使用來自體液的miRNA來早期檢測(cè)和監(jiān)控輕度認(rèn)知障礙(MCI)和阿爾茨海默病(AD)的方法
【專利摘要】記載了通過定量體液中的神經(jīng)突和/或突觸miRNA對(duì)輕度認(rèn)知障礙(MCI)和阿爾茨海默病(AD)早期診斷和進(jìn)展監(jiān)控的方法。
【專利說明】使用來自體液的miRNA來早期檢測(cè)和監(jiān)控輕度認(rèn)知障礙(MCI)和阿爾茨海默病(AD)的方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考
[0002]本申請(qǐng)要求2011年4月18日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/476，591,2011年4月25日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/478，766和2011年10月12日提交的美國臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/546，431的優(yōu)先權(quán)，將所有這些的全部?jī)?nèi)容引入于此以作參考。
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0003]本發(fā)明針對(duì)通過定量體液中的神經(jīng)突和/或突觸miRNA對(duì)輕度認(rèn)知障礙(MCI)和阿爾茨海默病(AD)早期診斷和進(jìn)展監(jiān)控的方法。
【背景技術(shù)】
[0004]阿爾茨海默病(AD)為最常見的神經(jīng)退行性疾病，其包括由腦細(xì)胞的代謝變化、神經(jīng)元的突觸和其它區(qū)室(compartment)的損失以及最終的神經(jīng)元死亡引起的一大組病理(為參考，參見Neurodegenerative diseases:From Molecular Concepts to TherapeuticTargets.編輯:R.von Bernhardi, N.C.1nestrosa, Nova Publishers, 2008)。由于壽命延長，通常的神經(jīng)退行性疾病，特別是AD在發(fā)達(dá)國家中已變得十分普遍。僅在美國，目前便存在超過540萬(和全世界3600萬)患AD的人群，并且估計(jì)有7000-8000萬超過55歲的人群被認(rèn)為處于發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)。2011年，在美國AD患者醫(yī)療服務(wù)的年費(fèi)用估計(jì)達(dá)$1830 億(Rocca, ff.A.等，Alzheimer' s&Dementia.2011, 7:80-93;http://www.alz.0rg/downloads/Facts_Figures_2011.pdf)。AD和其它神經(jīng)退行性疾病的藥物開發(fā)和成功治療因缺乏對(duì)它們?cè)缙谠\斷和監(jiān)控的有效方法而異常復(fù)雜。有效診斷方法的開發(fā)因腦經(jīng)長時(shí)間補(bǔ)償功能紊亂和神經(jīng)元缺失的潛能強(qiáng)大而更加復(fù)雜。這導(dǎo)致當(dāng)由于腦中嚴(yán)重的形態(tài)學(xué)變化(包括神經(jīng)元的大量損失)而不能非常成功地治療時(shí)疾病癥狀的臨床表現(xiàn)晚。因此，特別期望基于發(fā)病早期事件檢測(cè)的診斷方法。
[0005]阿爾茨海默病的特征在于特征在于在幾種疾病特異的腦區(qū)如海馬體和皮質(zhì)中神經(jīng)元死亡。然而，神經(jīng)元損失是疾病進(jìn)展中相對(duì)晚的事件，其典型地在突觸機(jī)能障礙、突觸損失、神經(jīng)突退縮和其它畸形出現(xiàn)如軸突輸送缺陷之后(參見，例如Crews, Masliah, HumanMol Gen.，2010，19:R12-R20 ;Bredesen，Molecular Neurodegeneration 2009，4:27；Nimmrich 和 Ebert，RevNeurosc1.2009，20:1-12 ;Yoshiyama 等，Neuron.2007，53:337-351 ；Wishart 等，J Neuropathol Exp Neurol.2006,65:733-739 ；GyIys 等，NeurochemInt.2004;44:125-131 ；Conforti 等，Trends Neurosc1.2007, 30:159-166 ；Revueltaj 等 Am J Alzhe`imers Dis Other Demen 2008，23:97-102)。許多研究致力于描述伴隨膜封閉的"軸小體"脫落，軸突、樹突和脊柱修剪(pruning)以及突觸解體的軸突破壞(Goda，Davis，Neuron 2003，40:243-264 ;Eaton，Davis，GenesDevelopment, 2003，17: 2075-2082 ；Koirala,Koj Neuron, 2004，44:578-580 ；Bishop等，Neuron, 2004，44:651-661 ；Low, Cheng, Phil.Trans.R.Soc.B 2006361，1531-1544)。[0006]目前嘗試開發(fā)能夠恢復(fù)樹突棘狀突起密度和突觸的抗-AD療法(Adlard等，PLoSONE, 2011，6:el7669)。
[0007]表現(xiàn)為輕度臨床癥狀的阿爾茨海默病的第一癥狀階段為輕度認(rèn)知障礙(MCI)，其通常被定義為正常老齡化和癡呆癥之間的中間狀態(tài)(DeCarli，LancetNeurol., 2003, 2:15-21 ；Stephan 等，Alzheimer 1 s Res Therapy, 2009, 1:1-9 ；Apostolova 等，Human Brain Mapping, 2010，31:786-797)。一般來說，MCI 患者以每年10-15% 的速度轉(zhuǎn)化為癡呆癥(Petersen 等，Arch Neurol.2001, 58:1985-1992 ；Apostolova等，Human Brain Mapping, 2010，31:786-797)。然而，目前無法可靠地預(yù)測(cè)MCI結(jié)果。首先，多達(dá) 40% 的 MCI 患者恢復(fù)為正常狀態(tài)(Larrieu 等，Neurology, 2002, 59:1594-1599 ；Brooks, Loewenstein, Alzheimer 1 s Res Therapy, 2010，2:28-36),并且尸體解剖研究表明大量MCI患者不具有AD病理的跡象(Jicha等，Arch Neurol, 2006, 63:674-681 ；Khan, Alkon, Neurobiol.10 Aging, 2010，31:889-900)。其次，約 20% 的轉(zhuǎn)化為癡呆癥的MCI患者診斷為未患有AD但患有其它神經(jīng)退行性疾病如血管癥、路易氏體(Lewy body)癥、亨廷頓癥、帕金森癥及其它癡呆癥(Jicha等，Arch Neurol, 2006, 63:674-681 ；Stephan等，Alzheimer' s Res Therapy, 2009，1:1-9)。第三，AD患者的疾病進(jìn)展從緩慢到中等和快速變化(Doody 等，Alzheimer' s Res Therapy, 2010，2:2-10)。甚至臨床 MCI 也并不是均一的病理且可描述為兩種病況，健忘癥狀(aMCI)和無健忘癥狀(Dlugaj等，DementGeriatr Cogn Disord., 2010, 30:362-373 ；Brooks, Loewenstein, Alzheimer 1 s ResTherapy, 2010，2:28-36)。一些出版物已證實(shí)，aMCI更經(jīng)常轉(zhuǎn)化為癡呆癥并且是AD較好的預(yù)測(cè)指標(biāo)(Mariani 等，J Alzheimer ' s Dis.，2007，12:23-35 ;Luck 等，PsychiatrPrax.，2008，35:331-336 ;Koivunen 等，Neurology, 2011，76:1085-1099)。然而，其他作者還未發(fā)現(xiàn)兩種MCI形式的轉(zhuǎn)化率的顯著差異(Rountree等，Dement Geriatr CognDisord.，2007，24:476-482)。
[0008]目前，AD和其它形式的癡呆癥的診斷是基于患者認(rèn)知功能的分析。如上所述，由于腦中有效的代償機(jī)制，通常當(dāng)疾病處于其后期時(shí)才顯露出認(rèn)知功能降低并且?guī)缀鯖]有治療可行。神經(jīng)元之間的淀粉狀蛋白斑、神經(jīng)元纖維τ-纏結(jié)和腦組織的整體收縮為AD的顯著特征，并且有許多基于這些現(xiàn)象開發(fā)診斷試驗(yàn)的嘗試。新的成像技術(shù)，包括淀粉狀蛋白沉積物的體內(nèi)檢測(cè)(例如，正電子成像術(shù)(PET)、計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)、磁共振成像(MRI)、多光子成像、腦磁圖描記術(shù)(magnetoencephalography) (MEG)、腦電描記術(shù)(EEG)等)(Mucke, Nature, 2009, 461:895-897 ；Mistur 等,J.Clin.Neurol., 2009, 55:153-166 ；Miller, Science, 2009，326:386-389 ；Perrin 等，Nature, 2009，461:916-922)正變得日益流行，但不能用于篩查目的。 [0009]現(xiàn)有的AD和其它形式癡呆癥的診斷分子試驗(yàn)可分成兩組。第一組是基于單核苷酸多態(tài)性(SNP)的分析,其有助于預(yù)測(cè)高風(fēng)險(xiǎn)疾病但不用于診斷(Bettens等，Hum MolGenet.2010, 19 (Rl):R4-R11)。第二組使用體液中參與AD發(fā)病機(jī)理的蛋白質(zhì)或腦特異性蛋白如神經(jīng)絲蛋白(NTP)的分析(Schipper, Alzheimer ' s&Dementia.2007, 3:325-332)。然而，這些實(shí)驗(yàn)不足夠靈敏和特異。近來的公布數(shù)據(jù)已表明，通過測(cè)量腦脊液(CSF)中三種蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物淀粉樣蛋白1-42、總τ蛋白和磷酸化τ181Ρ蛋白)的濃度的 AD 檢測(cè)的靈敏度高(Meyer 等，Arch Neurol.2010, 67:949-956 ；Pagan A.Μ.等Arch, Neurol2011, 68:1137-1144)。CSF采集過程的高侵襲性使得此類試驗(yàn)不實(shí)用且對(duì)日常臨床應(yīng)用造成挑戰(zhàn)。若干小組已報(bào)道了根據(jù)人血液中的大量蛋白質(zhì)或抗體的AD診斷試驗(yàn)(Ray S.等 2007, Nat.Med.13，1359-1362 ；Reddy Μ.M.等 2011, Celll44, 132-142 ；Nagele E.等2011，PLoS One6，e23112)。然而，其他研究者還未能夠證實(shí)這些研究的結(jié)果(Bjorkqvist M 等 2012，PLoS One 7，e29868)。
[0010]在2011年4月19日，老齡化國家研究所/阿爾茨海默病協(xié)會(huì)(NationalInstitute on Aging/Alzheimer ' s Association)提出了新的阿爾茨海默病診斷指南(Khachaturian ZS, 2011 Alzheimer' s and Dementia, 7，253-256)。新指南發(fā)表在四份論文中，致力于:(i)AD階段的分類，即癡呆階段、有癥狀的癡呆前期階段(MCI)和AD的無癥狀、臨床前階段(前期 MCI) (Jack 等，20111Alzheimer' s and Dementia.7，257-262)；
(11)NIA推薦的由AD引起的癡呆癥的診斷(McKhann等，2011，Alzheimer' sand Dementia.7，263-269) ； (iii)NIA 推薦的由 AD 引起的 MCI 的診斷(Albert等，2011，Alzheimer' s and Dementia.7, 270-279);和(iv) NIA 推薦對(duì)前期 MCI 的定義(Sperling 等，2011，Alzheimer' s and Dementia.7，280-292)。新指南強(qiáng)調(diào)目前缺少和非常需要可用于檢測(cè)前期MCI和癥狀發(fā)生前AD以及MCI和AD的可靠的生物標(biāo)記物。
[0011]因此，存在對(duì)能夠檢測(cè)AD的MCI或甚至更早的無癥狀階段(前期MCI)的無創(chuàng)或微創(chuàng)分子試驗(yàn)的極大需求。另外，如果此類試驗(yàn)可用于疾病結(jié)果的預(yù)后(prognosis)以及疾病和治療的監(jiān)控，則會(huì)更好。
