抑制包含鋅指DHHC型的十六烷酰基?；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和C-JUN N-末端激酶(JNK)之間 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種分離的多肽，所述分離的多肽與SEQ?ID?NO∶1；SEQ?ID?NO∶2；或SEQ?ID?NO∶3的任一個(gè)有至少90％的同一性，其中所述分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun?N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。分離的多肽可以與送遞和靶向部分結(jié)合，例如HIV-1Tat蛋白質(zhì)的細(xì)胞-膜轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。還提供了治療與神經(jīng)毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的方法。
【專利說明】抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17 (zD17)
和C-JUN N-末端激酶(JNK)之間相互作用的神經(jīng)保護(hù)肽
[0001]相關(guān)申請(qǐng)
[0002]本申請(qǐng)要求2011年7月12日遞交的美國臨時(shí)專利申請(qǐng)61 / 507，060的優(yōu)先權(quán)?！炯夹g(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明涉及通過靶向抑制-誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的神經(jīng)保護(hù)，例如包含鋒指DHHC型的十六燒酸基酸基轉(zhuǎn)移酶17 (palmitoyl acyl transferase zinc-f ingerDHHC type containingl7) (zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。特別地，本發(fā)明涉及使用分離的多肽通過抑制zD17和JNK相互作用來減小細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激的神經(jīng)保護(hù)。
【背景技術(shù)】
[0004]興奮性神經(jīng)毒性是一種病理過程，谷氨酸酯和類似物質(zhì)可以通過這種病理過程來損傷或殺死神經(jīng)細(xì)胞。興奮性神經(jīng)毒性可能在脊髓損傷、中風(fēng)、外傷腦損傷和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)退行性疾病中涉及，例如多發(fā)性硬化，阿爾茨海默病，肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)，帕金森病，酒精中毒或戒酒，和亨廷頓病。引起神經(jīng)細(xì)胞周圍谷氨酸酯濃度過高的其它常見癥狀是低血糖癥和癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus)。
[0005]中風(fēng)可能由于多種機(jī)理產(chǎn)生。腦血栓癥和腦栓塞可能由阻塞供應(yīng)大腦的動(dòng)脈的血凝塊產(chǎn)生，這是大多數(shù)中風(fēng)的原因。當(dāng)血管在大腦之中或周圍破裂時(shí)會(huì)發(fā)生蛛網(wǎng)膜下出血和大腦內(nèi)出血。因此，中風(fēng)可能是缺血(即腦血栓或腦栓塞)或自然出血(即蛛網(wǎng)膜下出血和大腦內(nèi)出血)。
[0006]血液凝塊或血栓形成經(jīng)常是腦動(dòng)脈動(dòng)脈硬化癥的結(jié)果。短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)也稱作微型中風(fēng)(min1-stiOke)，并且特征在于暫時(shí)血流中斷并且經(jīng)常是在中風(fēng)之前。
[0007]當(dāng)血液凝塊在循環(huán)系統(tǒng)中從遠(yuǎn)的位置變?yōu)楸或?qū)逐并且接著變?yōu)樵诠?yīng)腦的動(dòng)脈中(例如，在腦中或頸中)停滯時(shí)發(fā)生栓塞。腦栓塞經(jīng)常在心室纖維顫動(dòng)患者中發(fā)生，其心臟上心房(前室)博動(dòng)弱而快并且前室中的血液不完全排盡。停滯的血液更容易形成凝塊。
[0008]當(dāng)血管破裂時(shí)發(fā)生出血或流血。血管破裂可能是外傷或內(nèi)壓過高的結(jié)果。最可能破裂的血管是已經(jīng)存在缺陷的那些血管，例如動(dòng)脈瘤。
[0009]大腦內(nèi)出血在腦血管中發(fā)生，而蛛網(wǎng)膜下出血影響大腦表面(即保護(hù)性蛛網(wǎng)膜)的動(dòng)脈。
[0010]上述所有中風(fēng)機(jī)理都可能導(dǎo)致腦細(xì)胞的死亡，其接著觸發(fā)一種鏈反應(yīng)，其中細(xì)胞死亡產(chǎn)生的毒性化學(xué)物質(zhì)可以損傷鄰近細(xì)胞。大腦的受影響區(qū)域中的細(xì)胞經(jīng)常死亡，因?yàn)樗鼈儾辉購难航邮苎鹾蜖I養(yǎng)，而且由于谷氨酸酯濃度過高，導(dǎo)致中風(fēng)患者的癥狀和能力喪失。中風(fēng)是北美死亡的第二致因，并且引起能力喪失。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0011]本發(fā)明部分基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即這里所描述的分離的多肽選擇性抑制包含鋅指DHHC型的十六烷酰基?