專利名稱：大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷在制備保肝利膽藥物中的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥研究領(lǐng)域，具體涉及大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷在制備保肝利膽藥物中的新用途。
背景技術(shù)：
肝內(nèi)膽汁游積(intrahepatic cholestasis)由于各種原因使肝細(xì)胞排泌膽汁障礙，以致肝內(nèi)膽汁淤滯和血中膽汁成分增多，而無膽道阻塞者，稱為肝內(nèi)膽汁淤積?？梢娪谠l(fā)性膽汁性肝硬變、病毒性肝炎、某些藥物的損害(如酒精、氯丙嗪、睪丸酮、妊酮等)及個別孕婦。其病變特點:光鏡下，可見有肝細(xì)胞腫脹，內(nèi)有膽色素沉積；嚴(yán)重的，有少數(shù)肝細(xì)胞變性壞死，毛細(xì)膽管內(nèi)膽汁濃縮和有膽栓形成。電鏡下，毛細(xì)膽管擴(kuò)張，微絨毛減少，變平、甚至消失，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)呈不規(guī)則之增生，線粒體的嵴卷曲，毛細(xì)膽管周圍溶酶體增多等。肝內(nèi)膽汁淤積的發(fā)病機(jī)制，目前還不完全清楚，可能與下列因素有關(guān):I)自身免疫機(jī)制:原發(fā)性膽汁性肝硬化被認(rèn)為與自身免疫有密切關(guān)系，早期見小膽管周圍有淋巴細(xì)胞浸潤和小膽管上皮細(xì)胞增生和壞死；以后發(fā)展成小膽管周圍纖維組織增生和小葉間膽管萎縮，數(shù)目減少。病人血中抗線粒體抗體、抗小膽管抗體檢出率高，免疫球蛋白濃度高。2)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙:膽固醇先在肝細(xì)胞滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中羥化，再在線粒體中進(jìn)行側(cè)鏈氧化，生成游離型初級膽汁酸(primary bile acibs)，其中主要是三羥基的膽酸(cholic acid)和二輕基的鵝脫氧膽酸(lithochocholic acid)很少。游離型膽汁酸再與牛磺酸或甘氨酸結(jié)合，形成結(jié)合型初級膽汁酸(如?；悄懰峄蚋拾蹦懰帷⑴；蛆Z脫氧膽酸或甘氨鵝脫氧膽)，與膽紅素、膽固醇形成親水性強(qiáng)的乳粒，分泌入毛細(xì)膽管，經(jīng)膽管排入腸道。膽汁酸鹽在腸內(nèi)受細(xì) 菌作用，水解脫輕，成為次級膽汁酸(secondary bile acids),例如?；悄懰嶙?yōu)槊撗跄懰?deoxycholicacid)，甘氨鵝脫氧膽酸變?yōu)槭懰?，然后被重吸收入肝，再?jīng)過羥化生成膽酸和鵝脫氧膽酸。肝細(xì)胞主動分泌膽汁酸鹽，使毛細(xì)膽管內(nèi)滲透壓升高，使水和電解質(zhì)進(jìn)入毛細(xì)膽管，因此膽汁酸鹽是決定毛細(xì)膽管膽汁流量的重要因素，這部分膽汁稱為“膽鹽依賴性膽流”(bile saltdependent bile flow,BSDF)?；鎯?nèi)質(zhì)網(wǎng)質(zhì)損，輕化膽固醇功能降低,此時膽固醇直接經(jīng)側(cè)鏈氧化而生成大量的石膽酸；從腸道重吸收入肝的石膽酸也增多，而在肝內(nèi)又不能再羥化，因而在細(xì)胞內(nèi)石膽酸過多。膽汁酸為兩親性化合物，一端為極性基團(tuán)(-0H等)，另一端為非極性基團(tuán)(CH等)，膽酸和鵝脫氧膽酸含羥基較多，極性較高，與膽紅素和膽固醇形成的乳粒親水性強(qiáng)，較易通過毛細(xì)膽管微絨毛分泌入毛細(xì)膽管，而石膽酸的羥基少，極性低，與膽紅素和膽固醇形成的乳粒親水性差，在毛細(xì)膽管微絨毛內(nèi)發(fā)生淤積，滲透活性降低，從而使膽鹽依賴性膽流減少，引起肝內(nèi)膽汁淤積。3)毛細(xì)膽管內(nèi)膽流受到抑制:膽鹽分泌可以帶動水分流入毛細(xì)血管，這是推動毛細(xì)膽管內(nèi)膽管內(nèi)膽汁流動的一個因素。但是，在毛細(xì)膽管內(nèi)膽汁流動率中還有40 - 70%是由另外的因素推動的，叫做“不依賴于膽鹽的膽流(bile salt independent bile flow,BSIF)。BSIF在毛細(xì)膽管的膽汁流中似有更重要作用。實驗證明，氨丙嗪、雌激素、特別是炔雌醇可抑制BSIF。凡能抑制細(xì)胞質(zhì)膜Na+-K+-ATP酶的物質(zhì)(如毒毛旋花苷)，可抑制BSIF。氯丙嗪和炔雌醇(避孕藥)在人可引起肝內(nèi)膽汁淤積，可能是通過抑制Na+-K+-ATP酶而起作用的。膽汁酸的生成和肝腸循環(huán)正常石膽酸生成很少，結(jié)合石膽酸約占結(jié)合型膽汁酸總量的I 一 2%，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)功能障礙時，石膽酸生成增多。