一種關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿及其制備方法，具體來(lái)說(shuō)公開(kāi)了一種從關(guān)白附中制備二萜類(lèi)總生物堿的方法。該方法采用CO2超臨界萃取法提取關(guān)白附，再進(jìn)行加酸-堿化-萃取處理，萃取物再以堿水洗滌。具體來(lái)說(shuō)該方法包括如下步驟：步驟1：取關(guān)白附藥材以CO2為溶劑進(jìn)行超臨界萃?。徊襟E2：將步驟1得到的萃取物以酸水溶解，將酸水液進(jìn)行堿化處理后以有機(jī)溶劑萃??；以及步驟3：將步驟2得到的有機(jī)溶劑萃取物以堿水洗滌，回收有機(jī)溶劑。其總生物堿含量高達(dá)到50%以上，且大大降低了毒性成分關(guān)附辛素的含量。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從中草藥中制備得到關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿的方法，尤其是從毛茛科植物黃花烏頭Aconitum coreanum(Levl.) Rapaics的塊根(關(guān)白附)中提取、萃取、分離得到關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]中藥毛茛科黃花烏頭Aconitum coreanum(L6vl.) Rapaics是主產(chǎn)于我國(guó)北方的藥用植物，其塊根稱(chēng)為關(guān)白附，為常用中藥之一，主治心痛血痹，具有祛風(fēng)、燥濕、化痰、止痛的作用，民間用藥療效好。其化學(xué)成分主要由關(guān)附庚素(Guanfu base G，GFG)、關(guān)附甲素(Guanfu base A, GFA)、關(guān)附壬素(Guanfu base I, GFI)、關(guān)附辰素、關(guān)附己素、關(guān)附Z素等,為一系列母核為赫替(Hetisine)新型C20 二萜類(lèi)生物堿。其中關(guān)附甲素為首次發(fā)現(xiàn)的全新結(jié)構(gòu)類(lèi)型的安全、有效的廣譜抗心率失常一類(lèi)新藥。然而現(xiàn)有技術(shù)中，提取關(guān)附甲素工藝復(fù)雜、有效成分損失大，提取得率較低，導(dǎo)致鹽酸關(guān)附甲素成本較高，而且很大程度上浪費(fèi)了中藥材資源(關(guān)白附藥材中，關(guān)附甲素的含量?jī)H為0.2%-0.5%左右)。
[0003]研究發(fā)現(xiàn)，關(guān)白附總堿中其他活性成分(如關(guān)附己素、關(guān)附Z素、關(guān)附庚素以及關(guān)附壬素等)也具有較強(qiáng)的抗心率失常活性，其中關(guān)附庚素活性較鹽酸關(guān)附甲素強(qiáng)，對(duì)治療房顫具有較好作用。而關(guān)附辛素(atisinium chloride),也是關(guān)白附中的主要生物堿類(lèi)成分之一，為一種水溶性生物堿，能抑制骨骼肌系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)，對(duì)小鼠的LD5tl為9.0mg/kg,為高毒性成分，應(yīng)加以控制。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)中關(guān)白附總生物堿的制備工藝，主要以有機(jī)溶劑提取后進(jìn)行加酸-堿化-萃取的方法，并進(jìn)一步包括常規(guī)精制工藝如過(guò)大孔樹(shù)脂凈化(如CN1709892A)或以親脂性有機(jī)溶劑除雜(如CN1039198C)。上述工藝提取效率低，萃取步驟乳化嚴(yán)重，而且酸性條件下萃取，生物堿損失嚴(yán)重，大孔樹(shù)脂吸附時(shí)，生物堿也會(huì)較大損失，也導(dǎo)致總生物堿得率比較低。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種從關(guān)白附中制備二萜類(lèi)總生物堿的方法，該方法制備的總生物堿含量高，且毒性成分關(guān)附辛素含量低。
[0006]本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]一種制備關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿的方法，該方法包括如下步驟:
[0008]步驟1:取關(guān)白附藥材以CO2為溶劑進(jìn)行超臨界萃??；
[0009]步驟2:將步驟I得到的萃取物以酸水溶解，將酸水液進(jìn)行堿化后以有機(jī)溶劑萃取；
[0010]步驟3:將步驟2得到的有機(jī)溶劑萃取物以堿水洗滌，回收有機(jī)溶劑。
[0011]進(jìn)一步，步驟I關(guān)白附藥材進(jìn)行超臨界萃取前進(jìn)行粉碎，過(guò)60-100目篩。
[0012]進(jìn)一步，步驟I超臨界萃取條件為:萃取壓力為15_50MPa，萃取溫度為30_70°C，超臨界CO2流量為10-45kg/h，萃取時(shí)間為1-6小時(shí)，解析壓力為4-llMPa，解析溫度為45-60。。。
[0013]進(jìn)一步，步驟I超臨界萃取過(guò)程中加入夾帶劑，所述夾帶劑選自甲醇、乙醇、丙酮中的一種或幾種；更進(jìn)一步的，所述夾帶劑為甲醇、乙醇、丙酮中的任意兩種組成的混合溶液；更進(jìn)一步的，所述夾帶劑為乙醇和丙酮組成的混合溶液。進(jìn)一步的，所述夾帶劑加入量為按質(zhì)量比夾帶劑:關(guān)白附藥材=1: (1.5-20);更進(jìn)一步的，所述夾帶劑加入量為按質(zhì)量比夾帶劑:關(guān)白附藥材=1: (5-15)。
[0014]進(jìn)一步，步驟2加酸水至pH為1-3，所述酸水選自1-5%的鹽酸、硫酸或醋酸溶液中的任意一種。
[0015]進(jìn)一步,步驟2酸水液堿化至pH為8-11,堿化所用的堿溶液選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、濃氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。
