疏水性制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及物質(zhì)在通常不會溶解所述物質(zhì)的疏水性溶劑中的制劑，和獲得這些制劑的方法。特別是，本發(fā)明涉及親水性物種在諸如油等疏水性溶劑中的制劑。還描述了這些制劑作為疫苗的應(yīng)用和在藥物組合物中的應(yīng)用。
【專利說明】疏水性制劑
[0001]本發(fā)明涉及物質(zhì)在通常不會溶解所述物質(zhì)的疏水性溶劑中的制劑，和獲得這些制劑的方法。特別是，本發(fā)明涉及親水性物種在諸如油等疏水性溶劑中的制劑。
[0002]本發(fā)明特別適用于在正常情況下不溶于油或其他疏水性溶劑的親水性大分子。
[0003]對于多種應(yīng)用，例如在藥物科學、食品技術(shù)或化妝品行業(yè)中的應(yīng)用，操作蛋白質(zhì)或類似的大分子時會帶來問題，這是因為它們的親水性和高度的極性限制了它們與脂相的相互作用程度或并入脂相的程度。許多天然系統(tǒng)采取脂質(zhì)屏障(例如，皮膚、細胞膜)來防止親水性分子與內(nèi)部區(qū)室接觸；將蛋白質(zhì)分散在脂質(zhì)載劑中的能力將開啟將這些大分子引入生物系統(tǒng)的新途徑，由此可以使含有蛋白質(zhì)的脂質(zhì)介質(zhì)與屏障的疏水性成分整合，而不是被其排斥。
[0004]將蛋白質(zhì)并入油中可帶來益處的另一方面是酶在有機相中的應(yīng)用。與化學方法相t匕，酶合成正變得越來越重要，這是因為其低得多的能量需求、更大的底物和產(chǎn)物特異性、高產(chǎn)率和使不可能以化學方式催化的許多反應(yīng)得到了催化。最近關(guān)于酶可以在有機環(huán)境中保持活性的發(fā)現(xiàn)開啟了很多新的可能性。因此，涉及親脂性底物和產(chǎn)物的反應(yīng)可以得到有效催化，并且酶穩(wěn)定性通常比在水性環(huán)境中高得多，使其可用于極端得多的條件中，例如高溫。一個非常重要的方面是，涉及到諸如脂肪酶和肽酶等水解酶的反應(yīng)在低水環(huán)境中能夠優(yōu)先逆向進行，因此能夠合成多種工業(yè)上重要的化合物。另一應(yīng)用是涉及到復雜反應(yīng)鏈的情況，其中多個催化單元需要保持相互接近。這可以是光引發(fā)的氧化還原反應(yīng)的情況。另一可能性是利用酶作用于有機金屬底物以引起礦化從而以受控方式在油相中產(chǎn)生納米顆粒。制備預先形成的納米顆粒在油相中的穩(wěn)定分散體還可能有利于某些表面催化的反應(yīng)的進行。
[0005]親水性物質(zhì)在油相中而非在水性介質(zhì)中的分散還對在溫度介導的變性、水解、光敏感性等方面提高其穩(wěn)定性有益?？梢赃x擇在與水溶液相比更寬的溫度范圍內(nèi)保持流體的油或者具有更高粘度的油，從而形成抗物理損傷的更大保護。在混合相體系中，蛋白質(zhì)在油中的包封可限制其與水溶性化合物之`間的對彼此有害的相互作用，例如氧化。
[0006]本發(fā)明的組合物或制劑的另一優(yōu)點在于它們基本上無水，因此對水解穩(wěn)定。它們還對冷凍-解凍穩(wěn)定，并在高溫下具有更高的穩(wěn)定性，這很可能是因為蛋白質(zhì)的解折疊和變性必須要求水的存在。這意味著可以預期所述組合物或制劑與親水性物質(zhì)的水性制劑相比具有長得多的保存期。另外，因為這些制劑是無水的，它們與制藥實踐中的膠囊相容性更好，在制藥實踐中，明膠和羥丙基甲基纖維素(HPMC)膠囊殼可吸收水分并因此軟化。
[0007]此類物質(zhì)在不相容相中的溶解可通將其包裹在兩親物外鞘中來實現(xiàn)，所述兩親物與所要溶解的物質(zhì)以及連續(xù)相均相容。這種方法在專利申請W096/014871中已有所描述，其中，將片層形成性兩親物(例如磷脂)分散在水相中，從而形成小的單片層囊泡(SUV脂質(zhì)體)，然后將其與大分子混合，之后通過凍干除去水，隨后加入疏水性(油)相。已經(jīng)提出，在添加油的過程中，脂質(zhì)體膜相互融合并形成完全包圍大分子的連續(xù)擴展的單片層或多片層膜(兩親物外鞘)。
[0008]不過，該方法具有較大的局限性，這是因為實現(xiàn)完全溶解(利用可見光散射的缺失來確定完全溶解)所需的兩親物與溶質(zhì)的比例(重量/重量)較高。在諸如油酸等油中，兩親物/溶質(zhì)比通常> 7，而甘油三脂需要為溶質(zhì)的15至20倍的兩親物來實現(xiàn)令人滿意的溶解，在礦物油的情況下，高濃度的大分子的有效溶解通常不能實現(xiàn)。由于兩親物本身在甘油三脂和其它油相中的溶解性有限，這給可容納于油相中的溶質(zhì)的最大總量帶來了較大限制——通常小于5mg/ml。此外，當將這些油相分散在水相中形成乳液時，其中增溶的分子在正常情況下容易釋放到水相中，從而損失了 30%至70%的大分子。