[0012]發(fā)生在AD和其它神經(jīng)退行性疾病中的代謝變化引起棘狀突起、樹突、軸突的破壞和突觸損失，后者可能誘發(fā)神經(jīng)元死亡(Bredesen, Molecular Neurodegeneration2009,4:27 ;Crews, Masliah, Human Mol Gen.，2010，19:R12-R20)。類似的過程發(fā)生在胚胎腦發(fā)育期間。許多神經(jīng)元S試圖建立細(xì)胞間接觸，成功建立細(xì)胞間接觸的那些神經(jīng)元存活，而其它神經(jīng)元死亡(Butts 等，Cell Death Differ.2008, 15:1178-1186 ；Enokido和 Hatanaka, Gan To Kagaku Ryoh0.1994`, 21:615-620 ；Gasic and Nicotera, ToxicolLett.2003，20139:221-227)。
[0013]伴隨膜封閉的"軸小體"脫落，軸突、樹突和棘狀突起的修剪以及突觸解體的軸突破壞導(dǎo)致出現(xiàn)包含神經(jīng)元、軸突、神經(jīng)突、棘狀突起和突觸的胞質(zhì)成分(包括蛋白質(zhì)、RNA及其降解產(chǎn)物)的無細(xì)胞囊泡。還存在導(dǎo)致這些化合物釋放于胞外基質(zhì)的其它過程，特別是起泡(blebbing) (Charras 等,Biophys.J.2008, 94:1836-1853 ；Fackler, Grosse, J.CellBiol.2008，181:879-884)、胞吐作用(Skog 等 Nat Cell Biol.，2008，10:1470-1476)和其它形式的主動(dòng)分泌(Wang 等 Nucleic Acids Res.，2010，38:7248-7259 ;Kosaka 等，J BiolChem.，2010，285:17442-30 17452 ；Pigati 等，PLoS ONE, 2010，el3515)。
[0014]微小RNA (miRNA)是一類非編碼RNA，其終產(chǎn)物為約22nt的功能性RNA分子。它們通過結(jié)合至信使轉(zhuǎn)錄本的互補(bǔ)區(qū)域來抑制它們的翻譯或調(diào)控降解而在靶基因調(diào)控中起到重要作用(Griffiths-Jones Nucleic Acids Research, 2006, 34, Databaseissue:D140-D144)。通常，一種miRNA可靶向多種mRNA，并且一種mRNA可受靶向3' UTR的不同區(qū)域的多種miRNA調(diào)控。一旦結(jié)合至mRNA, miRNA便可通過影響例如mRNA翻譯和穩(wěn)定性來調(diào)芐基因表達(dá)和蛋白質(zhì)產(chǎn)生(Baek等，Nature 455 (7209): 64 (2008)；Selbach 等，Nature455 (7209):58 (2008) ；Ambros,2004,Nature,431,350-355 ；Barte1,2004, Cel I, 116,281-297 ；Cullen,2004, Virus Research., 102,3-9 ；He等，2004，Nat.Rev.Genet.，5，522-531;和 Ying 等，2004，Gene, 342，25-28)。還有特征較少的其它類型的小 RNA(綜述于 Kim, Mol.Cells, 2005，19:1-15)。
[0015]許多miRNA特異于或過表達(dá)于某一器官/組織/細(xì)胞(參見，例如，Hua等，BMC Genomics, 2009, 10:214 ；Liang 等，BMC Genomics.2007, 8:166 ；Landgraf等，Cell.2007，129:1401-1414 ；Lee 等，RNA.2008，14:35-42)。[0016]包括細(xì)胞特異的那些miRNA在內(nèi)的某些miRNA在某些細(xì)胞區(qū)室中富集，特別是在軸突、樹突和突觸中富集(參見，例如Schratt等，Nature.439:283-289，2006 ；Lugli 等，J Neurochem.106:650-661,2008 ；Bicker 和 Schratt,J Cell Mo IMed., 12:1466-1476, 2008 ；Smalheiser 和 Lugli, Neuromolecular Med.11:133-140，2009 ；Rajasethupathy, Neuron.63:714-716, 2009 ；Kye,RNA13:1224-1234, 2007 ；Yu 等，ExpCell Res.314:2618-2633，2008 ;Cougot,等，J Neurosc1.28:13793-13804,2008 ；Kawahara, Brain Nerve.60:1437-1444, 2008 ；Schratt G.Rev Neurosc1.2009 ；10:842-849 ；Pichardo-Casas 等 Brain Research.1436:20-33，2012)。
[0017]miRNA的表達(dá)和濃度受各種生理和病理信號(hào)的調(diào)控。某些miRNA的表達(dá)變化發(fā)現(xiàn)于阿爾茨海默病和其它神經(jīng)退行性疾病患者的神經(jīng)元中(Hebert和DeStrooper, Trends Neurosc1.32:199-206, 2009 ；Saba 等，PLoS One.2008 ；3:e3652 ；Kocerha 等，Neuromolecular Med.2009 ;11:162-172 ;Sethi 和 Lukiw, NeurosciLett.2009,459:100-104 ； Zeng,Mo I Pharmaco 1.75:259-264，2009 ；Cogswe 11等,Journal of Alzheimer’s Disease。14: 27-41，2008 ;Schaefer 等,J.Exp.Med.204:1553-1558, 2007 ；Hebert, Proc Natl Acad Sci USA 2008 ； 105:6415-6420 ；Wang 等，J Neurosc1.2008，28:1213-1223 ；Nelson 等，Brain Pathol.2008 ; 18:130-138 ；Lukiw, Neuroreport.2007 ； 18:297-300)。
[0018]由于它們的尺寸小，miRNA可穿過血腦、胎盤和腎臟屏障。miRNA釋放可被病理如惡性腫瘤等活化(Pigati等，PLoS ONE, 2010, el3515)。已提出體液中細(xì)胞/組織-特異性miRNA的分析用于檢測(cè)體內(nèi)細(xì)胞死亡(美國專利公布20090081640號(hào)；Laterza等，ClinChem.2009, 55:1977-1983)。
[0019]目前作為用作神經(jīng)退行性疾病如AD診斷的主要方法的認(rèn)知功能試驗(yàn)和腦成像僅允許檢測(cè)疾病的晚期，并且不夠特異。本領(lǐng)域中仍然存在對(duì)開發(fā)在發(fā)生主要的形態(tài)學(xué)變化和大量神經(jīng)細(xì)胞死亡前早期診斷MCI和AD的方法的極大需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0020]如上述背景部分所述，對(duì)用于阿爾茨海默病(AD)、輕度認(rèn)知障礙(MCI)和無癥狀前階段以及其它神經(jīng)退行性疾病的無創(chuàng)或微創(chuàng)的早期檢測(cè)和監(jiān)控試驗(yàn)存在極大的需求。本發(fā)明通過基于定量體液中的突觸和/或神經(jīng)突miRNA來提供新的高靈敏和無創(chuàng)或微創(chuàng)診斷和監(jiān)控方法來滿足該需求。本發(fā)明的方法允許在發(fā)生主要的形態(tài)變化和大量神經(jīng)細(xì)胞死亡之前診斷和監(jiān)控前期MC1、MC1、AD以及其它神經(jīng)退行性疾病，因而具有許多臨床意義。例如，使用本發(fā)明的方法可導(dǎo)致目前神經(jīng)退行性疾病的可行性治療的有效性增強(qiáng)，因?yàn)榇祟愔委熆稍诩膊〉娘@著更早期階段施用。使用本發(fā)明的方法還可允許開發(fā)新的有效的治療性和/或預(yù)防性處理，并可降低費(fèi)用和提高與此類開發(fā)相關(guān)的臨床試驗(yàn)的效率(例如，通過簡(jiǎn)化和增強(qiáng)患者選擇和分組(stratification)的確定性,和/或通過簡(jiǎn)化和提高藥物效力評(píng)價(jià)方法的效率)。
[0021]在一方面，本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)受試者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括:
[0022]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0023]b.比較從受試者采集的體液樣品中的所述miRNA水平和所述miRNA的年齡相稱的對(duì)照水平，和
[0024]c.⑴當(dāng)從受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與年齡相稱的對(duì)照相比增加時(shí)，將受試者鑒定為患有前期MCI或MCI，或(ii)當(dāng)從受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與年齡相稱的對(duì)照相比不增加時(shí)，將所述受試者鑒定為未患有前期MCI或MCI。
[0025]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供 一種用于檢測(cè)受試者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括:
[0026]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0027]b.測(cè)量從受試者采集的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0028]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平比；
[0029]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比,和
[0030]e.⑴當(dāng)在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比時(shí)，將受試者鑒定為患有前期MCI或MCI，或(ii)當(dāng)在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平比不高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比時(shí)，將受試者鑒定為未患有前期MCI或MCI。
[0031]在另一方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測(cè)受試者從前期MCI向MCI進(jìn)展的可能性的方法，所述方法包括:
[0032]a.測(cè)量從受試者采集的兩種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)獲得；
[0033]b.比較在從受試者采集的各體液樣品中的所述miRNA的水平與所述miRNA的年齡相稱的對(duì)照水平，和
[0034]c.如果在從受試者中采集而由此獲得的兩種或多種的體液樣品中所述miRNA的水平與年齡相稱的對(duì)照相比增加，則預(yù)測(cè)所述受試者中的疾病將從前期MCI向MCI進(jìn)展。
[0035]在一個(gè)實(shí)施方案中，體液樣品可間隔幾個(gè)月，例如間隔1、3、6、12或24個(gè)月，優(yōu)選間隔3-6個(gè)月獲得。
[0036]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測(cè)受試者從前期MCI向MCI進(jìn)展的可能性的方法，所述方法包括:
[0037]a.測(cè)量從受試者采集的兩種或多種的體液樣品中的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)獲得；
[0038]b.測(cè)量從受試者采集的各相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0039]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比；
[0040]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的從受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和
