專利名稱：治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種昆蟲(chóng)藥有效成份提取物的制備方法，特別是一種用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物的制備方法。
背景技術(shù)：
美洲大蠊(Periplaneta americana)是蜚蠊科中體積最大的昆蟲(chóng),成蟲(chóng)體長(zhǎng)29 35毫米，紅褐色，翅長(zhǎng)于腹部末端。觸角很長(zhǎng)，前胸背板中間有較大的蝶形褐色斑紋，斑紋的后緣有完整的黃色帶紋，原產(chǎn)于南美洲，食性廣泛、喜食糖和淀粉、污染食物。美洲大蠊是傳統(tǒng)的中藥材，以成蟲(chóng)入藥。性寒味咸，有毒，有辛辣味、有散瘀、消積、解毒、利水、消腫等功能?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，美洲大蠊表皮含有鞏膜質(zhì)、甲殼質(zhì)、溴、鋅、鎳、猛、·鉀、鈣、鈦、氯、硫、硅、鋁、鎂等元素，肌肉水解13種氨基酸，身體貯藏微生素BI、B2、煙酸和抗壞血酸等，淋巴含海藻糖、海藻糖酶、糖蛋白、肌醇、原兒茶酸葡萄甙等，全體含麥角硫因、龍蝦肌堿、胡蘆巴堿、甘氨酸、甜菜堿、肛堿、三甲胺、腺嘌呤等。美洲大蠊目前在治療燒燙傷、口腔潰瘍、胃潰瘍、痔瘡、肛裂、胃炎和消化性胃潰瘍、胃潰瘍性結(jié)腸炎、婦科疾病、尿布疹、過(guò)敏性鼻炎、抗腫瘤等方面均有應(yīng)用，但是，目前的應(yīng)用多為傳統(tǒng)中藥應(yīng)用方式，部分應(yīng)用是干燥成蟲(chóng)作為藥物組方的一部分，部分是將其提取物與其他藥物配伍使用。由于美洲大蠊存在的有效成份很多，如果只進(jìn)行普通提取，針對(duì)特定的疾病其效果并不能達(dá)到最佳，故需要根據(jù)不同的疾病對(duì)美洲大蠊進(jìn)行特殊提取，以使其對(duì)某種疾病的治療效果達(dá)到最佳。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，所采用的工藝路線可使美洲大蠊中對(duì)治療乙型肝炎病的特定有效成份聚集，從而提高乙型肝炎病的治療效果。本發(fā)明采用以下技術(shù)實(shí)現(xiàn)上述目的
治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，包括以下步驟
A、滅活粉碎美洲大蠊鮮蟲(chóng)采用80°C 90°C的熱水殺死，控溫在60°C±5°C范圍內(nèi)烘干，粉碎，過(guò)24目篩，制得美洲大蠊粗粉；
B、提取將步驟A所得美洲大蠊粗粉在75 80°C溫度下進(jìn)行3 5次回流提取，第一次提取時(shí)，加粗粉重量5 8倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為4飛小時(shí)；第二次以后每次加粗粉重量3 6倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為3飛小時(shí)；提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C，提取完成后，合并提取液，過(guò)濾得乙醇提取液；
C、一級(jí)濃縮將步驟B所得乙醇提取液在真空度-O.05 -O. 06MPa、溫度50 60°C的條件下減壓濃縮，至比重為I. 05 I. 15時(shí)，得乙醇濃縮液；
D、脫脂吸附將步驟C所得乙醇濃縮液加入乙醇濃縮液重量7 10倍量的蒸餾水，邊拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌10 60分鐘，攪拌速度為20 60轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置I 5小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入乙醇濃縮液O. 5^1. O倍量藥用活性炭在4(T60°C溫度下攪拌3(Γ60分鐘，使其充分吸附；
Ε、洗脫將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用藥用活性炭1(Γ30倍量蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用藥用活性炭30飛0倍量的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液；
F、二級(jí)濃縮將步驟E所得洗脫濾液在溫度50 60°C、真空度-O.05 -O. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為I. 20 I. 30時(shí)，得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物浸膏；
G、干燥粉碎將步驟F所得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物在50°C 60°C溫度、真空度-O. 04 -O. 07MPa的條件下真空干燥，粉碎為細(xì)粉，即得到用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物成品。所述步驟B可以按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)用濃度為90% 95%的乙醇回流提取三次美洲大蠊粗粉第一次提取時(shí)，加粗粉重量6倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為5·小時(shí)；第二次加粗粉重量4倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為4小時(shí)；第三次加粗粉重量4倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為4小時(shí)。提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C，提取完成后，合并三次提取液，過(guò)濾得乙醇提取液；