[0009]現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，可以以比W096/014871公開的方式更有效的方式將大分子封裝在兩親物外鞘中。這通過以下方式來實現(xiàn):首先將兩親物溶解在有機相(例如環(huán)己烷)中，然后將溶解在水相中的大分子的溶液分散在上述環(huán)己烷中以形成油包水乳液。通過這種方式，大分子被單層的兩親物包圍，而非W096/014871所述的多層包圍。不過，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，為了實施這一方法，使用單一兩親物(例如大豆磷脂酰膽堿)并不夠，并且該方法僅在采用特定比例的兩親物的特定組合時才有效。因此，本領(lǐng)域技術(shù)人員單純基于W096/014871的教導不能獲得本發(fā)明。
[0010]因此，利用本發(fā)明公開的兩親物的組合(其可以具有片層形成性或不具有片層形成性)，可以以礦物油、甘油三酯或角鯊烯構(gòu)建油制品，這些油制品容易溶解高濃度的大分子，并且即使在將油相分散到水性介質(zhì)中后還能夠保留這些大分子。即使其不是本發(fā)明的必要條件，但將大分子并入最終油相中的機制可能例如是包含到反膠團(reversemicelle)中的結(jié)果。
[0011]在第一方面，本發(fā)明提供一種單相疏水性制劑，所述制劑包含油相中的親水性物種和兩親性組分，所述兩親性組分至少包含多庫酯鈉、磷脂和非離子型兩親物，其中，所述親水性物種部分被所述兩親性組分包圍，并且所述兩親性組分的親水性頭部基團朝向所述親水性物種，并且其中，在上述兩親性組分和親水性物種之間沒有化學相互作用，例如共價相互作用；所述制劑的特征在于，所述非離子型兩親物具有:包含10至20個碳的親脂性鏈，和包含2至10個亞乙基氧基`或I至3個羥基的頭部基團。所述親水性物種的分子精細地均勻且穩(wěn)定地分散在整個疏水性介質(zhì)中。
[0012]此處所用的“非離子型兩親物”的定義是具有本文定義的親脂性鏈和頭部基團的兩親物。所述非離子型兩親物的親脂性鏈包含10至20個碳，優(yōu)選12至18個碳，更優(yōu)選14至16個碳。該親脂性鏈可包含10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個碳。所述頭部基團包含2至10個亞乙基氧基或I至3個羥基。優(yōu)選所述頭部基團包含4至8個亞乙基氧基。該頭部基團可包含2、3、4、5、6、7、8、9或10個亞乙基氧基。作為另一選擇，頭部基團可包含1、2或3個羥基。非離子型兩親物的實例包括聚氧乙烯2十六烷基醚(Bri j52)、聚氧乙烯2油烯基醚、聚氧乙烯10十六烷基醚、聚氧乙烯4十六烷基醚、聚氧乙烯4肉豆蘧基醚、聚氧乙烯3硬脂基醚、聚氧乙烯4月桂基醚、乙醇酸乙氧基化物月桂基醚和月桂基山梨聚糖或其混合物。
[0013]合適的油相包括:烴，例如非極性油，如植物油，包括花生油、紅花油、大豆油、棉籽油、玉米油、橄欖油、杏仁油、芝麻油、椰子油、蓖麻油、大風子油、桃仁油；肉豆蘧酸異丙酯礦物油，包括輕質(zhì)石蠟、角鯊烷和角鯊烯；具有不飽和脂肪酸的長鏈脂肪酸，例如優(yōu)選的油酸和亞油酸；醇,特別是中鏈醇(例如辛醇)以及支化長鏈醇(例如葉綠醇)，類萜(例如橙花醇和香葉醇)，其他醇(例如叔丁醇、松油醇)；甘油單酯，例如甘油單油酸酯(GMO);其他酯，例如乙酸乙酯、乙酸戊酯和乙酸冰片酯；中鏈或長鏈甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯及其混合物；以上任何物質(zhì)的鹵化類似物，包括鹵化油，例如長鏈碳氟化合物和碘化甘油三酯(例如lipidiol)。適合的甘油三酯包括由分餾的植物脂肪酸或其混合物衍生出的那些甘油三酯。例如，可以使用例如辛酸、癸酸和亞油酸甘油三酯的混合物，例如Miglyo1818?，或丙二醇、二辛酸酯和二癸酸酯的混合物，例如Miglyol840?。