4)微絲的功能降低:毛細(xì)膽管微絨毛中有豐富的微絲，其中含有肌動蛋白樣的收縮蛋白。微絲在膽汁分泌中的重要性可用下述實驗說明；用細(xì)胞松弛素(選擇性地降低微絲的功能)灌流大鼠肝臟I小時，膽汁流量減少50%，灌流2小時，膽流完全停止，微絲的作用大概是通過它的收縮、松弛，使微絨毛變形，毛細(xì)膽管擴(kuò)張或縮小，從而推動膽汁流動。各種原因引起的肝內(nèi)膽汁淤積，幾乎無例外地都有毛細(xì)膽管微絨毛的形態(tài)變化，如腫脹、變形、數(shù)目減少等。由于肝細(xì)胞膽汁分泌障礙，發(fā)生肝內(nèi)膽汁淤積，膽汁則從肝細(xì)胞彌散入血，造成肝內(nèi)膽汁淤積性黃疸，血液中膽汁酸鹽增多。其膽色素代謝變化:血清結(jié)合膽紅素明顯增多，膽紅素定性試驗直接陽性反應(yīng)；糞和尿內(nèi)尿(糞)膽素元減少；尿內(nèi)膽紅素陽性。除膽紅素代謝變化外，絕大多數(shù)病人血清鹼性磷酸酶顯著升高，還有其它肝功能損害的變化。膽寧片是上海和黃藥業(yè)有限公司按照原三類新藥要求開發(fā)研制的中藥，是國家實行新藥審批辦法后上海地區(qū)第一個國家級中藥新藥(原三類新藥)，由于療效明確，無毒副作用，服用方便而深受廣大患者歡迎。膽寧片由大黃、虎杖、青皮、白茅根、陳皮、郁金、山楂等7味藥材組成，為新的中藥復(fù)方。具有疏肝利膽、清熱通下的功效，臨床用于肝郁氣滯、濕熱未清所致的右上腹隱隱作痛，食入作脹，胃納不香、噯氣、便秘；慢性膽囊炎等上述癥候者的治療。研究發(fā)現(xiàn)膽寧片對ANIT ( α -萘異硫氰酸酯，a-naphthyl isothiocy)所致的膽汁淤積具有很好的保護(hù)作用，但是膽寧片藥味較多，藥效成分復(fù)雜，膽寧片具體的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)尚未有報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的局限，對大黃素-8-0-13_D-葡萄糖苷(Emodin-8-O- β -D-glucopyranoside)針對肝內(nèi)膽汁游積的保護(hù)作用效果進(jìn)行研究,確切了大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷對肝內(nèi)膽汁淤積的保護(hù)作用。本發(fā)明首先公開了大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷在制備保肝利膽藥物中的應(yīng)用。較優(yōu)的，所述保肝利膽藥物為膽汁淤積預(yù)防和/或治療藥物。更優(yōu)的，所述保肝利膽藥物為肝內(nèi)膽汁淤積預(yù)防和/或治療藥物。優(yōu)選的，所述應(yīng)用為大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷作為主要有效成分在制備保肝利膽藥物中的應(yīng)用。更優(yōu)的，所述應(yīng)用為大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷作為單一有效成分在制備保肝利膽藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明通過研究發(fā)現(xiàn),針對ANIT (α-萘異硫氰酸酯，a-naphthyl isothiocy)所致肝內(nèi)膽汁淤積大鼠，施用大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷的實驗組與未施用任何藥物的空白對照組相比，大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和堿性磷酸酶(ALP)的活力減低，總膽紅素(TBIL)和直接膽紅素(DBIL)的含量下降，膽汁流量增加，可見大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷具有利膽、保肝降酶的功效，可用于保肝利膽藥物的研發(fā)。本發(fā)明第二方面公開了一種保肝利膽藥物制劑，其有效成分為大黃素-8-0- β -D-匍萄糖昔。本發(fā)明的保肝利膽藥物制劑中，僅含有大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷這一單一有效成分。較優(yōu)的，所述保肝利膽藥物為膽汁淤積預(yù)防和/或治療藥物；更優(yōu)的，所述保肝利膽藥物為肝內(nèi)膽汁淤積預(yù)防和/或治療藥物。本發(fā)明的保肝利膽藥物制劑中，含有治療有效量的大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷。較優(yōu)的，所述保肝利膽藥物制劑中，還含有藥學(xué)上可接受的載體。較優(yōu)的，大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷在所述藥物制劑中的質(zhì)量百分比為5 50%。更優(yōu)的，大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷在所述藥物制劑中的質(zhì)量百分比為20 50%。