[0041]e.如果在從受試者中采集而由此獲得的兩種或多種的體液樣品中在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則預(yù)測(cè)受試者的疾病將從前期MCI向MCI進(jìn)展。
[0042]用于上述方法的miRNA的年齡相稱的對(duì)照水平或年齡相稱的對(duì)照比可為，例如預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)(例如，使用具備正常認(rèn)知功能的年齡相稱的群體確定的本領(lǐng)域-接受水平或比)。
[0043]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)受試者中的腦老化的方法，所述方法包括: [0044]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0045]b.比較從受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與⑴事先從相同受試者獲得的所述miRNA的對(duì)照水平，或與(ii)預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)，和
[0046]c.當(dāng)從受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與對(duì)照⑴相比或與所述預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)(ii)相比增加時(shí)，將受試者鑒定為正經(jīng)受腦老化。
[0047]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于檢測(cè)受試者中的腦老化的方法，所述方法包括:
[0048]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0049]b.測(cè)量從受試者采集的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0050]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平比；
[0051]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比與⑴事先從相同受試者獲得的相應(yīng)的對(duì)照比，或與(ii)預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)比，和
[0052]e.當(dāng)在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比高于相應(yīng)的對(duì)照比⑴或與所述預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)比(ii)相比高時(shí)，將受試者鑒定為正經(jīng)受腦老化。
[0053]用于上述兩種方法的預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)可為，例如使用具備正常認(rèn)知功能的相對(duì)年輕的群體(例如10-20歲，20-30歲，30-40歲，20-50歲)確定的本領(lǐng)域-接受的水平或比。
[0054]在另外的方面，本發(fā)明提供一種用于確定受試者中的前期MCI或MCI治療的有效性的方法，所述方法包括:
[0055]a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0056]b.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平；
[0057]c.比較在步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平，和
[0058]d.⑴如果在治療期間或之后miRNA的水平已降低，則確定治療有效；(ii)如果在治療期間或之后miRNA的水平并沒有降低，則確定治療不是有效的。
[0059]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于確定受試者中的前期MCI或MCI治療的有效性的方法，所述方法包括:
[0060]a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0061]b.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；[0062]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從治療開始前獲得的受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比；
[0063]d.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0064]e.測(cè)量來自治療期間或之后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0065]f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從治療期間或之后獲得的受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比；
[0066]g.比較在步驟(C)和(f)中計(jì)算的miRNA的水平比,和
[0067]h.⑴如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比低于在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比，則確定治療有效；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平比，則確定治療不是有效的。
[0068]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于確定延緩受試者中的腦老化的治療的有效性的方法，所述方法包括:
[0069]a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； [0070]b.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平；
[0071]c.比較在步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平，和
[0072]d.⑴如果在治療期間或之后miRNA的水平已降低，則確定治療有效；(ii)如果在治療期間或之后miRNA的水平并沒有降低，則確定治療不是有效的。
[0073]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于確定延緩受試者中的腦老化的治療的有效性的方法，所述方法包括:
[0074]a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0075]b.測(cè)量來自治療開始前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0076]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從治療開始前獲得的受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比；
[0077]d.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0078]e.測(cè)量來自治療期間或之后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0079]f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從治療期間或之后獲得的受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比；
[0080]g.比較在步驟(C)和(f)中計(jì)算的miRNA的水平比,和
[0081]h.⑴如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比低于在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平比，則確定治療有效；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平比，則確定治療不是有效的。
[0082]在上述用于確定治療有效性的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，樣品可例如在治療期間或之后每隔I周、2周、I個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月或24個(gè)月獲得。
[0083]在額外的方面，本發(fā)明提供一種用于鑒定對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0084]a.測(cè)量從患有前期MCI或MCI的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得；
[0085]b.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平；
[0086]c.比較步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平，和
[0087]d.(i)如果在試驗(yàn)化合物給藥后miRNA的水平已降低，則鑒定該化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用；(ii)如果在試驗(yàn)化合物給藥后miRNA的水平并沒有降低，則鑒定該化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI不是有用的。
[0088]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于鑒定對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0089]a.測(cè)量從患有前期MCI或MCI的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得；
[0090]b.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
`[0091]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比；
[0092]d.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0093]e.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0094]f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比；
[0095]g.比較在步驟(C)和(f)中計(jì)算的miRNA的水平比,和
[0096]h.⑴如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比低于在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比，則鑒定該試驗(yàn)化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用；
(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平t匕，則鑒定該試驗(yàn)化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI不是有用的。
[0097]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于鑒定對(duì)延緩腦老化有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0098]a.測(cè)量從受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得；
[0099]b.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平；
[0100]C.比較在步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平，和
[0101]d.(i)如果在試驗(yàn)化合物給藥后miRNA的水平降低，則鑒定該化合物對(duì)延緩腦老化有用；(ii)如果在試驗(yàn)化合物給藥后miRNA的水平并沒有降低，則鑒定該化合物對(duì)延緩腦老化不是有用的。
