使用葡甲胺穩(wěn)定的依那西普制劑的制作方法【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明為一種穩(wěn)定水性藥物組合物，其包含依那西普；和用以阻滯所述制劑中依那西普的不穩(wěn)定性、聚集和/或片段化的穩(wěn)定成分，所述穩(wěn)定成分由以下至少一種組成：(a)葡甲胺；或(b)葡甲胺連同蔗糖；或(c)與氯化鈉組合的葡甲胺；或(d)與氯化鈉和蔗糖組合的葡甲胺。以下討論中所用的各種技術(shù)術(shù)語(yǔ)“定義”部分被限定且貫穿本說(shuō)明書(shū)的其余部分。本發(fā)明所述的穩(wěn)定的依那西普制劑引起長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性?！緦?zhuān)利說(shuō)明】使用葡甲胺穩(wěn)定的依那西普制劑【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明涉及用于依那西普的長(zhǎng)期儲(chǔ)存的使用葡甲胺穩(wěn)定的水性藥物組合物，制造所述組合物的方法，其給藥方法和含有其的試劑盒。本發(fā)明包括不需要精氨酸用于穩(wěn)定的依那西普制劑?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]多肽在其使用之前通常必須被儲(chǔ)存。當(dāng)被儲(chǔ)存一段時(shí)期時(shí)，多肽在溶液中通常不穩(wěn)定(Manning等人，1989,Pharm.Res.6:903-918)。為延長(zhǎng)其保質(zhì)期，已經(jīng)開(kāi)發(fā)了另外的處理步驟，諸如干燥，如冷凍干燥。然而，凍干的藥物組合物較不方便使用。[0003]為改善多肽穩(wěn)定性的典型實(shí)踐可通過(guò)改變所述制劑元素的濃度，或通過(guò)添加賦形劑以改性所述制劑來(lái)處理(參見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利第5580856和6171586號(hào))。然而，添加劑的使用仍然可導(dǎo)致失活的多肽。另外，在冷凍干燥的情況下，再水化步驟可通過(guò)，例如，聚集或變性導(dǎo)致所述多肽的失活(Hora等人，1992，Pharm.Res.,9:33-36;Liu等人，1991，Biotechnol.Bioeng，37:177-184)。多肽的聚集是不期望的，因?yàn)槠淇蓪?dǎo)致免疫原性(Cleland等人,1993,Crit.Rev.TherapeuticDrugCarrierSystems,10:307-377;和Robbins等人，1987，Diabetes,36:838-845)。[0004]用以改善多肽穩(wěn)定性的另一個(gè)途徑是使用在特定濃度的L-精氨酸(美國(guó)專(zhuān)利第7，648，702號(hào))。[0005]在使用前存儲(chǔ)長(zhǎng)達(dá)兩年的一種多肽是依那西普(Enbrel?，Immunex公司)，其為由連接至人IgGl的Fe部分的人75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體(TNFR)的胞外配體結(jié)合部分組成的二聚體融合多肽。其由934個(gè)氨基酸組成，并具有近150千道爾頓的表觀分子量(PhysiciansDeskReference,2002,MedicalEconomics公司)。依那西普的Fe組分含有人IgGl的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域2(CH2)，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域3(CH3)和鉸鏈區(qū)，但無(wú)重鏈恒定結(jié)構(gòu)域I(CHl)。Fe結(jié)構(gòu)域可含有一個(gè)或所有以上描述的結(jié)構(gòu)域。依那西普通常通過(guò)在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中的重組DNA技術(shù)來(lái)生產(chǎn)。[0006]本發(fā)明提供允許其長(zhǎng)期儲(chǔ)存的依那西普新型穩(wěn)定液體制劑?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0007]本發(fā)明為一種依那西普水性穩(wěn)定制劑，其包含依那西普；和用以阻滯所述制劑中依那西普的不穩(wěn)定性、聚集和/或片段化的穩(wěn)定成分，所述穩(wěn)定成分由以下至少一種組成:(a)葡甲胺；或(b)葡甲胺連同蔗糖；或(C)葡甲胺連同氯化鈉；或(d)葡甲胺連同氯化鈉和蔗糖。[0008]以下討論中所用的各種技術(shù)術(shù)語(yǔ)在以下題為“定義”的部分被限定且貫穿本說(shuō)明書(shū)的其余部分。[0009]本發(fā)明所述穩(wěn)定的依那西普制劑引起以至少以下一點(diǎn)為特征的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:(I)在M3或T2或T4的SEC分析為:大于約90%的單體含量；小于約3wt%的聚集體含量；以及小于約5wt%的片段3含量；和⑵在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約3wt.%;由HIC色譜圖的峰2代表的組分的量為大于80wt%；以及由HIC色譜圖的峰3表示的組分的量小于約20wt。[0010]在所述穩(wěn)定制劑的優(yōu)選方面，所述制劑引起以以下為特征的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰2代表的組分的量為大于或等于約95wt%;且其中，如果峰3存在于所述HIC色譜圖，由峰3代表的組分的量小于或等于約3wt%。[0011]如以上概括的穩(wěn)定的依那西普制劑，任選地并優(yōu)選地，不含精氨酸，或基本不含精氨酸。[0012]本發(fā)明所述制劑具有優(yōu)異穩(wěn)定性，如在5°C下存儲(chǔ)一、二或三個(gè)月后進(jìn)行的SEC(排阻色譜)和HIC(疏水作用色譜)分析所測(cè)定。這些制劑堪比或優(yōu)于其中精氨酸為必需組分的市售依那西普制劑。因此本發(fā)明還涉及如上歸納的穩(wěn)定的依那西普的制劑，其不含精氨酸或基本不含精氨酸，且其中所述組合物在M3或T2或T4評(píng)價(jià)，引起滿足以下標(biāo)準(zhǔn)之一或兩者的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:(A)堪比或優(yōu)于在商標(biāo)?Enbre丨下銷(xiāo)售的市售依那西普的穩(wěn)定性，這通過(guò)(i)在所述組合物(如本說(shuō)明書(shū)中所定義)中的聚集體、單體和片段3的量的SEC分析，和(ii)對(duì)應(yīng)HIC色譜圖(如本說(shuō)明書(shū)所定義)的峰1、2和3的所述組合物中的材料的量的HIC分析來(lái)測(cè)量；和⑶其中⑴峰3不存在或基本不存在和(ii)峰2代表多于約95被％組合物的HIC色譜圖；基本沒(méi)有對(duì)應(yīng)于聚集體的峰的SEC色譜圖；和其中單體含量代表至少約95wt%所述組合物的SEC色譜圖。