[0016]進(jìn)一步，步驟2所述有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正丁醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和醋酸甲酯中的一種或者其中幾種的混合物。
[0017]進(jìn)一步，步驟3所述堿水pH為8-12，堿水選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。優(yōu)選，步驟3所述堿水pH為9-12 ;更優(yōu)選，步驟3所述堿水pH 為 10-12。
[0018]進(jìn)一步，步驟3回收有機(jī)溶劑后，干燥處理后即得關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿
[0019]另外，本發(fā)明還提供了一種通過(guò)上述方法制備得到的關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明采用CO2超臨界萃取法對(duì)藥材進(jìn)行提取，提取物雜質(zhì)少，溶液粘度低，再進(jìn)行加酸-堿化-萃取處理，避免了萃取時(shí)乳化嚴(yán)重的問(wèn)題，總生物堿含量高(達(dá)到50%以上)；另外，本發(fā)明萃取及洗滌過(guò)程可以將水溶性成分去除，尤其是毒性成分關(guān)附辛素，純化后提取物中其含量小于1%。。
[0021]效果實(shí)驗(yàn)例
[0022]實(shí)驗(yàn)例I C02超臨界萃取對(duì)提取物得率和總生物堿含量的影響
[0023]I實(shí)驗(yàn)方法
[0024]1.1樣品制備
[0025]實(shí)驗(yàn)組:取5kg關(guān)白附藥材，按本發(fā)明實(shí)施例1方法制備總生物堿，得產(chǎn)物262g。
[0026]對(duì)照組:取5kg關(guān)白附藥材，粉碎，95%乙醇回流提取2次，回收溶劑，得到浸膏，以少量1%鹽酸溶解，以濃氨水堿化pH為10，以氯仿萃取，回收溶劑，于80°C減壓干燥，得關(guān)白附總生物堿185g。
[0027]1.2總生物堿含量測(cè)定
[0028]1.2.1對(duì)照品溶液制備:
[0029]取鹽酸關(guān)附甲素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成每1ml含0.50mg的溶液，搖勻，即得。
[0030]1.2.2供試品溶液制備:
[0031]取實(shí)驗(yàn)組總生物堿、對(duì)照組總生物堿細(xì)粉各20mg，精密稱(chēng)定，分別置1ml量瓶中，加甲醇超聲處理使溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0032]1.2.3測(cè)定方法:
[0033]分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，采用內(nèi)標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定，即得。
[0034]2實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0035]結(jié)果見(jiàn)表1。
[0036]表1不同方法制備總生物堿得率和含量比較
[0037]

【權(quán)利要求】
1.一種制備關(guān)白附二萜類(lèi)總生物堿的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟: 步驟1:取關(guān)白附藥材以CO2為溶劑進(jìn)行超臨界萃??； 步驟2:將步驟I得到的萃取物以酸水溶解，將酸水液進(jìn)行堿化處理后以有機(jī)溶劑萃??；以及 步驟3:將步驟2得到的有機(jī)溶劑萃取物以堿水洗滌，回收有機(jī)溶劑。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I超臨界萃取過(guò)程中加入夾帶劑，所述夾帶劑選自甲醇、 乙醇、丙酮中的一種或幾種。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述夾帶劑為乙醇和丙酮按1:1組成的混合溶液。
4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述夾帶劑加入量為按質(zhì)量比計(jì)，夾帶劑:關(guān)白附藥材=1: (1.5-20)。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3所述堿水的pH為8-12。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟3所述堿水選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2加酸水至pH為1-3，所述酸水選自1-5%的鹽酸、硫酸或醋酸溶液中的任意一種。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2酸水液堿化至pH為8-11，堿化所用的堿溶液選自氫氧化鈉溶液、氫氧化鉀溶液、濃氨水或碳酸鈉溶液中的任意一種。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2所述萃取用有機(jī)溶劑選自乙酸乙酯、氯仿、二氯甲烷、正丁醇、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮和醋酸甲酯中的一種或者其中幾種的混合物。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟I超臨界萃取條件為:萃取壓力為15-50MPa，萃取溫度為30_70°C，超臨界C02流量為10_45kg/h，萃取時(shí)間為1-6小時(shí)，解析壓力為4-llMPa，解析溫度為45-60°C。
【文檔編號(hào)】A61K36/714GK104069196SQ201310097075
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2013年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月25日
【發(fā)明者】董秀華, 孫申國(guó), 朱天全, 曾艷, 李娜, 吳丹, 劉巍, 程志國(guó) 申請(qǐng)人:吉林敖東洮南藥業(yè)股份有限公司