；D(zhuǎn)移酶17 (zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。而且，如這里所公開的，zD17和JNK之間的相互作用的選擇性抑制可以用于減小細(xì)胞中興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激。細(xì)胞中興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激可能與某種疾病相關(guān)，這些疾病可以選自但不限于下面的:脊髓損傷、中風(fēng)、外傷腦損傷和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)退行性疾病中涉及，例如多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。引起神經(jīng)細(xì)胞周圍谷氨酸酯濃度過高的其它常見癥狀是低血糖癥和癲癇持續(xù)狀態(tài)(status epilepticus)。
[0012]這里所描述的化合物可以用于體內(nèi)或體外研究應(yīng)用(即非臨床)來研究興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激或細(xì)胞毒性應(yīng)激的可供選擇的治療。此外，這些分離的多肽可以單獨(dú)使用或者作為體內(nèi)或體外研究的包的部分來使用，使用重組蛋白質(zhì)、編碼分離的多肽的核苷酸、培養(yǎng)基中供養(yǎng)的和/或動(dòng)物模型中的細(xì)胞，來研究興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激或細(xì)胞毒性應(yīng)激的的機(jī)理。
[0013]一方面，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2或SEQ IDNO: 3任一個(gè)有至少80%同一性。或者，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I或SEQID NO: 2或SEQ ID NO: 3任一個(gè)有至少85%同一性。或者，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3任一個(gè)有至少90%同一性。或者，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3任一個(gè)有至少95%同一性?；蛘撸峁┝艘环N分離的多肽，包含SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2或SEQ ID NO: 3 的任一個(gè)。
[0014]另一方面，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I ；SEQ ID NO: 2 ;或SEQ IDNO: 3的任一個(gè)有至少90%同一性，其中同一性可以通過序列的長度計(jì)算，而且其中分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17 (zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。
[0015]另一方面，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I ；SEQ ID NO: 2 ;或SEQ IDNO: 3的任一個(gè)有至少90%同一性，其中分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。
[0016]另一方面，提供了一種分離的多肽，與SEQ ID NO: I ；SEQ ID NO: 2 ;或SEQ IDNO: 3的任一個(gè)有至少95%同一性，其中分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。
[0017]另一方面，提供了一種包含SEQ ID NO: I ；SEQ ID NO: 2;或 SEQ ID NO: 3 的任一個(gè)的分離的多肽。
[0018]分離的多肽可以抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-junN-末端激酶(JNK)之間的相互作用。分離的多肽可以進(jìn)一步包括與所述分離的多肽結(jié)合的遞送和靶向部分。所述遞送和靶向部分可以選自下面的一種或多種:配體；蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；或抗體。蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域可以是HIV-1Tat蛋白質(zhì)的細(xì)胞-膜轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。
[0019]另一方面，提供了一種分離的多核苷酸，包括編碼這里所描述的多肽的核苷酸序列。
[0020]另一方面，提供了包含這里所描述的多肽和載體的組合物。[0021]所述載體可以是藥學(xué)上可接受載體。
[0022]另一方面，提供了包含這里所描述的分離的多核苷酸的載體。
[0023]另一方面，提供了包含這里所描述的載體的細(xì)胞。
[0024]另一方面,提供了包含這里所描述的多核苷酸的細(xì)胞，其中該多核苷酸可以與表達(dá)調(diào)控序列操作性連接。
[0025]另一方面，提供了保護(hù)細(xì)胞免受興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激的方法，該方法包括向細(xì)胞遞送這里所描述的分離的多肽。
[0026]另一方面，提供了保護(hù)細(xì)胞免受興奮性神經(jīng)毒性應(yīng)激的方法，該方法包括:(a)向細(xì)胞遞送這里所描述的載體；和(b)表 達(dá)載體所攜帶的多核苷酸。