[0013]在一個(gè)優(yōu)選的方面，本發(fā)明的制劑包含約25至75mg/ml的依那西普，含量多至約150mM的氯化鈉,約I至約30mM的磷酸鈉；和約O至5wt%的鹿糖或海藻糖或其組合；其中所述組合物具有約6.0至約6.6的pH，且其中所述組合物以在M3或T2或T4的SEC分析為特征，其中:單體含量多于約85wt%;聚集體含量少于約3wt%，且片段3含量少于約Swt%。滿足這些分析標(biāo)準(zhǔn)的制劑不需要精氨酸。[0014]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述穩(wěn)定的依那西普制劑進(jìn)一步以以下為特征:(a)在M3或T2或T4的SEC分析為大于約90wt%的單體含量；和小于約3wt%的聚集體含量；和(b)在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約4wt%；由HIC色譜圖峰2代表的組分的量為大于80wt%;以及由HIC色譜圖的峰3代表的組分的量小于約20wt%的；且其中所述制劑不含或基本不含精氨酸。[0015]本發(fā)明所述依那西普組合物進(jìn)一步給予提供含有可接受水平的顯微鏡下才可見(jiàn)的顆粒的制劑的能力。因此，本發(fā)明還涉及穩(wěn)定的依那西普制劑，其在M3或T2或T4每!111平均具有不多于約10000個(gè)尺寸大于5μm的顯微鏡下才可見(jiàn)的顆粒。[0016]本發(fā)明所述的穩(wěn)定的依那西普組合物進(jìn)一步以以下為特征:(a)在‘或^或^的SEC分析為大于約90wt%的單體含量；和小于約3?1%的聚集體含量的；和(b)在‘或^或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約3wt%;由HIC色譜圖峰2代表的組分的量為大于80wt%;以及由HIC色譜圖的峰3代表的組分的量小于約20wt%，且其中所述制劑不含或基本不含精氨酸。[0017]所述制劑的穩(wěn)定性可進(jìn)一步以以下為特征:所述組合物，任選地不含或基本不含精氨酸，表現(xiàn)以下在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約I%;由HIC色譜圖的峰2代表的組分的量為大于約95wt%;且由HIC色譜圖的峰3代表的組分的量小于約3wt%。滿足這些分析標(biāo)準(zhǔn)的制劑不需要精氨酸。[0018]優(yōu)選地不含或基本不含精氨酸的本發(fā)明優(yōu)選的穩(wěn)定的組合物表現(xiàn)出以下在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約2%，或優(yōu)選地小于約1%;由HIC色譜圖的峰2表示的組分的量大于約95wt%，優(yōu)選大于約97%;且由HIC色譜圖的峰3代表的組分的量小于約lwt%,優(yōu)選O至1%。[0019]不同于以含精氨酸的制劑中提供的市售依那西普，我們出乎意料的發(fā)現(xiàn)，鑒于美國(guó)專(zhuān)利第7648702號(hào)，本文所描述和示例的依那西普的制劑實(shí)施方案不需要精氨酸用于長(zhǎng)期穩(wěn)定，盡管如果需要仍然可以加入精氨酸。提供不使用精氨酸穩(wěn)定的依那西普制劑的能力，通過(guò)提供患者和醫(yī)療提供者與需要精氨酸用以穩(wěn)定的目前商業(yè)依那西普制劑(即，Enbrel?)相比較可在較低成本獲得的依那西普替代制劑，表現(xiàn)出對(duì)于醫(yī)療系統(tǒng)的潛在顯著利益。[0020]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“不穩(wěn)定性”或類(lèi)似術(shù)語(yǔ)表示依那西普單體在儲(chǔ)存中進(jìn)行各種不期望的轉(zhuǎn)化的趨勢(shì)。此種轉(zhuǎn)化包括低聚物和高分子量聚集體(下文術(shù)語(yǔ)“聚集體”)的形成，其中多個(gè)基本完整的依那西普單體通過(guò)各種非共價(jià)鍵吸引(例如，靜電相互作用)互相不可逆結(jié)合。在儲(chǔ)存中不期望的轉(zhuǎn)化還可包括所述依那西普單體降解成更小的片段和/或斷開(kāi)的形式。理想地，依那西普的制劑應(yīng)盡可能最小化所述制劑在儲(chǔ)存中導(dǎo)致依那西普的聚集體、錯(cuò)折疊蛋白、低聚物和/或片段形成的趨勢(shì)。減少不需要的聚集體或片段形成的能力帶來(lái)的重要利益為所述藥物潛在毒性和/或免疫原性的減小。[0021]本發(fā)明所述的依那西普制劑，其任選地且優(yōu)選地不含或基本上不含精氨酸。所述術(shù)語(yǔ)“基本上不含精氨酸”意在指精氨酸，即使存在，也不有助于所述制劑中依那西普單體的穩(wěn)定至如此程度以致本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)判斷其存在從穩(wěn)定的角度而言是有利或必要的。[0022]這些和其它方面將從以下描述中變得明顯，盡管在不背離本公開(kāi)內(nèi)容的新概念的精神和范圍的情況下可進(jìn)行其中的變化和修飾。[0023]應(yīng)當(dāng)理解的是前述通用描述和以下具體描述僅為示例性和解釋性的且并不限制要求保護(hù)的本發(fā)明。[0024]發(fā)明詳述[0025]現(xiàn)詳細(xì)描述本發(fā)明的各種實(shí)施方案。如說(shuō)明書(shū)所用并貫穿權(quán)利要求，“一個(gè)(a)”，“一個(gè)(an)”，和“所述(the)”的含義包括復(fù)數(shù)引用，除非上下文中清楚地另有指示。同樣，如說(shuō)明書(shū)所用并貫穿權(quán)利要求，“在……之中(in)”的含義包括“在……之中(in)”和“在……之上(on)”，除非上下文清楚地另有指示。另外，此說(shuō)明書(shū)中所用的一些術(shù)語(yǔ)在以下更具體地定義。[0026]定義[0027]在此說(shuō)明書(shū)中所用的術(shù)語(yǔ)通常在本發(fā)明的上下文之內(nèi)，以及使用各個(gè)術(shù)語(yǔ)的特定上下文中具有其領(lǐng)域內(nèi)的普通含義。用來(lái)描述本發(fā)明的特定術(shù)語(yǔ)在下文或者在說(shuō)明書(shū)的其它地方進(jìn)行討論，以向從業(yè)者提供關(guān)于本發(fā)明的描述的另外指導(dǎo)。提供了特定術(shù)語(yǔ)的同義詞。一個(gè)或更多同義詞的敘述不排除其它同義詞的使用。