[0014]可以使用具有磷脂酰膽堿頭部基團的磷脂，這種磷脂的實例包括磷脂酰膽堿(PC)本身、溶血磷脂酰膽堿(溶血PO、大豆PC、鞘磷脂、任何這些物質(zhì)的衍生物，例如十六烷基磷酸膽堿或含有磷酰膽堿的兩親性聚合物以及鹵化兩親物(例如氟化磷脂)。在本申請中，術(shù)語磷脂酰膽堿(PO和卵磷脂可互換使用。適合的天然卵磷脂可源自任何常規(guī)來源，例如蛋類，特別是大豆。
[0015]為了使兩親性組分以其頭部基團指向親水性物種的方式定向，需要在引入油相之前但在除去水之后使親水性物種被兩親物包圍的制備方法。這可以通過創(chuàng)造兩相油包水乳液來實現(xiàn)，其中，非水可混溶的‘油相’是容易通過例如蒸發(fā)或凍干而除去的疏水相。作為除去油相的方法，凍干是有利的，這是因為可同時除去乳液微滴中的水相。
[0016]極其優(yōu)選的是，本發(fā)明的制劑是光學透明的，這可以通過在可見光波長處測量濁度來監(jiān)測，而在一些情況下，通過檢查一段時間內(nèi)的沉淀情況來監(jiān)測。通?？梢詼y量620_的光密度。0.2以下的值、優(yōu)選0.15以下的值被認為是透明的。
[0017]在本發(fā)明的所有結(jié)構(gòu)中，兩親物分子的親水性頭部向內(nèi)朝向結(jié)構(gòu)的中心，而疏水性尾部則向外朝向分散有疏水性物種的溶劑。
[0018]因此，在本發(fā)明的第二方面，提供了一種制造含有親水性物種的疏水性制劑的方法，所述方法包括以下步驟:
[0019](i)將溶于疏水性溶劑中的多庫酯鈉、磷脂和非離子型兩親物的溶液與溶于水相的親水性物種的溶液混合以形成乳液；
[0020](ii)除去所述水相和疏水性溶劑；
[0021](iii)向在(ii)中獲得的干`燥的殘余物中添加油相。
[0022]本文所用的術(shù)語“疏水性溶劑”是指容易通過例如蒸發(fā)或凍干而除去的疏水相?？梢允褂萌魏尉哂羞m合的熔點的揮發(fā)性疏水性溶劑。該溶劑必須是水不混溶的，并且應(yīng)當容易凍干，因此其優(yōu)選具有-10°c至+15°C的冰點。適合的溶劑的實例包括環(huán)己烷、環(huán)庚烷和環(huán)辛烷,多種比例的這些化合物的混合物,和與所添加的小比例的叔丁醇的混合物,這些溶劑足以將兩親物的溶解度提高到所需水平。疏水性溶劑的選擇取決于所要溶解的物種的類型和兩親物。本領(lǐng)域技術(shù)人員利用見于以下實施例中的指導可容易地確定這種選擇。
[0023]在該程序中單獨使用磷脂不會產(chǎn)生在各種不同的油中的透明分散液。如果使用非離子型兩親物和多庫酯鈉的組合，在系統(tǒng)中完全不存在游離水的情況下，其結(jié)果在細顆粒的懸浮液或非常均勻但極其渾濁的分散液之間變化，這取決于兩親性物質(zhì)的比例。不過，包含磷脂作為較少組分與多庫酯鈉和非離子型兩親物組合卻得到了透明的分散液。在油相是礦物油并且非離子型兩親物是P0E2十六烷基醚(Brij52)的情況下，在組分重量比多庫酯鈉:磷脂:非離子型兩親物為2:1:2至3:2:3時獲得了最佳結(jié)果。這些比例僅是指示性比例，特別應(yīng)當指出，確切的比例取決于所采用的油和兩親物的性質(zhì)。如本說明書后面給出的實施例中所描述的那樣，容易進行實驗來確定任何給定情況下不同組分的最佳比例。
[0024]適合的水相包括水、氧化氘和二甲基亞砜(DMSO)?？梢詫⑸倭康念~外的親水性試劑與親水相混合，例如乙二醇、甘油、丙二醇、碳酸丙烯酯、PEG或者單糖或寡糖。
[0025]兩親物以溶劑中的總?cè)苜|(zhì)至多為100mg/ml的水平溶解于疏水性溶劑中。大分子，優(yōu)選免疫原或免疫調(diào)節(jié)劑，通常以10mg/ml至20mg/ml的濃度溶于水或其他適合的水相(例如DMSO)中。然后將水相加入到疏水性溶劑中，優(yōu)選以1:4 (體積/體積)的比例，從而在渦旋混合后得到均勻的分散液。
[0026]乳液顆粒的平均粒徑取決于疏水相和水相的確切性質(zhì)。不過，其可以為2 μ m左右。
[0027]7jC相在疏水性溶劑中的分散可通過混合來實現(xiàn)，例如通過短時間(如約10至60秒、通常約15秒)的劇烈渦旋混合來實現(xiàn)，或通過數(shù)小時的溫和混合(例如使用定軌搖床)來實現(xiàn)。
[0028]第二方面的方法的產(chǎn)物是新穎的，這是因為其使得可以制備包含溶于諸如礦物油、角鯊烷、角鯊烯和甘油三酯等油中的通常不溶于疏水性溶劑的親水性物種的組合物，其中，在將所述組合物分散在水相中后，所述親水性物種會以較高的程度保留在所述疏水性溶劑中。也可以采用在室溫下通常為固體的其他油(例如三硬脂精、三月桂精、石蠟)，只要在高于所涉及的油的熔點的溫度下進行將油添加至親水相中的步驟即可。
