一種調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥制劑，該中藥復(fù)方制劑適用于在胰腺癌治療過程中對胰腺癌干細(xì)胞的控制。本發(fā)明根據(jù)我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥濕熱毒蘊(yùn)病機(jī)理論，針對胰腺癌“濕熱”和“熱毒”的病理特點(diǎn)，以“清熱化濕，散結(jié)解毒”為組方原則，選取蛇六谷、半枝蓮、白花蛇舌草、絞股藍(lán)、白豆蔻、生米仁和靈芝七味藥物制成。經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明對SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠的瘤體有明顯的抑制作用，調(diào)控瘤體內(nèi)胰腺癌干細(xì)胞的分化。與吉西他濱合用，明顯增強(qiáng)抑瘤作用，同時(shí)調(diào)控腫瘤干細(xì)胞的分化。
【專利說明】一種調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥制劑，該中藥復(fù)方制劑適用于在胰腺癌治療過程中對胰腺癌干細(xì)胞的控制。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤干細(xì)胞(CSC)是腫瘤組織中小部分具有自我更新和多向分化的細(xì)胞亞群，它決定著腫瘤的形成和發(fā)展。換而言之，即使體內(nèi)殘存了極小部分CSC，都會(huì)因其高致瘤性而誘發(fā)腫瘤的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，最終導(dǎo)致治療失敗，疾病進(jìn)展，甚至死亡。因此，CSC與腫瘤不良預(yù)后有著非常密切的聯(lián)系。
[0003]CSC與腫瘤預(yù)后的相關(guān)性已被大量臨床研究所證實(shí)。Hisae等研究證實(shí)結(jié)腸癌B期或C期患者外周血腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記CEA/CK/⑶133陽性往往提示預(yù)后不佳，與CEA/CK/⑶133陰性患者相比，總生存率明顯降低，無病進(jìn)展期明顯縮短。Al-Hajj等對乳腺癌患者進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)CD44+/CD24-乳腺癌干細(xì)胞早期就可以在轉(zhuǎn)移性胸腔積液中檢測到，并且多數(shù)早期擴(kuò)散至骨髓的乳腺癌細(xì)胞都具有腫瘤干細(xì)胞的表型特征，與此同時(shí)，乳腺癌中CD44+細(xì)胞比例升高與不良預(yù)后相關(guān)。急性髓性白血病中，確診時(shí)較高的腫瘤干細(xì)胞比例多預(yù)示治療后較多的微小殘余癌細(xì)胞和較差的預(yù)后。
[0004]針對CSC的治療策略可改善腫瘤患者生存預(yù)后，是未來治療進(jìn)展的突破口。如靶向治療藥物伊馬替尼對分化活躍和成熟的白血病細(xì)胞效果較好，但對處于靜止?fàn)顟B(tài)，未分化的腫瘤干細(xì)胞的作用較差，治療后仍多見復(fù)發(fā)，聯(lián)合針對CSC自我更新和多向分化相關(guān)的Hedgehog信號(hào)通路抑制 劑的藥物可能消除伊馬替尼治療引起的耐藥和復(fù)發(fā)。靶向治療藥物曲妥珠單抗對乳腺癌干細(xì)胞也發(fā)揮作用，具有減少體外克隆球形成，可以使得轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的生存期延長I年左右。局部晚期乳腺癌患者新輔助化療后，⑶44+/⑶24-/lOW乳腺癌CSC比例較化療前明顯升高，而針對EGFR的靶向藥物拉帕替尼治療后，CSC比例卻較化療前下降，患者生存期與腫瘤干細(xì)胞變化明顯相關(guān)。
[0005]中醫(yī)藥治療惡性腫瘤具有增效減毒、緩解癥狀、改善生活質(zhì)量、延長生存期的作用，臨床常表現(xiàn)為患者長期帶瘤生存，這常是中藥治療的優(yōu)勢所在。胰腺癌的預(yù)后極差，5年生存率一直徘徊在5%左右。近10年的中西醫(yī)綜合治療晚期胰腺癌顯示出了明顯的優(yōu)勢，5年生存率可達(dá)8.4%，中位生存期7.6月，療效明顯優(yōu)于目前國內(nèi)外同類研究先進(jìn)水平，其中16例患者獲得3年以上長期帶瘤生存(5例生存超過5年)，至今仍然存活良好，這在國內(nèi)外均屬罕見。由此可見，中藥制劑在維持晚期腫瘤患者長期帶瘤生存方面有很大的優(yōu)勢，可能與調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的功能有關(guān)。