[0027]另一方面，提供了表達(dá)多肽的方法，該方法包括:(a)向細(xì)胞遞送這里所描述的載體；和(b)在允許載體所攜帶的多核苷酸表達(dá)的條件下培養(yǎng)細(xì)胞。
[0028]可以體內(nèi)將載體遞送給細(xì)胞?？梢噪x體將載體遞送給細(xì)胞。可以體外將載體遞送給細(xì)胞。
[0029]另一方面，提供一種治療與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的方法，所述方法包括:向需要的被試者施用生物學(xué)有效量的這里所描述的多肽。
[0030]生物學(xué)有效量可以是足以防止興奮性神經(jīng)毒性-誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的量。興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以是中風(fēng)。
[0031]另一方面，提供一種治療與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的藥物組合物，所述方法，所述組合物包含這里所描述的分離的多肽和藥學(xué)可是接受載體。
[0032]興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以是中風(fēng)。
[0033]另一方面，提供這里所描述的分離的多肽治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的用途。
[0034]另一方面，提供這里所描述的分離的多肽制備用于治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的藥物的用途。
[0035]興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以是中風(fēng)。
[0036]另一方面，提供用于治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的這里所描述的分離的多肽。
[0037]興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以是中風(fēng)。
[0038]另一方面，提供了商用包，包括:(a)這里所描述的分離的多肽；和(b)其治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的用途說明書。
[0039]另一方面，提供了商用包，包括:(a)這里所描述的分離的多肽和藥學(xué)可接受載體；和(b)其治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的用途說明書。
[0040]另一方面，提供了商用包，包括:(a)這里所描述的藥物組合物；和(b)其治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的用途說明書。
[0041]興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病可以是中風(fēng)。
[0042]另一方面，提供了一種藥物組合物，包含:(a)與SEQ ID NO: I ；SEQ ID NO: 2 ；或SEQ ID NO: 3的任一個(gè)有至少90%同一性的分離的多肽，其中同一性可以通過序列的長度計(jì)算，而且其中分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷酰基?；D(zhuǎn)移酶17 (zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用；和(b)藥學(xué)上可接受賦形劑。
[0043]所述賦形劑可以是等張注射液。組合物可適于對(duì)人施用。分離的多肽可以以包含HIV-1Tat蛋白質(zhì)的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白形式存在。藥物組合物可以在消毒容器中。容器可以是注射器。無菌容器可以在試劑盒或商用包中提供。
[0044]另一方面，提供了這里所描述的分離的多肽，其中所述分離的多肽抑制應(yīng)激誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(例如包含鋅指DHHC型的十六烷酰基?；D(zhuǎn)移酶17 (zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用)。另一方面，提供了這里所描述的分離的多肽，其中所述分離的多肽保護(hù)細(xì)胞免于細(xì)胞素素應(yīng)激。所述細(xì)胞素素應(yīng)激?？梢允桥d奮性神經(jīng)毒素應(yīng)激。另一方面，所述分離的多肽可以進(jìn)一步包括與分離的多肽結(jié)合的遞送和靶向部分。任選地，所述遞送和靶向部分可以選自下面的一種或多種:配體；蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域；或抗體。任選地，蛋 白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域可以是HIV-1Tat蛋白質(zhì)的細(xì)胞-膜轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(例如，見 SEQ ID NOs: 4-9)。
[0045]本發(fā)明的其它方面和特征對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員在參見下面的與附圖一起的本發(fā)明【具體實(shí)施方式】下而變得一目了然。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0046]圖1顯示細(xì)胞因子TNF- α和兒-1 β增強(qiáng)神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)物中zD17_JNK3相互作用的條線圖，其中 TNF-a (50ng / ml，6h)和兒_1β (IOng / ml，16h)處理分別誘導(dǎo) zD17_JNK3相互作用增加1.53±0.11和1.88±0.23倍。