[0029]上述組合物可用于制備兩相組合物。因此，在第三方面，本發(fā)明提供一種包含親水相和疏水相的兩相組合物，其中，所述疏水相包含上述組合物或制劑?？赏ㄟ^使上述組合物或疏水性制劑與諸如水溶液等親水相接觸來形成所述兩相組合物。適合的親水相包含水、氧化氘和二甲基亞砜(DMSO)。可以將少量的額外的親水性試劑與親水相混合，例如乙二醇、甘油、丙二醇、碳酸丙烯酯、PEG或者單糖或寡糖。
[0030]在第三方面的優(yōu)選實施方式中，兩相組合物是水包油乳液。含有本發(fā)明的疏水性制劑或組合物的乳液也可以用于制備微膠囊。如果乳液用含有明膠的水相形成，則可以用已知方法通過凝聚使明膠從溶液中析出，并且會在含有親水物的疏水相的微滴外圍形成膜。在除去親水相后，微膠囊將保留。該技術(shù)是本領(lǐng)域中已知的，但在與本發(fā)明的制劑結(jié)合時特別有用。因此，本發(fā)明的第四方面提供了制備水包油乳液的方法，所述方法包括以下步驟:使本發(fā)明的單相疏水性制劑與親水相接觸以形成水包油乳液。
[0031 ] 在優(yōu)選實施方式中，親水相包含明膠或白蛋白。
[0032]該水包油雙乳液將親水性溶質(zhì)保留在了疏水性油相中，且隨不同時間向外部水性區(qū)域中滲漏的程度最小。該體系中使用的油優(yōu)選是礦物油、角鯊烷、角鯊烯或甘油三酯。也可以采用在室溫下通常為固體的其他油(例如三硬脂精、三月桂精、石蠟)，只要在高于所涉及的油的熔點的溫度下進行將油添加至親水相中的步驟即可。
[0033]如果外部親水相是白蛋白(例如濃度為50mg/ml的白蛋白)或至多20%w/w水平的明膠，則會進一步增強保留作用。因此親水相優(yōu)選包含明膠或白蛋白。保留程度越高，則所述制品越適合作為疫苗遞送載體。
[0034]本發(fā)明的產(chǎn)品有極多的用途，并具有多種應(yīng)用。在第五方面，本發(fā)明提供一種制品，所述制品包含本發(fā)明的制劑或組合物，以及可選的一種或多種藥物可接受賦形劑、稀釋劑或載劑。所述制品可用于醫(yī)藥應(yīng)用。
[0035]在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方式中，所述組合物或制劑中的親水性物種是免疫原。所述制品優(yōu)選為疫苗。在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的制品作為疫苗的應(yīng)用。
[0036]在本發(fā)明中 ，術(shù)語“親水性物種”涉及通?？扇苡谒匀軇┑蝗苡谑杷匀軇┑娜魏挝锓N。用于本發(fā)明中的親水性物種的范圍很廣，但親水性大分子代表了可使用的物種的實例。
[0037]多種大分子適合用于本發(fā)明。通常，這種大分子化合物具有親水性或至少具有親水性區(qū)域，這是因為將疏水性大分子溶于油性溶液一般很少有困難。適合的大分子的實例包括蛋白質(zhì)和糖蛋白質(zhì)、寡核酸和多核酸(例如DNA和RNA)、多糖以及任何這些物質(zhì)的超分子組裝體(在一些情況下包括整個細胞或細胞器)?？捎帽景l(fā)明的方法成功溶解的具體蛋白的實例包括胰島素、降鈣素、血紅蛋白、細胞色素C、辣根過氧化物酶、抑肽酶、蘑菇酪氨酸酶、紅細胞生成素、生長素、生長激素、生長激素釋放因子、加蘭肽、尿激酶、因子IX、組織型纖溶酶原激活劑、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶、過氧化物酶、鐵蛋白、干擾素、因子VIII及其片段(所有上述蛋白均可來自任何適合的來源)。可以使用的其他大分子為FITC標記的葡聚糖和Torulla酵母的RNA提取物。特別地，大分子可以為膠原，例如I型膠原或II型膠原。含有II型膠原的制品是用于口服下調(diào)類風濕性關(guān)節(jié)炎中的免疫反應(yīng)的很有前景的候選物。大分子也可以是免疫原，尤其用于疫苗組合物。通常在Iml的油中引入最低濃度為2.5mg的大分子，因此初始親水性溶劑中的大分子濃度為至少10mg/ml。
[0038]本文所用的術(shù)語“免疫原”涉及能夠引發(fā)免疫結(jié)果的物種。該結(jié)果可以是典型的免疫應(yīng)答，例如產(chǎn)生抗體或觸發(fā)特定T細胞群的分化或擴增，并且可以是系統(tǒng)性的或局部的，例如限于黏膜應(yīng)答。作為另一選擇，免疫結(jié)果還可以是例如免疫耐受，其中使初始免疫系統(tǒng)對特定抗原的激發(fā)無應(yīng)答。作為再一選擇，所述結(jié)果可以是脫敏作用，其中預先存在的發(fā)生針對特定抗原的自身免疫或過敏反應(yīng)(IgE)的趨勢降低。
