專利名稱：柚皮苷的新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，特別涉及柚皮苷在制備改善腦組織葡萄糖代謝減退和長時程記憶的藥物和健康制劑的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
近年來，來自不同臨床和實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷牧餍胁W(xué)、神經(jīng)病理學(xué)以及功能影像學(xué)幾項(xiàng)平行研究表明腦糖代謝減退及能量紊亂早于神經(jīng)系統(tǒng)認(rèn)知障礙和行為異常的發(fā)生。正電子發(fā)射斷層成像掃描儀(Position Emission Tomography, PET)顯示阿爾茨海默癥患者在出現(xiàn)認(rèn)知功能減退、CT和MRI相應(yīng)部位無異常改變以前，大腦皮層的葡萄糖代謝率就已經(jīng)出現(xiàn)異常，其減退程度與認(rèn)知障礙的嚴(yán)重性呈正相關(guān)。與此結(jié)果相一致，在帕金森癥、亨廷頓癥、癲癇癥等腦組織疾病中也發(fā)現(xiàn)存在持續(xù)性、進(jìn)行性、區(qū)域性的腦糖代謝異常，累及部位與臨床患者腦組織病變發(fā)生部位相一致。腦組織能量代謝障礙可以觸發(fā)多元神經(jīng)損害機(jī)制 發(fā)生，誘發(fā)多種急性或慢性神經(jīng)病理學(xué)損傷，從而導(dǎo)致突觸抑制和失功能，軸突變性以及神經(jīng)元死亡，進(jìn)而引發(fā)神經(jīng)行為異常和功能損傷。柚皮苷(Naringin),分子式=C27H32O14,結(jié)構(gòu)式如下
OH O
氣
.□H ·* 6 Vch
Hh柚皮苷來源于蕓香科植物中的二氫黃酮類化合物，為白色至淺黃色結(jié)晶性粉末。其具有多種生物活性，包括抗氧化，抗炎，改善微循環(huán)和營養(yǎng)供給。口服柚皮苷在體內(nèi)代謝成柚皮素，而柚皮素已被證明對血腦屏障具有良好的通透性。研究發(fā)現(xiàn)柚皮苷通過提高線粒體復(fù)合物酶功能活性，增強(qiáng)氧化應(yīng)激能力，改善大鼠亨廷頓癥的神經(jīng)行為異常；通過抗氧化改善紅藻氨酸毒性引起的癲癇樣神經(jīng)行為；通過緩解線粒體復(fù)合物酶活性進(jìn)而改善秋水仙堿和D-半乳糖誘導(dǎo)的學(xué)習(xí)記憶損傷。多種腦組織疾病均存在腦糖代謝障礙和/或長時程記憶損傷，盡管研究柚皮苷對神經(jīng)組織作用的報(bào)道很多，然而研究其對腦組織糖代謝以及突觸可塑性的作用至今未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供柚皮苷及其衍生物在制備改善腦組織葡萄糖代謝減退和長時程記憶的藥物中的應(yīng)用。作為優(yōu)選，所述柚皮苷衍生物為柚皮苷鹽、柚皮苷前藥、柚皮苷二氫查耳酮。本專利發(fā)明人經(jīng)大量研究發(fā)現(xiàn)，柚皮苷有2種新功能(I)提高腦組織葡萄糖攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，改善能量代謝障礙；(2)活化鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶以及下游的AMPA谷氨酸受體，促進(jìn)谷氨酸神經(jīng)元興奮性傳遞，從而改善長時程記憶。 本發(fā)明的另一個目的是提供柚皮苷在制備治療以腦糖代謝障礙和/或長時程記憶損傷為特征的腦組織疾病的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過APPSWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠研究柚皮苷在能量代謝以及突觸可塑性中效應(yīng)，結(jié)果表明其可以提高腦組織葡萄糖攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，改善能量代謝障礙；活化鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶以及下游的AMPA谷氨酸受體，促進(jìn)谷氨酸神經(jīng)元興奮性傳遞，從而改善長時程記憶。首次證實(shí)柚皮苷通過調(diào)節(jié)腦能量代謝和長時程記憶，從而改善損傷的神經(jīng)行為，延緩疾病進(jìn)程，具有發(fā)展成為治療以腦糖代謝障礙和/或長時程記憶損傷為特征的腦組織疾病藥物和相關(guān)健康制劑的潛力。


圖I為避暗實(shí)驗(yàn)檢測柚皮苷改善APPSWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠長時程記憶能力。圖2為水迷宮實(shí)驗(yàn)檢測柚皮苷改善APPSWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠長時程記憶能力。圖3顯示柚皮苷增加APPswe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織葡萄糖攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)。圖4顯示柚皮苷活化鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶以及下游的AMPA谷氨酸受體。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明公開了柚皮苷在制備改善腦組織葡萄糖代謝和長時程記憶的藥物中的應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。為了使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本發(fā)明的技術(shù)方案，下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。實(shí)施例I :柚皮苷改善APPSWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠和長時程記憶能力APPswe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠隨機(jī)分組，每組12只，雌雄各半，并選擇12只野生鼠作為對照組，這些小鼠在性別、體重相匹配，將轉(zhuǎn)基因小鼠分為4組AD安慰劑組、安理申治療組(2mg/kg/d)、柚皮苷治療組(50mg/kg/d)、柚皮苷治療組(100mg/kg/d)。安慰劑組及對照組小鼠給予常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)鼠糧，安理申治療組和柚皮苷治療組在常規(guī)的標(biāo)準(zhǔn)鼠糧中加入相應(yīng)齊U量的藥物，小鼠每天鼠糧的攝入量按下列計(jì)算每只體重為20g的小鼠，每天攝入鼠糧為3g，選擇3月齡小鼠給藥，治療時間為16周，給藥后進(jìn)行行為學(xué)實(shí)驗(yàn)。