[0047]圖2顯示谷氨酸和NMDA增強(qiáng)zD17與JNK同種型2和3相互作用的條線圖，其中對(duì)JNK2 (與對(duì)照物相比增強(qiáng)的倍數(shù)；谷氨酸，1.7 ±0.2 ；NMDA, 2.1 ±0.4)和JNK3 (谷氨酸，2.6±0.2 ;NMDA，2.5±0.3)的增強(qiáng)作用高于對(duì)JNKl的(谷氨酸，1.4±0.1 ；NMDA,
1.4±0.I)。
[0048]圖3顯示潛在的JNK-相互作用基序?qū)D17N-末端胞質(zhì)域的體外肽掃描，圖中劃線的相互作用-正向區(qū)顯示zD17的N-末端部分，有標(biāo)記(A-F)的黑粗體線表示肽掃描的潛在的JNK-相互作用基序，它們?cè)趜D17上的位置在線旁邊標(biāo)記。還有，蛋白質(zhì)相互作用的錨蛋白結(jié)構(gòu)域在所指位置以圓矩形劃出。
[0049]圖4顯示位于不同錨蛋白結(jié)構(gòu)域中的兩個(gè)基序，它們對(duì)于ZD17-JNK相互作用是重要的。下面指示的是Myc-觸發(fā)的全長zD17 (FL)和帶有按種類劃分的缺失的zD17片段，標(biāo)出了內(nèi)含的潛在的相互作用基序(A-F)。劃出了這些構(gòu)建體的相互作用能力(+或_)。[0050]圖5顯示JNK3結(jié)合zD17上的基序-D和基序_E?；騙D，基序-E和之間的第三錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)與GST融合并純化。與JNK3孵育之后只有與JNK3結(jié)合的基序-D和基序_E。
[0051]圖6顯示肽NMoD，NIMoE和NMoEsh從中衍生的zD17上的位置，如zD17錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)的模擬結(jié)構(gòu)中所示。從國家生物技術(shù)信息中心(National Center forBiotechnology Information) (PDB: 3EU9)獲得 3D 結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)并且用 PyMOL 軟件(vl.3)處理。
[0052]圖7顯示多肽對(duì)JNK3基礎(chǔ)活性的作用。從細(xì)胞溶胞產(chǎn)物將JNK3免疫沉淀，接著用激酶測定(KA)檢測激酶活性。用已知的JNK抑制劑3Ρ600125(10μΜ)或NMoD(IyM)預(yù)處理細(xì)胞2h，分別引發(fā)JNK3基礎(chǔ)活性顯著(相對(duì)于對(duì)照物變化的倍數(shù)，0.56 ± 0.06)或部分(0.72±0.07)減小。NIMoEd μ Μ)對(duì)JNK3的基礎(chǔ)活性沒有明顯影響(0.89±0.10，P=0.33)。
[0053]圖8顯示肽NMoE對(duì)zD17_JNKl /2/3相互作用的影響。
[0054]圖9顯示NMoE去除了 JNK2和JNK3的NMDA-誘導(dǎo)的活性，但是對(duì)JNKl沒有作用。
[0055]從細(xì)胞溶胞產(chǎn)物將JNK免疫沉淀，接著用激酶測定(KA)檢測JNK活性(相對(duì)O小時(shí)規(guī)一化。JNK1(.): 0.5h，61.0±5.4%，lh，137.8±20.8%;JNKl+NMoE(〇):0.5h,104.3±2.6，lh, 168.5±3.3 % ；JNK2( ? ): 0.5h, 164.3±11.5 % ；lh, 179.2±11.2 % ；JNK2+NIMoE( O ): 0.5h，103.7±5.0 % ;lh，90.9± 10.9 % ；JNK3( ): 0.5h,141.7±7.8 % ;lh，172.1±18.9 % ；JNK3+NIMoE( □ ): 0.5h，90.6±5.3 % ；lh,47.0± 17.6% )。t-test.** 表不 Ρ〈0.01。線條圖表不平均值土s.e.m。
[0056]圖10顯示施用肽的軸突發(fā)育。A，與SP600125孵育影響起始和延伸。對(duì)軸突用軸突標(biāo)記物Tau-1標(biāo)記。顯示軸突起始速度(相對(duì)對(duì)照物歸一化，SP600125,18.2±4.1%,η=3)和軸突長度(對(duì)照物，161.2±3.9 ;SP600125，84.9±1.6%，n = 4)。B，NMoE 不阻斷軸突起始(相對(duì)對(duì)照物歸一化，NIMoE,98.6±0.2%, η = 3, P = 0.69)或延伸(對(duì)照物，160.0±8.9 ;ΝΜοΕ，161.1±13.6，n = 3 ;Ρ = 0.96)。t-test。** 表示 P〈0.01。誤差柱表示平均值土 s.e.m。
[0057]圖11顯示以LDH測定為基礎(chǔ)的興奮性神經(jīng)毒性-誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞死亡百分率NMDA的條形圖，顯示NMoE的作用，其中相對(duì)照，PI著色和核Hoechst著色對(duì)神經(jīng)突的完整性和核的形狀打分(沒有顯示)。
[0058]圖12A顯示NMoEsh保護(hù)培養(yǎng)基中代表細(xì)胞死亡的定量釋放LDH的條形圖。
[0059]圖12B顯示如所示劑量NMoE不同劑量時(shí)加NMDA的神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)物中定量釋放LDH的條形圖(量化細(xì)胞死亡)。
[0060]圖12C顯示NMoE處理細(xì)胞(+NMoE空白柱狀)和NMoE未處理細(xì)胞(-NMoE實(shí)心柱狀)不同NMDA濃度下細(xì)胞死亡百分率，其中如圖所示NMoE在一定范圍的NMDA濃度下保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)物。t-test.*和**分別表示P〈0.05和P〈0.01。誤差柱表示平均值+ s.e.nio
