專利名稱：一種野菊花提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥頭狀花序,收載于《中國(guó)藥典2010年版一部》295頁(yè)。具清熱解毒、瀉火平肝之功效。用于丁瘡癰腫、目赤腫痛、 頭痛眩暈。近年來，隨著現(xiàn)代提取分離和波譜學(xué)技術(shù)以及現(xiàn)代藥理學(xué)的飛速發(fā)展，對(duì)野菊花屬植物的化學(xué)成分和生物活性的研究越來越深入。經(jīng)化學(xué)分析，其主要成份為黃酮類、酚酸類及萜類等物質(zhì)，是其發(fā)揮藥理活性的物質(zhì)基礎(chǔ)?，F(xiàn)代藥理研究證實(shí)，野菊花提取物藥理作用較為廣泛(I)心、腦血管保護(hù)作用；具有增加冠脈流量，降低氧代謝，提高耐缺氧能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌梗死的治療作用,增加腦血流量,改善微循環(huán),收縮血管作用。(2)對(duì)血液系統(tǒng)的作用；具有抗血小板聚集，增強(qiáng)纖維蛋白酶活性，降血脂、活血化瘀、抗動(dòng)脈粥樣硬化作用。(3)降壓作用；(4)抗病原微生物作用；(5)促進(jìn)白細(xì)胞吞噬功能；(6)其他作用。因此，現(xiàn)在研究較多的野菊花總黃酮作為藥用活性部位具有極大的臨床應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)開發(fā)價(jià)值。
目前，野菊花提取物的制備方法很多，但應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的多為粗提物，提取物中總黃酮含量低，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的要求。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明是要解決現(xiàn)有野菊花提取物的制備方法制備的野菊花提取物用于工業(yè)生產(chǎn)的多為粗提物，提取物中總黃酮含量低，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的要求的問題，而提供了一種野菊花提取物的制備方法。
一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的
一、取野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的16 20倍，第二次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的12 16倍，第三次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的12 16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計(jì)相對(duì)密度為 I. 10 I. 14的清膏；
二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水，加水后的體積與野菊花中藥材的質(zhì)量比為2L Ikg,再用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 5 7. 0，靜置12tT24h，收集上清液，再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. O 3. 0，再靜置12tT24h，收集上層液體；
三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質(zhì)量比為I :2. 5，再用去離子水進(jìn)行洗脫，洗脫用的去離子水體積為6 10個(gè)柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為65°/Γ85%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個(gè)柱體積,收集乙醇洗脫液；
四、對(duì)乙醇洗脫液進(jìn)行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值6. (Γ7.0，濃縮，減壓干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
本發(fā)明的有益效果是采用酸處理提取液的方法去除分子量較大的鞣質(zhì)類物質(zhì)， 運(yùn)用聚酰胺樹脂處理，采用體積濃度為80%乙醇洗脫，該工藝進(jìn)一步去除大分子的蛋白、鞣質(zhì)及樹脂類物質(zhì)，使得富集分子量較小的黃酮類物質(zhì)。該發(fā)明的關(guān)鍵點(diǎn)是采用聚酰胺樹脂處理之前，先采用酸處理提取液，使提取液中的黃酮及有機(jī)酸均已非成鹽狀態(tài)下進(jìn)入樹脂柱中，并且能夠較完全的被樹脂吸附，并且針對(duì)性較好。同時(shí)采用體積濃度為80%乙醇能夠較完全的解吸黃酮。該工藝除乙醇外，不使用其他有機(jī)溶劑，使得工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)設(shè)備要求較低，制造成本降低，同時(shí)該方法的的提取物收率較高超過2. 5%，該提取物總黃酮含量超過80%，達(dá)到國(guó)家中藥注射劑原料的技術(shù)要求。該方法主要針對(duì)于黃酮類成分，使黃酮類成分富集且適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本發(fā)明方法獲得的野菊花提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，超過 80% ;單體成分蒙花苷(C28H32O14)含量超過15%。
本發(fā)明用于制備野菊花提取物，該提取物可作為中藥注射劑原料或口服制劑的原料。
具體實(shí)施方式
本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉的具體實(shí)施方式
，還包括各具體實(shí)施方式
之間的任意組合。
具體實(shí)施方式
一本實(shí)施方式一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的
一、取野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的16 20倍，第二次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的12 16倍，第三次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的12 16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計(jì)相對(duì)密度為 I. 10 I. 14的清膏；