[0102]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于鑒定對(duì)延緩腦老化有用的化合物的方法，所述方法包括:
[0103]a.測(cè)量從受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得；
[0104]b.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0105]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比；
[0106]d.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0107]e.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0108]f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比。
[0109]g.比較在步驟(C)和(f)中計(jì)算的miRNA的水平比,和
[0110]h.⑴如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比低于在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平比，則鑒定該試驗(yàn)化合物對(duì)延緩腦老化有用；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的miRNA的水平比，則鑒定該試驗(yàn)化合物對(duì)延緩腦老化不是有用的。
[0111]上述試驗(yàn)化合物篩查方法還可包括將試驗(yàn)化合物向受試者給藥的步驟。
[0112]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測(cè)已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段的進(jìn)展的方法，所述方法包括:
[0113]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的miR-451的水平；
[0114]b.測(cè)量相同體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；
[0115]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平比；
[0116]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比,和
[0117]e.如果在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定受試者的疾病將從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
[0118]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測(cè)已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括:
[0119]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的miR-7、miR_125b和miR-16的至少一種的水平；
[0120]b.測(cè)量相同體液樣品中標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0121]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的miRNA的水平比；
[0122]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和
[0123]e.如果在步驟(C)中計(jì)算的至少一種比例高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定受試者的疾病將從MCI向AD的 癡呆階段進(jìn)展。[0124]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于預(yù)測(cè)已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括在一次試驗(yàn)中組合兩種生物標(biāo)記物/標(biāo)準(zhǔn)物miRNA比，即miR-451與突觸或神經(jīng)突miRNA的比以及miR-7、125b或miR-16與標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的比。如果兩種比例高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則將預(yù)期受試者的疾病從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
[0125]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括:
[0126]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的miRNA-451的水平，其中所述樣品已經(jīng)以間隔的時(shí)間點(diǎn)采集；
[0127]b.比較從受試者采集的各體液樣品中的miRNA-451的水平與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照水平，和
[0128]c.如果從受試者采集的各體液樣品中的miRNA-451的水平高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照水平，則確定受試者的疾病從MCI向AD進(jìn)展。
[0129]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括:
[0130]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的miRNA-451的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)采集；
[0131]b.測(cè)量從受試者 采集的各相同體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平;
[0132]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比；
[0133]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的從受試者采集的各體液樣品的miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和
[0134]e.如果對(duì)于從受試者采集的各體液樣品，在步驟(C)中計(jì)算的miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定受試者的疾病從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
[0135]在單獨(dú)的方面，本發(fā)明提供一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括:
[0136]a.測(cè)量從受試者采集的體液樣品中的miR-7、125b和miR-16的至少一種的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)采集；
[0137]b.測(cè)量從受試者采集的各相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平；
[0138]c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從受試者采集的各相同體液樣品中的miRNA的水平比；
[0139]d.比較在步驟(C)中計(jì)算的從受試者采集的各相同體液樣品的mRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和
[0140]e.如果對(duì)于從受試者采集的各相同體液樣品，在步驟(C)中計(jì)算的至少一種比例高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定受試者的疾病將從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
[0141]在相關(guān)方面，本發(fā)明提供一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括在一次試驗(yàn)中組合兩種生物標(biāo)記物/標(biāo)準(zhǔn)物miRNA比，即(i)miR-451與突觸或神經(jīng)突miRNA的比和(ii)miR_7、miR_125b和miR-16的至少一種與標(biāo)準(zhǔn)物 miRNA (例如，miR-491-5p 或選自由 miR_9、miR-127、miR_181a、miR-370 和miR-491-5p組成的組的兩種或多種的標(biāo)準(zhǔn)物的平均值)的比。如果對(duì)于從受試者采集的各體液樣品，(i)和(ii)兩種比例高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則將預(yù)期受試者的疾病從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
[0142]在上述方法的一個(gè)實(shí)施方案中，體液樣品可間隔幾個(gè)月，例如間隔1、3、6、12或24個(gè)月，優(yōu)選間隔3-6個(gè)月采集。
[0143]在本發(fā)明的方法中有用的突觸或神經(jīng)突miRNA的非限制性實(shí)例包括，例如miR_7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409-3p、miR-425、miR-429、miR-433-5p、miR-446、miR-467、miR-483-3p、miR-485-5p、miR-487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939。
[0144]在本發(fā)明的前期MCI和MCI診斷、預(yù)后和篩查方法中有用的突觸或神經(jīng)突miRNA的優(yōu)選實(shí)例包括 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p、miR-382、miR-7 和miR_125b。
[0145]在腦老化相關(guān)的診斷、預(yù)后和篩查方法中有用的突觸或神經(jīng)突miRNA的優(yōu)選實(shí)例包括 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p 和 miR-382。
[0146]為了增加本發(fā)明方法的準(zhǔn)確性，優(yōu)選使用兩種或多種的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平。進(jìn)一步優(yōu)選證實(shí)在兩種或多種的連續(xù)采集的體液樣品中突觸或神經(jīng)突miRNA的水平的變化。
[0147]在本發(fā)明的方法中有用的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA包括腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA以及在多種組織中表達(dá)但在腦中不顯著表達(dá)的miRNA(例如，miR-lOb或miR-141)。本發(fā)明的方法包括單一標(biāo)準(zhǔn)物(例如，miR-491-5p、miR-370等)以及兩種或多種的標(biāo)準(zhǔn)物的平均值(例如，選自由miR-9、miR-127、miR-181a、miR-370和miR-491_5p組成的組的兩種或多種的標(biāo)準(zhǔn)物)。
[0148]在本發(fā)明的方法中有用的腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物包括，例如神經(jīng)元體miRNA ;主要在腦區(qū)表達(dá)但不參與要評(píng)價(jià)的病理的miRNA ;主要在膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的miRNA和在要評(píng)價(jià)的病理中表達(dá)、分泌或二者下調(diào)的腦富集的miRNA。