[0061]圖13顯示c-Jun磷酸化作用線形圖(左圖)和C中ρ17型的量化(右圖)C，NMoE阻斷NMDA-誘導(dǎo)的半胱氨酸蛋白水解酶-3裂解(One-way ANOVA-試驗(yàn)。*和**分別表示P〈0.05和P〈0.01。誤差柱表示平均值土 s.e.m)。[0062]圖14顯示局部缺血發(fā)作之前或之后在指定時(shí)間一次靜脈內(nèi)注射接受假品(對(duì)照物)，鹽水，NIMoEscr,或NMoEsh的SD大鼠的MCAo實(shí)驗(yàn)的流程圖。
[0063]圖15顯示總的梗塞大小和體積的兩個(gè)量化曲線圖(插入柱狀圖)，其中NMoEsh處理(-0.5h，43.43±9.82，η = 7 ；+2h,41.95±8.22，η = 10 ；+4h,78.74±28.50，η =6 ；F = 20.71，Ρ〈0.01，與對(duì)照組相比)大大減小了總的梗塞體積，而鹽水或NMoEscr幾乎沒有作用(對(duì)照物，240.70±35.67，η = 9 ;鹽水，268.89±40.47，η = 4 ；NIMoEscr,212.60±37.6，η = 5 ;F = 0.38，P = 0.69) (One-way ANOVA-試驗(yàn)。.[0064]圖16顯示代表指示用NMoEsh處理的缺血大鼠改善動(dòng)作的結(jié)果的神經(jīng)學(xué)評(píng)分的柱狀圖。在MCAo開始22小時(shí)后檢查神經(jīng)學(xué)功能。鹽水或NMoEscr處理組顯示相似的不足(對(duì)照物，16.43±0.95，n = 7 ;鹽水，18.00±1.35，n = 4 ；NIMoEscr, 18.60±1.24，η =5 ；F = 1.65，P = 0.23)。施用 NIMoEsh 顯著降低神經(jīng)學(xué)評(píng)分(-0.5h，8.00±0.72，η = 7 ;+2h，8.50±0.75,η = 10 ；+4h, 11.20±1.49,η = 6 ；F = 21.98,P < 0.01，與對(duì)照組相比)。One-way ANOVA-試驗(yàn)。
[0065]圖17顯示 用附著去除試驗(yàn)(adhesive removal test) (ART)評(píng)價(jià)體覺功能的柱狀圖，并且顯示NMoE處理改善了 ART評(píng)分。在對(duì)照組，鹽水處理組和NMoEscr-處理動(dòng)物組中，MCAo去除了對(duì)側(cè)面的反應(yīng)(對(duì)照物，13.57±4.30see，n = 7 ;鹽水，7.42±3.21sec，n =4 ；NIMoEscr, 10.80±2.06see, η = 5 ；F = 0.64, P = 0.54)。預(yù)處理或處理后灌輸 NMoE導(dǎo)致體覺功能的改善(-0.5h，48.62±8.24sec, η = 7 ；+2h,62.1±8.60sec, η = 10 ；+4h,60.83±8.13sec, η = 6 ；F = 11.28, Ρ〈0.01)。One-wayANOVA-試驗(yàn)。
[0066]圖18和19顯示功能試驗(yàn)曲線圖，并且顯示改善MCAo損傷后NMoEsh-處理動(dòng)物的動(dòng)作結(jié)果。MCAo開始后4h給與NIMoEscr或NIMoEsh0神經(jīng)學(xué)評(píng)分(NIMoEscr, η = 8 ；天-1，19.25±0.80 ;天_3，13.63±1.03 ;天_7，7.13±0.58 ;天_14，4.38±0.50 ；NIMoEsh,η = 7 ;天-1，11.43±1.96 ；天-3,5.86±1.14 ；天-7，1.71±0.47 ；天-14,0.85±0.34)和 ART(NIMoEscr, η = 8 ;天-1，12.63±3.14 ；天-3,34.13±6.88 ；天-7,59.13±5.67 ；天-14,81.88±4.44 ；NIMoEsh, η = 7 ;天-1,52.57±6.82 ；天-3,73.86±9.63 ；天 ~7,94.86±7.33 ;天-14，101.43±3.35)。t-test。# 指示 P <0.01。誤差柱表示平均值+ s.e.m) ο
【具體實(shí)施方式】
[0067]這里使用的術(shù)語“同一性”指兩個(gè)肽之間或兩個(gè)核酸分子之間序列的同一性的量度。通過比較為了比較目的而排列的各序列中的位置能測定同一性。如果共有至少大約80%序列同一性，或者至少大約81%序列同一性，至少大約82%序列同一性，至少大約83%序列同一性，至少大約84%序列同一性，至少大約85%序列同一性，至少大約86%序列同一性，至少大約87%序列同一性，至少大約88%序列同一性，至少大約89%序列同一性，至少大約90%序列同一性，則兩個(gè)氨基酸序列或核酸序列被認(rèn)為是基本上同一的?；蛘?，如果共有至少大約91%序列同一性，至少大約92%序列同一性，至少大約93%序列同一性，至少大約94%序列同一性，至少大約95%序列同一性，至少大約96%序列同一性，至少大約97%序列同一性，至少大約98%序列同一性，至少大約99%序列同一性，則兩個(gè)氨基酸序列或核酸序列被認(rèn)為是基本上同一的。[0068]通過目前應(yīng)用的并且最初在Altschul等(1990) J.Mol.Biol.215: 403-410中描述的BLAST運(yùn)算法則可以來測定序列同一性。BLAST運(yùn)算法則可以與公開的設(shè)置默認(rèn)值使用。當(dāng)比較序列中的一個(gè)位置被相同堿基或氨基酸占據(jù)時(shí)，該分子被認(rèn)為在那個(gè)位置共有同一性。序列之間的同一性程度是序列所共有的匹配位置數(shù)目和序列之間重疊程度的函數(shù)。此外，當(dāng)考慮與SEQ ID NOs: I~3的序列同一性程度時(shí)，是想要分別與SEQIDNOs: I~3比較氨基酸等同數(shù)目。當(dāng)確定與SEQ ID NOs: I~3的同一性程度是不是要考慮另外的序列(即除了分別對(duì)應(yīng)于SEQ ID NOs: I~3的20，10，或15氨基酸的那些)。給定序列的序列同一性可以通過參考序列(即SEQ ID NOs:1~3)的長度來計(jì)算。
