專利名稱：一種薄荷黃酮提取物及其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種薄荷黃酮提取物及其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
抗氧化劑是一類能有效阻止或延緩自動氧化的物質(zhì)，被廣泛應(yīng)用于藥品及食品中。傳統(tǒng)的合成抗氧化劑有BHA、BHT、PG及TBHQ等，20世紀(jì)以來，人們不斷發(fā)現(xiàn)合成抗氧化劑具有致畸、致癌等毒性，因此越來越多的國家開始限制或禁止使用某些合成抗氧化劑，而轉(zhuǎn)而從植物中尋求天然抗氧化劑成分。薄荷為唇形科植物Mentha haplocalyx Briq.的干燥地上部分,為傳統(tǒng)的辛涼解表藥，味辛，性涼，具有疏風(fēng)、散熱、疏肝、辟穢、解毒的功效，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床。薄荷中含 有大量、多種黃酮類成分，如麝香草素、柳穿魚黃素、蒙花苷、香葉木苷、香葉木素、芹菜素、椴樹素、刺槐素、木犀草素、香蜂草苷等成分。申請人:研究發(fā)現(xiàn)，薄荷黃酮提取物具有良好的抗氧化作用。但目前，未見對薄荷黃酮類成分及其制備工藝的研究報(bào)道。因此，申請入開展了本發(fā)明研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種薄荷黃酮提取物，本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供其制備方法，本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供其質(zhì)量檢測方法，本發(fā)明的第四個(gè)目的在于提供其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明薄荷黃酮提取物的制備方法包括如下步驟步驟I :取薄荷藥材，用30 90%乙醇回流提取2 4次，每次提取O. 5 2小時(shí)；步驟2 :聚酰胺或大孔吸附樹脂純化。該薄荷黃酮提取物中總黃酮含量為30 90% ;該薄荷黃酮提取物中總黃酮含量優(yōu)選為50 80%。將以上所得提取物，加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑、口服液、注射劑。上述步驟I中，取薄荷藥材，用30 90%乙醇回流提取2 4次，每次提取O. 5 2小時(shí)，合并提取液，得薄荷乙醇提取液；其中，優(yōu)選的方法為采用14倍量70%乙醇提取3次，每次I. 5h ；上述步驟2中，取步驟I所得乙醇提取液，減壓回收溶劑至所含乙醇濃度為O 40%，以2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速離心20 40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為O. 05 O. 2g/mL，通過聚酰胺柱或大孔吸附樹脂柱，生藥量與聚酰胺或大孔樹脂體積比為I : 4 8，聚酰胺或大孔樹脂柱徑高比為I : 7 11，吸附流速為I 3BV/h，待吸附結(jié)束后，O 30%乙醇洗脫I 4BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2 5BV/h，棄去，再用70 95%乙醇洗脫I 4BV，洗脫流速為5 9BV/h，收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物；優(yōu)選的方法為回收溶劑至所含乙醇濃度為30%，以3000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. lg/mL的上樣液，上樣于聚酰胺柱，生藥量與聚酰胺體積比為I : 6，聚酰胺柱徑高比為I : 9，吸附流速為2BV/h，待吸附結(jié)束后，10%乙醇洗脫3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為4BV/h，棄去，再用90%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為8BV/h，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物。上述步驟2中聚酰胺為30 60目；大孔吸附樹脂為D101、AB-8、HPD-400、S-8型大孔吸附樹脂。上述制備方法中，優(yōu)選的方法為薄荷藥材采用14倍量70%乙醇提取3次，每次
I.5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為30%，以3000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. lg/mL的上樣液，上樣于聚酰胺柱，生藥量 與聚酰胺體積比為I : 6，聚酰胺柱徑高比為I : 9，吸附流速為2BV/h，待吸附結(jié)束后，10%乙醇洗脫3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為4BV/h，棄去，再用90%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為8BV/h，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物。本發(fā)明薄荷薄荷黃酮提取物為薄荷經(jīng)乙醇提取再通過聚酰胺或大孔吸附樹脂純化得到，經(jīng)抗氧化活性實(shí)驗(yàn)表明，具有良好的抗氧化作用。