二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水，加水后的體積與野菊花中藥材的質(zhì)量比為2L Ikg,再用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 5 7. 0，靜置12tT24h，收集上清液，再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. O 3. 0，再靜置12tT24h，收集上層液體；
三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質(zhì)量比為I :2. 5，再用去離子水進(jìn)行洗脫，洗脫用的去離子水體積為6 10個(gè)柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為65°/Γ85%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個(gè)柱體積,收集乙醇洗脫液；
四、對(duì)乙醇洗脫液進(jìn)行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調(diào)pH值6. (Γ7.0，濃縮，減壓干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
本實(shí)施方式采用酸處理提取液的方法去除分子量較大的鞣質(zhì)類物質(zhì)，運(yùn)用聚酰胺樹脂處理，采用體積濃度為80%乙醇洗脫，該工藝進(jìn)一步去除大分子的蛋白、鞣質(zhì)及樹脂類物質(zhì)，使得富集分子量較小的黃酮類物質(zhì)。該發(fā)明的關(guān)鍵點(diǎn)是采用聚酰胺樹脂處理之前，先采用酸處理提取液，使提取液中的黃酮及有機(jī)酸均已非成鹽狀態(tài)下進(jìn)入樹脂柱中，并且能夠較完全的被樹脂吸附，并且針對(duì)性較好。同時(shí)采用體積濃度為80%乙醇能夠較完全的解吸黃酮。該工藝除乙醇外，不使用其他有機(jī)溶劑，使得工藝流程簡(jiǎn)單，生產(chǎn)設(shè)備要求較低，制造成本降低，同時(shí)該方法的的提取物收率較高超過2. 5%，該提取物總黃酮含量超過80%，達(dá)到國(guó)家中藥注射劑原料的技術(shù)要求。該方法主要針對(duì)于黃酮類成分,使黃酮類成分富集且適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
本實(shí)施方式獲得的野菊花提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，超過 80% ;單體成分蒙花苷(C28H32O14)含量超過15%。
具體實(shí)施方式
二 本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一不同的是第一次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的If 19倍，第二次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的1Γ15倍，第三次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的1Γ15倍。其它與具體實(shí)施方式
一相同。
具體實(shí)施方式
三本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一或二不同的是步驟二所述鹽酸溶液的質(zhì)量濃度為5%。其它與具體實(shí)施方式
一或二相同。
具體實(shí)施方式
四本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為70°/Γ80%。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
五本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至三之一不同的是步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為75%。其它與具體實(shí)施方式
一至三之一相同。
具體實(shí)施方式
六本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至五之一不同的是步驟四所述氫氧化鈉溶液的質(zhì)量濃度為10%。其它與具體實(shí)施方式
一至五之一相同。
具體實(shí)施方式
七本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至六之一不同的是步驟四中調(diào) pH值6. 5飛.8。其它與具體實(shí)施方式
一至六之一相同。
具體實(shí)施方式
八本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟四所述減壓干燥溫度為60°C 80°C，減壓干燥時(shí)間為6tTl0h。其它與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
具體實(shí)施方式
九本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式
一至七之一不同的是步驟四所述減壓干燥溫度為65°C 75°C，減壓干燥時(shí)間為7tT9h。其它與具體實(shí)施方式
一至七之一相同。
采用以下實(shí)施例驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果
實(shí)施例一
本實(shí)施例一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的
一、取IOOkg野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的20倍，第二次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的16倍，第三次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計(jì)相對(duì)密度為I. 10 I.14的清膏；
二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水，加水后的體積為200L，再用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH值至6. 5，靜置24h，收集上清液，再用質(zhì)量濃度為5%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH 值至2. 0，再靜置24h，收集上層液體；
三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質(zhì)量比為I :2. 5，再用去離子水進(jìn)行洗脫，洗脫用的去離子水體積為8個(gè)柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為80%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個(gè)柱體積，收集乙醇洗脫液；