[0069]在一些實(shí)施方案中，提供了具有與SEQ ID NO: I或SEQ ID NO: 2或SEQ IDNO: 3實(shí)質(zhì)相同的氨基酸成份的分離的多肽組合物。其中所述實(shí)質(zhì)相同的意思是包括當(dāng)比較等同區(qū)域(即分別是~20或10或15個(gè)氨基酸)時(shí)序列同一性的程度。此外，實(shí)質(zhì)相同意思是包括前提是保持細(xì)胞保護(hù)活性或這里所描述的其它活性的保守取代和修飾的氨基酸。
[0070]如這里所使用的，“肽”或“多肽”可以互換使用，并且一股指由通過肽鍵或修飾的肽鍵共價(jià)連接的至少兩個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的化合物。但是當(dāng)參照具體的SEQ ID NO具體使用時(shí)，它意思是指包括SEQ ID NOs: I~3所代表的NMo的氨基酸序列(即MTPLMWAAYRTHSVDPTRLL (NIMoE) ；WAAYRTHSVD (NIMoEsh) ；TPLHWATRGGHLSMV (NIMoD)),其中多肽具有細(xì)胞保護(hù)活性。修飾的肽鍵可以包括，例如，可以對(duì)肽提供另外的期望的性質(zhì)的肽電子等排物(修飾的肽鍵)。肽可以包括至少兩個(gè)氨基酸。這里所描述的肽或多肽所包含的氨基酸也可以或者通過天然過程修飾，例如翻譯后處理，或者通過本領(lǐng)域公知的化學(xué)修飾技術(shù)來修飾。修飾能發(fā)生在肽中的任何位置，包括肽主鏈，氨基酸側(cè)鏈和氨基或羧基末端。要明白相同類型的修飾作用可以在給定肽中的幾個(gè)位點(diǎn)以相同或不同程度存在。
[0071]氨基酸是包含氨基，羧基和不同氨基酸之間不同的側(cè)鏈的分子。氨基酸可以是其自然形式或者其可以是合成的氨基酸。氨基酸可以被描述為，例如，極性，非極性，酸性的，堿性的，芳香的或中性的。極性氨基酸是在生物學(xué)或接近中性pH下可以通過氫鍵與水相互作用的氨基酸。氨基酸的極性是生物學(xué)或接近中性PH下氫鍵合程度的指征。極性氨基酸的例子包括絲氨酸，脯氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，賴氨酸，組氨酸，精氨酸，天冬氨酸，酪氨酸和谷氨酸。非極性氨基酸的例子包括甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，和色氨酸。酸性氨基酸在中性PH下具有凈負(fù)電荷。酸性氨基酸的例子包括天冬氨酸和谷氨酸。堿性氨基酸在中性pH下具有凈正電荷。堿性氨基酸的例子包括精氨酸，賴氨酸和組氨酸。芳香性氨基酸一股是非極性的，并且可以參與疏水作用。芳香性氨基酸的例子包括苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸。酪氨酸還可以通過芳香側(cè)鏈上的羥基參與氫鍵鍵合。中性脂肪族氨基酸一股是非極性和疏水性的。中性氨基酸的例子包括丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸和蛋氨酸。一種氨基酸可以一種以上描述類別來描述。相同描述類別中的氨基酸彼此可以替代肽中的另一個(gè)。氨基酸殘基一股可以根據(jù)下面表A，對(duì)應(yīng)于氨基酸的俗名，用單字母或三字母名稱來表示。這里所描述的肽所包含的氨基酸要理解是L-或D-構(gòu)型。這里所描述的氨基酸可以被可以改變肽的循環(huán)半衰期但是不副作用地影響它們的生物學(xué)活性的甲基化作用，氨基化作用，?；饔没蛘咂渌瘜W(xué)基團(tuán)的取代作用所修飾。另外，本發(fā)明的肽中可以存在或不存在二硫鍵。自然界可能存在不標(biāo)準(zhǔn)的氨基酸，可以或者可以不被基因編碼?；蚓幋a的非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的例子包括硒代半胱氨酸，有時(shí)由UGA密碼子帶到一些蛋白質(zhì)中，這個(gè)密碼子一股是終止密碼子。不被基因編碼的一些非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸可以從已經(jīng)存在于肽中的標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的修飾而產(chǎn)生，或者，例如，可以是代謝中間產(chǎn)物或母體。非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的例子包括4-羥基脯氨酸，5-羥基賴氨酸，6-N-甲基賴氨酸，Y -羧基谷氨酸，鎖鏈素，硒代半胱氨酸，鳥氨酸，瓜氨酸，羊毛硫氨酸，1-氨基環(huán)丙基-1-羧酸，Y-氨基丁酸，肉堿，肌氨酸，或N-甲酰甲硫氨酸。標(biāo)準(zhǔn)和非標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的合成變體也是已知的并且可以包括化學(xué)衍生的氨基酸，用于鑒定或跟蹤的標(biāo)記的氨基酸，或者在α碳上帶有各種側(cè)鏈基團(tuán)的氨基酸。這樣的側(cè)鏈基團(tuán)的例子是本領(lǐng)域公知的并且包括包括脂肪族，單環(huán)芳香族，多環(huán)芳香族，雜環(huán)的，異核的，氨基，烷基氨基，羧基，羧?；瓤峄?，狐，脈，羥基，烷氧基，疏基，烷基疏基，或者包含其它雜原子的側(cè)鏈。其它合成的氣基酸可以包括α-氨基酸，非α氨基酸，例如氨基酸，去-羧基或去-氨基酸。氨基酸的合成變體可以用本領(lǐng)域公知的一股方法來合成，或者可以從供應(yīng)商購買，例如RSP AminoAcids LLC(Shirley, MA)?