在包括本文所討論的任意術(shù)語(yǔ)的實(shí)例的此說(shuō)明書(shū)中任何位置實(shí)例的使用僅為說(shuō)明性的，而絕不限制本發(fā)明或任意示例性術(shù)語(yǔ)的范圍和含義。本發(fā)明不限于在本說(shuō)明書(shū)中給出的各種實(shí)施方案。[0028]除非另有定義，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與此發(fā)明屬于的領(lǐng)域的普通技術(shù)人員之一通常理解的相同的含義。在沖突的情況下，將以本文件，包括定義為準(zhǔn)。[0029]“左右(around)”,“約(about)”或“近似(approximately)”一般意思是給定值或范圍的20%以?xún)?nèi)，10%以?xún)?nèi)，5，4，3，2或1%以?xún)?nèi)。給定的數(shù)量是近似的，意味著所述術(shù)語(yǔ)“左右(around)”,“約(about)”或“近似(approximately)”如果未明確陳述可進(jìn)行推斷。[0030]所述術(shù)語(yǔ)“依那西普”或“依那西普單體”或“單體”與Enbrel?同義。其指一種多肽，是由連接至人IgGl的Fe部分的人75千道爾頓(p75)的腫瘤壞死因子受體(TNFR)的胞外配體結(jié)合部分組成的二聚融合多肽。其由934個(gè)氨基酸組成，并具有近150千道爾頓的表觀分子量。出于本申請(qǐng)的目的，所述術(shù)語(yǔ)“依那西普”還包含具有沒(méi)有顯著影響依那西普的功能、效力、或親合力的在氨基酸結(jié)構(gòu)中的較小修改(包括氨基酸的缺失，添加和/或取代)的依那西普。所述術(shù)語(yǔ)“依那西普”包含的Enbrel?的所有形式和制劑，包括但不限于濃縮制劑，可注射的即用制劑；與水、醇、和/或其它成分重新組成的制劑，以及其它。[0031]所述術(shù)語(yǔ)“糖”指單糖、二糖和多糖。糖的實(shí)例包括但不限于蔗糖、海藻糖、右旋糖及其它。[0032]所述術(shù)語(yǔ)“葡甲胺”指具有化學(xué)式H3NHCH2(CHOH)4CH2OH的化合物，以成為1_脫氧-1-甲胺基山梨醇；N-甲基-d-葡糖胺；和1-脫氧-1-甲氨基-D-葡萄糖醇。[0033]所述術(shù)語(yǔ)“甘露糖基甘油酸酯”、“甘露糖基乳酸酯”、“甘露糖基羥基乙酸酯”和“二甘油磷酸酯”為領(lǐng)域內(nèi)熟知的且具有其通常接受的含義。以下參考文獻(xiàn)描述詳細(xì)描述這些化合物:Faria等人，CarbohydrateRes.2008,343:3025-3033；Borges等人，ExtremophiIes2002,6:209-216；Faria等人，ChemBioChem2003,4:734-741；Sawangwan等人，Biotechnol.J.2010，5:187-191;和Pais等人，J.Mol.Biol.2009，394:237-250。本申請(qǐng)通過(guò)引用并入這些參考文獻(xiàn)中含義的這些化合物的描述。[0034]所述術(shù)語(yǔ)“多元醇”指含有多個(gè)羥基基團(tuán)的醇。多元醇的實(shí)例包括但不限于甘露醇、山梨醇及其它。[0035]所述術(shù)語(yǔ)“長(zhǎng)期儲(chǔ)存”應(yīng)理解為意味著所述藥物組合物可儲(chǔ)存三個(gè)月或更長(zhǎng)，六個(gè)月或更長(zhǎng)，以及優(yōu)選地一年或更長(zhǎng)。長(zhǎng)期儲(chǔ)存還應(yīng)理解為意味著所述藥物組合物作為液體在2-8°C儲(chǔ)存，或者例如在_20°C或更低溫凍結(jié)。還可想到所述組合物可被凍結(jié)和解凍多于一次。[0036]關(guān)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存所述術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定(stable)”或“穩(wěn)定的(stabilized)”應(yīng)理解為意味著所述藥物組合物中含有的依那西普相對(duì)在儲(chǔ)存開(kāi)始所述組合物的活性，不損失其活性多于20%，或更優(yōu)選地15%，或甚至更優(yōu)選10%，以及最優(yōu)選5%。[0037]所述術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”包括但不限于人類(lèi)。[0038]所述術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的載體”指無(wú)毒的固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包封材料、制劑輔助劑或任意常規(guī)類(lèi)型的賦形劑。藥學(xué)上可接受的載體在所采用的劑量和濃度下對(duì)受體無(wú)毒，且與所述制劑的其他成分相容。[0039]所述術(shù)語(yǔ)“組合物”指通常含有載體，諸如本領(lǐng)域內(nèi)常規(guī)且適合進(jìn)入受試者內(nèi)給予用于治療、診斷或預(yù)防目的藥學(xué)上可接受載體或賦形劑的混合物。其可包括細(xì)胞培養(yǎng)，其中所述多肽或多核苷酸存在于所述細(xì)胞內(nèi)或所述培養(yǎng)基內(nèi)。例如，用于口服給予的組合物可形成溶液劑、混懸劑、片劑、丸劑、膠囊劑、緩釋制劑、口腔沖洗劑或粉末劑。[0040]所述術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”和“制劑”可交換使用。[0041]所述術(shù)語(yǔ)“治療”指用于哺乳動(dòng)物中疾病的治療藥的任意給予或應(yīng)用，并包括抑制所述疾病、控制其發(fā)展、減輕所述疾病，例如通過(guò)引起消退，或恢復(fù)或修復(fù)損失、缺失或缺陷功能；或刺激低效率過(guò)程。所述術(shù)語(yǔ)包括獲得期望的藥學(xué)的和/或生理學(xué)的效果，覆蓋哺乳動(dòng)物中病理學(xué)病況或不適的任意治療。所述效果，在完全或部分預(yù)防不適或其癥狀方面可為預(yù)防性的，和/或在部分或完全治療不適和/或歸因于所述不適的不良影響方面可為治療性的。其包括:(1)在對(duì)所述不適有傾向但尚未有癥狀的受試者中預(yù)防所述不適發(fā)生或復(fù)發(fā)，(2)抑制所述不適諸如控制其發(fā)展，(3)停止或終止所述疾病或至少其相關(guān)癥狀，以使得所述宿主不在遭受所述不適或其癥狀，諸如引起所述不適或其病癥的消退，例如，通過(guò)恢復(fù)或修復(fù)損失、缺失或缺陷功能，或刺激低效率過(guò)程，或者(4)減輕、緩和或改善所述不適或與其相關(guān)的癥狀，其中改善用于廣義以指至少一個(gè)參數(shù)諸如炎癥、疼痛和/或腫瘤尺寸量級(jí)的減小。