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)包括避暗實(shí)驗(yàn)和Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。為了研究柚皮苷對小鼠長時程記憶能力的效應(yīng)，行為學(xué)與以往不同的是避暗實(shí)驗(yàn)結(jié)束后7天，再次檢測小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)在完成第I次空間探索實(shí)驗(yàn)7天后，又進(jìn)行了 I次空間探索實(shí)驗(yàn)。結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)無論是陽性藥安理申還是柚皮苷治療組小鼠在7天后的記憶能力均有所遺忘，然而柚皮苷治療組記憶的維持時間較長，表現(xiàn)為避暗實(shí)驗(yàn)中，轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)入暗室的潛伏期安理申由原來的110. 17±19· 93s減少至75. 44±10· 72s，減少了 3L 52% ；而柚皮苷治療組小鼠由原來的180. 79±32· 18s減少至148. 61 ±13. 34s，只減少了 17. 8%(圖I);在水迷宮空間探索實(shí)驗(yàn)中轉(zhuǎn)基因小鼠穿越原平臺所在區(qū)域的次數(shù)(zone4)安理申由原來的ll±1.00s減少為7. 78±1.05s，而柚皮苷由原來的10. 82±1.26s減少為10±1.48s (圖2)。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)柚皮苷可以增強(qiáng)APPsWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠長時程記憶能力。實(shí)施例2 :柚皮苷增加APPSWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織葡萄糖攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)正電子發(fā)射斷層掃描術(shù)(Positron Emission Tomography, PET)是利用放射性標(biāo)記物進(jìn)行活體分子成像，分析大腦糖代謝，從而間接反映神經(jīng)元的活動，是活體診斷腦部疾病的重要工具。本研究應(yīng)用PET技術(shù)于轉(zhuǎn)基因小鼠的實(shí)驗(yàn)研究中，無創(chuàng)定量測量不同腦區(qū)葡萄糖的利用率。結(jié)果顯示，與野生對照小鼠相比，APPswe/PS ldE9轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織額葉葡萄糖攝取減少了 38%，顳葉減少了 44%，海馬減少了 41%轉(zhuǎn)基因鼠相t匕，柚皮苷治療組(100mg/kg/d)小鼠額葉葡萄糖攝取增加了 72. 5%，顳葉增加了 61%，海馬增加了 62% (見圖3)，結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)柚皮苷可以提高腦組織葡萄糖的利用率，改善轉(zhuǎn)基因小 鼠的能量代謝障礙。實(shí)施例3 :柚皮苷活化鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶以及下游的AMPA谷氨酸受體長時程增強(qiáng)(long term potentiation, LTP)是學(xué)習(xí)記憶的物質(zhì)基礎(chǔ)，而CaMK II參與了 LTP的誘導(dǎo)和維持，在學(xué)習(xí)記憶的形成和維持中起著關(guān)鍵性的作用。激活的CaMK
II可以進(jìn)一步活化了下游腦組織中AMPA (Ser831)活性，從而激活A(yù)MPA受體，增加細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度，誘導(dǎo)興奮性突觸后電流增強(qiáng)，促進(jìn)谷氨酸神經(jīng)元興奮性傳遞。同時磷酸化后AMPA受體也能使AMPA受體結(jié)合蛋白插入突觸后致密成分中，錨定新增的AMPA，使沉默突觸變成有功效的突觸，提高突觸傳導(dǎo)效率。本研究通過免疫印跡觀察到APPsWe/PSldE9轉(zhuǎn)基因小鼠相對于野生成年小鼠CaMK II磷酸化水平顯著下降，而在柚皮苷治療組(100mg/kg/d)小鼠腦組織中CaMK II磷酸化水平升高。同時通過免疫印跡檢測CaMK II激酶下游AMPA(Ser831)受體磷酸化變化，結(jié)果顯示AMPA (Ser831)磷酸化變化與CaMK II (Thr286)變化趨勢相一致(見圖4)。本結(jié)果首次發(fā)現(xiàn)柚皮苷可以提高轉(zhuǎn)基因小鼠腦組織中的CaMK II(Thr286)磷酸化水平和AMPA (Ser831)活性，增強(qiáng)長長時程效應(yīng)，提高突觸傳導(dǎo)效率和功倉泛。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
權(quán)利要求
1.柚皮苷及其衍生物在制備改善腦組織葡萄糖代謝減退和長時程記憶的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述柚皮苷衍生物為柚皮苷鹽、柚皮苷前藥、柚皮苷二氫查耳酮。
3.柚皮苷在制備治療以腦糖代謝障礙和/或長時程記憶損傷為特征的腦組織疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，公開了柚皮苷在制備改善腦組織葡萄糖代謝減退和長時程記憶減退的藥物的應(yīng)用。本發(fā)明首次發(fā)現(xiàn)柚皮苷可以提高腦組織葡萄糖攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)，改善能量代謝障礙；同時可以活化鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶以及下游的AMPA谷氨酸受體，促進(jìn)谷氨酸神經(jīng)元興奮性傳遞，改善長時程記憶，從而改善神經(jīng)退行性疾病的癥狀，延緩疾病進(jìn)程，具有發(fā)展成為治療以腦糖代謝障礙和/或長時程記憶損傷為特征的腦組織疾病藥物或健康制劑的潛力。
文檔編號A61K31/7048GK102872065SQ20121038015
公開日2013年1月16日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者張連峰, 王冬梅, 楊亞軍, 張麗, 曹興水 申請人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究所