所述步驟D可以按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)將步驟C所得乙醇濃縮液加入乙醇濃縮液重量8倍量的蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌40分鐘，攪拌速度為40轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置3小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入濾液O. 8倍量藥用活性炭在50°C溫度下攪拌45分鐘，使其充分吸附；
所述步驟E可以按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用20倍量蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用步驟D所得濾液50倍量濃度20%、PH值
2.23的醋酸乙醇液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液；
所述步驟E中所用洗脫劑為濃度10°/Γ20%、ΡΗ值2. (Γ3. O的醋酸乙醇液或濃度10% 20%醋酸的水飽和正丁醇溶液或苯酚濃度為109Γ20%的苯酚乙醇液。所述步驟E中50倍量洗脫劑洗脫后，可收集前30倍洗脫液進(jìn)行濃縮干燥得到用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物成品，而后20倍洗脫液可收集貯存作為下批洗脫劑套用，從而減少洗脫液濃縮體積，降低能耗，降低生產(chǎn)成本。本發(fā)明具有以下有益效果
本發(fā)明所述方法致力于由純中藥應(yīng)用向特定疾病、特定有效成份應(yīng)用方向發(fā)展，所采用的工藝路線可使美洲大蠊中對(duì)治療乙型肝炎用的特定有效成份聚集，從而提高單純美洲大蠊提取物對(duì)治療乙型肝炎的治療效果。具體技術(shù)具有的有益效果如下
I、采用本發(fā)明所述方法制備治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物，可以有效控制對(duì)乙型肝炎產(chǎn)生抑制效果的有效成份的水解，提高乙型肝炎治愈率。2、采用本發(fā)明所述方法制備治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物藥物，對(duì)慢性乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)40 70%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)35 60% ;對(duì)乙肝病毒攜帶者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)20 40%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)30 50%。總有效率可達(dá)80 95%。3、采用本方法進(jìn)行制備，對(duì)治療乙型肝炎用的特定有效成份提取得率可達(dá):Γ5%。4、采用本方法進(jìn)行制備，可以提高最終提取物的抗腐性，避免因腐敗變質(zhì)造成浪費(fèi)。
5、可以避免最終提取物含有蛋白質(zhì)，從而減少藥物中的有害過(guò)敏源。6、采用蒸餾水進(jìn)行除脂，相比于石油醚和氯仿脫脂，不僅成本更低，而且安全性更聞。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I
治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，包括以下步驟
A、滅活粉碎美洲大蠊鮮蟲(chóng)采用80°C的熱水殺死，控溫在60°C±5°C范圍內(nèi)烘干，取IOOKg粉碎，過(guò)24目篩，制得美洲大蠊粗粉；· B、提取將步驟A所得美洲大蠊粗粉投入提取罐內(nèi)，在75 80°C溫度下進(jìn)行3次回流提取，第一次提取時(shí)，加500Kg濃度95%的乙醇，提取時(shí)間為4小時(shí)；第二次以后每次加300Kg濃度95%的乙醇，提取時(shí)間為3小時(shí)；提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C ;提取完成后，合并提取液，過(guò)濾得乙醇提取液；
C、一級(jí)濃縮將步驟B所得乙醇提取液放入單效濃縮器在真空度-O.05 -O. 06MPa、溫度50 60°C的條件下減壓濃縮，至比重為I. 07時(shí)，得乙醇濃縮液26. 4Kg ；
D、脫脂吸附將步驟C所得乙醇濃縮液移入脫脂罐內(nèi)，加入184.SKg蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌10分鐘，攪拌速度為60轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置I小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入13. 2Kg藥用活性炭在40°C溫度下攪拌30分鐘，使其充分吸附；
E、洗脫將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用264Kg蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用792Kg的濃度20%、pH值2. 23的醋酸乙醇液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液；