[0039]免疫原可選自但不限于白喉類毒素、破傷風類毒素、肉毒桿菌類毒素、蛇毒抗原、病毒抗原(例如甲、乙、丙、丁或戊型肝炎病毒的抗原，百日咳亞基，甲型流感和/或乙型流感病毒(全滅活病毒或蛋白亞基)，HlNl豬流感病毒，H5N1禽流感病毒，脊髓灰質(zhì)炎病毒，輪狀病毒，腿腺炎病毒，麻疫病毒，水痘病毒，腦膜炎病毒，風疫病毒，呼吸道合胞病毒，HIV, EV71,登革熱病毒抗原，黃熱病病毒抗原，人乳頭狀瘤病毒抗原，皰疹病毒HSVl或HSV2抗原，埃博拉病毒，豬繁殖與呼吸綜合征病毒，豬環(huán)狀病毒2型，西尼羅河病毒，日本腦炎病毒，手足口病抗原)、整個細菌或其提取物(例如BCG，其他分枝桿菌抗原，腸道疾病病原體及其抗原，包括例如霍亂抗原、沙門菌屬物種、埃希氏菌屬物種、幽門螺桿菌抗原、銅綠假單胞菌、衣原體物種、奈瑟球菌屬物種、耶爾森菌屬物種)、真菌或真菌抗原、甲型或乙型流感嗜血桿菌(帶有或不帶有載體蛋白)、原生動物`抗原(例如瘧疾、利什曼原蟲、弓形蟲、錐蟲)、吸蟲抗原(例如血吸蟲)、絳蟲抗原(例如，來自囊尾蝴、棘球蝴)、線蟲抗原(例如弓蛔蟲、鉤蟲和絲蟲)、螺旋屬抗原(例如疏螺旋體屬物種)、癌細胞特異的表面膜表位和靶向細胞受體的抗炎調(diào)節(jié)因子、類固醇的聚合物綴合物。用于下調(diào)免疫應(yīng)答的免疫原包括HLA抗原、花粉、塵螨抗原、蜂螯或食物過敏原，例如麩質(zhì)或花生、谷氨酸脫氫酶、用于治療糖尿病的胰島素或含有胰島素亞組分的綴合物。另外，免疫原可以是膠原，例如I型膠原或II型膠原。含有II型膠原的制品是用于口服下調(diào)類風濕性關(guān)節(jié)炎中的免疫反應(yīng)的很有前景的候選物。免疫原可以是肽、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖、核酸、類固醇和/或一種或多種這些試劑的組合形成的綴合物。當抗原是肽、多糖或其他抗原時，還可以使其與至少一條中鏈或長鏈烴尾綴合。
[0040]本發(fā)明的一個優(yōu)點在于不同的抗原(例如蛋白和多糖)可以共存于同一載體中，從而通過一種組分作為另一種組分的載劑來引發(fā)增強的免疫應(yīng)答，而無需任何共價連接。
[0041]在需要上調(diào)免疫應(yīng)答的情況下，免疫原可以與一種或多種其他分子(免疫刺激劑或佐劑)結(jié)合，一起作為免疫原共同嵌入同一油相中。所述佐劑可包括:霍亂毒素B片段及其類似物和衍生物，大腸桿菌不耐熱毒素及其類似物和衍生物，BCG，含有CpG的寡核苷酸序列，破傷風類毒素，白喉類毒素，細菌脂質(zhì)A (完好的或去毒)，單磷?；|(zhì)A。[0042]在另一實施方式中，免疫原與一種或多種細胞因子共溶解以增強應(yīng)答。適合的細胞因子的實例包括IL-4、IL-10、IL-12和、干擾素。也可以加入其他免疫刺激劑，例如單磷?；|(zhì)A、分枝桿菌提取物、胞壁酰二肽及類似物、促吞噬肽和霍亂亞單位B和大腸桿菌的不耐熱毒素。
[0043]還可以方便地將小分子(例如維生素)與大分子(特別是多糖，例如環(huán)糊精)一起共溶解。小分子(如維生素B12)還可以與大分子化學偶聯(lián)，從而可以包含在組合物中。
[0044]與例如W095/13795等現(xiàn)有技術(shù)的方法相比，本發(fā)明的方法可以以低得多的兩親物:蛋白質(zhì)比例進行包封。這可以使更多的大分子并入諸如甘油三酯和礦物油等油中。另外，在分散到水性介質(zhì)中后，大分子在油中的保留更高。
[0045]除了大分子之外，本發(fā)明的方法可用于溶解更小的有機分子。有機小分子的實例包括葡萄糖、羧基熒光素和多種藥劑，例如抗癌劑，但所述方法當然可同樣適用于其他有機小分子，例如維生素或藥學活性劑或生物學活性劑。另外，利用該方法還可以溶解諸如氯化鈣和磷酸鈉等化合物。實際上，本發(fā)明對于藥學或生物學活性劑特別有利，這是因為使用非水性溶液能夠使分子進入體內(nèi)的路徑多樣化，從而例如增加生物利用度。
[0046]可包含在本發(fā)明的疏水性組合物中的另一類型的物種是無機材料，例如無機小分子或膠體物質(zhì)，例如膠體金屬。本發(fā)明的方法能夠使膠體金屬(例如膠體金、鈀、鉬或銠)的一些性質(zhì)即使在在正常情況下會使顆粒聚集的疏水性溶劑中也能夠得以保留。這對于在有機溶劑中進行的反應(yīng)的催化可以特別有用。
[0047]其他大顆粒材料也可以利用此方法來封裝，例如病毒和細菌(無論是活的、弱化的還是滅活的)。
