d體而能夠成為液狀的干燥品而調(diào)制。這些都可以按照通常方法調(diào)制。本發(fā)明的降血壓劑中所配合的各肽的比例以總量計(jì)，可以列舉通常0.001 80重量％左右,優(yōu)選0.1 50重量％左右，更優(yōu)選約0.1 10重量％左右。這樣所得到的降血壓劑的給藥量，根據(jù)其目的(發(fā)揮降血壓作用、或者發(fā)揮抑制血糖上升的作用或胰島素分泌亢進(jìn)作用并且發(fā)揮降血壓作用)、該降血壓劑的給藥方法、劑型、投與患者的年齡和體重或癥狀(疾病的嚴(yán)重程度)等適當(dāng)選擇。具體而言，作為本發(fā)明的肽的給藥量(組合2種以上的肽給藥時(shí)為總量)，可以列舉成人每日約I 500mg左右、優(yōu)選約2 IOOmg左右的范圍。另外，作為本發(fā)明的珠蛋白分解物的給藥量，可以列舉成人每日
0.1 5g左右、優(yōu)選約0.5 3g左右的范圍。另外，該給藥不一定I日I次，也可以分成I日2 4次給藥。上述各種形態(tài)的制劑可以通過(guò)與其形態(tài)相適應(yīng)的適當(dāng)給藥途徑來(lái)給藥，例如注射劑形態(tài)可以通過(guò)靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、腹腔內(nèi)給藥等，固體制劑形態(tài)的醫(yī)藥制劑可以通過(guò)口服給藥等。優(yōu)選口服給藥的形態(tài)。如在后述實(shí)驗(yàn)例中所示，本發(fā)明的降血壓劑對(duì)處于高血壓狀態(tài)的患者發(fā)揮降血壓作用，改善高血壓狀態(tài)。因此，本發(fā)明的降血壓劑作為起因于高血壓狀態(tài)的疾病的預(yù)防或治療劑是有效的。另外，在表I中表示由日本高血壓學(xué)會(huì)和WH0/ISH規(guī)定的高血壓分類。[表1 ]
權(quán)利要求
1.一種降血壓劑，其特征在于 以由序列號(hào)6的Phe-GlU-Ser所示的氨基酸序列組成的肽、或者含有該肽的珠蛋白分解物作為有效成分。
2.如權(quán)利要求I所述的降血壓劑，其特征在于 對(duì)輕癥高血壓患者口服給藥。
3.如權(quán)利要求I或2所述的降血壓劑，其特征在于 通過(guò)口服給藥途徑，對(duì)成人每日以Img 500mg的比例每日投與由序列號(hào)6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列組成的肽，或者以O(shè). Ig 5g的比例每日投與含有該肽的珠蛋白分解物。
4.由序列號(hào)6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列組成的肽、或者含該肽的珠蛋白分解物在降血壓劑的制造中的使用。
5.由序列號(hào)6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列組成的肽、或者含該肽的珠蛋白分解物。
6.在改善高血壓狀態(tài)的方法或者在起因于高血壓狀態(tài)的疾病的預(yù)防或治療方法中使用的權(quán)利要求5所述的肽、或者含該肽的珠蛋白分解物。
7.如權(quán)利要求4所述的使用，其特征在于 所述降血壓劑對(duì)輕癥高血壓患者口服給藥。
8.如權(quán)利要求4或7所述的使用，其特征在于 所述降血壓劑通過(guò)口服給藥途徑，對(duì)成人每日以Img 500mg的比例每日投與由序列號(hào)6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列組成的肽，或者以O(shè). Ig 5g的比例每日投與含有該肽的珠蛋白分解物。
全文摘要
本發(fā)明提供降血壓劑。本發(fā)明的降血壓劑以由序列號(hào)6的Phe-Glu-Ser所示的氨基酸序列組成的肽、或者含有該肽的珠蛋白分解物作為有效成分。
文檔編號(hào)A61P9/12GK103251928SQ201310138240
公開(kāi)日2013年8月21日 申請(qǐng)日期2008年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年8月7日
發(fā)明者香川恭一, 福濱千津子, 藤野博昭, 東立里純寧 申請(qǐng)人:愛(ài)沐健制藥株式會(huì)社