F、二級(jí)濃縮將步驟E所得洗脫濾液放入單效濃縮器在溫度50 60°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為I. 23時(shí)，得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物浸膏4. 8Kg ；
G、干燥粉碎將步驟F所得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物在50°C 60°C溫度、真空度-O. 04 -O. 07MPa的條件下真空干燥，粉碎為細(xì)粉，即得到用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物成品3. 9Kg。采用上述方法制備治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物藥物，對(duì)治療乙型肝炎用的特定有效成份提取得率可達(dá)3. 9%。對(duì)慢性乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)57. 1%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)52. 6% ;對(duì)乙肝病毒攜帶者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)37. 0%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)43. 3%?？傆行士蛇_(dá)91.9%。實(shí)施例2
治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟
A、滅活粉碎美洲大蠊鮮蟲(chóng)采用85°C的熱水殺死，控溫在60°C±5°C范圍內(nèi)烘干，取IOOKg粉碎，過(guò)24目篩，制得美洲大蠊粗粉；
B、提取將步驟A所得美洲大蠊粗粉投入提取罐內(nèi)，在75 80°C溫度下進(jìn)行4次回流提取，第一次提取時(shí)，加粗粉重量6倍量濃度92%的乙醇，提取時(shí)間為5小時(shí)；第二次以后每次加粗粉重量4倍量濃度92%的乙醇，提取時(shí)間為4小時(shí)；提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C ;提取完成后，合并提取液，過(guò)濾得乙醇提取液；
C、一級(jí)濃縮將步驟B所得乙醇提取液放入單效濃縮器在真空度-O.05 -O. 06MPa、溫度50 60°C的條件下減壓濃縮，至比重為I. 05 I. 15時(shí)，得乙醇濃縮液；
D、脫脂吸附將步驟C所得乙醇濃縮液移入脫脂罐內(nèi)，加入乙醇濃縮液重量8倍量的蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌40分鐘，攪拌速度為40轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置3小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入乙醇濃縮液O. 8倍量藥用活性炭在50°C溫度下攪拌40分鐘，使其充分吸附；
E、洗脫將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用乙醇濃縮液20倍量蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用乙醇濃縮液50倍量的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液；
F、二級(jí)濃縮將步驟E所得洗脫濾液放入單效濃縮器在溫度50 60°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為I. 20 I. 30時(shí)，得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物浸膏；
G、干燥粉碎將步驟F所得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物在50°C 60°C溫度、真空度-O. 04 -O. 07MPa的條件下真空干燥，粉碎為細(xì)粉，即得到用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物成品4. 6Kg。采用上述方法制備治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物藥物，對(duì)治療乙型肝炎用的特定有效成份提取得率可達(dá)4. 6%。對(duì)慢性乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)59. 6%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)47. 2% ;對(duì)乙肝病毒攜帶者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)31. 6%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)39. 0%?？傆行士蛇_(dá)89. 4%。實(shí)施例3
肝炎用的美洲大蠊提取物的提取方法，其特征在于包括以下步驟
A、滅活粉碎美洲大蠊鮮蟲(chóng)采用90°C的熱水殺死，控溫在60°C±5°C范圍內(nèi)烘干，取IOOKg粉碎，過(guò)24目篩，制得美洲大蠊粗粉；
B、提取將步驟A所得美洲大蠊粗粉投入提取罐內(nèi)，在75 80°C溫度下進(jìn)行5次回流提取，第一次提取時(shí)，加800Kg濃度90%的乙醇，提取時(shí)間為6小時(shí)；第二次以后每次加600Kg濃度90%的乙醇，提取時(shí)間為5小時(shí)；提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C ;提取完成后，合并提取液，過(guò)濾得乙醇提取液；