[0149]在本發(fā)明的方法中有用的腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的非限制性實(shí)例包括，例如miR-9、miR-181a、miR-127、miR-370 和 miR-491_5p，其可單獨(dú)或組合使用。
[0150]在一個(gè)特定的實(shí)施方案(適用于本發(fā)明方法的每一種)中，突觸或神經(jīng)突miRNA選自由miR-128、miR-132和miR-874(統(tǒng)稱為"miR-132家族")組成的組，標(biāo)準(zhǔn)物miRNA選自由 miR-491-5p、miR-9、miR_181a 和 miR-141 組成的組。
[0151]在另一特定的實(shí)施方案(適用于本發(fā)明方法的每一種)中，突觸或神經(jīng)突miRNA選自由miR-134、miR-323-3p和miR-382 (統(tǒng)稱為"miR-134家族")組成的組，標(biāo)準(zhǔn)物miRNA 為 miR-370 或 miR-127。
[0152]在另一特定的實(shí)施方案(適用于本發(fā)明的所有方法，除了腦老化相關(guān)的方法以外)中，突觸或神經(jīng)突 miRNA 為 miR-7，標(biāo)準(zhǔn)物 miRNA 為 miR-9、miR-27、miR-181a、miR-370、miR-49 l-5p，或所有這些標(biāo)準(zhǔn)物的平均血漿濃度。
[0153]在另一特定的實(shí)施方案(適用于本發(fā)明的所有方法，除了腦老化相關(guān)的方法以外)中，突觸或神經(jīng)突神經(jīng)突miRNA為miR-125b，標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為miR-9、miR_181a、miR-370、miR-49l-5p，或所有這些標(biāo)準(zhǔn)物的平均血漿濃度。
[0154]用于本發(fā)明的方法的受試者包括，例如神經(jīng)退行性疾病或其它神經(jīng)元病理的人、獸醫(yī)用動(dòng)物和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。對(duì)于本發(fā)明的診斷、預(yù)后和治療監(jiān)控方法，受試者優(yōu)選人。對(duì)于篩查方法，受試者優(yōu)選實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
[0155]可用于本發(fā)明方法的體液的非限制性實(shí)例包括，例如血漿或血清、尿液和唾液。在一些實(shí)施方案中，miRNA從體液樣品純化。
[0156]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括(例如作為初始步驟)從受試者采集體液樣品的步驟。
[0157]在本發(fā)明的方法中，miRNA的水平可使用任何適合的技術(shù)，例如雜交、RT-PCR或測(cè)
序來確定。
[0158]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法可進(jìn)一步包括減少或消除miRNA降解的步驟。
[0159]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的診斷方法可進(jìn)一步包括向已診斷為患有病況或診斷為處于向更嚴(yán)重的病況進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)中的受試者施以治療性或預(yù)防性處理的步驟。
[0160]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的診斷方法可進(jìn)一步包括招募臨床試驗(yàn)受試者的步驟。
[0161]連同上述診斷和篩查方法，本發(fā)明還提供各種包括對(duì)檢測(cè)靶miRNA特異的一種或多種的引物和/或探針組的試劑盒。此類試劑盒可進(jìn)一步包括對(duì)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物和/或探針組。試劑盒中引物或`探針組合的非限制性實(shí)例如下:
[0162]1.對(duì)選自由miR-7、miR_125b和miR-16組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針(任選地,進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-491-5p、miR-9、miR-127、miR-181a和miR-370組成的組的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物或探針)。
[0163]2.對(duì)miR-451特異的引物或探針(任選地，進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR_7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935和miR-939組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針)。
[0164]3?對(duì)選自由 miR-7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR-125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369-5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483-3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 組成的組的至少兩種 miRNA特異的引物或探針(任選地，進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR-181a,miR-370和miR-49l_5p組成的組的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物或探針)。
[0165]4.對(duì)選自由 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p、miR-382、miR-7和miR-125b組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針(任選地,進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR_181a、miR-370 和 miR-491_5p 組成的組的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物或探針)。
[0166]5.對(duì)選自由miR-128、miR-132和miR-874組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針(任選地，進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-491-5p、miR-9、miR-181a和miR-141組成的組的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物或探針)。
[0167]6.對(duì)選自由miR-134、miR-323-3p和miR-382組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針(任選地，進(jìn)一步包括對(duì)miR-370或miR-127的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物特異的引物或探針).[0168]7.對(duì)miR-7特異的引物或探針(任選地，進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-9、miR-27、miR-181a,miR-370和miR-49l_5p組成的組的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物或探針)。
[0169]8.對(duì)miR_125b特異的引物或探針(任選地，進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR_9、miR-181a,miR-370和miR-491_5p組成的組的至少一種標(biāo)準(zhǔn)物miRNA特異的引物或探針)。
[0170]此類試劑盒可用于從患者分離的體液樣品中的直接miRNA檢測(cè)或可用在純化的RNA樣品上。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0171]圖1A-E為示出MCI患者(MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miR-7⑷，miR-874 (B), miR-9 (C), miR-181a (D)和miR-49l_5p (E)濃度比較的圖。所有濃度相對(duì)于摻標(biāo)的(spiked)ath_miR-159a 歸一化(normalization)。這里及其它盒須圖(box and whiskerplots)中，盒表示結(jié)果的50%的分布,盒上下的棒表示結(jié)果的80%。點(diǎn)表示位于80%數(shù)據(jù)以外的分析值。分析的中值由盒內(nèi)部的線表示。歸一化miRNA濃度以相對(duì)單位(對(duì)數(shù)標(biāo)尺)示于縱軸。
[0172]圖2A-C為示出MCI患者(MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miR_874(A)、miR-134(B)和miR-539(C)的濃度比較的圖。所有濃度相對(duì)于miR-141歸一化。
[0173]圖3A-C為示出MCI患者(MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA的濃度比較的圖。miR-7 (A)、miR-128 (B)和 miR-134 (C)的濃度相對(duì)于 miR_181a 歸一化。
[0174]圖4為示出MCI患者(MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miR_125b的濃度比較的圖。miR-125b的濃度相對(duì)于miR-9歸一化。
[0175]圖5A-C為示出MCI患者(MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA的濃度比較的圖。miR-128 (A)、miR-134(B)和 miR_874(C)的濃度相對(duì)于 miR-491_5p 歸一化。
[0176]圖6為示出MCI (MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA濃度比較的圖。miR-134的濃度相對(duì)于miR-127歸一化。
[0177]圖7A-B為示出比較MCI患者(MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA的濃度的圖。miR-132 (A)和miR-323_3p (B)的濃度相對(duì)于miR-16歸一化。
[0178]圖8A-C為示出MCI (MCI)和年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA濃度比較的圖。miR-134 (A)、miR-874 (B)、miR-539 (C)的濃度相對(duì)于 miR-10b 歸一化。
[0179]圖9A-C為示出MCI (MCI)和AD患者(AD)以及年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA 濃度比較的圖。miR-7 (A)、miR-132 (B)、miR-874 (C)的濃度相對(duì)于 miR-141 歸一化。
[0180]圖10A-E為示出MCI (MIC)和AD患者(AD)以及年齡相稱的對(duì)照(AMC)的血漿中miRNA 濃度比較的圖。miR-7 (A)、miR-128 (B)、miR-132 (C)、miR382 (D)和 miR-874 (E)的濃度相對(duì)于miR-9歸一化。
[0181]圖1lA-E為示出MCI和AD患者以及年齡相稱的對(duì)照的血漿中miRNA濃度比較的圖。miR-132 (A)、miR-134 (B)、miR-323_3p (C)、miR-382 (D)和 miR-874 (E)的濃度相對(duì)于miR-127-3p 歸一化。
[0182]圖12A-G為示出MCI和AD患者以及年齡相稱的對(duì)照的血漿中miRNA濃度比較的圖。miR-7 (A)、miR-128 (B)、miR-132 (C)、miR-134 (D)、miR323-3p (E)、miR-382 (F)和miR-874 (G)的濃度相對(duì)于miR_181a歸一化。