[0006]鑒于此，通過臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)及實(shí)驗(yàn)研究，探索出一種調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑顯得尤為重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]為了彌補(bǔ)上述藥物和敷料的不足，發(fā)明人經(jīng)過多年的研究，根據(jù)我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥濕熱毒蘊(yùn)病機(jī)理論，針對胰腺癌“濕熱”和“熱毒”的病理特點(diǎn)，以“清熱化濕，散結(jié)解毒”為組方原則，提出一種能夠?qū)σ种埔认侔┯泻芎玫寞熜?，通過調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞發(fā)揮作用的調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑。
[0008]本發(fā)明的復(fù)方制劑采用中藥材或所述中藥材的提取物:蛇六谷、白花蛇舌草、半枝蓮、絞股藍(lán)、白豆蘧、生(或炒)米仁、靈芝配制而成，其中:
[0009]半枝蓮:清熱解毒、利濕消腫為君
[0010]白花蛇舌草、蛇六谷:清熱解毒、化痰散積為臣；
[0011]絞股藍(lán)、生(或炒)米仁、靈芝:化濕健脾、扶助正氣、提高機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)患者自身的防癌、抗癌能力，為佐；
[0012]白豆蘧:化濕和胃、行氣寬中為使；。
[0013]諸藥合用，發(fā)揮清熱化濕、解毒化積之功效。
[0014]本發(fā)明制劑的各組分按下述重量比的中藥材或所述中藥材的提取物制備:
[0015]半枝蓮15~300g、蛇六谷10~200g、白花蛇舌草10~300g、絞股藍(lán)30~300g、白豆蘧5~100g、生(炒)米仁30~300g、靈芝10~300g。
[0016]本發(fā)明中藥復(fù)合制劑可采用以下兩種方法制備:
[0017]制備工藝1:
[0018]將上述中藥組分的中藥材根據(jù)病情按比例用量置于鍋中，第一次按中藥組分總重8倍加水，加熱煎煮2小時(shí)，得一煎液；第二次按中藥組分總重6倍加水，加熱煎煮I小時(shí)，得二煎液。然后將一煎液和二煎液合并，采用文火蒸發(fā)濃縮至稠厚狀。再加入95%的等量乙醇，充分混勻，放置過夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸餾回收乙醇，濃縮后靜置24小時(shí)，使沉淀完全過濾，濾液再濃縮至稠厚狀(比重為1.32/25°C)。取濃縮膏1份，干燥蔗糖粉3份，糊精1.25份，用70%乙醇調(diào)整干濕度，然后用顆粒機(jī)12目篩制成顆粒，將濕顆粒置低溫干燥處，使其干燥，包裝后即可。
[0019]或，制備工藝2:
[0020]將所述中藥組分中的7味藥材飲片，先分別單獨(dú)分兩次煎煮，經(jīng)濾過、濃縮、噴霧干燥、加適量麥芽糊精、粉碎混勻后制成中間體(制成顆粒)，最后將等量7味中藥材的所述的中間體混合均勻，制粒，得成品；
[0021 ] 其中，分別制備組分中的7味藥材飲片的中間體(制成顆粒)，
[0022]1、半枝蓮15000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0023]2、白花蛇舌草15000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí),合并煎液,濾過,濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加入麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒1000g，得所述的中間體；
[0024]3、蛇六谷lOOOOg，加水煎煮二次，第一次I小時(shí)，第二次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾
液濃縮至相對密度為1.10~1.12 (60°C)的清膏，噴霧干燥，加入麥芽糊精適量，混勻，制粒，干燥，制成顆粒1000g，得所述的中間體；
[0025]4、取生(炒)米仁20000g，加水煎煮二次，一煎I小時(shí)，二煎0.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0026]5、絞股藍(lán)lOOOOg，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0027]6、靈芝12000g，加水煎煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0028]7、豆蘧配方顆粒制備工藝:取豆蘧lOOOOg，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成1000g顆粒，得所述的中間體；
[0029]最后將等量7味中藥材的所述的中間體混合均勻，制粒，得本發(fā)明的復(fù)方制劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0030]圖1為實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路示意圖。
[0031]圖2為本發(fā)明作用于SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠瘤體生長曲線示意圖。
[0032]圖3為本發(fā)明作用于SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠體重的變化示意圖。