所述藥學(xué)上可接受的載體為各種藥學(xué)上常用的輔料和/或賦形劑，包括(但不限于)糖類(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，纖維素及其衍生物(如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和甲基纖維素)，黃蓍膠粉末，麥芽，明膠，滑石，固體潤滑劑(如硬脂酸和硬脂酸鎂)，硫酸鈣，植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄欖油、玉米油和可可油，多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)，海藻酸，乳化劑(如Tween)，潤濕劑(如月桂基硫酸鈉)，著色劑，調(diào)味劑，壓片劑、穩(wěn)定劑，抗氧化劑，防腐劑，無熱原水，等滲鹽溶液和磷酸鹽緩沖液等；該載體可根據(jù)需要提高配方的穩(wěn)定性、活性及生物有效性等，或在口服的情況下產(chǎn)生可接受的口感或氣味。本發(fā)明的藥物制劑可以按照藥劑學(xué)上的通用方法制成任何常規(guī)的形式，包括口服制劑和注射制劑。所述口服制劑優(yōu)選的是片劑、顆粒劑、丸劑、粉劑、糖漿劑、湯劑和膠囊劑；更優(yōu)選為片劑、顆粒劑、丸劑和膠囊劑。本發(fā)明藥物制劑中所使用的大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷即可以采用現(xiàn)有技術(shù)從中藥材虎杖、大黃以及何首烏中提取，也可以直接從市面上進(jìn)行購買，或者從含有大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷的藥物(例如膽寧片)中進(jìn)行提取。從膽寧片中提取大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷的方法如下:I)取膽寧片粉末，采用乙醇水溶液提取I 3次，濃縮得到膽寧片浸膏；2)將膽寧片浸膏用熱水溶解、過濾，將濾液上樣到填充有DlOl型大孔樹脂的柱子，上樣后分別用蒸餾水(15L)，20%的乙醇(20L)，50%的乙醇(20L)，70%(20L)的乙醇及95%的乙醇(20L)洗脫；3)收集50%的乙醇洗脫物，并將該洗脫物反復(fù)經(jīng)凝膠柱分離，即可得到純化的大黃素-8-0- β -D-匍萄糖昔。較優(yōu)的，步驟I)所述乙醇水溶液濃度為80 95%。更優(yōu)的，步驟I)所述乙醇水 溶液濃度為95%。為節(jié)省成本，步驟I)可采用95%的工業(yè)酒精進(jìn)行提取。本發(fā)明中乙醇的濃度均為體積百分比。
較優(yōu)的，步驟3)對洗脫物進(jìn)行分離的重復(fù)次數(shù)不少于兩次。本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明通過ANIT誘發(fā)的大鼠肝內(nèi)膽汁淤積模型，研究并證實了大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷作用于肝內(nèi)膽汁淤積，能促進(jìn)膽汁排泄，增加膽汁流量，具有保肝降酶的功效，將其應(yīng)用于保肝利膽藥物的研發(fā)將能創(chuàng)造良好的經(jīng)濟(jì)效益和廣泛的社會效益。


圖1:從膽寧片中提取大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷的分離流程2:大黃素-8-0-β -D-匍萄卩比喃糖昔的結(jié)構(gòu)式圖3:各組大鼠肝臟病理切片圖
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明，應(yīng)理解，以下實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實施例1本實施例的目的在于提供一種從膽寧片中提取大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷的方法。1.實驗材料和方法1.1實驗材料、儀器與試劑膽寧片粉末(批次:20100315上海和黃藥業(yè)有限公司)DK-S24型電熱恒溫水浴鍋(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)DHG-9070A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)備有限公司)KW-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)SENCO R205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海申生科技有限公司)SENCO W201恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司).
