專利名稱：利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及介孔硅納米材料進入細胞內(nèi)增效，且特別是有關(guān)于一種利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法。
背景技術(shù)：
納米材料是目前發(fā)展迅速的一個領(lǐng)域，介孔硅(MSN)是一種納米材料。由于介孔硅具有多孔性，表面面積大，表面容易進行化學(xué)修飾等優(yōu)點。近年來人們研究利用介孔硅裝載針對腫瘤化學(xué)治療的藥物，直接通過細胞內(nèi)吞進入靶細胞，到達細胞內(nèi)在溶酶體酸性pH條件下，釋放裝載的藥物，達到殺傷腫瘤細胞的作用。因此，避免了藥物在到達腫瘤細胞前對正常細胞的毒性作用，發(fā)揮特異性殺死腫瘤細胞的作用。由于介孔硅表面含有氨基，可以通過化學(xué)鍵與多肽、核苷酸等多種化學(xué)物質(zhì)相連。在介孔硅表面連接上腫瘤細胞特有的某些多肽如RGD (三肽)，就可以發(fā)揮特異性靶向腫瘤的作用。同時，介孔硅還可以與具有熒光、 近紅外發(fā)光、超順磁性材料(SPI0)等物質(zhì)一起合成，進行光學(xué)和磁共振成像，成為針對腫瘤的特異性納米探針。因此，介孔硅是一種非常有發(fā)展前途的納米材料。介孔硅發(fā)揮其生物作用的前提條件是介孔硅必須進入靶向細胞。根據(jù)研究結(jié)果，不同的介孔硅進入不同腫瘤細胞的效率不同。介孔硅的形狀、表面電荷特性、長短徑比值、表面修飾材料等都會影響其進入細胞的效率。同一介孔硅針對不同的細胞，被細胞內(nèi)吞的效率也不相同。由于細胞膜的表面呈現(xiàn)負電荷，對于表面也為負電荷的介孔硅，其進入細胞內(nèi)的效率就特別低。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是增加介孔硅特別是表面為負電荷的介孔硅納米材料進入細胞內(nèi)的效率，從而使介孔硅發(fā)揮其生物作用。為達成上述目的，本發(fā)明提出一種利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法，包括下列步驟；用無血清培養(yǎng)基500微升稀釋溶解陽性脂質(zhì)體20微升，稀釋比例為I :25，并室溫下靜置5分鐘；用500微升無血清培養(yǎng)基稀釋溶解O. 5mg介孔硅納米材料，室溫下靜置5分鐘；稀釋溶解后的陽性脂質(zhì)體與所述稀釋溶解后的介孔硅材料等量混合，室溫下靜置20分鐘；將混合液均勻加在含1640培養(yǎng)基4ml的培養(yǎng)細胞中，輕輕混勻后，37° C的二氧
化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。進一步,本發(fā)明中，所述的陽性脂質(zhì)體為Lipofectamine 2000,所述的無血清培養(yǎng)基為 OptiMEM I。本發(fā)明的有益效果是由于脂質(zhì)體(liposomes)表面帶正電荷,可以將表面帶負電荷的介孔硅(MSNs)包圍起來，脂質(zhì)體表面帶正電荷，很容易和帶負電荷的細胞膜結(jié)合，從而攜帶介孔娃進入細胞內(nèi)，提聞介孔娃納米材料進入細胞內(nèi)的效率。


圖I為陽性脂質(zhì)體Lipofectamine2000的示意圖。圖2顯示了通過透射電鏡觀察單純介孔硅納米材料被正常胚胎腎293T細胞吞噬的情況。圖3顯示了使用了本發(fā)明后再通過電鏡觀察介孔硅納米材料被正常胚胎腎293T細胞吞噬的情況。圖4應(yīng)用電感耦合等離子直讀光譜儀(ICP)測定293T對照組細胞(沒有吞噬介孔硅)、293T細胞單純介孔硅吞噬和293Τ細胞脂質(zhì)體增強介孔硅吞噬實驗后，等量細胞內(nèi)硅原子濃度，其中結(jié)果顯示，脂質(zhì)體明顯增加介孔硅進入細胞的數(shù)量?！?br> 具體實施例方式為了更了解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容，特舉具體實施例并配合所附圖式說明如下。陽性脂質(zhì)體Lipofectamine2000是一種雙層的疏水脂質(zhì)體材料，目前常規(guī)用于轉(zhuǎn)導(dǎo)DNA進入細胞。如圖I所示，由于脂質(zhì)體(liposomes)表面帶正電荷,可以將表面帶負電荷的介孔硅(MSNs)包圍起來，脂質(zhì)體表面帶正電荷，很容易和帶負電荷的細胞膜結(jié)合，從而攜帶介孔娃進入細胞內(nèi)?；谏鲜鲈?，本發(fā)明提出一種利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法，包括下列步驟用無血清培養(yǎng)基500微升稀釋溶解陽性脂質(zhì)體20微升，稀釋比例為I :25，并室溫下靜置5分鐘；用500微升無血清培養(yǎng)基稀釋溶解O. 5mg介孔硅納米材料，室溫下靜置5分鐘；稀釋溶解后的陽性脂質(zhì)體與所述稀釋溶解后的介孔硅材料等量混合，室溫下靜置20分鐘；將混合液均勻加在含1640培養(yǎng)基4ml的培養(yǎng)細胞中，輕輕混勻后，37° C的二氧