[0033]圖4為本發(fā)明及其他治療組干預(yù)SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠后瘤體照片。
[0034]圖5為本發(fā)明對胰腺癌干細(xì)胞的調(diào)控作用示意圖。
[0035]圖6為本發(fā)明對胰腺癌干細(xì)胞的調(diào)控作用示意圖。
[0036]圖7為本發(fā)明干預(yù)后胰腺癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物mRNA水平的變化示意圖。
[0037]圖8為各中藥組分的制備工藝流程圖。
【具體實(shí)施方式】
[0038]實(shí)施例1
[0039]按下述重量比的中藥材或所述中藥材的提取物制備中藥復(fù)方制劑:
[0040]半枝蓮15~300g、蛇六谷10~200g、白花蛇舌草10~300g、絞股藍(lán)30~300g、白豆蘧5~100g、生(炒)米仁30~300g、靈芝10~300g。
[0041]將上述中藥組分的中藥材根據(jù)病情按比例用量置于鍋中，第一次按中藥組分總重8倍加水，加熱煎煮2小時(shí)，得一煎液；第二次按中藥組分總重6倍加水，加熱煎煮I小時(shí)，得二煎液。然后將一煎液和二煎液合并，采用文火蒸發(fā)濃縮至稠厚狀。再加入95%的等量乙醇，充分混勻，放置過夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸餾回收乙醇，濃縮后靜置24小時(shí)，使沉淀完全過濾，濾液再濃縮至稠厚狀(比重為1.32/25°C)。取濃縮膏1份，干燥蔗糖粉3份，糊精1.25份，用70%乙醇調(diào)整干濕度，然后用顆粒機(jī)12目篩制成顆粒，將濕顆粒置低溫干燥處，使其干燥，包裝后即得本發(fā)明中藥復(fù)合制劑。
[0042]實(shí)施例2
[0043]將所述中藥組分中的7味藥材(飲片)半枝蓮、蛇六谷、白花蛇舌草、絞股藍(lán)、白豆蘧、生(炒)米仁、靈芝，先分別單獨(dú)分兩次煎煮，經(jīng)濾過、濃縮、噴霧干燥、加適量麥芽糊精、粉碎混勻后制成中間體(制成顆粒)，最后將等量7味中藥材的所述的中間體混合均勻，制粒，得成品；[0044]其中，分別制備組分中的7味藥材(飲片)的中間體(制成顆粒)(如圖8所示)，
[0045]1、半枝蓮15000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0046]2、白花蛇舌草15000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí),合并煎液,濾過,濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加入麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒1000g，得所述的中間體；
[0047]3、蛇六谷10000g，加水煎煮二次，第一次I小時(shí)，第二次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾
液濃縮至相對密度為1.10~1.12 (60°C)的清膏，噴霧干燥，加入麥芽糊精適量，混勻，制粒，干燥，制成顆粒1000g，得所述的中間體；
[0048]4、取生(炒)米仁20000g，加水煎煮二次，一煎I小時(shí)，二煎0.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒1000g，得所述的中間體；
[0049]5、絞股藍(lán)lOOOOg，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0050]6、靈芝12000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體；
[0051]7、豆蘧配方顆粒 制備工藝:取豆蘧lOOOOg，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成1000g顆粒，得所述的中間體；
[0052]最后將等量7味中藥材的所述的中間體混合均勻，制粒，得本發(fā)明的復(fù)方制劑。
[0053]實(shí)施例3本發(fā)明對SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠瘤體有明顯的抑制作用
[0054]1.SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠模型建立:取生長良好的SW1990胰腺癌細(xì)胞，調(diào)整濃度為107/ml的SW1990單細(xì)胞懸液。在無菌條件下，用Iml注射器接種于裸鼠左腋下皮下，接種量為0.2ml/只，共48只。隨機(jī)分為對照組10只、SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠模型組38只。將SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠模型組50只裸鼠經(jīng)75mg/Kg濃度的吉西他濱腹腔注射dl，d5，d9干預(yù)3次后，處死對照組及10只SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠模型組裸鼠，取瘤。將剩余28只SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠模型組裸鼠隨機(jī)分為生理鹽水組、吉西他濱組、本發(fā)明組、吉西他濱+本發(fā)明組，每組7只。各組分別繼續(xù)干預(yù)4周后，處死取瘤。
