一種采用熊膽為基質(zhì)的中藥飲片炮制方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于一種新的中藥飲片的炮制方法。該方法在常溫下，用一定濃度的鮮熊膽汁或熊膽粉溶于水，對中藥材進行均勻噴灑，悶潤至熊膽溶液為中藥材充分吸收，然后鋪展于托盤中，放入烘箱烘烤、烘干后取出，即得熊膽制中藥炮制品。本發(fā)明利用熊膽本身的特性，以其為基質(zhì)對中藥材進行炮制，藥理試驗表明炮制后可增強藥材原有的功效，如增強了金銀花、菊花、薄荷等的清熱解毒作用，決明子、夏枯草、枸杞子的清肝明目功效，金錢草、雞內(nèi)金等的利膽溶石等作用，山楂、葛根等的降脂活血功效，干蟾皮、虎眼萬年青等的抗癌作用。
【專利說明】一種采用熊膽為基質(zhì)的中藥飲片炮制方法
[0001]

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體一種涉及協(xié)同增效的熊膽為基質(zhì)的中藥飲片炮制方法。
[0003]技術(shù)背景
熊膽為熊科動物黑熊 Soloimrctos thibetanus Cuvier 或掠熊 Ursus arctosLinnaeus的干燥膽囊，又名黑膽(《詩經(jīng)》)，黃熊膽(《詩疏》)，豬熊膽，馬熊膽(《爾雅翼》)，黑熊膽，人熊膽(《本草綱目》)。
[0004]現(xiàn)臨床所用熊膽均為熊科動物黑熊feJeftareiias thibetanus Cuvier經(jīng)膽囊手術(shù)引流的新鮮膽汁或其干燥后的粉末熊膽粉。味苦，寒。歸肝、膽、心經(jīng)。具有清熱解毒、涼心平肝、明目之功效，多用于治療驚風抽搐、惡瘡，痔漏，目赤翳障，黃疽、目赤腫痛，咽喉腫痛等癥。現(xiàn)代藥理研究證實熊膽具有多種藥理作用，主要有:利膽、保肝、溶解膽石、鎮(zhèn)靜、抗驚厥、解痙，抗炎，抑菌，解熱，對心血管系統(tǒng)的作用，降血糖作用，另外熊膽還有鎮(zhèn)咳，抗缺氧，鞏固記憶，健胃、鎮(zhèn)痛，抗疲勞作用等。
[0005]


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種中藥炮制方法，該方法采用熊膽為基質(zhì)對中藥進行炮制。在常溫下，用一定濃度的鮮熊膽汁或熊膽粉溶于水，對中藥進行均勻噴灑，悶潤至熊膽溶液為中藥材充分吸收，然后鋪展于托盤中，放入烘箱烘烤、干燥后封存。
[0007]現(xiàn)代研究表明，熊膽粉具有解熱鎮(zhèn)痛、清肝明目、利膽溶石、降脂活血通脈等功效。因此，以此為溶液噴灑在中藥材或中藥飲片上，對中藥材或飲片有如下功能:經(jīng)藥理實驗證實，在采用熊膽汁或熊膽粉溶液為基原炮制后，增強了金銀花、菊花、薄荷等的清熱解毒作用，決明子、夏枯草、枸杞子的清肝明目功效，金錢草、雞內(nèi)金等的利膽溶石等作用，山楂、葛根等的降脂活血功效，干蟾皮、虎眼萬年青等的抗癌作用。
[0008]實施本發(fā)明的技術(shù)路線如下:
1.炮制工藝:
常溫下，將50mL鮮熊膽汁加水至200mL，或5克熊膽粉(1mL新鮮膽汁噴霧干燥后可獲得Ig熊膽粉)兌入200mL水中，制成溶液，將待炮制的飲片(溶液與藥材比例:50mL/kg)鋪展于托盤中，用熊膽溶液進行均勻噴霧，悶潤至熊膽溶液為中藥材充分吸收后放入烘箱烘烤，烘干后取出，封存，即得熊膽制中藥炮制品。其中，花類藥材烘烤時間為I~2h，烘烤溫度為60~80°C ;全草類藥材烘烤時間為I~3h，烘烤溫度為60~80°C ;果實類藥材烘烤時間為3~4h，烘烤溫度為70~90°C ;動物類藥材烘烤時間為I~4h，烘烤溫度為50~60°C。烘干后，封存。
[0009]2.功效考察所用實驗?zāi)Ｐ?
(I)清熱解毒實驗?zāi)Ｐ?