[0183]圖13A-H為示出MCI和AD患者以及年齡相稱的對(duì)照的血漿中miRNA濃度比較的圖。miR-7 (A)、miR-125 (B)、miR-128 (C)、miR-132 (D)、miR-134 (E)、miR323_3p (F)、miR-382 (G)和 miR-874 (H)的濃度相對(duì)于 miR-370 歸一化。
[0184]圖14A-H為示出MCI和AD患者以及年齡相稱的對(duì)照的血漿中miRNA濃度比較的圖。miR-7 (A)、miR-125 (B)、miR-128 (C)、miR-132 (D)、miR-134 (E)、miR323_3p (F)、miR-382 (G)和 miR-874 (H)的濃度相對(duì)于 miR-491_5p 歸一化。
[0185]圖15A-C 呈現(xiàn)利用相`對(duì)于 miR-49l-5p 歸一化的 miR-128 (A)、miR-132 (B)和miR-874(C)獲得的MCI患者(MCI)與年齡相稱的對(duì)照(AMC)之間差異的受試者操作特征(Receiver-Operating Characteristic, ROC)曲線分析。記錄 ROC 曲線(AUC)下的面積。對(duì)于各生物標(biāo)記物/標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)的靈敏性、特異性和準(zhǔn)確性計(jì)算作為生物標(biāo)記物/標(biāo)準(zhǔn)物比的“截留(cutoff)”點(diǎn)(表示為各圖上的點(diǎn))，此處樣品屬于AMC或MCI組的可能性相等。
[0186]圖16A-C 呈現(xiàn)利用相對(duì)于 miR-370 歸一化的 miR-134 (A)、miR-323_3p (B)和miR-382 (C)獲得的MCI患者(MCI)與年齡相稱的對(duì)照(AMC)之間差異的受試者操作特征(ROC)曲線分析。記錄ROC曲線(AUC)下的面積。對(duì)于各生物標(biāo)記物/標(biāo)準(zhǔn)物對(duì)的靈敏性、特異性和準(zhǔn)確性，計(jì)算作為生物標(biāo)記物/標(biāo)準(zhǔn)物比的“截留(cutoff)”點(diǎn)(表示為各圖上的點(diǎn))，此處樣品屬于AMC或MCI組的可能性相等。
[0187]圖 17A-F 呈現(xiàn) miR128 和 miR-132 (A)、miR-128 和 miR-874 (B)、miR-132 和miR-874 (C)、miR-134 和 miR-323_3p (D)、miR-134 和 miR-382 (E)、以及 miR-382 和miR-323-3p (F)之間的關(guān)聯(lián)分析。比較各種生物標(biāo)記物對(duì)的Ct值,并計(jì)算斯皮爾曼等級(jí)相關(guān)系數(shù)(Spearman, s rank correlation coefficient)r 以及 95% 置信區(qū)間(MIN&MAX)。
[0188]圖18A-J為示出21-50歲(CY)和76-86歲(CO)對(duì)照的血漿中miRNA濃度比較的圖。生物標(biāo)記物miRNA的濃度相對(duì)于各種miRNA標(biāo)準(zhǔn)物歸一化并以相對(duì)單位(縱軸)示出。A:miR-128/miR-181a ；B:miR-132/miR-181a ；C:miR-874/miR-181a ；D:miR-134/miR-370 ；E:miR-323-3p/miR-370 ；F:miR-382/miR-370 ；G:miR-132/miR-9 ；H:miR-382/miR-127-3p ；I:miR-132/miR-491-5p ；J:miR-874/miR-491_5p。
[0189]圖19示出具備初始正常的認(rèn)知功能的老年受試者在2-5年期間的血漿中生物標(biāo)記物的濃度分析。測(cè)量miR-128、miR-132和miR-874 (生物標(biāo)記物)的水平并相對(duì)于miR-49l-5p歸一化。如果三種生物標(biāo)記物中的至少兩種的濃度高于由ROC曲線(圖15)的截留點(diǎn)預(yù)定的對(duì)照值，則認(rèn)為患者是病理陽性的。灰色和黑色分別表示對(duì)照和病理。小框提供血漿miRNA試驗(yàn)的結(jié)果，外部顏色表示臨床診斷；因此，僅在其中臨床診斷不同于當(dāng)前方法的預(yù)測(cè)的情況中看到兩種顏色。
[0190]無MCI患者,如通過認(rèn)知功能試驗(yàn)所診斷的,還通過血漿miRNA試驗(yàn)確定為陰性；畫-無MCI患者，通過血漿miRNA試驗(yàn)確定為陽性；
【權(quán)利要求】
1.一種用于檢測(cè)受試者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.比較從所述受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平和所述miRNA的年齡相稱的對(duì)照水平，和 c.(i)當(dāng)從所述受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與所述年齡相稱的對(duì)照相比增加時(shí)，將所述受試者鑒定為患有前期MCI或MCI,或(ii)當(dāng)從所述受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與所述年齡相稱的對(duì)照相比不增加時(shí)，將所述受試者鑒定為未患有前期MCI或MCI。
2.一種用于檢測(cè)受試者中的前期MCI或MCI的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.測(cè)量從所述受試者采集的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和 e.(i)當(dāng)在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比時(shí)，將所述受試者鑒定為患有前 期MCI或MCI，或(ii)當(dāng)在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比不高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比時(shí)，將所述受試者鑒定為未患有前期MCI或MCI。
3.一種用于預(yù)測(cè)受試者從前期MCI向MCI進(jìn)展的可能性的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的兩種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)獲得； b.比較從所述受試者采集的各體液樣品中的所述miRNA的水平與所述miRNA的年齡相稱的對(duì)照水平，和 c.如果在從所述受試者中采集而由此獲得的兩種或多種的體液樣品中所述miRNA的水平與所述年齡相稱的對(duì)照相比增加，則預(yù)測(cè)所述受試者中的疾病將從前期MCI向MCI進(jìn)展。
4.一種用于預(yù)測(cè)受試者從前期MCI向MCI進(jìn)展的可能性的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的兩種或多種的體液樣品中的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)獲得； b.測(cè)量從所述受試者采集的各相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從所述受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的從所述受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和 e.如果在從所述受試者中采集而由此獲得的兩種或多種的體液樣品中在步驟(C)中計(jì)算的所述miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則預(yù)測(cè)所述受試者的疾病將從前期MCI向MCI進(jìn)展。
5.一種用于檢測(cè)受試者中腦老化的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.比較從所述受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與(i)事先從相同受試者獲得的所述miRNA的對(duì)照水平，或與(ii)預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)，和C.當(dāng)從所述受試者采集的體液樣品中的所述miRNA的水平與對(duì)照(i)相比或與所述預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)(ii)相比增加時(shí)，將所述受試者鑒定為正經(jīng)受腦老化。
6.一種用于檢測(cè)受試者中的腦老化的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.測(cè)量從所述受試者采集的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比與⑴事先從相同受試者獲得的相應(yīng)的對(duì)照比，或與(ii)預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)比，和 e.當(dāng)在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比高于相應(yīng)的對(duì)照比(i)或與所述預(yù)定的年輕標(biāo)準(zhǔn)比(ii)相比高時(shí)，將所述受試者鑒定為正經(jīng)受腦老化。
7.一種用于確定受試者中的前期MCI或MCI治療的有效性的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平； c.比較在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在所述治療期間或之后所述miRNA的水平已降低，則確定所述治療有效；(ii)如果在所述治療期間或之后所述miRNA的水平并沒有降低，則確定所述治療不是有效的。
8.一種用于確定受試者中的前期MCI或MCI治療的有效性的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.測(cè)量來自治療開始前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從治療開始前獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； d.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； e.測(cè)量來自治療期間或之后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從治療期間或之后獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； g.比較在步驟(c)和(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則確定所述治療有效；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則確定所述治療不是有效的。
9.一種用于確定延緩受試者中的腦老化的治療的有效性的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平；C.比較在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在治療期間或之后所述miRNA的水平已降低，則確定所述治療有效；(ii)如果在治療期間或之后miRNA的水平并沒有降低，則確定所述治療不是有效的。
10.一種用于確定延緩受試者中的腦老化的治療的有效性的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從治療開始前獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； b.測(cè)量來自治療開始前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從治療開始前獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； d.測(cè)量從治療期間或之后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； e.測(cè)量來自治療期間或之后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從治療期間或之后獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； g.比較在步驟(c)和(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則確定所述治療有效；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則確定所述治療不是有效的。