[0042]所述術(shù)語(yǔ)“疾病”指需要醫(yī)藥介入或?qū)τ谄溽t(yī)藥介入是期望的任意病況、感染、不適或癥狀。這種醫(yī)藥介入可包括治療、診斷和/或預(yù)防。[0043]所述術(shù)語(yǔ)“治療上有效量”指當(dāng)向活體受試者給予時(shí)在所述活體受試者上達(dá)到期望效果的量。例如，用于向活體受試者給予的治療有效量的本發(fā)明所述多肽為預(yù)防和/或治療整合素ανβ3_介導(dǎo)疾病的量。該確切量將取決于所述治療的目的，且由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用已知技術(shù)將可確定。如本領(lǐng)域內(nèi)已知,對(duì)系統(tǒng)相對(duì)局部遞送、年齡、體重、總體健康、性別、飲食、給予時(shí)間、藥物相互作用和所述病況的嚴(yán)重程度的調(diào)節(jié)是必須的，且由本領(lǐng)域技術(shù)人員使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)可確定。[0044]所述術(shù)語(yǔ)“1\”指依那西普制劑已在40°C被儲(chǔ)存約一周的時(shí)間點(diǎn)。[0045]所述術(shù)語(yǔ)“T2”指依那西普制劑已在40°C被儲(chǔ)存約兩周的時(shí)間點(diǎn)。[0046]所述術(shù)語(yǔ)“T4”指依那西普制劑已在40°C被儲(chǔ)存約四周的時(shí)間點(diǎn)。[0047]所述術(shù)語(yǔ)“M3”總共指三個(gè)時(shí)間點(diǎn)，具體指對(duì)依那西普制劑在5°C的存儲(chǔ)溫度下在約一個(gè)、約兩個(gè)或約三個(gè)月的儲(chǔ)存時(shí)間后觀察到的分析結(jié)果。例如，本文對(duì)在M3進(jìn)行的分析的引用應(yīng)理解為意味著這種分析在依那西普制劑已被儲(chǔ)存選自約一個(gè)、約兩個(gè)或約三個(gè)月的時(shí)間的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行。因此，如果在對(duì)應(yīng)至少一個(gè)以下儲(chǔ)存持續(xù)時(shí)間:在5°C儲(chǔ)存近似一個(gè)月、近似兩個(gè)月或近似三個(gè)月的的時(shí)間點(diǎn)觀察到所需值，則滿足本文的要求即在M3依那西普制劑引起特定分析值或測(cè)量值。[0048]所述術(shù)語(yǔ)“峰1”、“峰2”和“峰3”當(dāng)在本文與HIC色譜結(jié)果的討論結(jié)合使用時(shí)，指在美國(guó)專(zhuān)利7,294，481中所討論的相同的峰1、2和3?！揪唧w實(shí)施方式】[0049]當(dāng)含有依那西普(Enbre丨?)，包括依那西普的水性和凍干制劑的藥物組合物被長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)，依那西普的活性可能會(huì)因……通過(guò)聚集和/或化學(xué)降解包括片段形成的不穩(wěn)定而丟失或減少。因此，本發(fā)明提供了允許依那西普穩(wěn)定長(zhǎng)期儲(chǔ)存的依那西普的水性制劑的幾個(gè)實(shí)施方案，使得依那西普，不管以液體還是凍結(jié)狀態(tài)，在存儲(chǔ)的過(guò)程中均是穩(wěn)定的。所提供的制劑包括但不限于不含精氨酸且不需要任何額外步驟諸如再水化的制劑。[0050]以下更詳細(xì)地解釋這些實(shí)施方案。[0051]依那西普[0052]本發(fā)明的所有組合物均包含依那西普(Enbrel?)。如本申請(qǐng)的背景部分所解釋?zhuān)滥俏髌諡橛蛇B接至人IgGl的Fe部分的人75千道爾頓(p75)腫瘤壞死因子受體的胞外配體結(jié)合部分組成的二聚體融合多肽。依那西普由934個(gè)氨基酸組成。所述依那西普的Fe組分含有人IgGl的重鏈恒定結(jié)構(gòu)域2(CH2)，重鏈恒定結(jié)構(gòu)域3(CH3)和鉸鏈區(qū)。Fe結(jié)構(gòu)域可含有一個(gè)或所有以上描述的結(jié)構(gòu)域。[0053]在本發(fā)明的藥物組合物中適于儲(chǔ)存的依那西普可由表達(dá)依那西普的活體宿主細(xì)胞諸如抗體情況下的雜交瘤，或在融合多肽或抗體情況下經(jīng)基因工程以產(chǎn)生多肽的的宿主細(xì)胞來(lái)生產(chǎn)?；蚬こ碳?xì)胞方法以產(chǎn)生多肽為本領(lǐng)域熟知。參見(jiàn)例如，Ausubel等人.，eds.(1990),CurrentProtocolsinMolecularBiology(Wiley,紐約)。這種方法包括將編碼且允許所述多肽表達(dá)的核苷酸引入活體宿主細(xì)胞。這些宿主細(xì)胞可為細(xì)菌細(xì)胞、真菌細(xì)胞或優(yōu)選地培養(yǎng)生長(zhǎng)的動(dòng)物細(xì)胞。細(xì)菌宿主細(xì)胞包括但不限于大腸桿菌細(xì)胞。合適的大腸桿菌菌株的實(shí)例包括:HB101、DH5.alpha、GM2929、JM109、KW251、NM538、NM539和任意不能裂解外來(lái)DNA的大腸桿菌菌株?？梢允褂玫恼婢拗骷?xì)胞包括但不限于釀酒酵母、畢赤酵母和曲霉菌屬細(xì)胞?？梢允褂玫膭?dòng)物細(xì)胞系的一些實(shí)例為CH0、VER0、BHK、HeLa、Cos、MDCK、293、3T3和W138。新動(dòng)物細(xì)胞系可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法(例如，通過(guò)轉(zhuǎn)化、病毒感染和/或選擇)來(lái)建立。任選地，依那西普可由所述宿主細(xì)胞分泌至培養(yǎng)基。[0054]所表達(dá)的依那西普的純化可通過(guò)任意標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行。當(dāng)細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生依那西普時(shí)，該顆粒片段被移除例如通過(guò)離心或超濾。當(dāng)依那西普被分泌入所述培養(yǎng)基時(shí)，這種表達(dá)系統(tǒng)的上清液可首先使用標(biāo)準(zhǔn)多肽濃縮過(guò)濾器進(jìn)行濃縮。還可加入蛋白酶抑制劑來(lái)抑制蛋白水解，且可包括抗生素以預(yù)防微生物的生長(zhǎng)。[0055]依那西普可使用例如羥基磷灰石色譜、凝膠電泳、透析和親和色譜、以及已知或有待發(fā)現(xiàn)的純化技術(shù)，包括但不限于蛋白A色譜、離子交換柱分餾、乙醇沉淀、反相HPLC、硅色譜、肝素SEPHAROSET?色譜法、陰離子或陽(yáng)離子交換樹(shù)脂色譜(諸如聚天冬氨酸柱)、層析聚焦、SDS-PAGE和硫酸銨沉淀的任意結(jié)合來(lái)純化。