C、一級(jí)濃縮將步驟B所得乙醇提取液放入單效濃縮器在真空度-O.05 -O. 06MPa、溫度50 60°C的條件下減壓濃縮，至比重為I. 12時(shí)，得乙醇濃縮液29. 7 Kg ；
D、脫脂吸附將步驟C所得乙醇濃縮液移入脫脂罐內(nèi)，加入297Kg蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌60分鐘，攪拌速度為20轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置5小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入29. 7 Kg藥用活性炭在60°C溫度下攪拌60分鐘，使其充分吸附；
E、洗脫將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用891Kg蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用1782Kg濃度20%醋酸的水飽和正丁醇溶液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液； F、二級(jí)濃縮將步驟E所得洗脫濾液放入單效濃縮器在溫度50 60°C、真空度-O. 05 -O. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為I. 24時(shí)，得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物浸膏5. 2Kg ；
G、干燥粉碎將步驟F所得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物在50°C 60°C溫度、真空度-O. 04 -O. 07MPa的條件下真空干燥，粉碎為細(xì)粉，即得到用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物成品4. 7Kg。采用上述方法制備治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物藥物，對(duì)治療乙型肝炎用的特定有效成份提取得率可達(dá)4. 7%。對(duì)慢性乙肝患者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)58. 4%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)44. 3% ;對(duì)乙肝病毒攜帶者HBeAg轉(zhuǎn)陰率可達(dá)35. 4%，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率可達(dá)42. 7%?？傆行士蛇_(dá)87. 1%。實(shí)施例4
治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物制備的藥物及治療病例
取上述(實(shí)施例2)美洲大蠊提取物細(xì)粉500g，加淀粉200g、微晶纖維素300g，硬脂酸·鎂2g混合均勻，得藥粉lOOOg，按每粒O. 3g填充硬膠囊?；蛉∶乐薮篌固崛∥锛?xì)粉500g，加淀粉200g、微晶纖維素300g，加適當(dāng)濃度酒精制軟材，制粒，干燥，加硬脂酸鎂2g整粒，得顆粒IOOOg,按每粒裝O. 3g填充膠囊。70例慢性乙型肝炎及乙肝病毒攜帶者，證屬肝郁脾虛兼血瘀，隨機(jī)分為甲組35例(男19例、女16例，平均年齡25歲，9例輕度、4例中度、22例攜帶者)，乙組35例(男26例、女9例，平均年齡26歲，9例輕度、3例中度、23例攜帶者)。甲組口服給藥上述膠囊，每次2粒，每日兩次；乙組口服給藥拉米夫定片，每次2片，每日3次。兩組均給藥90天。檢查體溫、呼吸、脈率、血壓、血常規(guī)、大小便常規(guī)及隱血、總膽紅素、直接膽紅素、ALT、TTT、BUN、CRN、A/G、血K+Na+、Cl-等項(xiàng)目。治療結(jié)果
(I)對(duì)HBV感染標(biāo)志物陰轉(zhuǎn)影響
對(duì)于慢性乙肝患者，甲組13例，HBeAg轉(zhuǎn)陰6例(轉(zhuǎn)陰率46. 2%)，治療前后差異有顯著性(P < O. 05),HBV-DNA轉(zhuǎn)陰5例(轉(zhuǎn)陰率38. 5%)，治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05)。乙組12例，HBeAg轉(zhuǎn)陰3例(轉(zhuǎn)陰率25. 0%)，治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰3例(轉(zhuǎn)陰率25.0%)，治療前后差異無(wú)顯著性(P > 0.05)。但兩組間比較差異無(wú)顯著性(P > O. 05)。提示甲組對(duì)HBeAg轉(zhuǎn)陰療效有優(yōu)于乙組的趨勢(shì)。對(duì)于乙肝病毒攜帶者，甲組22例，HBeAg轉(zhuǎn)陰6例(轉(zhuǎn)陰率27. 3%)，治療前后差異有顯著性(P < O. 05)，HBV-DNA轉(zhuǎn)陰5例(轉(zhuǎn)陰率22. 7%)，治療前后差異無(wú)顯著性(P >0.05)。乙組23例，HBeAg轉(zhuǎn)陰2例(轉(zhuǎn)陰率9. 1%)，治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05),HBV-DNA轉(zhuǎn)陰I例(轉(zhuǎn)陰率4. 3%)，治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05)。但兩組間比較差異無(wú)顯著性(P > O. 05)。提示甲組對(duì)HBeAg轉(zhuǎn)陰療效有優(yōu)于乙組的趨勢(shì)。(2)對(duì)肝功能的影響