[0048]在其他方面，本發(fā)明提供:
[0049]一種化妝品制品，所述制品包`含本發(fā)明的制劑或組合物以及可選的一種或多種賦形劑、稀釋劑或載劑。
[0050]一種治療受試對象的方法，所述方法包括施用本發(fā)明的制劑或組合物。
[0051]包含膠原或其片段的本發(fā)明的制劑或組合物，用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎。所述膠原優(yōu)選為II型膠原。
[0052]可以使用本發(fā)明的組合物的一種方式是將在正常情況下不溶于親脂性溶劑的物質(zhì)口服遞送給包括人在內(nèi)的哺乳動物。這可以用于遞送飲食補充劑，例如維生素，或用于遞送生物活性物質(zhì)，特別是蛋白質(zhì)或糖蛋白，包括胰島素、生長激素和免疫原。
[0053]在另一種應(yīng)用中，可以通過例如上述方法將諸如維生素等營養(yǎng)物包封到膠囊或微膠囊中，隨后，其不僅可以用作人類食物補充劑，還可以用于農(nóng)業(yè)和水產(chǎn)業(yè)，后者的一個實例是用于養(yǎng)殖幼蝦的食料生產(chǎn)。
[0054]另外，所述組合物可用于制備胃腸外施用的藥物或其他制品以及供局部或眼部使用的制品。對于此應(yīng)用，通常優(yōu)選使用上述的油溶液和水相的乳液。
[0055]許多治療或預防處理經(jīng)設(shè)計用來實現(xiàn)持續(xù)釋放或延遲釋放，或者涉及雙組分體系，所述雙組分體系包括例如即釋組分以及用于延遲釋放或持續(xù)釋放的組分。由于其高穩(wěn)定性，本發(fā)明的制劑對于設(shè)計用來進行持續(xù)釋放或延遲釋放的大分子制品特別有用。
[0056]本發(fā)明組合物的更長的保存期在藥物領(lǐng)域中特別有利。
[0057]這種油包親水物制劑可在制藥或類似的行業(yè)中用于掩蓋氣味。這在藥物工業(yè)中是一個特別的問題，許多藥物因為具有令人不愉快的氣味而不受患者、特別是兒童的歡迎。
[0058]另一應(yīng)用是在化妝品業(yè)中，其中，將親水性化合物的疏水性制劑并入化妝品制品中同樣非常容易。可以以這種方式使用的大分子包括那些具有一定的潤濕作用或酶促作用的大分子。本發(fā)明還可以用于將諸如膠原等蛋白質(zhì)并入皮膚病用乳膏和洗劑中。
[0059]本發(fā)明的制品可以與其他試劑聯(lián)合存在，從而使其可以施用至人和動物以實現(xiàn)治療目的或其他目的。所得的組合物可包括糊劑、乳膏、凝膠劑、半固體或兩相固體分散體。所述制品可局部施用、口服施用、眼部施用、鼻部施用或作為栓劑施用，或可作為注射劑施用(例如肌肉內(nèi)注射、皮下注射或皮內(nèi)注射)。在進行口服施用的情況下，所述組合物可以為液體、錠劑、凝膠形式或與干燥粉末混合，任何這些形式都以自由形式攝取或以封裝在例如明膠、淀粉或HPMC硬膠囊殼中或軟膠囊(例如軟明膠膠囊)中的形式攝取。可選的是，這些膠囊可以具有腸溶包衣以使它們經(jīng)過胃而不與胃內(nèi)容物相互作用，而是隨后在小腸或大腸中溶解。適合的包衣是本領(lǐng)域已知的。作為另一選擇，對于適合的施用途徑，例如鼻腔施用、肺部施用、頰部施用和舌下施用，組合物可以為氣溶膠形式。氣溶膠可以由含有本申請的疏水性制劑的油微滴或水包油微滴形成。
[0060]本發(fā)明的組合物可適合于通過任何適當?shù)耐緩絹硎┯茫缤ㄟ^口服(包括頰部和舌下)途徑、直腸途徑、鼻腔途徑、局部(包括頰部、舌下或透皮)途徑、陰道途徑或胃腸外(包括皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)或皮內(nèi))途徑。所述制品可通過制藥領(lǐng)域中已知的任何方法來制備，例如通過將活性成分與載劑或賦形劑相結(jié)合。
[0061]適合于口服施用的藥物制品可以作為離散的單元存在，例如膠囊或片劑；粉末或顆粒；水性或非水性液體中的溶液或懸浮液；可食用泡沫或攪拌物(whip);乳液。
[0062]適合于局部施用的藥物制品可以配制成軟膏、乳膏、懸浮液、洗劑、散劑、溶液、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣溶膠或油。
[0063]對于向眼部或其它外部組織(例如口和皮膚)的施用，所述制品優(yōu)選作為局部軟膏或乳膏施用。當配制成軟膏時，可以將活性成分與石蠟基質(zhì)或水可混溶的軟膏基質(zhì)一起使用。作為另一選擇，可以用水包油乳膏基質(zhì)或油包水基質(zhì)來將活性成分配制成乳膏。