試劑均為國產(chǎn)分析純。1.2膽寧片浸膏的提取膽寧片粉末800g，95%的工業(yè)酒精4L提取三次濃縮得到浸膏384.6g。1.3大黃素8-0- β -D-葡萄糖苷分離DlOl型大孔樹脂3kg經(jīng)1%的鹽酸4L浸泡2h，蒸餾水洗至中性后，1%的氫氧化鈉溶液4L浸泡2h，蒸餾水洗至中性后，用95%的工業(yè)乙醇沖洗至無味，再用蒸餾水將工業(yè)乙醇全部更換之。浸膏用熱水溶解，過濾后將濾液上樣后分別用蒸餾水(15L)，20%的乙醇(20L)，50%的乙醇(20L)，70%(20L)的乙醇及95%的乙醇(20L)洗脫。50%的乙醇洗脫物經(jīng)反復(fù)上凝膠柱得到大黃素-8-0- β -D-葡萄糖苷8.037g，提取分離流程圖如圖1所示。2.分離結(jié)果2.1化合物結(jié)構(gòu)鑒定2.1.1大黃素-8-0- β -D-葡萄吡喃糖苷:
桔紅色針晶(MeOH)，ES1-MSm/z (%): 431 [M_H]_ NMR 及 13C-NMR 數(shù)據(jù)見下表 1，與文獻(xiàn)值相比較[梁永鋒，陳東，2008]，確定該化合物為大黃素-8-0- β -D-葡萄吡喃糖苷，結(jié)構(gòu)式見圖2。表I大黃素-8-0- β -D-葡萄吡喃糖苷1H NMR^13C-NMR歸屬
權(quán)利要求
1.大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷在制備保肝利膽藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為大黃素-8-0-β-D-葡萄糖苷作為主要有效成分在制備保肝利膽藥物中的應(yīng)用。
3.如權(quán)利要求1或2任一權(quán)利要求所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用為大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷作為單一有效成分在制備保肝利膽藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述保肝利膽藥物為膽汁淤積預(yù)防和/或治療藥物。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述保肝利膽藥物為肝內(nèi)膽汁淤積預(yù)防和/或治療藥物?！?br> 6.一種保肝利膽藥物制劑，其有效成分為大黃素-8-0-β -D-葡萄糖苷。
7.如權(quán)利要求6所述的保肝利膽藥物制劑，其特征在于，所述保肝利膽藥物制劑中，還含有藥學(xué)上可接受的載體。
8.如權(quán)利要求6所述的保肝利膽藥物制劑，其特征在于，所述保肝利膽藥物為口服制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的保肝利膽藥物制劑，其特征在于，所述保肝利膽藥物制劑形式選自片劑、顆粒劑、丸劑或膠囊劑。
10.—種從膽寧片中提取大黃素-8-0-β-D-匍萄糖苷的方法,其具體步驟如下: 1)取膽寧片粉末，采用乙醇水溶液提取I 3次，濃縮得到膽寧片浸膏； 2)將膽寧片浸膏用熱水溶解、過濾，將濾液上樣到填充有DlOl型大孔樹脂的柱子，上樣后分別用蒸餾水、20%的乙醇、50%的乙醇、70%的乙醇及95%的乙醇洗脫； 3)收集50%的乙醇洗脫物，并將該洗脫物反復(fù)經(jīng)凝膠柱分離，即可得到純化的大黃素-8-0- β -D-匍萄糖昔。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥研究領(lǐng)域，具體涉及大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷在制備保肝利膽藥物中的新用途。本發(fā)明還制備了一種保肝利膽藥物制劑，其有效成分為大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷。本發(fā)明通過ANIT誘發(fā)的大鼠肝內(nèi)膽汁淤積模型，研究并證實了大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷針對肝內(nèi)膽汁淤積疾病，能顯著降低血清轉(zhuǎn)氨酶水平，促進(jìn)膽汁排泄，增加膽汁流量，具有保肝利膽的功效，將其應(yīng)用于保肝利膽藥物的研發(fā)將能創(chuàng)造良好的經(jīng)濟(jì)效益和廣泛的社會效益。
文檔編號A61P1/16GK103156873SQ20131011332
公開日2013年6月19日 申請日期2013年4月2日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月2日
發(fā)明者丁麗麗, 劉軒, 楊莉, 王崢濤, 詹常森, 沈丹萍, 王玲, 張正光 申請人:上海和黃藥業(yè)有限公司