[0056]使用離子型多元醇衍生物賦形劑穩(wěn)定的依那西普[0057]本發(fā)明提供包含依那西普和離子型多元醇衍生物賦形劑的穩(wěn)定水性制劑，其中所述賦形劑選自由葡甲胺(N-甲基D-葡糖胺)、甘露糖基甘油酸酯、甘露糖基乳酸酯、甘露糖基羥基乙酸酯和二甘油磷酸酯組成的組。[0058]優(yōu)選地，在此實(shí)施方案或方面，本發(fā)明為一種依那西普水性穩(wěn)定制劑，其包含依那西普；和用以阻滯所述制劑中依那西普的不穩(wěn)定性、聚集和/或片段化的穩(wěn)定成分，所述穩(wěn)定成分由以下組成:(a)葡甲胺；或(b)葡甲胺連同蔗糖；或(C)葡甲胺連同氯化鈉；或(d)葡甲胺連同氯化鈉和蔗糖。[0059]葡甲胺通常用作小分子賦形劑。我們現(xiàn)出乎意料地發(fā)現(xiàn)葡甲胺也能夠穩(wěn)定含有大蛋白，諸如依那西普的水性藥物組合物。[0060]葡甲胺被認(rèn)為減少依那西普以不期望的三元或四元復(fù)合物形式締合的趨勢(shì)，且因此，減少依那西普的聚集。所述聚集的減少被認(rèn)為持續(xù)長(zhǎng)時(shí)間，例如兩年或更多。不希望囿于特殊理論，離子多元醇衍生物，包括葡甲胺，被認(rèn)為能夠通過(guò)三種不同機(jī)理的組合穩(wěn)定含有依那西普的水性藥物組合物。第一，其可以以甘露醇、蔗糖和山梨醇增加構(gòu)象穩(wěn)定性的相同方式作為被排除的溶質(zhì)。第二，帶電溶質(zhì)可改變膠體穩(wěn)定性，從而減少自身結(jié)合的傾向，從而減緩聚集。第三、這些離子多元醇衍生物，被控制在接近中性pH，可作為鹽溶劑，如精氨酸的作用，潛在地再溶解聚集體。葡甲胺的穩(wěn)定效果不限于聚集體的減少還可涉及含有所述單體的制劑中依那西普單體的穩(wěn)定的其它方面。[0061]本發(fā)明所述的藥物組合物可通過(guò)結(jié)合純化的依那西普和所述離子多元醇衍生物，優(yōu)選葡甲胺來(lái)制備。進(jìn)一步，可按需加入緩沖劑、張度改性劑和另外的賦形劑和其它通常使用的非活性成分。簡(jiǎn)單起見(jiàn)，在本說(shuō)明書(shū)中稍后將更全面地討論這些。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將理解所述組合物中要包括的各種組分的結(jié)合可以以任意合適的順序完成。例如，所述緩沖劑可最先、中間或最后加入，以及所述張度改性劑可最先、中間或最后加入。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還將理解這些化學(xué)品中的一些在某些組合中可不相容，并因此容易使用具有相似性質(zhì)但在所述相關(guān)混合物中相容的不同化學(xué)品代替。[0062]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，在所提供的制劑中葡甲胺的濃度優(yōu)選地為約0.1%(w/v)至40%(w/v)之間，更優(yōu)選地約I%至20%，更優(yōu)選地約2%至約10%，甚至更優(yōu)選地約2%至約5%。[0063]葡甲胺可從商業(yè)供應(yīng)商獲得。[0064]—個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案包含約25至約75mg/ml的依那西普,約l_30mM的磷酸鈉；多至約10%的葡甲胺；任選地多至約5wt%的鹿糖；和任選地多至約IOOmM的氯化鈉,其中所述組合物具有約6.0至7.0的pH，優(yōu)選地約6.0至約6.6，且最優(yōu)選約6.3至約6.5。[0065]葡甲胺穩(wěn)定的依那西普組合物優(yōu)選地以以下在T2的SEC分析為特征，其中:所述單體含量多于約85wt%;聚集體含量少于約3wt%;且片段3含量少于約8wt%。[0066]其中存在離子多元醇衍生物諸如葡甲胺用于穩(wěn)定的更優(yōu)選的依那西普制劑為以以下為特征的一種:[0067](a)在T4的SEC分析為:大于約90、91、92、93、94、95、96或97wt%單體含量；和少于約3、2或Iwt%的聚集體含量；和[0068](b)在T2的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量少于約4、3、2或Iwt%;由HIC色譜圖的峰2代表的組分的量多于80、81、82、83、84或85wt%;以及由HIC色譜圖峰3代表的組分的量少于約20、19、18、17、16、15、14、或13wt%;和[0069](c)在Td^HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量少于約3、2或Iwt%;由HIC色譜圖峰2代表的組分的量多于80、81、82、83、84或85wt%;以及由HIC色譜圖峰3代表的組分的量少于20、19、18、17、16、15、14、或13wt%0[0070]用葡甲胺穩(wěn)定的特別優(yōu)選的依那西普制劑以以下HIC分析為特征:其中由HIC色譜的峰I代表的組分的量小于約1%;由HIC色譜的峰2代表的組分的量為大于約99wt%;以及由HIC色譜的峰3代表的組分的量小于約Iwt%的在T4或T2。[0071]術(shù)語(yǔ)“SEC”、“T2”、“T4”、““HIC”、“單體含量”、“聚集體”和“片段3”、“峰1，，、“峰2”和“峰3”在以下實(shí)施例中定義。[0072]在其它實(shí)施方案中，所述制劑中的葡甲胺可以替換為山梨醇、甘油或甘露醇的另一種離子多元醇衍生物，諸如甘露糖基甘油酸酯、甘露糖基乳酸酯、甘露糖基羥基乙酸酯和二甘油磷酸酯(在約0.1%至約40%)。[0073]不含精氨酸且表現(xiàn)如上描述的分析性質(zhì)的一個(gè)優(yōu)選的葡甲胺穩(wěn)定的依那西普制劑包含約25至約75mg/ml的依那西普；約0.5wt%的甲葡胺；約25mM的磷酸鹽；約I%的鹿糖；以及約IOOmM氯化鈉。[0074]不含精氨酸且表現(xiàn)如上描述的分析性質(zhì)的另一優(yōu)選的葡甲胺穩(wěn)定的依那西普制劑包含約50mg/ml的依那西普；約5wt%的甲葡胺；約25mM的磷酸鹽。[0075]盡管本發(fā)明不排除精氨酸的使用，根據(jù)本發(fā)明包含離子多元醇衍生物諸如葡甲胺用于穩(wěn)定的依那西普制劑優(yōu)選地不含或基本不含精氨酸。[0076]所提供的藥物組合物的其它組分[0077]本發(fā)明的制劑還可包括緩沖劑、張度改性劑、賦形劑、藥學(xué)上可接受的載體和藥物組合物通常使用的其它非活性成分。簡(jiǎn)單起見(jiàn)，在本說(shuō)明書(shū)中稍后將更全面地討論這些。[0078]緩沖劑保持pH在期望范圍內(nèi)。合適的緩沖劑包括組氨酸、磷酸鉀、檸檬酸、馬來(lái)酸鈉或鉀、醋酸銨、三_(羥甲基)氨基甲烷(tris)、各種形式的醋酸鹽和二乙醇胺。所述制劑中所述緩沖劑的濃度優(yōu)選地在約ImM至約IM之間，更優(yōu)選約IOmM至約200mM制劑。