四、對(duì)乙醇洗脫液進(jìn)行減壓蒸餾回收乙醇，用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調(diào) pH值6. 5，濃縮，減壓干燥，減壓干燥溫度為80°C，減壓干燥時(shí)間為9h，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
本實(shí)施例的提取物收率不少于2. 5%，主要成分為黃酮。該提取物組分情況的研究結(jié)果提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計(jì)，不少于80% ;單體成分蒙花苷 (C28H32O14)含量不少于15%。
主要成分的探索性研究
I材料、試驗(yàn)與試劑
高效液相色譜儀安捷倫1100系列液相色譜儀，配有在線脫氣機(jī)；四元梯度洗脫泵；柱溫箱。
蒙花苷化學(xué)對(duì)照品批號(hào)111528-200605
蘆丁化學(xué)對(duì)照品批號(hào)110080-200707
由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供
色譜柱 C18250X4. 6mm 5ym
試劑甲醇、乙腈色譜純(DIKMA)
試藥實(shí)施例一制備的野菊花提取物
批號(hào):110601、110901、120401
2試驗(yàn)方法與結(jié)果
2. I試驗(yàn)方法
野菊花提取物質(zhì)量控制采用紫外分光光度法測(cè)定總黃酮，高效液相法測(cè)定蒙花苷。
野菊花提取物中的大類成分主要是黃酮類成份，通過文獻(xiàn)和標(biāo)準(zhǔn)品定位，初步認(rèn)為野菊花提取物中含有蒙花苷等黃酮類成分，采用高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D)進(jìn)行含量測(cè)定。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水-磷酸系統(tǒng)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為334nm。
2. 2試驗(yàn)結(jié)果
通過對(duì)部分已知成份進(jìn)行含量測(cè)定，其含量結(jié)果見表2-1
2-1野菊花提取物質(zhì)量控制含量測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的一、取野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的16 20倍，第二次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的12 16倍，第三次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的12 16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計(jì)相對(duì)密度為I. 10 I. 14的清膏；二、向步驟一獲得的清膏內(nèi)加水，加水后的體積與野菊花中藥材的質(zhì)量比為2L:1kg， 再用質(zhì)量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6. 5 7. 0，靜置12tT24h，收集上清液， 再用鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH值至2. O 3. 0，再靜置12tT24h，收集上層液體；三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質(zhì)量比為I :2. 5，再用去離子水進(jìn)行洗脫，洗脫用的去離子水體積為6 10個(gè)柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為65°/Γ85%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個(gè)柱體積，收集乙醇洗脫液；四、對(duì)乙醇洗脫液進(jìn)行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調(diào)PH值6.(Γ7. 0，濃縮，減壓干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于第一次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的If 19倍，第二次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的1Γ15倍，第三次去離子水的質(zhì)量是野菊花中藥材的1Γ15倍。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟二所述鹽酸溶液的質(zhì)量濃度為5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為70°/Γ80%。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為75%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述氫氧化鈉溶液的質(zhì)量濃度為10%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四中調(diào)pH值 6. 5^6. 8。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述減壓干燥溫度為60°C 80°C，減壓干燥時(shí)間為6tTl0h。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述減壓干燥溫度為65°C 75°C，減壓干燥時(shí)間為7h 9h。
全文摘要
一種野菊花提取物的制備方法，本發(fā)明涉及一種提取物的制備方法。本發(fā)明是要解決現(xiàn)有野菊花提取物的制備方法制備的野菊花提取物用于工業(yè)生產(chǎn)的多為粗提物，提取物中總黃酮含量低，不能滿足工業(yè)化生產(chǎn)的要求的問題。方法如下一、去離子水煎煮野菊花中藥材，濃縮清膏；二、清膏內(nèi)加水，調(diào)pH值，收集上層液體；三、收集乙醇洗脫液；四、回收乙醇，調(diào)pH值，濃縮，減壓干燥，得到野菊花提取物。本發(fā)明方法的提取物收率較高超過2.5％，獲得的野菊花提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H30O16)計(jì)，超過80％。本發(fā)明用于制備野菊花提取物，該提取物可作為中藥注射劑原料或口服制劑的原料。
文檔編號(hào)A61P7/02GK102920767SQ20121048281
公開日2013年2月13日 申請(qǐng)日期2012年11月23日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月23日
發(fā)明者劉文亮, 賽春梅, 秦緒江, 曲林, 凌雪宇, 單鈺毓, 李殿明, 王英新 申請(qǐng)人:哈藥集團(tuán)中藥二廠