[0064]適合于對眼部局部施用的藥物制品包括滴眼液，其中，活性成分溶于或懸浮于適合的載劑(特別是水性溶劑)中。
[0065]適合于在口中局部施用的藥物制品包括錠劑、軟錠劑和口腔洗劑。
[0066]適合于對直腸施用的藥物制品可以作為栓劑或灌腸劑存在。
[0067]載劑為固體的適合于鼻腔施用的藥物制品包括粒徑為例如20 μ m至500 μ m的粗粉末，其以嗅入的方式施用，即，從舉到鼻下近處的粉末容器中通過鼻道快速吸入。載劑為液體的作為噴鼻劑或滴鼻劑施用的適合制品包括包含活性成分的微乳化液的水溶液或油溶液。
[0068]適合于吸入施用的藥物制品包括細粉灰或煙霧，其可用各種類型的計量給藥式加壓氣溶膠、噴霧器或吹入器來產(chǎn)生。
[0069]適合于陰道施用的藥物制品可以作為陰道環(huán)、棉塞、乳膏、凝膠、糊劑、泡沫或噴霧制品存在。
[0070]適合于胃腸外施用的藥物制品包括:水性和非水性的無菌注射液，其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使該制品與計劃的接受者的血液等滲的溶質(zhì)；水性和非水性的無菌懸浮液，其可包含懸浮 劑和增稠劑。這些制品可以存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密閉的安培瓶和小瓶，并且可以儲存在冷凍干燥(凍干)條件下，只需在即將使用時添加無菌液體載劑(例如注射用水)。即用注射溶液和懸浮液可以用無菌粉末、顆粒和片劑來制備。
[0071]應(yīng)當理解的是，除了以上特別提及的成分之外，所述制品還可以包含在所涉及的制品類型的相關(guān)領(lǐng)域中常規(guī)使用的其他試劑，例如，適合于口服施用的制品可包含調(diào)味劑。
[0072]最后，本發(fā)明在化學和生物合成領(lǐng)域(例如無水酶促合成)中具有多種應(yīng)用。
[0073]下面將參考下述非限制性實施例和以下附圖來進一步描述本發(fā)明:
[0074]圖1顯示了在用包含膠原的本發(fā)明的制劑治療后小鼠關(guān)節(jié)炎的發(fā)病率。
[0075]圖2顯示了施用包含膠原的本發(fā)明的制劑對關(guān)節(jié)炎小鼠軟骨侵蝕的效果。
[0076]實施例1
[0077]利用多庫酯鈉、Bri j52和大豆PC的組合在礦物油中形成含有抑肽酶的反膠團
[0078]1.在8ml帶螺旋蓋的玻璃小瓶中稱重300mg多庫酯鈉，并加入2.7ml環(huán)己烷。將蓋子擰緊后，加溫振蕩小瓶直至內(nèi)容物溶解，從而得到濃度約100mg/ml的溶液。
[0079]2.在8ml帶螺旋蓋的玻璃小瓶中稱重300mg Bri j52 (聚氧乙烯2十六烷基醚)，并加入2.7ml環(huán)己烷。將蓋子擰緊后，加溫振蕩小瓶直至內(nèi)容物溶解，從而得到濃度約100mg/ml的溶液。
[0080]3.在8ml帶螺旋蓋的玻璃小瓶中稱重300mg大豆磷脂酰膽堿，并加入2.7ml環(huán)己烷。將蓋子擰緊后，加溫振蕩小瓶直至內(nèi)容物溶解，從而得到濃度約100mg/ml的溶液。
[0081]4.將10個2m`l帶螺旋蓋的玻璃小瓶標記為I至10，在各管中分配下表所示體積的來自步驟1、2和3的溶液。
[0082]
管編號 I多庫酯鈉溶液|Brij52溶液I大豆磷脂酰膽堿
μ Iμ Iμ I
?O400-
2100300-
3200200-
4300TOO-
54000-
60400TOO
7100300TOO
8200 200 100
9300100100
104000100
[0083]5在各樣品中加入100 μ I的20mg/ml的抑肽酶溶液，短暫渦旋混合，然后在甘油浴中快速冷凍，隨后暴露于Imbar以下的真空中過夜，以除去環(huán)己烷和水。
[0084]6第二天向各小瓶中加入450 μ I礦物油，隨后將小瓶封蓋并置于輥式混合器上，
直至獲得單一均相。
[0085]7將200 μ I的各分散液轉(zhuǎn)移至微孔板中的單獨的孔中，通過在微孔板讀取儀上測量620nm處的光密度來評價散射。
[0086]從下表可見，當采用兩種以上兩親物的組合來形成疏水相時，觀察到了最有效的溶解(根據(jù)OD減少所指示的散射缺失來判斷)。
[0087]
【權(quán)利要求】
1.一種單相疏水性制劑，所述制劑包含油相中的親水性物種和兩親性組分，所述兩親性組分包含多庫酯鈉、磷脂和非離子型兩親物，其中，所述親水性物種部分被所述兩親性組分包圍，并且所述兩親性組分的親水性頭部基團朝向所述親水性物種，并且其中，在所述兩親性組分和所述親水性物種之間沒有化學相互作用；所述制劑的特征在于，所述非離子型兩親物具有:包含10至20個碳的親脂性鏈，和包含2至10個亞乙基氧基或I至3個羥基的頭部基團。