緩沖劑為本領(lǐng)域熟知的且通過(guò)已知方法制造以及可從商業(yè)供應(yīng)商獲得。[0079]適合的緩沖劑的實(shí)例為磷酸鹽、組氨酸、檸檬酸鹽、馬來(lái)酸鹽、酒石酸鹽、琥珀酸鹽、醋酸鹽、三_(羥基)_氨基甲烷(tris)、碳酸氫鹽。[0080]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述緩沖鹽為磷酸鈉。[0081]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述藥物組合物的pH在或接近生理水平。因此，優(yōu)選地，所提供的組合物的PH在約5.8至約8.4之間；甚至更優(yōu)選，在約6.2和約7.4之間。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解所述PH可按需調(diào)節(jié)以最大化在某種制劑中依那西普的穩(wěn)定性和溶解性。因此，pH在生理范圍之外但對(duì)于患者尚可容許的依那西普制劑，也在本發(fā)明所述的范圍之外。[0082]張度改性劑為有助于溶液重量摩爾滲透壓濃度的分子。藥物組合物的重量摩爾滲透壓濃度優(yōu)選地被調(diào)節(jié)以最大化所述活性組分的穩(wěn)定性和/或以最小化給藥對(duì)患者的不適。通常優(yōu)選的是藥物組合物與血清等滲，即具有同樣或相似的重量摩爾滲透壓濃度，其可通過(guò)張度改性劑的加入達(dá)成。[0083]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所提供制劑的重量摩爾滲透壓濃度從約180至約420m0sM。然后，應(yīng)當(dāng)理解的是，按照具體情況要求，所述重量摩爾滲透壓濃度可更高或更低。[0084]適用于修飾重量摩爾滲透壓濃度的張度改性劑的實(shí)例包括但不限于氨基酸(不包括精氨酸)(例如半胱氨酸、組氨酸和甘氨酸)、鹽(例如，氯化鈉、氯化鉀和檸檬酸鈉)和/或糖類(lèi)(例如，蔗糖、葡萄糖和甘露醇)。[0085]優(yōu)選的張度改性劑為甘氨酸、丙氨酸、氯化鈉、氯化鉀和硫酸鈉。[0086]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述制劑中所述張度改性劑的濃度優(yōu)選地在約ImM至約IM之間，更優(yōu)選地約IOmM至約200mM。張度改性劑為本領(lǐng)域熟知的且可通過(guò)已知方法制造和可從商業(yè)供應(yīng)商獲得。[0087]賦形劑，還被稱(chēng)為化學(xué)添加劑、共溶質(zhì)或共溶劑，其當(dāng)在溶液(以及在干燥或凍結(jié)形式)中時(shí)穩(wěn)定所述多肽，也可被添加至藥物組合物。賦形劑為本領(lǐng)域熟知且可通過(guò)已知方法制造和可從商業(yè)供應(yīng)商獲得。[0088]適合的賦形劑的實(shí)例包括但不限于糖/多醇諸如:蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖；聚合物諸如:血清白蛋白(牛血清白蛋白(BSA)、人SA或重組HA)、葡聚糖，聚(乙烯基醇)，PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC);非水性溶劑諸如:多元醇，(例如，PEG和甘油)和二甲基甲酰胺(DMF);氨基酸諸如:脯氨酸、L-絲氨酸、谷氨酸鈉、丙氨酸、甘氨酸、賴(lài)氨酸鹽酸鹽、肌氨酸和Y-氨基丁酸；表面活性劑諸如:吐溫?-80(聚山梨醇酯80)、吐溫?-20(聚山梨醇酯20)、SDS、聚山梨醇酯、泊洛沙姆；以及各種賦形劑諸如:磷酸鉀、醋酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、金屬離子(如鋅、鈣、和鎂)、CHAPS、單月桂酸酯、2-0-β-甘露糖甘油酯或上述的任意組合。[0089]優(yōu)選的賦形劑為蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇，麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖、牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、重組白蛋白、葡聚糖、PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、聚乙二醇、乙二醇、甘油、丙氨酸、甘氨酸、賴(lài)氨酸鹽酸鹽、肌氨酸、SDS、聚山梨醇酯20、聚山梨酯80、泊洛沙姆188、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、鋅離子、鈣離子、鎂離子、CHAPS，蔗糖單月桂酸酯和2-0-β-甘露糖甘油酯。[0090]本發(fā)明的制劑中一種或更多賦形劑的濃度優(yōu)選地在約0.001至5重量百分?jǐn)?shù)之間，更優(yōu)選地約0.1至2重量百分?jǐn)?shù)。[0091]治療方法[0092]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療哺乳動(dòng)物的方法，其包括向哺乳動(dòng)物給予治療有效量的本發(fā)明所述的藥物組合物，其中所述哺乳動(dòng)物具有可使用依那西普有益地治療的疾病或不適。[0093]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述依那西普源自與將用所述組合物治療的相同種類(lèi)的哺乳動(dòng)物。[0094]在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中面所述哺乳動(dòng)物為人類(lèi)。[0095]可用所提供的組合物治療的疾病或不適包括但不限于類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、強(qiáng)直性脊椎炎、韋格納氏病(肉芽腫病)、克羅恩病(或炎癥性腸疾病)、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、丙型肝炎、子宮內(nèi)膜異位、哮喘、惡病質(zhì)、銀屑癬和特應(yīng)性皮炎?？捎帽景l(fā)明所述組合物治療的其它疾病或不適包括在W000/62790、W001/62272、美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第2001/0021380號(hào)和美國(guó)專(zhuān)利7，648，702Β2中所描述的那些，其相關(guān)部分通過(guò)引用并入本文。[0096]所提供的藥物組合物可通過(guò)系統(tǒng)注射，諸如靜脈注射；或通過(guò)向相關(guān)位點(diǎn)的注射或施用，諸如當(dāng)該位點(diǎn)暴露于手術(shù)時(shí)通過(guò)直接注射或直接施用至所述位點(diǎn)；或通過(guò)局部施用向需要治療的受試者給藥。