11.一種用于鑒定對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從患有前期MCI或MCI的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得； b.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平； c.比較步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在所述試驗(yàn)化合物給藥后所述miRNA的水平已降低，則鑒定所述化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用；(ii)如果在所述試驗(yàn)化合物給藥后所述miRNA的水平并沒有降低，則鑒定所述化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI不是有用的。
12.—種用于鑒定對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用的化合物的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從患有前期MCI或MCI的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得； b.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平; c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； d.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平；e.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平; f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； g.比較在步驟(c)和(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步驟( f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則鑒定所述試驗(yàn)化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI有用；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則鑒定所述試驗(yàn)化合物對(duì)減緩前期MCI或MCI的進(jìn)展或治療前期MCI或MCI不是有用的。
13.一種用于鑒定對(duì)延緩腦老化有用的化合物的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得； b.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的所述miRNA的水平； c.比較在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平,和 d.(i)如果在所述試驗(yàn)化合物給藥后所述miRNA的水平降低，則鑒定所述化合物對(duì)延緩腦老化有用；(ii)如果在所述試驗(yàn)化合物給藥后所述miRNA的水平并沒有降低，則鑒定所述化合物對(duì)延緩腦老化不是有用的。
14.一種用于鑒定對(duì)延緩腦老化有用的化合物的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從受試者采集的一種或多種的體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平，其中所述體液樣品在試驗(yàn)化合物給藥前獲得； b.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平; c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥前獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； d.測(cè)量從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的一種或多種的體液樣品中的相同突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； e.測(cè)量來自試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者的相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平; f.計(jì)算在步驟(d)和(e)中測(cè)量的從試驗(yàn)化合物給藥后獲得的受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； g.比較在步驟(c)和(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比,和 h.(i)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則鑒定所述試驗(yàn)化合物對(duì)延緩腦老化有用；(ii)如果在步驟(f)中計(jì)算的所述miRNA的水平比不低于在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比，則鑒定所述試驗(yàn)化合物對(duì)延緩腦老化不是有用的。
15.一種用于預(yù)測(cè)已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括:a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的miR-451的水平； b.測(cè)量相同體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和 e.如果在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定所述受試者的疾病將從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
16.一種用于預(yù)測(cè)已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的miR-7、miR-125b和miR-16的至少一種的水平； b.測(cè)量相同體液樣品中標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和` e.如果在步驟(C)中計(jì)算的至少一種比例高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定所述受試者的疾病將從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
17.一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的miRNA-451的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)采集； b.比較從所述受試者采集的各體液樣品中的miRNA-451的水平與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照水平，和 c.如果從所述受試者的各體液樣品中的miRNA-451的水平高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照水平，則確定所述受試者的疾病從MCI向AD進(jìn)展。
18.一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的miRNA-451的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)采集； b.測(cè)量從所述受試者采集的各相同體液樣品中的至少一種突觸或神經(jīng)突miRNA的水平; c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從所述受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的從所述受試者采集的各體液樣品的所述miRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和 e.如果對(duì)于從所述受試者采集的各體液樣品，在步驟(c)中計(jì)算的所述miRNA的水平比高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定所述受試者的疾病從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
19.一種用于監(jiān)控已診斷為患有MCI的受試者從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展的方法，所述方法包括: a.測(cè)量從所述受試者采集的體液樣品中的miR-7、125b和miR-16的至少一種的水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)采集；b.測(cè)量從所述受試者采集的各相同體液樣品中的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA的水平； c.計(jì)算在步驟(a)和(b)中測(cè)量的從所述受試者采集的各相同體液樣品中的所述miRNA的水平比； d.比較在步驟(c)中計(jì)算的從所述受試者采集的各體液樣品的所述mRNA的水平比與相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，和 e.如果對(duì)于從所述受試者采集的各體液樣品，在步驟(C)中計(jì)算的至少一種比例高于相應(yīng)的年齡相稱的對(duì)照比，則確定所述受試者的疾病將從MCI向AD的癡呆階段進(jìn)展。
20.根據(jù)權(quán)利要求1-16和18任一項(xiàng)所述的方法，其中所述突觸或神經(jīng)突miRNA選自由 miR-7、miR-25、miR_26a、miR_26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369-5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR-487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 組成的組。
21.根據(jù)權(quán)利要求1-16和18任一項(xiàng)所述的方法，其中所述突觸或神經(jīng)突miRNA選自由miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p 和 miR-382 組成的組。
22.根據(jù)權(quán)利要求1-16和18任一項(xiàng)所述的方法，其包括測(cè)量?jī)煞N或多種的突觸或神經(jīng)突miRNA的水平。`
23.根據(jù)權(quán)利要求1、2、5和6任一項(xiàng)所述的方法，其包括測(cè)量從所述受試者采集的兩種或多種的體液樣品中的miRNA水平，其中所述樣品已在間隔的時(shí)間點(diǎn)采集。
24.根據(jù)權(quán)利要求3、4、7-15和17-19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述體液樣品間隔幾個(gè)月獲得。
25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述體液樣品間隔3-6個(gè)月獲得。
26.根據(jù)權(quán)利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA選自由以下組成的組:神經(jīng)元體miRNA ;主要在不參與要評(píng)價(jià)的病理的腦區(qū)表達(dá)的miRNA ;主要在膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的miRNA和在要評(píng)價(jià)的病理中下調(diào)的腦富集的miRNA。
