專利名稱：一種醋氯芬酸-plga微球水凝膠的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物的制備方法，具體涉及一種醋氯芬酸-PLGA微球凍干粉及醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠的制備方法。背景技術(shù)：
醋氯芬酸(Aceclofenac, ACF)是一種新型的強(qiáng)效非留體類抗炎藥(NSAIDs),具有消炎、鎮(zhèn)痛、解熱等作用，用于緩解類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨性關(guān)節(jié)炎和強(qiáng)直性脊柱炎等引起的炎癥和疼痛，對于扭傷、拉傷及其他軟組織損傷、手術(shù)后疼痛及腫脹也非常有效，還可用于其他疾病引起的疼痛。ACF是C0X-2中度選擇性抑制作用，與其他的NSAIDs相比較，具有治療作用強(qiáng)、不良反應(yīng)少的優(yōu)點(diǎn)。與雙氯芬酸、酮基布洛芬、吲哚美辛等比較更安全有效，但它仍有胃腸道刺激作用。為了使其藥物濃度平穩(wěn)，減少對胃的刺激性，延長藥物的治療作用和時間，降低不良反應(yīng)的發(fā)生率 ，方便患者服藥，人們從改變劑型及復(fù)方制劑等方面進(jìn)行了研究，如常用的劑型有普通片劑，但由于其半衰期短約僅為四小時，使血漿濃度短暫上升，很快又從血漿中消除，每天需要服用數(shù)次，且血藥濃度波動大療效不穩(wěn)定，長期服用的主要不良反應(yīng)為胃腸道刺激性較大，罕見消化道潰瘍和出血。為了克服所述缺陷將其制成一日一次的緩釋制劑，結(jié)果表明醋氯芬酸緩釋片能顯著改善RA患者的癥狀，降低血沉，有明顯的治療作用，其療效及安全性與醋氯芬酸片相近，但一天只需要服藥一次。另外還有膠囊劑，采用醋氯芬酸緩釋顆粒作為丸芯，然后再將其它藥物或者提取物進(jìn)行混合進(jìn)行二次包衣制成顆粒裝入膠囊內(nèi)，結(jié)果表明可緩慢釋放24h。另處還有微丸劑，使用粉沫包衣工藝制備的微丸，具有明示結(jié)腸定位釋藥的作用。雖然以上緩控釋制劑對減少不良反應(yīng)和血藥濃度波動大的情況有所緩解，但一天一次的給藥方式已經(jīng)不能滿足不斷提高的臨床需求，有待開發(fā)更安全、有效、方便的劑型和給藥方式。聚乳酸-羥基乙酸共聚物(簡稱PLGA)是生物可降解的功能高分子有機(jī)化合物，具有良好的生物相容性、無毒、良好的成囊和成膜的性能，被廣泛應(yīng)用于制藥領(lǐng)域。其降解速率隨著兩種化合物組成比例的不同而變化，因此可以根據(jù)藥物的性質(zhì)和用途選擇不同比例組合成的聚乳酸-羥基乙酸，制備成具有特定功效的微球制劑，所制得的PLGA微球的粒徑，從幾微米到幾百微米不等，可以用于注射和口服。PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物同樣具有良好的生物可降解性、生物相容性，表現(xiàn)出安全、無毒的特點(diǎn)，是可注射溫敏型水凝膠材料，其一定濃度的水溶液可表現(xiàn)出接近于人體生理溫度的相轉(zhuǎn)變特性，可在體溫條件下自發(fā)形成柔軟的凝膠，使藥物長期緩慢釋放，同時具有在體內(nèi)原位形成，可避免外科手術(shù)給患者帶來的痛苦，降低醫(yī)療費(fèi)用支出的優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于可注射生物緩控釋藥物傳遞系統(tǒng)。
發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)所存在的缺陷，本發(fā)明目的之一是集醋氯芬酸和PLGA的優(yōu)點(diǎn)于一體，提供了一種醋氯芬酸-PLGA微球凍干粉的制備方法；
本發(fā)明的另一個目的是提供一種醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠的制備方法。醋氯芬酸-PLGA微球凍干粉的制備方法如下所述:(1)取PLGA溶于二氯甲烷中，制得濃度為3 5%(m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸與PLGA重量之比為I 3:2 10的比例，將醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超聲至完全溶解，得油相，放于冰箱4°C中待用；
(2)將上述所得油相與濃度為I 2%(m/v)的預(yù)先降溫至4°C的PVA水溶液，按0.5 1.5:9 11的體積比加入到PVA水溶液，并以5000 1500rpm/min速度剪切5min，制得O/W乳液；
(3)如(2)所制得的乳液緩慢加入到重蒸餾水中，低速攪拌3h，使微球固化；
(4)離心收集步驟(3)中微球后，重蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥48h即得白色粉末狀醋氯芬酸-微球凍干粉。醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠的制備方法如下所述:
(1)取PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物并溶于重蒸餾水中，在4°C時放置48 72h，待共聚物充分溶脹、溶解，形成濃度為15 20% (m/v)的PLGA-PEG-PLGA溶液，4°C保存待用；
(2)使用前稱取醋氯芬酸-微球凍干粉，控溫在4-20°C、渦旋條件下將醋氯芬酸-微球凍干粉分次加入到的PLGA-PEG-PLGA水凝膠溶液中，待分散均勻即可。其中PLGA-PEG-PLGA 分子量 4000，PLGA 型號 75/25，PEG 分子量 1000。本發(fā)明的優(yōu)越之處在于:
1、所形成種醋氯芬酸-PLGA微球的粒徑3.95±0.97 μ m，粒徑較小且分布較均勻，符合混懸液注射要求(10版藥典)。2、體外釋放結(jié)果顯示，醋氯芬酸微球7天可緩慢釋放80%左右，與醋氯芬酸傳統(tǒng)制劑相比較，明顯延長了釋放時間，由此可克服醋氯芬酸由于連續(xù)、反復(fù)給藥所造成的胃腸道不良反應(yīng)、為更好的應(yīng)用于臨床提供一定的理論依據(jù)。3、微球所用載體PLGA具有生物相容性好、生物可降解的優(yōu)點(diǎn)，在體內(nèi)參與三羧酸循環(huán)，最終降解成二氧化碳和水，沒有任何毒副作用，生物安全性高。4、所制備的水凝膠的Tgel (溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變溫度)為30±2°C，表現(xiàn)出室溫溶膠、體溫凝膠的可注射水凝膠理想特性。5、制備成水凝膠的優(yōu)勢:克服醋了氯芬酸-微球體外突釋較嚴(yán)重(Id內(nèi)釋放37%)的缺點(diǎn)，微球與水凝膠復(fù)合，體外釋放結(jié)果顯示:ld釋放小于10%，可緩慢釋放達(dá)10d，緩釋效果明顯。3、醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠所用材料PLGA-PEG-PLGA具有生物可降解、生物相容性好的優(yōu)點(diǎn)，沒有任何毒副作用，生物安全性高。

附圖1為光學(xué)顯微鏡下觀察到的實(shí)施例1的微球凍干粉。附圖2為體外累積釋放曲線。附圖3A為各制劑對大鼠左后足原發(fā)性腫脹結(jié)果曲線圖(n=10)。附圖3B為各制劑對大鼠左后足繼發(fā)性腫脹結(jié)果曲線圖。
具體實(shí)施方式

本發(fā)明所涉及到的試劑均可以在市場上買到。實(shí)施例1:①精密稱取PLGA溶于定量二氯甲烷中，制得濃度為3% (m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸與PLGA的重量比為3:10的比例，將醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超聲至完全溶解，制得油相；②將所得的油相與濃度為1.5% (m/v)的PVA水溶液，按1:10的體積比加入到PVA水溶液，并以5000rpm/min速度剪切初乳液5min，制得Ο/W乳液將上述所形成的乳液緩慢加入到重蒸餾水中，低速攪拌3h，使微球固化最后離心收集步驟③中的微球，重蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥48h即得白色粉末狀微球。使用前⑤精密稱取步驟④中的微球凍干粉20mg，于4 20°C時不斷攪拌的情況下，少量多次加入到15% (m/v)的PLGA-PEG-PLGA水溶液中，分散均勻即得種醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠。水凝膠相變溫度:27°C，載藥量3.37mg/ml，包封率73.01% (m/m)。實(shí)施例2:①精密稱取PLGA溶于定量二氯甲烷中，制得濃度為4% (m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸與PLGA的重量比為2:5的比例，將醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超聲至完全溶解，制得油相；②將所制得的油相與濃度為1.5% (m/v)的PVA水溶液，按1:10的體積比加入到PVA水溶液，并以5000rpm/min速度剪切初乳液5min，制得0/W乳液；③將上述所形成乳液緩慢加入到重蒸餾水中，低速攪拌3h，使微球固化；④最后離心收集步驟③中的微球，重蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥48h即得白色粉末狀微球。⑤精密稱取步驟④中的微球凍干粉25mg，于保溫4 20°C不斷攪拌的情況下，少量多次加入到20%的(m/v)PLGA-PEG-PLGA水溶液中，分散均勻即得醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠。水凝膠相變溫度:30°C，載藥量5.88mg/ml，包封率82.36% (m/m)。