[0097]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療和/或預(yù)防風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的方法，包含向需要其的哺乳動(dòng)物給予治療上有效量的所提供的依那西普組合物之一。[0098]在所提供的組合物中所述治療上有效量的依那西普將取決于要治療的病況、所述病況的嚴(yán)重程度、先前的治療、以及患者的臨床歷史和對(duì)所述治療藥劑的應(yīng)答。適當(dāng)劑量可根據(jù)主治醫(yī)生的判斷進(jìn)行調(diào)節(jié)，從而將其一次或經(jīng)一系列的給藥給予患者。[0099]在一個(gè)實(shí)施方案中，每成人劑量的有效依那西普的量為從約l-500mg/m2或約l-200mg/m2,或約l_40mg/m2或約5_25mg/m2。[0100]或者，也可給予固定劑量，其量可為2-500mg/劑量，2-100mg/劑量或約10_80mg/劑量。[0101]如果該劑量將給予每周多于一次，示例性的劑量范圍與之前描述的劑量范圍相同或更低，且優(yōu)選地以25-100mg/劑量的每劑量范圍給予每周兩次或更多次。[0102]在另一個(gè)實(shí)施方案中，用于注射給藥的可接受劑量含有SO-1OOmg/劑量，或者含有80mg每劑量。[0103]該劑量可每周、每?jī)芍?、或每幾?例如2至8周)給予。[0104]在一個(gè)實(shí)施方案中，依那西普以25至75mg/ml通過(guò)單次皮下(SC)注射給予。[0105]在一些實(shí)例中，患者病況的改善將通過(guò)每周一至三次持續(xù)至少三周給予多至約IOOmg劑量的所述藥物組合物來(lái)獲得。延續(xù)更長(zhǎng)時(shí)期的治療對(duì)引起期望程度的改善可為必要的。對(duì)于不能治愈的慢性病況該療法可無(wú)限期繼續(xù)。對(duì)于兒科患者(年齡4-17)，合適的療法可涉及每周一次或多次給予0.4mg/kg至5mg/kg劑量的依那西普。[0106]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物制劑可以以散裝制劑制備，且照此，所述藥物組合物的組分被調(diào)節(jié)至高于給藥所需并在給藥前適當(dāng)?shù)叵♂?。[0107]所述藥物組合物可作為單一治療劑或按需與另外的治療結(jié)合給予。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，所提供的治療和/或預(yù)防方法與給予治療上有效量的另一活性劑結(jié)合使用。所述其它活性劑可在給予本發(fā)明所述藥物組合物之前、期間或之后給予。另一活性劑可以作為所提供組合物的一部分，或者，作為單獨(dú)的制劑給藥。[0108]所提供的藥物組合物的給藥可以以各種方式實(shí)現(xiàn)，包括腸胃外經(jīng)口、口腔、舌下、鼻、直腸、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、透皮、皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、心內(nèi)、心室內(nèi)、顱內(nèi)、氣管內(nèi)，鞘內(nèi)給予，肌肉注射，玻璃體內(nèi)注射和局部應(yīng)用。[0109]本發(fā)明所述的藥物組合物尤其用于胃腸外給藥，即皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)，滑膜內(nèi)，玻璃體內(nèi)，和/或鞘內(nèi)。胃腸外給藥可通過(guò)彈丸注射或持續(xù)輸注。用于注射的藥物組合物可以以單位劑量的形式存在，例如，在安瓿瓶中或在多劑量容器中，連同所添加的防腐劑。另外，已發(fā)展許多最新的藥物遞送方法，且本發(fā)明所述的藥物組合物適合使用這些新方法給藥，例如Inject-ease?、Genject?、注射器筆諸如GenPen?和無(wú)針器械諸如MediJector?和BioJector?。本藥物組合物還可適合于尚待發(fā)現(xiàn)的給藥方法。也參見(jiàn)Langer,1990,Science,249:1527-1533。[0110]所提供的藥物組合物還可制成貯庫(kù)制劑。這種長(zhǎng)效制劑可通過(guò)植入(例如皮下或肌內(nèi))或通過(guò)肌內(nèi)注射給予。因此，例如，所述制劑可使用適合的聚合聚集或疏水材料(例如作為溶于可接受的油的乳劑)或離子交換樹(shù)脂改性，或成為難溶衍生物，例如作為難溶性鹽。[0111]若需要，所述藥物組合物可存在于可含有一個(gè)或更多含有所述活性成分的單位劑量形式的小瓶、包裝或分散器械中。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述分散器械可包含具有單次劑量液體即用制劑的注射器。所述注射器可隨附給藥說(shuō)明。[0112]在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及試劑盒或容器，其含有本發(fā)明的水性藥物組合物。在所述水性藥物組合物中所述多肽的濃度可在一個(gè)寬的范圍內(nèi)變化，但通常在從約0.05至約20000微克每毫升(μg/ml)水性制劑的范圍內(nèi)。所述試劑盒還可隨附使用說(shuō)明。[0113]本發(fā)明更特別地描述于以下實(shí)施例，其僅意在說(shuō)明，因?yàn)槠渲性S多改進(jìn)和變化對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員將是明顯的。[0114]實(shí)施例[0115]使用葡甲胺穩(wěn)定的依那西普[0116]優(yōu)選不含精氨酸，使用葡甲胺穩(wěn)定的依那西普制劑可使用以下概括描述的程序進(jìn)行制備和測(cè)試。[0117]稱(chēng)量各個(gè)固體制劑組分至給定體積的制劑緩沖劑所需的量。這些組分被合并入能夠裝載和測(cè)量所述給定體積的制劑緩沖劑的燒杯或容器。相當(dāng)于所述目的給定制劑緩沖劑的近似3/4體積的去離子水被加入所述燒杯，隨后將所述組分溶解。所述緩沖劑的pH被使用IM氫氧化鈉或IM鹽酸調(diào)節(jié)至目的制劑的pH。然后通過(guò)加入去離子水使最終的制劑緩沖劑體積上升至所述目的體積。依那西普蛋白質(zhì)溶液放置于透析材料袋(諸如ThermoScientificSlide-A-LyzerMINIDialysisUnit10,000MWC0)中，其隨后與所需的制劑緩沖劑在4°C接觸放置12小時(shí)。制劑緩沖體積與蛋白溶液體積的比應(yīng)不小于1000:1。所述透析袋和其含有的蛋白溶液隨后在第二份同樣體積的制劑緩沖劑中在4°C放置另外12小時(shí)。將所得到的蛋白溶液從所述透析材料袋中移出，且所述蛋白的濃度使用紫外線光譜測(cè)定。