在復(fù)常影響方面，TBiL指標(biāo)，甲組治前異常4例，治后復(fù)常4例，復(fù)常率100%,治療前后差異有顯著性(P < O. 05);乙組治前異常3例,治后復(fù)常I例，復(fù)常率33. 3%,治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，組間比較差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，提示甲組治療TBiL復(fù)常有效且有優(yōu)于乙組的趨勢(shì)。ALT指標(biāo)，甲組治前異常13例，治后復(fù)常7例，復(fù)常率53. 85%,治療前后差異有顯著性(P < O. 05);乙組治前異常12例，治后復(fù)常9例，復(fù)常率75. 0%,治療前后差異有顯著性(P < O. 05)，組間比較差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，提示甲乙兩組治療ALT復(fù)常均有效且療效相當(dāng)。AST指標(biāo)，甲組治前異常6例,治后復(fù)常3例,復(fù)常率50. 0%,治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05);乙組治前異常I例，治后復(fù)常O例，復(fù)常率0，組間比較差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，提示甲乙兩組治療AST復(fù)常均欠佳。A/G指標(biāo)，甲組治前異常17例，治后復(fù)常10例，復(fù)常率53. 3%,治療前后差異有顯著性(P < O. 05);乙組治前異常7例，治后復(fù)常5例，復(fù)常率66. 7%，治療前后差異有顯著性(P < O. 05)，組間比較差異無(wú)顯著性(P >O. 05)，提示甲乙兩組治療A/G復(fù)常均有效且療效相當(dāng)。SP指標(biāo)，甲組治前異常14例，治后復(fù)常9例，復(fù)常率64. 29%,治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05);乙組治前異常11例，治后復(fù)常9例，復(fù)常率81. 82%，治療前后差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，組間比較差異無(wú)顯著性(P >
O.05)，提示甲乙兩組治療SP復(fù)常療效欠佳。對(duì)肝功能療效相當(dāng)，僅TBiL療效甲組優(yōu)于乙組(P < O. 05)。(3)中醫(yī)證候療效·
甲組23例，臨床控制8例，顯效7例，有效5例，無(wú)效3例，總有效率86. 9%，總顯效率65. 2% ；乙組23例，臨床控制5例，顯效2例，有效6例，無(wú)效10例，總有效率56. 5%，總顯效率30. 4%，兩組間差異有顯著性(P < O. 05)，提示甲組對(duì)中醫(yī)證候療效優(yōu)于乙組。在改善癥狀程度上，甲組脅肋疼痛、腹脹、食欲不振治療前后差異有顯著性(P < O. 05)或非常顯著性(P <0.01),提示甲組能改善脅肋疼痛、腹脹、食欲不振，但甲乙兩組間比較差異無(wú)顯著性(P > O. 05)，提示甲組有優(yōu)于乙組的趨勢(shì)。(4)舌、脈象情況
舌象，甲組正常28例，治前異常而治后正常2例、治后異常5例；乙組正常26例，治前異常而治后正常2例、治后異常7例。脈象，甲組正常26例，治前異常而治后正常5例，治后異常4例；乙組正常30例，治前異常而治后正常2例,治后異常3例。(5)對(duì)凝血酶原活動(dòng)度的影響
兩組凝血酶原治療前后比較差異均無(wú)顯著性，兩組間亦無(wú)差異顯著性，提示兩組對(duì)凝血酶原影響較小。(6)體征變化情況
兩組內(nèi)及兩組間治療前后心率、收縮壓、舒張壓、肝脾B超比較差異均無(wú)顯著性(P >
O.05)。(7)安全性觀察
血常規(guī)正常33例，甲組治前異常而治后正常I例，治后異常I例；乙組治前異常而治后正常2例。尿常規(guī)、糞常規(guī)、BUN、Cr、ECG兩組各35例治療前后全正常。提示該藥服用安全。( 8 )不良反應(yīng)觀測(cè)
70例病人服藥觀察期間，未出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)。
權(quán)利要求
1.治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于包括以下步驟 A、滅活粉碎美洲大蠊鮮蟲(chóng)采用80°C 90°C的熱水殺死，控溫在60°C±5°C范圍內(nèi)烘干，粉碎，過(guò)24目篩，制得美洲大蠊粗粉； B、提取將步驟A所得美洲大蠊粗粉在75 80°C溫度下進(jìn)行3 5次回流提取，第一次提取時(shí)，加粗粉重量5 8倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為4飛小時(shí)；第二次以后每次加粗粉重量3 6倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為3飛小時(shí)；提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C ;提取完成后，合并提取液，過(guò)濾得乙醇提取液； C、一級(jí)濃縮將步驟B所得乙醇提取液在真空度-O.05 -O. 06MPa、溫度50 60°C的條件下減壓濃縮，至比重為I. 05 I. 15時(shí)，得乙醇濃縮液； D、脫脂吸附將步驟C所得乙醇濃縮液加入乙醇濃縮液重量7 10倍量的蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90 °C后，攪拌10 60分鐘，攪拌速度為20 60轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置I 5小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入乙醇濃縮液O. 