實(shí)施例3:①精密稱取PLGA溶于定量二氯甲烷中，制得濃度為5% (m/v)的PLGA溶液，再按醋氯芬酸與PLGA的重量比為3:10的比例，將醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超聲至完全溶解，制得油相；②將所得的油相與濃度為2% (m/v)的PVA水溶液，按1:10的體積比加入到PVA水溶液，并以10000rpm/min速度剪切初乳液5min，制得0/W乳液；③將上述所形成的乳液緩慢加入到重蒸餾水中`，低速攪拌3h，使微球固化；④最后離心收集步驟③中的微球，重蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥48h即得白色粉末狀微球。⑤精密稱取步驟④中的微球凍干粉25mg，于保溫4 20°C不斷攪拌的情況下，少量多次加入到15%的(m/v)PLGA-PEG-PLGA水溶液中，分散均勻即得醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠。水凝膠相變溫度:30°C，載藥量4.06mg/ml,包封率70.44% (m/m)。微球水凝膠制備工藝的研究:微球水凝膠制備主要分微球制備和水凝膠制備兩部分，其中微球制備過程較復(fù)雜其影響因素較多，并且微球的制備對水凝膠的制備基本沒有影響，因此本申請進(jìn)行了分別考察。(—)微球制備工藝考察:微球的制備受到多種因素的影響，這些因素共同制約著所制得的微球的質(zhì)量，因此通過選擇非常具有代表性的考察指標(biāo)——包封率和載藥量，作為微球質(zhì)量評價的參考指標(biāo)，對所制得的PLGA微球進(jìn)行影響因素的考察，具有非常重大的意義。本發(fā)明選取PLGA種類、PLGA濃度、PVA濃度、初乳與PVA比例、藥物與PLGA重量之比以及制備初乳的條件作為考察因素。1、PLGA種類對微球包封率和載藥量的影響:由于聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)由兩種單體一乳酸和羥基乙酸隨機(jī)聚合而成，不同的單體比例可以制備出不同類型的PLGA，其物理狀態(tài)、化學(xué)性質(zhì)以及降解程度皆隨著組成單體比例不同而不同。本申請選用了以下的組成:
LA:GA = 50:50 ；LA:GA = 75:25 ；LA:GA = 85:15在PLGA濃度、PVA濃度、初乳與PVA水溶液比例、醋氯芬酸與PLGA的重量之比及反應(yīng)條件一定的情況下，PLGA種類對微球質(zhì)量影響考察結(jié)果見表醋氯芬酸-PLGAl。表格I考察PLGA種類的各因素及水平
權(quán)利要求
1.一種醋氯芬酸-PLGA微球的制備方法，其特征在于如下所述: 步驟一，取PLGA溶于二氯甲烷中，制得質(zhì)量體積濃度為3 5 %的PLGA溶液，再按醋氯芬酸與PLGA質(zhì)量比為I 3:4 6的比例，將醋氯芬酸加入到PLGA溶液中，超聲至完全溶解，制得油相，放于冰箱4°C中待用； 步驟二，將上述所得油相與預(yù)先降溫至4°C且質(zhì)量體積濃度為I 2%的PVA水溶液，按0.5 1.5:9 11的體積比加入到PVA水溶液，并以5000 1500rpm/min速度剪切乳液5min，制得Ο/W乳液； 步驟三，上述所制得的乳液緩慢加入到重蒸餾水中，繼續(xù)低速攪拌一段時間使微球固化； 步驟四，離心收集步驟(3)中微球后，重蒸餾水洗滌3次，冷凍干燥48h即得白色粉醋氯芬酸-微球凍干粉。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠的制備方法，其特征在于: 步驟一:取PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物溶于重蒸餾水，于4°C時放置48 72h，待其充分溶脹溶解，形成質(zhì)量體積濃度為15 20%的PLGA-PEG-PLGA溶液，4°C保存待用；步驟二:取醋氯芬酸-微球凍干粉，在4-20°C、渦旋攪拌條件下將醋氯芬酸-微球凍干粉分次加入到的PLGA-PEG-PLGA 水凝膠溶液中，待分散均勻即可。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠的制備方法，首先制備醋氯芬酸-PLGA微球，然后取PLGA-PEG-PLGA三嵌段共聚物制備醋氯芬酸-PLGA微球水凝膠。本發(fā)明的優(yōu)越之處在于微球粒徑較小且分布較均勻，符合注射要求。與醋氯芬酸傳統(tǒng)制劑相比較，明顯延長了釋放時間。微球所用載體PLGA具有生物相容性好、生物可降解的優(yōu)點(diǎn)，沒有任何毒副作用。制備成水凝膠的優(yōu)勢克服醋了氯芬酸-微球體外突釋較嚴(yán)重(1d內(nèi)釋放37%)的缺點(diǎn)，微球與水凝膠復(fù)合，體外釋放結(jié)果顯示1d釋放小于10%，可緩慢釋放達(dá)10d，緩釋效果明顯。
文檔編號A61K47/34GK103110593SQ20131004620
公開日2013年5月22日 申請日期2013年2月6日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月6日
發(fā)明者胡玉榮, 趙宏巧, 劉洋, 郭新紅, 耿鑫, 王靜, 李春明, 黃佳妮 申請人:鄭州大學(xué)