使用離心(諸如AmiconUltra10，000MWCO離心濃縮機(jī))和/或用制劑緩沖劑稀釋將蛋白濃度調(diào)節(jié)至期望水平。[0118]可通過(guò)排阻色譜(SEC)、變性SEC(dSEC)、疏水作用色譜(HIC)、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)對(duì)所述組合物測(cè)試長(zhǎng)期穩(wěn)定性，以及在不同時(shí)間點(diǎn)的結(jié)合和生物活性。所述生物活性可通過(guò)任意數(shù)量的熟知試驗(yàn)測(cè)量。[0119]例如，排阻色譜技術(shù)描述于Hawe等人，Pharm.Res.2011,28:2302和/或vanMarrschalkerweerd等人，Eur.J.Pharm.Biopharm.2011,78:213。相似地，變性排阻色譜、疏水作用色譜和十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù)對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員也是熟知的。[0120]所述組合物被認(rèn)為在兩年或更長(zhǎng)的時(shí)期將是穩(wěn)定的。[0121](制劑1:19)[0122]【權(quán)利要求】1.一種依那西普的水性穩(wěn)定制劑，其包含:依那西普；和用以阻滯所述制劑中依那西普的不穩(wěn)定性、聚集和/或片段化的穩(wěn)定成分，所述穩(wěn)定成分由以下至少一種組成:(a)葡甲胺；或(b)葡甲胺連同蔗糖；或(c)葡甲胺連同氯化鈉；或(d)葡甲胺連同氯化鈉和蔗糖。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，進(jìn)一步包含選自緩沖劑、張度改性劑和賦形劑的一種或多種另外的組分。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中所述穩(wěn)定成分基本由以下至少一種組成:(a)葡甲胺；或(b)葡甲胺連同蔗糖；或(c)葡甲胺連同氯化鈉；或(d)葡甲胺連同氯化鈉和蔗糖；且其中所述制劑任選地不含無(wú)或基本不含精氨酸，且所述制劑引起以至少以下一點(diǎn)為特征的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:在M3或T2或T4的SEC分析為:大于約90%的單體含量；小于約3wt%的聚集體含量；以及小于約5wt%的片段3含量；和在M3、T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約3wt%;由HIC色譜圖的峰2代表的組分的量為大于80wt%;以及由HIC色譜圖的峰3表示的組分的量小于約20wt%。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其任選地不含或基本不含精氨酸，包含約25至約75mg/ml的依那西普；約I至30mM的磷酸鈉；多至約10%的葡甲胺；任選地多至約5?1:%的蔗糖；和任選地多至約IOOmM的氯化鈉，其中所述組合物具有約6.0至6.6的pH，且其中所述組合物以以下在M3或T2或T4的SEC分析為特征:所述單體含量多于約85wt%;聚集體含量少于約3wt%，且片段3含量少于約8wt%。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的組合物，其引起以以下為特征的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:(a)在M3或T2或T4的SEC分析為:大于約90wt%的單體含量；和小于約3wt%的聚集體含量；和(b)在％或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約4wt%；由HIC色譜圖峰2代表的組分的量為大于約80wt%；以及由HIC色譜圖的峰3代表的組分的量小于約20wt%。6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其具有以下在M3或T2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰I代表的組分的量小于約lwt%;由HIC色譜圖的峰2表示的組分的量大于約95wt%;且由HIC色譜圖的峰3代表的組分的量小于約3wt%。7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其包含:約50mg/ml的依那西普；約0.5wt%的葡甲胺；約10至30mM的磷酸鹽；約1%的鹿糖；和約IOOmM的氯化鈉。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其包含:約50mg/ml的依那西普；約5被％的葡甲胺；約10至30mM的磷酸鹽；且不含或基本不含蔗糖和氯化鈉9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其引起以以下為特征的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:在^或1~2或T4的HIC分析，其中由HIC色譜圖的峰2代表的組分的量為大于或等于約95wt%;且其中，如果峰3存在于所述HIC色譜圖，由峰3代表的組分的量小于或等于約lwt%。10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其在M3或T2或T4每ml平均具有不多于約10000個(gè)尺寸大于5μm的顯微鏡下才可見(jiàn)的顆粒。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其不含精氨酸，或基本不含精氨酸，其中所述組合物在M3或T2或T4，引起符合以下標(biāo)準(zhǔn)之一或兩者的長(zhǎng)期儲(chǔ)存穩(wěn)定性:(A)堪比或優(yōu)于在商標(biāo)?Enbre丨下銷(xiāo)售的市售依那西普的穩(wěn)定性，其通過(guò)以下測(cè)量:(i)在所述組合物(如本說(shuō)明書(shū)中所定義)中的聚集體、單體和片段3的量的SEC分析，和(?)對(duì)應(yīng)HIC色譜圖(如本說(shuō)明書(shū)所定義)的峰1、2和3的所述組合物中材料的量的HIC分析；和(B)其中(i)峰3不存在或基本不存在和(ii)峰2代表多于約95被％組合物的HIC色譜圖；基本上沒(méi)有對(duì)應(yīng)于聚集體的峰的SEC色譜圖；和其中單體含量代表至少約95wt%所述組合物的SEC色譜圖?！疚臋n編號(hào)】A61K39/395GK104010658SQ201280062761【公開(kāi)日】2014年8月27日申請(qǐng)日期:2012年10月18日優(yōu)先權(quán)日:2011年10月18日【發(fā)明者】馬克·曼寧,布萊恩·墨菲申請(qǐng)人:科榮生生物科學(xué)公司