①抗菌作用(體外對常見呼吸道細菌的抑制作用):分別取原藥材飲片、熊膽制藥材飲片提取物適量，加0.5 mL吐溫-80，再加營養(yǎng)肉湯稀釋配制成濃度為200，100，50，10，5，2.5m g/mL共6個濃度，實驗時流通蒸氣滅菌。鏈球菌試驗需在滅菌藥液中添加I %葡萄糖，肺炎球菌和白喉桿菌試驗另加10 %兔血清，白色念珠菌試驗應(yīng)用沙氏培養(yǎng)液稀釋藥液。空白對照為不含藥物的培養(yǎng)基。藥液的各個濃度管及空白對照管分別加入1:2000的試驗菌液(8 h培養(yǎng)物)0.lmL，37 °C培養(yǎng)24 h觀察結(jié)果。判定最小抑菌濃度(MIC)。
[0010]②抗內(nèi)毒素作用(對大腸桿菌內(nèi)毒素致家兔發(fā)熱模型的影響):取新西蘭兔隨機分為4組，分別為模型組，飲片組(2g/kg)，熊膽制飲片組(2g/kg)和陽性對照組(阿司匹林,250mg/kg),每組5只,雄性。實驗當天,各兔固定在固定架上,在實驗環(huán)境中適應(yīng)I h,測2次體溫，取兩次體溫的平均值為正常體溫。除模型組外，各組按20 mL/kg灌胃給與相應(yīng)藥物，模型組給予等量生理鹽水。給藥后，按0.01 mL/kg耳沿靜脈注射內(nèi)毒素(15 μ g/mL)致熱，自進針起0.5，1，2，3，4，5,6 h各測定肛溫。以注射內(nèi)毒素前后的肛溫差值為縱坐標，注射后時間為橫坐標繪制平均體溫變化曲線。
[0011]③解熱作用(對干酵母致大鼠發(fā)熱模型的影響):取SD大鼠，按體重隨機分為4組，分別為模型組，飲片組(2 g/kg)，熊膽制飲片組(2g/kg)和陽性對照組(阿司匹林，250mg/kg)，每組5只，雄性。實驗前I d，禁食不禁水。實驗日給藥前測肛溫2次，取其兩次體溫的平均值為正常體溫。除模型組外，各組灌胃給藥，給藥容積為10 mL/kg，模型組給予等量生理鹽水。給藥0.5h后，各組大鼠按10 mL/kg于背部皮下注射干酵母生理鹽水混懸液(0.2 mg/mL),造模后分別于0.5,1,2, 3, 4, 5,6,8 h測定肛溫。以注射干酵母生理鹽水混懸液前后的肛溫差值為縱坐標，注射后時間為橫坐標繪制平均體溫變化曲線。
[0012](2)清肝明目實驗?zāi)Ｐ?
①對實驗性高血脂癥兔血清低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的影響:選用健康雄性新西蘭兔20只，觀察I周后，空腹耳緣靜脈取血，按免疫比濁法試劑盒說明書方法測定給高脂飼料前血清LDL-C的含量，然后均勻分4組:(1)正常對照組(正常組):實驗全程喂正常飼料，2周后蒸餾水灌胃；(II)高血脂模型組:實驗開始后一直喂高脂飼料(膽固醇0.5 g/kg/d和豬油0.5 mL/kg/d)； (III)原藥材組:同聞血脂I旲型組，2周(聞血脂形成)后聞脂詞喂的同時灌胃給予原藥材飲片提取物(相當于生藥2g/kg/d) ; (IV)熊膽制藥材組:同高血脂模型組，2周(高血脂形成)后高脂飼喂的同時灌胃給予熊膽制藥材飲片提取物(相當于生藥2g/kg/d)。上述各組兔實驗全程自由飲水，連續(xù)給藥4周后從兔耳緣靜脈取血，測定血清 LDL-C。
[0013]②對溴酸鉀(KBr03) /傷寒沙門氏菌脂多糖(LPS)誘發(fā)小鼠晶狀體氧化應(yīng)激狀態(tài)的改善作用:KM種小鼠隨機分為正常對照組，LPS/KBr03誘導(dǎo)模型組，LPS/KBr03+原藥材飲片組(2g/kg)、LPS/KBr03+熊膽制藥材飲片組(2g/kg)。模型組及給藥組尾靜脈注射2 mg/kg LPS，同時腹腔注射200mg/kg KBr03制備小鼠晶狀體氧化應(yīng)激模型。給藥組在注射LPS/KBr03 3 h前及注射同時分別灌胃2次，模型與正常組灌胃同體積水溶液。LPS/KBr03給藥6 h后，乙醚麻醉條件下采取小鼠晶狀體放入離心管內(nèi)，進行晶狀體抗氧化能力指數(shù)(0RAC )和丙二醛(MDA)水平的測定。
[0014]ORAC測定方法:將96孔板每個孔中加入待測樣品溶液20 μ L，磷酸鉀緩沖液20 μ L，再加入氧自由基誘發(fā)劑AAPH 140 μ L至終濃度為12.8 mmol/L，最后添加熒光素鈉20 UL至終濃度為63 nmol/L，立即啟動反應(yīng)并迅速將酶標板置于預(yù)溫37 °C的熒光酶標儀中開始測定。采用動力學(xué)方式，每2 min測定一個點，至熒光強度衰減至零為止。ORAC值以lymol/L Trolox在熒光衰減曲線上對應(yīng)的保護積分面積作為標準對照計算。
[0015]MDA測定方法:將各組小鼠的眼球置于離心管內(nèi)，加入生理鹽水制成40 %的組織勻漿液。然后以3000 r/min離心10 min，取上清液并分別按照MDA檢測試劑盒說明操作進行MDA活性的測定。
[0016](3)利膽溶石實驗?zāi)Ｐ?