5^1. O倍量藥用活性炭在4(T60°C溫度下攪拌3(Γ60分鐘，使其充分吸附； Ε、洗脫將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用藥用活性炭1(Γ30倍量蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用藥用活性炭30飛0倍量的洗脫劑洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液； F、二級(jí)濃縮將步驟E所得洗脫濾液在溫度50 60°C、真空度-O.05 -O. 06MPa條件下減壓濃縮，濃縮至比重為I. 20 I. 30時(shí)，得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物浸膏； G、干燥粉碎將步驟F所得治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物在50°C 60°C溫度、真空度-O. 04 -O. 07MPa的條件下真空干燥，粉碎為細(xì)粉，即得到用于治療乙型肝炎病的美洲大蠊提取物成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟B按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)用濃度為90% 95%的乙醇回流提取4次美洲大蠊粗粉第一次提取時(shí)，加粗粉重量6倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為5小時(shí)；第二次加粗粉重量4倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為4小時(shí)；第三次加粗粉重量4倍量濃度90% 95%的乙醇，提取時(shí)間為4小時(shí)；提取過(guò)程中，乙醇溫度均保持在75 80°C，提取完成后，合并三次提取液，過(guò)濾得乙醇提取液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟D可以按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)將步驟C所得乙醇濃縮液加入乙醇濃縮液重量8倍量的蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌40分鐘，攪拌速度為40轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置3小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入濾液O. 8倍量藥用活性炭在50°C溫度下攪拌45分鐘，使其充分吸附。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟D可以按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)將步驟C所得乙醇濃縮液加入乙醇濃縮液重量8倍量的蒸餾水，邊攪拌邊升溫至8(T90°C后，攪拌40分鐘，攪拌速度為40轉(zhuǎn)/分，然后保溫靜置3小時(shí)使油水分層；收集下層水液，經(jīng)濾紙過(guò)濾后，在所得濾液中加入濾液O. 8倍量藥用活性炭在50°C溫度下攪拌45分鐘，使其充分吸附。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟E可以按照以下方法進(jìn)行生產(chǎn)將步驟D所得含活性炭藥液裝入層析柱中，放出藥液，先用20倍量蒸餾水洗滌，水洗液棄去；再用步驟D所得濾液50倍量濃度20%、PH值2. 23的醋酸乙醇液洗脫，收集洗脫液，經(jīng)濾紙過(guò)濾，得洗脫濾液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟E中所用洗脫劑為濃度10°/Γ20%、PH值2. (Γ3. O的醋酸乙醇液或濃度10°/Γ20%醋酸的水飽和正丁醇溶液或苯酚濃度為10°/Γ20%的苯酚乙醇液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，其特征在于，所述步驟E中所用洗脫劑為濃度10°/Γ20%、ΡΗ值2. (Γ3. O的醋酸乙醇液或濃度10% 20%醋酸的水飽和正丁醇溶液或苯酚濃度為109Γ20%的苯酚乙醇液。
全文摘要
本發(fā)明提供一種治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物的制備方法，包括步驟A、滅活粉碎；B、提??；C、一級(jí)濃縮；D、脫脂吸附；E、洗脫；F、二級(jí)濃縮；G、干燥粉碎。采用本發(fā)明所述方法制備治療乙型肝炎用的美洲大蠊提取物，可以有效控制對(duì)乙型肝炎產(chǎn)生抑制效果的有效成份的水解，提高乙型肝炎治愈率。本發(fā)明提取的藥物，對(duì)慢性乙肝患者和乙肝病毒攜帶者HBeAg轉(zhuǎn)陰率、HBV-DNA轉(zhuǎn)陰率總有效率可達(dá)80～95%；對(duì)治療乙型肝炎用的特定有效成份提取得率可達(dá)3~5%；且可以提高最終提取物的抗腐性，避免因腐敗變質(zhì)造成浪費(fèi)；可以避免最終提取物含有蛋白質(zhì)，從而減少藥物中的有害過(guò)敏源。采用本發(fā)明提取方法成本低、安全性高。
文檔編號(hào)A61K35/64GK102885858SQ201210446628
公開(kāi)日2013年1月23日 申請(qǐng)日期2012年11月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月10日
發(fā)明者何道峰, 郝振平 申請(qǐng)人:昆明賽諾制藥有限公司