[0072]本領(lǐng)域熟練人員公知這里所描述的肽或多肽中各個(gè)氨基酸可以被取代。氨基酸序列同一性可以通過使用BLAST (基礎(chǔ)局部排列檢索工具)2.0預(yù)算法則中使用的BLASTP和TBLASTN程序計(jì)算。計(jì)算氨基酸序列相似性或同一性的技術(shù)是本領(lǐng)域熟練人員公知的，BLAST 運(yùn)算法則的使用描述于 ALTSCHUL 等，1990，J Mol.Biol.215: 403-410 和 ALTSCHUL等(1997)，Nucleic Acids Res.25: 3389-3402。
[0073]此外，本領(lǐng)域熟練人員公知某些取代作用更可能導(dǎo)致活性的保持。例如，氨基酸可以被描述為，例如，極性，非極性，酸性的，堿性的，芳香的或中性的。極性氨基酸是在生物學(xué)或接近中性pH下可以 通過氫鍵與水相互作用的氨基酸。氨基酸的極性是生物學(xué)或接近中性PH下氫鍵合程度的指征。極性氨基酸的例子包括絲氨酸，脯氨酸，蘇氨酸，半胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，賴氨酸，組氨酸，精氨酸，天冬氨酸，酪氨酸和谷氨酸。非極性氨基酸的例子包括甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸，蛋氨酸，苯丙氨酸，和色氨酸。酸性氨基酸在中性PH下具有凈負(fù)電荷。酸性氨基酸的例子包括天冬氨酸和谷氨酸。堿性氨基酸在中性PH下具有凈正電荷。堿性氨基酸的例子包括精氨酸，賴氨酸和組氨酸。
[0074]芳香性氨基酸一股是非極性的，并且可以參與疏水作用。芳香性氨基酸的例子包括苯丙氨酸，酪氨酸和色氨酸。酪氨酸還可以通過芳香側(cè)鏈上的羥基參與氫鍵鍵合。中性脂肪族氨基酸一股是非極性和疏水性的。中性氨基酸的例子包括丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，異亮氨酸和蛋氨酸。一種氨基酸可以一種以上描述類別來描述。相同描述類別中的氨基酸彼此可以替代肽中的另一個(gè)。
[0075]此外，包含SEQ ID NO: I或者與SEQ ID NO: I有至少90%同一性的20個(gè)氨基酸的序列的分離的多肽可以具有與SEQ ID NO: I相同的18個(gè)氨基酸。此外，包含SEQID NO: 2或者與SEQ ID NO: 2有至少90%同一性的10個(gè)氨基酸的序列的分離的多肽可以具有與SEQ ID NO: 2相同的9個(gè)氨基酸。此外，包含SEQ ID NO: 3或者與SEQ IDNO: 3有至少90%同一性的15個(gè)氨基酸的序列的分離的多肽可以具有與SEQ ID NO: 3相同的14個(gè)氨基酸。
[0076]或者，分離的多肽可以具有55個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有54個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有53個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有52個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有51個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有49個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有48個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有47個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有46個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有45個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有44個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有43個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有42個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有41個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有40個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有39個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有38個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有37個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有36個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有35個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有34個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有33個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有32個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有31個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有30個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有29個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有28個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有27個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有26個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有25個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有24個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有23個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有22個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有21個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有20個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有19個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有18個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有17個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有16個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有15個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有12個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有11個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有10個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有9個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有8個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有7個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有6個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有5個(gè)氨基酸。或者，分離的多肽可以具有10-50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有11-50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有12-50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-45個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-40個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-35個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-30個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-25個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有13-20個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-50個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-35個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-30個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-29個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-28個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-27個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-26個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-25個(gè)氨基酸，14-24個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-23個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-22個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-21個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-20個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-19個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-18個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-17個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-16個(gè)氨基酸，或者分離的多肽可以具有14-15個(gè)氨基酸。