體外溶石作用觀察:將外形一致、重量相近的膽固醇、混合性、膽色素結(jié)石，隨機分組4，每組5粒，分別與原藥材飲片提取液和熊膽制藥材飲片提取液(濃度均為0.5g/mL)各5mL，置于37°C水浴箱內(nèi)的試管內(nèi)，每天更換溶液，記錄20天后溶石的重量。同時以生理鹽水，鵝去氧膽酸(100mg/mL)為對照。
[0017](4)降脂活血實驗?zāi)Ｐ?
①采用高血脂癥小鼠模型考察對小鼠血清總膽固醇及甘油三酯的影響:取健康小鼠60只，雌雄各半，隨機分為4組，每組10只，即:空白對照組；高脂血癥模型對照組；原藥材飲片組(5 g/kg);熊膽制藥材飲片組(5 g/kg)。禁食16 h后，各給藥組灌胃給藥，容量均為0.2 mL/10 go2 h后除空白對照組外，每鼠腹腔注射75%蛋黃乳液0.1 mL/10 g (取新鮮雞蛋黃用生理鹽水配成75%蛋黃乳液)，6 h后每組再次灌胃相應(yīng)溶媒或藥物，劑量同前，于注射蛋黃乳液14 h后眼眶靜脈取血、離心、分離血清，采用氧化酶法測定總膽固醇(TC)及甘油三酯(TG)含量。
[0018]②采用剪尾法觀察對小鼠出血時間和凝血時間的影響:小鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)48h后，應(yīng)用隨機數(shù)字表進行完全隨機化分組，分為4組，每組6只?？瞻讓φ战M(給同體積生理鹽水)，阿司匹林組，原藥材飲片組，熊膽制藥材飲片組，各組均采用灌胃給藥，連續(xù)給藥7天，每天灌胃一次，末次給藥30min后，將小鼠置于固定器中，使其尾部垂直，在小鼠尾尖約5mm處剪斷，自血液溢出開始記時，每隔30s用濾紙吸去溢出血液，自計時開始至無血液溢出(自然止血)為止的時間，即出血時間。
[0019](5)抗癌作用實驗?zāi)Ｐ?
①采用MTT法檢測體外抗癌活性:取處于對數(shù)生長期，狀態(tài)良好的人肝癌細胞株HepG2細胞，吹散成單細胞懸液，用血球計數(shù)板計數(shù)后，以IX 15個/孔接種于96孔板，培養(yǎng)24 h貼壁后，分別加入一定濃度梯度的藥材提取物，作用24 h后棄去培養(yǎng)基，每孔加含濃度為0.5 mg/mL的MTT的培養(yǎng)基，37°C繼續(xù)培養(yǎng)3 h.棄去培養(yǎng)液，每孔加入200 μ L DMSO溶解藍紫色的甲瓚顆粒，用酶標儀在波長570 nm下測定吸光度值(OD)。對照組細胞存活率設(shè)定為100%，其他處理組OD值與對照組相比較，計算各自腫瘤細胞的生長抑制率。
[0020]②采用小鼠H22肝癌移植瘤模型研究體內(nèi)抗癌作用:接種腫瘤細胞:取腹腔傳代6~8 d生長良好的乳白色腹水，用生理鹽水稀釋至lXlOVmL。取40只小鼠，雌雄各半，在小鼠右前肢腋下皮下注射接種0.2 mL腫瘤細胞懸液，制成實體瘤實驗動物模型。接種次日稱量，小鼠隨機分為4組，即陰性對照組(灌胃給予等體積的生理鹽水)、陽性對照組(灌胃給藥環(huán)磷酰胺30mg*kg 1,3 d給藥I次)、原飲片組和熊膽制飲片組(提取液灌胃給藥，劑量均為5g/kg)，連續(xù)給藥7 d，l次/d。末次給藥24 h后稱重，頸椎脫臼處死動物。剝離腫瘤組織，用濾紙吸干后稱瘤重，計算抑瘤率，抑瘤率= (1-實驗組瘤重/陰性對照組瘤重)X 100%。
[0021]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1熊膽制前后薄荷對干酵母所致大鼠發(fā)熱的體溫影響圖2熊膽制前后菊花對大腸桿菌內(nèi)毒素所致家兔發(fā)熱的體溫影響

【具體實施方式】
:
實施例1:
將12.5mL鮮熊膽汁兌入10mL水中混勻制成熊膽溶液，取金銀花藥材1kg，鋪展于托盤中，用熊膽溶液進行噴霧，然后放入烘箱烘烤，80°C，烘干Ih后取出，封存，即得熊膽制金銀花。