28.根據(jù)權(quán)利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA 選自由 miR-9、miR-181a、miR-127、miR-370 和 miR-491_5p 組成的組。
29.根據(jù)權(quán)利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為在多種組織中表達(dá)但在腦中不顯著表達(dá)的miRNA。
30.根據(jù)權(quán)利要求2、4、6、8、10、12、14、16和19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA 為 miR-lOb 或 miR-141。
31.根據(jù)權(quán)利要求16或19所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為miR-491_5p或選自由miR-9、miR-127、miR_181a、miR-370和miR-491_5p組成的組的兩種或多種的標(biāo)準(zhǔn)物的平均值。
32.根據(jù)權(quán)利要求2、4、6、8、10、12和14任一項(xiàng)所述的方法，其中所述突觸或神經(jīng)突miRNA選自由miR-128、miR-132和miR-874組成的組，和所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA選自由miR-491-5p、miR-9、miR-181a 和 miR-141 組成的組。
33.根據(jù)權(quán)利要求2、4、6、8、10、12和14任一項(xiàng)所述的方法，其中所述突觸或神經(jīng)突miRNA選自由miR-134、miR-323_3p和miR-382組成的組，和所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為miR-370或miR-127。
34.根據(jù)權(quán)利要求16或19所述的方法，其中所述突觸或神經(jīng)突miRNA為miR_7，和所述標(biāo)準(zhǔn)物 miRNA 選自由 miR-9、miR-18la、miR-370 和 miR-491_5p 組成的組。
35.根據(jù)權(quán)利要求16或19所述的方法，其中所述突觸或神經(jīng)突miRNA為miR_125b和所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA選自由miR-9、miR-18 la、miR-370和miR-491_5p組成的組。
36.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的方法，其中所述miRNA的所述年齡相稱的對(duì)照水平為預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。
37.根據(jù)權(quán)利要求2或4所述的方法，其中所述miRNA的所述年齡相稱的對(duì)照水平為預(yù)定標(biāo)準(zhǔn)。
38.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者為人。
39.根據(jù)權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)所述的方法，其中所述受試者為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。
40.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述體液樣品為血漿或血清。
41.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法包括從所述受試者采集所述體液樣品的步驟。
42.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的方法，其中所述miRNA的水平使用選自由雜交、RT-PCR和測(cè)序組成的組的方法確定。
43.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的方法，其中，在測(cè)量miRNA水平前，將所述miRNA從所述體液樣品中純化。
44.根據(jù)權(quán)利要求1-19任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括減少或消除所述miRNA降解的步驟。
45.根據(jù)權(quán)利要求7-14任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法包括將試驗(yàn)化合物向所述受試者給藥的步驟。
46.根據(jù)權(quán)利要求1、3、5、7、9、11、13、15、17和18任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括將所述突觸或神經(jīng)突miRNA或miRNA-451的水平相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)物miRNA歸一化。
47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的方法，其中所述腦富集的標(biāo)準(zhǔn)物miRNA選自由以下組成的組:神經(jīng)元體miRNA ;主要在不參與要評(píng)價(jià)的病理的腦區(qū)表達(dá)的miRNA ;主要在膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的miRNA和在要評(píng)價(jià)的病理中下調(diào)的腦富集的miRNA。
49.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA選自由miR-9、miR_181a、miR-127、miR-370 和 miR-491_5p 組成的組。
50.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為在多種組織中表達(dá)但在腦中不顯著表達(dá)的miRNA。
51.根據(jù)權(quán)利要求46所述的方法，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物miRNA為miR-10b或miR-141。
52.根據(jù)權(quán)利要求1-6和15-19任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括向已診斷為患有病況或診斷為處于向更嚴(yán)重的病況進(jìn)展的風(fēng)險(xiǎn)中的所述受試者施以治療性或預(yù)防性處理。
53.根據(jù)權(quán)利要求1-6和15-19任一項(xiàng)所述的方法，其進(jìn)一步包括招募臨床試驗(yàn)受試者。
54.一種試劑盒，其包括對(duì)選自由miR-7、miR-125b和miR-16組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-491-5p、miR-9、miR-127、miR-181a和miR-370組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
56.一種試劑盒，其包括對(duì)miR-451特異的引物或探針。
57.根據(jù)權(quán)利要求56所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-7、miR-25、miR-26a、miR-26b、miR-98、miR-124、miR_125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR-200b、miR-200c、miR-218、miR-292-5p、miR-297、miR-322、miR-323_3p、miR-329、miR-325、miR-337、miR-339、miR-345、miR-350、miR-351、miR-369-3、miR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433-5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
58.一種試劑盒，其包括對(duì)選自由 miR-7、miR-25、miR-26a、miR-26b、miR-98、miR-124、miR-125a、miR_125b、miR-128、miR-132、miR-134、miR-137、miR-138、miR-146、miR-154、miR-182、miR-183、miR_200b、miR_200c、miR-218、miR-292_5p、miR-297、miR-322、miR-323-3pλmiR-329λm iR-325λmiR-337λmiR-339λmiR-345λmiR-350λmiR-351λmiR-369-3λmiR-369_5p、miR-381、miR-382、miR-409_3p、miR-425、miR-429、miR-433_5p、miR-446、miR-467、miR-483_3p、miR-485_5p、miR_487b、miR-494、miR-495、miR-496、miR-541、miR-543、miR-656、miR-668、miR-874、miR-889、miR-935 和 miR-939 組成的組的至少兩種miRNA特異的引物或探針。
59.根據(jù)權(quán)利要求58所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR-181a、miR-370和miR-491-5p組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
60.一種試劑盒，其包括對(duì)選自由 miR-128、miR-132、miR-874、miR-134、miR-323_3p、miR-382、miR-7和miR_125b組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
61.根據(jù)權(quán)利要求60所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-10b、miR-141、miR-9、miR-127、miR-181a、miR-370和miR-491-5p組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
62.一種試劑盒，其包括對(duì)選自由miR-128、miR-132和miR-874組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
63.根據(jù)權(quán)利要求62所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-491-5p、miR-9、miR-181a和miR-141組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
64.一種試劑盒，其包括對(duì)選自由miR-134、miR-323-3p和miR-382組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)miR-370或miR-127的至少一種特異的引物或探針。
66.一種試劑盒，其包括對(duì)miR-7特異的引物或探針。
67.根據(jù)權(quán)利要求66所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-9、miR-27、miR-181a、miR-370和miR-491-5p組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
68.一種試劑盒，其包括對(duì)miR-125b特異的引物或探針。
69.根據(jù)權(quán)利要求68所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括對(duì)選自由miR-9、miR-181a、miR-370和miR-491-5p組成的組的至少一種miRNA特異的引物或探針。
70.根據(jù)權(quán)利要求54-69任一項(xiàng)所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括miRNA分離或純化手段。
71.根據(jù)權(quán)利要求54-69`任一項(xiàng)所述的試劑盒，其進(jìn)一步包括使用說明。
【文檔編號(hào)】A61K48/00GK103620057SQ201280030048
【公開日】2014年3月5日 申請(qǐng)日期:2012年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2011年4月18日
【發(fā)明者】K·S·辛納曼, V·特斯文斯基, S·R·烏曼斯基 申請(qǐng)人:迪阿米爾有限責(zé)任公司