[0055]藥物干預(yù):
[0056]生理鹽水組:生理鹽水，每次灌胃0.1ml，每天I次。
[0057]本發(fā)明組方:由半枝蓮15~300g、蛇六谷10~200g、白花蛇舌草10~300g、絞股藍(lán)30~300g、白豆蘧5~100g、生(炒)米仁30~300g、靈芝10~300g組成，按《中藥藥理研究方法學(xué)》人鼠等效劑量進(jìn)行劑量換算，成人體重以60kg計(jì)算，小鼠體重以20g計(jì)算，清胰化積方為155g/帖/人/日，則人鼠等效劑量為36g/kg/只/日，濃縮為每毫升含生藥
3.6g/ml的藥液，置于4°C冰箱保存，每次灌胃0.2ml，每天I次。[0058]吉西他濱組:吉西他濱注射液(LILLY FRANCES,劑型:200mg/支)，每只小鼠按50mg/kg,0.2ml/次,第 1,8,15 天腹腔注射；
[0059]吉西他濱+本發(fā)明組:吉西他濱給藥方式同上，本發(fā)明給藥方式同上。
[0060]2抑瘤作用實(shí)驗(yàn)
[0061]2.1腫瘤生長曲線
[0062]造模后第7天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小，測量其長徑㈧和垂直橫徑⑶，之后每周測量一次。按公式v=0.52XAXB2計(jì)算腫瘤體積，描繪腫瘤體積增長曲線。
[0063]2.2抑瘤率
[0064]脫頸處死，剝離瘤塊，稱取瘤重,計(jì)算抑瘤率:抑瘤率(%)=(對照組平均瘤重一治療組平均瘤重)/對照組平均瘤重X 100%。結(jié)果顯示，本發(fā)明對SW1990胰腺癌干細(xì)胞荷瘤小鼠瘤體有明顯的抑制作用，與生理鹽水組比較有顯著性差異(P〈0.05)。見圖5。
[0065]實(shí)施例4本發(fā)明對胰腺癌干細(xì)胞的調(diào)控作用
[0066]l.ffestern blot法檢測本發(fā)明干預(yù)后胰腺癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物蛋白水平的變化Western blot組織總蛋白的制備及濃度測定:取IOOmg腫瘤組織,充分研磨，PBS洗漆離心沉淀，5倍體積4% SDS重懸、攪勻，沸水浴中加熱10分鐘，反復(fù)吹打剪切，室溫1000Orpm離心10分鐘，上清液移至另一管，即為提取好的蛋白質(zhì)，Lowry法檢測蛋白質(zhì)濃度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出抽提蛋白質(zhì)對應(yīng)的吸 光值和濃度。Western blotting:固定:蛋白質(zhì)進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)并從凝膠上轉(zhuǎn)移到PVDF膜上；封閉:取下PVDF膜，在盛有封閉液的玻璃平皿中室溫平緩搖動(dòng)I~2小時(shí)后，4°C過夜；與第一抗體結(jié)合；與第二抗體結(jié)合；顯色:將PVDF膜放入檢測緩沖液中平衡5分鐘，在2ml檢測緩沖液中加入40 μ I底物，按膜面積
0.1ml/cm2的量加人玻璃平皿中，放入PVDF膜，放入塑料袋中，并塑封，暗中顯色lh，棄去顯色液，將膜用TE洗滌2次，在TE中浸泡。觀察并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0067]結(jié)果表明本發(fā)明干預(yù)胰腺癌干細(xì)胞后腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物⑶24，⑶44，ALDH1A1，⑶133，0CT4, Nanog, S0X2等在蛋白水平有不同程度的下降。見圖6。
[0068]2.Real-time PCR法檢測本發(fā)明干預(yù)后胰腺癌干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物mRNA水平的變化總RNA的提取:參照GENERAY公司總RNA抽提試劑盒(Trizol-離心柱型)使用說明進(jìn)行RNA抽提后，取I μ I RNA溶液，用雙蒸水稀釋至100 μ 1，經(jīng)紫外分光光度儀檢測其0D260及0D280并計(jì)算其RNA濃度(C = 0D260X40X稀釋倍數(shù)X 10 — 3，單位:μ g/μ I);用DEPC水調(diào)整RNA濃度至I μ g/ μ 1，置一 70°C冰箱保存。逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA (RT):具體操作參照Fermentas^RevertAidTM^irst strand cDNA synthesis Kit，，，_20oC保存。SYBR GREEN法實(shí)時(shí)半定量 RT-PCR:realtime PCR 反應(yīng)體系:SYBR premix (2x) 12.5ul，上游引物(IOumol/L) 0.5ul，下游引物(10umol/L) 0.5ul，模板 cDNA2.0ul，DEPC 水 9.5ul,總體積 25ul。PCR反應(yīng)條件:95°C熱啟動(dòng)15分鐘之后，94°C變性30秒，53°C退火I分鐘，72°C延伸I分鐘，共40個(gè)循環(huán)，至4°C結(jié)束。