[0022]對炮制前后的金銀花藥材進行功效比較，取熊膽制后金銀花藥材各50g，水提取后噴霧干燥的粉末，制成2.5、5、10、50、100和200mg/mL系列濃度，進行體外對常見呼吸道細菌的抑制作用評價，結(jié)果見表1 (最小抑菌濃度MIC, mg/mL),從結(jié)果可知，除了白色念珠菌外，熊膽制金銀花的MIC均小于金銀花原藥材，故經(jīng)熊膽炮制后可以提高金銀花的清熱解毒功效。
[0023]表1熊膽制前后金銀花的體外抑菌效果MIC (mg/mL)

【權(quán)利要求】
1.一種中藥炮制方法，其特征在于，采用熊膽為基質(zhì)對中藥進行炮制； 將鮮熊膽汁或熊膽粉溶于水，對中藥材進行均勻噴灑，悶潤至熊膽溶液為中藥材充分吸收，然后根據(jù)中藥的材質(zhì)，進行相應(yīng)的干燥處理。
2.如權(quán)利要求1的方法，噴灑在中藥材上的熊膽汁或熊膽粉，以重量份計算，熊膽汁或熊膽粉為中藥材的0.01%-50%，優(yōu)選0.5-50%,更優(yōu)選2-10%。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，所述的相應(yīng)的干燥處理的條件為:花類藥材烘烤時間為I~2h，烘烤溫度為40~90°C ； 全草類藥材烘烤時間為I~3h，烘烤溫度為40~90°C ； 果實類藥材烘烤時間為3~4h，烘烤溫度為40~90°C ； 動物類藥材烘烤時間為I~4h，烘烤溫度為40~90°C ; 王煙處理后取出，或者地，視干燥程度在常溫下繼續(xù)晾干至水分合格，即得熊膽制中藥炮制品。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，具體的工藝步驟為:常溫下，將鮮熊膽汁按1:2~1:6(v/V)的比例加水稀釋，或熊膽粉按1:2(Tl:60 (g/mL)比例加水稀釋后獲得的溶液，將該溶液按5(T200 mL/kg用量均勻噴霧到待炮制的藥材上，悶潤至熊膽溶液為中藥材充分吸收后放入烘箱烘烤:其中，花類藥材烘烤時間為I~2h，烘烤溫度為60~80°C ;全草類藥材烘烤時間為I~3h，烘烤溫度為60~80°C ;果實類藥材烘烤時間為3~4h，烘烤溫度為70~900C ;動物類藥材烘烤時間為I~4h，烘烤溫度為50~60°C，烘干后取出，封存，即得熊膽制中藥炮制品。
5.如權(quán)利要求1的方法，能增強中藥材原有的清熱解毒、清肝明目、利膽溶石、降脂活血及抗癌功效。
6.如權(quán)利要求1的方法，對具有清熱解毒作用的中藥材進行炮制時，能夠增強其清熱解毒功效；所述的中藥材為金銀花、菊花、薄荷； 或者地，對具有清肝明目作用的中藥材進行炮制時，能夠增強其清肝明目功效；所述的中藥材為決明子、夏枯草、枸杞子； 或者地，對具有利膽溶石作用的中藥材進行炮制時，能夠增強其利膽溶石功效；所述的中藥材為金錢草、雞內(nèi)金； 或者地，對具有降脂活血作用的中藥材進行炮制時，能夠增強其降脂活血功效；所述的中藥材為山楂、葛根； 或者地，對具有抗癌作用的中藥材進行炮制時，能夠增強其抗癌功效；所述的中藥材為干蟾皮、虎眼萬年青。
7.—種熊膽制中藥炮制品，該中藥炮制品由權(quán)利要求1 一 7所述的任一項方法制備得IL
8.根據(jù)權(quán)利要求?_的得到的熊膽制中藥炮制品在制備藥品或食品中的用途。
【文檔編號】A61K36/488GK104069149SQ201310067780
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2013年3月25日 優(yōu)先權(quán)日:2013年3月25日
【發(fā)明者】王友智 申請人:北京智正方圓醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司