2.如權(quán)利要求1所述的制劑，其中，所述親水性物種選自:肽、蛋白、脂質(zhì)、糖、核酸、類固醇，和/或一種或多種這些試劑的組合形成的綴合物，和/或帶有至少一條中鏈或長鏈烴尾部的綴合物。
3.—種制造含有親水性物種的疏水性制劑的方法，所述方法包括以下步驟: (i)將溶于疏水性溶劑的多庫酯鈉、磷脂和非離子型兩親物的溶液與溶于水相的親水性物種的溶液混合，以形成乳液； (?)除去所述水相和疏水性溶劑； (iii)向在(ii)中獲得的干燥的殘余物中添加油相。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中，所述疏水性溶劑選自環(huán)己烷、環(huán)庚烷、環(huán)辛烷或其混合物以及可選的叔丁醇。
5.如權(quán)利要求3或4所述的方法，其中，步驟(ii)通過凍干來進行。
6.如權(quán)利要求3 至5中任一項所述的方法，其中，所述親水性物種選自:肽、蛋白、月旨質(zhì)、糖、核酸、類固醇，和/或一種或多種這些試劑的組合形成的綴合物，和/或帶有至少一條中鏈或長鏈烴尾部的綴合物。
7.如權(quán)利要求3至6中任一項所述的方法，其中，所述親水性物種是膠原或其片段、衍生物和類似物，所述親水性物種溶于乙酸和二甲基亞砜的混合物中。
8.—種兩相組合物，所述組合物包含:水相；和權(quán)利要求1或2所述的單相疏水性制劑或者能夠用權(quán)利要求3至7中任一項所述的方法獲得的單相疏水性制劑。
9.如權(quán)利要求8所述的兩相組合物，其中，所述兩相組合物是水包油乳液。
10.如權(quán)利要求8或9所述的兩相組合物，其中，所述水相包含明膠或白蛋白。
11.如權(quán)利要求10所述的兩相組合物，其中，所述兩相組合物是微膠囊。
12.—種形成兩相組合物的方法，所述方法包括:使權(quán)利要求1或2所述的制劑或者能夠用權(quán)利要求3至7中任一項所述的方法獲得的制劑與水溶液接觸。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其中，所述水相包含明膠或白蛋白。
14.用于醫(yī)藥應(yīng)用的權(quán)利要求1或2所述的制劑、或權(quán)利要求8至11中任一項所述的組合物、或能夠用權(quán)利要求3至7中任一項所述的方法獲得的制劑、或能夠用權(quán)利要求12或13所述的方法獲得的組合物。
15.一種組合物，所述組合物包含:權(quán)利要求1或2所述的制劑、或權(quán)利要求8至11中任一項所述的組合物、或能夠用權(quán)利要求3至7中任一項所述的方法獲得的制劑、或能夠用權(quán)利要求12或13所述的方法獲得的組合物，以及可選的一種或多種藥物賦形劑、稀釋劑或載劑。
16.一種疫苗，所述疫苗包含權(quán)利要求14所述的制劑或權(quán)利要求15所述的組合物。
17.如權(quán)利要求16所述的疫苗，所述疫苗適合于口服施用。
18.如權(quán)利要求17所述的疫苗，所述疫苗包括膠囊。
19.如權(quán)利要求18所述的疫苗，其中，所述膠囊具有腸溶包衣。
20.如權(quán)利要求16至19中任一項所述的疫苗，其中，所述組合物包含瘧疾抗原或流感抗原或腸道疾病病原體抗原。
21.如權(quán)利要求15所述的藥物組合物，所述組合物適于口服施用、肌肉內(nèi)施用或皮下施用。
22.—種具有腸溶包衣的膠囊，所述膠囊包含權(quán)利要求15所述的藥物組合物。
23.如權(quán)利要求15所述的組合物，所述組合物包含膠原，用于治療類風濕性關(guān)節(jié)炎。
24.一種化妝品制品，所述制品包含:權(quán)利要求1或2所述的制劑、或權(quán)利要求8至11中任一項所述的組合物、或能夠用權(quán)利要求3至7中任一項所述的方法獲得的制劑、或能夠用權(quán)利要求12或1 3所述的方法獲得的組合物，以及可選的一種或多種賦形劑、稀釋劑或載劑。
【文檔編號】A61K9/107GK103826613SQ201280033311
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年5月4日 優(yōu)先權(quán)日:2011年5月6日
【發(fā)明者】R·牛 申請人:瓦辛內(nèi)有限公司