[0069]P0U5F1 (0CT4)引物 F:5，-GAGCAACTCCGATGGGGCCT-3，
[0070]R:5’-TGTCCTGGGACTCCTCCGGGT-3’
[0071 ] Nanog 引物 F: 5，-GCAATGGTGTGACGCAGAAGGC-3，
[0072]R:5’-TGGGTCTGGTTGCTCCAGGTTG-3’
[0073]S0X2 引物 F: 5，-GGGGGAAAGTAGTTTGCTGCCTCT-3’[0074]R:5’-TGCCGCCGCCGATGATTGTT-3’
[0075]GLII 引物 F: 5，-AGGGAGTGCAGCCAATACAG-3’
[0076]R:5’-ATTGGCCGGAGTTGATGTAG-3’
[0077]結(jié)果表明本發(fā)明干預(yù)胰腺癌干細(xì)胞后腫瘤干細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志物0CT4, Nanog, S0X2, GLIl等在mRNA有不同程度的下降(如圖7所示)。
【權(quán)利要求】
1.一種調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑，其特征在于:由下述重量比的中藥材或所述中藥材的提取物及藥物輔料組成:半枝蓮15~300g、蛇六谷10~200g、白花蛇舌草10~.300g、絞股藍(lán)30~300g、白豆蘧5~100g、生(炒)米仁30~300g、靈芝10~300g。
2.權(quán)利要求1所述的調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于:所述中藥組分按重量比用量置于鍋中，第一次按中藥組分總重8倍加水，加熱煎煮2小時(shí)，得一煎液；第二次按中藥組分總重6倍加水，加熱煎煮I小時(shí)，得二煎液，然后將一煎液和二煎液合并，采用文火蒸發(fā)濃縮至稠厚狀，再加入95%的等量乙醇，充分混勻，放置過夜，使其沉淀，次日取其上清液，蒸餾回收乙醇，濃縮后靜置24小時(shí)，使沉淀完全過濾，濾液再濃縮至稠厚狀，比重為1.32/25°C，取濃縮膏1份，干燥蔗糖粉3份，糊精1.25份，用70%乙醇調(diào)整干濕度，然后用顆粒機(jī)12目篩制成顆粒，將濕顆粒置低溫干燥處，使其干燥，包裝后即得。
3.權(quán)利要求1所述的調(diào)控胰腺癌干細(xì)胞的中藥復(fù)方制劑的制備方法，其特征在于:將所述中藥組分中的7味藥材飲片，先分別單獨(dú)分兩次煎煮，經(jīng)濾過、濃縮、噴霧干燥、加適量麥芽糊精、粉碎混勻后制成顆粒中間體，最后將等量7味中藥材的所述的中間體混合均勻，制粒，得成品； 其中，分別制備組分中的7味藥材飲片的顆粒中間體， 半枝蓮15000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為.1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體； 白花蛇舌草15000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加入麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體； 蛇六谷lOOOOg，加水煎煮二次，第一次I小時(shí)，第二次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10~1.12 (60°C)的清膏，噴霧干燥，加入麥芽糊精適量，混勻，制粒，干燥，制成顆粒1000g，得所述的中間體； 取生(炒)米仁20000g，加水煎煮二次，一煎I小時(shí)，二煎0.5小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒1000g，得所述的中間體； 絞股藍(lán)lOOOOg，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為.1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體； 靈芝12000g，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為.1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成顆粒lOOOg，得所述的中間體； 豆蘧配方顆粒制備工藝:取豆蘧lOOOOg，加水煎煮二次，每次I小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對密度為1.10-1.12 (600C )的清膏，噴霧干燥，粉碎，加麥芽糊精適量，混勻，制成1000g顆粒，得所述的中間體； 最后將等量7味中藥材的所述的中間體混合均勻，制粒，得本發(fā)明的復(fù)方制劑。
【文檔編號(hào)】A61K9/16GK103800731SQ201210437189
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月5日 優(yōu)先權(quán)日:2012年11月5日
【發(fā)明者】劉魯明 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院