[0077] 用來描述肽或多肽的命名法可以根據(jù)下面的常規(guī)實(shí)際操作，其中各氨基酸殘基中氨基在左邊而羧基在右邊。在代表本發(fā)明具體實(shí)施方案的序列中，雖然沒有具體說明，但是要明白氨基-和羧基-末端基團(tuán)是設(shè)定在生理PH值下的形式，除非另有說明。在氨基酸結(jié)構(gòu)式中，每個(gè)殘基一股可用通過單字母或三字母名稱表示，對(duì)應(yīng)于表A中氨基酸名稱。
[0078]表A.自然界存在的肽中通常發(fā)現(xiàn)的20種標(biāo)準(zhǔn)L-氨基酸的命名法和縮寫
[0079]
【權(quán)利要求】
1.一種與 SEQ ID NO:1 ；SEQ ID NO: 2 ;*SEQ ID NO: 3 的任一個(gè)有至少 90% 同一性的分離的多肽，其特征在于，所述分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。
2.一種與 SEQ ID NO:1 ；SEQ ID NO:2;或 SEQ ID NO:3 的任一個(gè)有至少 95% 同一性的分離的多肽，其特征在于，所述分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。
3.一種分離的多肽，包含SEQ ID NO:1 ；SEQ ID NO:2 ;或SEQ ID NO:3中任一個(gè)序列。
4.如權(quán)利要求3的分離的多肽，其特征在于，所述分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用。
5.如權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的分離的多肽，其中所述分離的多肽進(jìn)一步包括與所述分離的多肽結(jié)合的送遞和靶向部分。
6.如權(quán)利要 求5所述的分離的多肽，其中所述所述遞送和靶向部分選自下面的一種或多種:配體，蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，或抗體。
7.如權(quán)利要求6所述的分離的多肽，其中所述蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域是HIV-1Tat蛋白質(zhì)的細(xì)胞一膜轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。
8.—種分離的多核苷酸,包括編碼權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽的核苷酸序列。
9.一種組合物，包含權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽以及載體。
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其中所述載體是藥學(xué)可接受載體。
11.一種載體，包含權(quán)利要求8的分離的多核苷酸。
12.—種細(xì)胞，包含權(quán)利要求11的載體。
13.—種細(xì)胞,包含權(quán)利要求8的多核苷酸,其中所述多核苷酸與表達(dá)調(diào)控序列操作連接。
14.一種保護(hù)細(xì)胞免受興奮性神經(jīng)毒素應(yīng)激的方法，所述方法包括向細(xì)胞送遞權(quán)利要求I~7任一項(xiàng)所述的分離的多肽。
15.一種保護(hù)細(xì)胞免受興奮性神經(jīng)毒素應(yīng)激的方法，所述方法包括:(a)向細(xì)胞遞送權(quán)利要求11的載體；和(b)表達(dá)載體所攜帶的多核苷酸。
16.一種表達(dá)多肽的方法，所述方法包括:(a)向細(xì)胞遞送權(quán)利要求11的載體；和(b)在允許載體所攜帶的多核苷酸表達(dá)的條件下維持細(xì)胞。
17.如權(quán)利要求15~16任一項(xiàng)所述的方法，其中向細(xì)胞遞送載體在體內(nèi)進(jìn)行。
18.如權(quán)利要求15~16任一項(xiàng)所述的方法,其中向細(xì)胞遞送載體在離體進(jìn)行。
19.如權(quán)利要求15~16任一項(xiàng)所述的方法,其中向細(xì)胞遞送載體在體外進(jìn)行。
20.一種治療與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的方法，所述方法包括:向需要的被試者施用生物學(xué)有效量的權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中所述生物學(xué)有效量是足以防止興奮性神經(jīng)毒性誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡的量。
22.如權(quán)利要求20或21所述的方法，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病是中風(fēng)。
24.一種治療與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的藥物組合物，所述組合物包含權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽和藥學(xué)可是接受載體。
25.如權(quán)利要求24所述的藥物組合物，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。
26.如權(quán)利要求25所述的藥物組合物，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病是中風(fēng)。
27.如權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽治療與神經(jīng)毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的用途。
28.如權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽在制備治療與神經(jīng)毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的藥物中的用途。
29.如權(quán)利要求27或28所述的用途，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。
30.如權(quán)利要求29所述的用途，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病是中風(fēng)。
31.一種用于治療與神經(jīng)毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的分離的多肽。
32.如權(quán)利要求31所述的多肽，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性 硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。
33.如權(quán)利要求32所述的多肽，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病是中風(fēng)。
34.一種商用包,包括:(a)權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽；和(b)治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的其用途說明書。
35.一種商用包，包括:(a)權(quán)利要求1~7任一項(xiàng)所述的多肽和藥學(xué)可接受載體；和(b)治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的其用途說明書。
36.一種商用包，包括:(a)權(quán)利要求24~26任一項(xiàng)所述的藥物組合物；和(b)治療與細(xì)胞毒性或興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病的其用途說明書。
37.如權(quán)利要求34~36任一項(xiàng)所述的商用包,其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病選自脊髓損傷、中風(fēng)、腦損傷、多發(fā)性硬化、阿爾茨海默病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病、酒精中毒或戒酒、和亨廷頓病。
38.如權(quán)利要求37所述的商用包，其中所述與興奮性神經(jīng)毒性相關(guān)疾病是中風(fēng)。
39.一種藥物組合物，包含: (a)與SEQ ID NO:1 ；SEQ ID NO:2;或 SEQ ID NO:3 的任一個(gè)有至少 90% 同一性的分離的多肽，其中同一性通過序列的長度計(jì)算，而且其中分離的多肽抑制包含鋅指DHHC型的十六烷?；；D(zhuǎn)移酶17(zD17)和c-jun N-末端激酶(JNK)之間的相互作用；和 (b)藥學(xué)上可接受賦形劑。
40.如權(quán)利要求39所述的組合物，其中所述賦形劑是等張注射液。
41.如權(quán)利要求39或40所述的組合物，其中所述組合物適合對(duì)人給藥。
42.如權(quán)利要求39、40或41所述的組合物，其中所述分離的多肽以包含HIV-1Tat蛋白質(zhì)的細(xì)胞膜轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的融合蛋白中存在。
43.一種消毒容器，包含權(quán)利要求39~42任一項(xiàng)所述的組合物。
44.如權(quán)利要求43所述的容器，其中所述容器是注射器。
45.一種試劑盒，包含權(quán)利要求43的消毒容器。
【文檔編號(hào)】A61P25/28GK103998602SQ201280043513
【公開日】2014年8月20日 申請(qǐng)日期:2012年7月12日 優(yōu)先權(quán)日:2011年7月12日
【發(fā)明者】馬克斯·S·西納德, 楊光 申請(qǐng)人:英屬哥倫比亞大學(xué)