化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。且本實施例中，陽性脂質(zhì)體為美國invitrogen公司生產(chǎn)的Lipofectamine2000,無血清培養(yǎng)基為美國invitrogen公司生產(chǎn)的OptiMEM I。圖2顯示了通過透射電鏡觀察單純介孔硅納米材料被正常胚胎腎293T細胞吞噬的情況，由圖2可見，細胞內(nèi)幾乎沒有被吞噬的介孔硅納米顆粒。圖3顯示了使用了本發(fā)明的方法后再通過電鏡觀察介孔硅納米材料被正常胚胎腎293T細胞吞噬的情況。由圖3可知，陽性Lipofectamine 2000幫助介孔硅進入細胞，電鏡檢查顯示293T細胞內(nèi)吞噬有較多的介孔硅納米材料。圖4應(yīng)用電感耦合等離子直讀光譜儀(ICP)測定293T對照組細胞(沒有吞噬介孔硅)、293T細胞單純介孔硅吞噬和293Τ細胞脂質(zhì)體增強介孔硅吞噬實驗后，等量細胞內(nèi)硅原子濃度。結(jié)果顯示，脂質(zhì)體明顯增加介孔硅進入細胞的效率。本發(fā)明用于增加介孔硅納米材料，特別是表面負電荷的介孔硅進入細胞內(nèi)的效率，使介孔硅納米材料更好發(fā)揮生物作用。
雖然本發(fā)明已以較佳實施例揭露如上，然其并非用以限定本發(fā)明。本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域中具有通常知識者，在不脫離本發(fā)明的精神和范圍內(nèi)，當(dāng)可作各種的更動與潤飾。因 此，本發(fā)明的保護范圍當(dāng)視權(quán)利要求書所界定者為準(zhǔn)。
權(quán)利要求
1.一種利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法，其特征在于，包括下列步驟 用無血清培養(yǎng)基500微升稀釋溶解陽性脂質(zhì)體20微升，稀釋比例為I :25，并室溫下靜置5分鐘； 用500微升無血清培養(yǎng)基稀釋溶解O. 5mg介孔硅納米材料，室溫下靜置5分鐘； 稀釋溶解后的陽性脂質(zhì)體與所述稀釋溶解后的介孔硅材料等量混合，室溫下靜置20分鐘； 將混合液均勻加在含1640培養(yǎng)基4ml的培養(yǎng)細胞中，輕輕混勻后，37° C的二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法，其特征在于，所述的陽性脂質(zhì)體為Lipofectamine 2000。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法，其特征在于，所述的無血清培養(yǎng)基為OptiMEM I。權(quán)利要求不允許出現(xiàn)上述形式的語句。
全文摘要
本發(fā)明提供一種利用陽性脂質(zhì)體增加介孔硅納米材料進入細胞效率的方法,包括下列步驟用無血清培養(yǎng)基500微升稀釋溶解陽性脂質(zhì)體20微升，稀釋比例為125,并室溫下靜置5分鐘；用500微升無血清培養(yǎng)基稀釋溶解0.5mg介孔硅納米材料，室溫下靜置5分鐘；稀釋溶解后的陽性脂質(zhì)體與所述稀釋溶解后的介孔硅材料等量混合，室溫下靜置20分鐘；將混合液均勻加在含1640培養(yǎng)基4ml的培養(yǎng)細胞中，輕輕混勻后，37°C的二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。本發(fā)明用于增加介孔硅納米材料，特別是表面負電荷的介孔硅進入細胞內(nèi)的效率，使介孔硅納米材料更好發(fā)揮生物作用。
文檔編號A61K47/02GK102940885SQ201210486898
公開日2013年2月27日 申請日期2012年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月26日
發(fā)明者王建東, 盧光明 申請人:中國人民解放軍南京軍區(qū)南京總醫(yī)院