實(shí)驗(yàn)例I薄荷黃酮提取物抗氧化實(shí)驗(yàn)I儀器與試劑KQ-500DE型數(shù)控超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；DS電熱三用水浴鍋(北京醫(yī)療設(shè)備廠)；Sart0ri0us BT25S型1/100000電子分析天平(北京賽多利斯儀器有限公司);SPECTRAMAX190型酶標(biāo)儀；96孔板。DPPH試劑(2，2- 二苯基苦味?；诫禄杂苫?，維生素C，其它化學(xué)試劑均為分析純。樣品有薄荷黃酮提取物1、2、3為分別按照實(shí)施例7、8、9方法制備所得。2方法與結(jié)果2. I樣品液配制準(zhǔn)確稱取各供試樣品2mg，加100 μ L DMSO溶解后，加900 μ L無水乙醇稀釋，充分振搖后配制成lmg/mL供試樣品溶液。用乙醇依次稀釋成質(zhì)量濃度為I. 0,0. 5,0. 25,0. 125、O. 0625,0. 03125,0. 015625mg/mL 的溶液。陽性對照品(Vc)溶液質(zhì)量濃度與上述樣品溶液質(zhì)量濃度相同。2. 2 DPPH自由基清除方法將100 μ L不同質(zhì)量濃度的供試樣品溶液和100 μ L DPPH乙醇溶液共置于96空板小孔內(nèi)，空白對照孔為100 μ L乙醇和100 μ L DPPH乙醇溶液，重復(fù)3次，37°C遮光放置反應(yīng)30min,測其在517nm波長處吸光度。以Vc做陽性對照，按公式計(jì)算樣品對DPPH自由基的
清除率。清除率(%) = [I-(Ai-Aj)/Ac] X 100%Ac為加入DPPH試劑后空白對照吸光度，Ai為加入DPPH試劑后樣品液吸光度，Aj為未加入DPPH試劑時(shí)樣品液吸光度。2. 3 結(jié)果
各樣品清除DPPH自由基結(jié)果見表I及圖1、2、3、4。由結(jié)果可知，薄荷黃酮提取物具有較明顯的抗氧化作用。表I各樣品清除DPPH自由基結(jié)果薄荷提取物IC50 (mg/L)
Vc0.014
薄荷黃酮提取物I0.035
薄荷黃酮提取物20.033
薄荷黃酮提取物30.040·下述實(shí)施例均能實(shí)現(xiàn)上述實(shí)驗(yàn)例的效果。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :膠囊劑薄荷藥材采用14倍量70%乙醇提取3次，每次I. 5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為30%，以3000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. lg/mL的上樣液，上樣于30 60目聚酰胺柱，生藥量與聚酰胺體積比為I 6，聚酰胺柱徑高比為I : 9，吸附流速為2BV/h，待吸附結(jié)束后，10%乙醇洗脫3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為4BV/h，棄去，再用90%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為8BV/h，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成膠囊劑?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HCl 3. OmL，并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，于470nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為70%。
實(shí)施例2 :片劑薄荷藥材采用12倍量50%乙醇提取2次，每次I. 0h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為25%，以4000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 15g/mL的上樣液，上樣于AB-8型大孔吸附樹脂柱，生藥量與AB-8型大孔吸附樹脂柱體積比為I : 7，樹脂柱徑高比為I : 7，吸附流速為lBV/h，待吸附結(jié)束后，20%乙醇洗脫2BV進(jìn)行除雜，除雜流速為3BV/h，棄去，再用80%乙醇洗脫4BV，洗脫流速為6BV/h，收集80%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成片劑?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液； 樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HC13. OmL,并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至7.01^，搖勻，于47011111處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為50%。實(shí)施例3:丸劑薄荷藥材采用16倍量80%乙醇提取4次，每次2. 0h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為20%，以2000r/min的速度離心20min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 05g/mL的上樣液，上樣于DlOl大孔吸附樹脂柱，生藥量與DlOl大孔吸附樹脂柱體積比為I : 4，樹脂柱徑高比為I : 10，吸附流速為3BV/h，待吸附結(jié)束后，30%乙醇洗脫IBV進(jìn)行除雜，除雜流速為lBV/h，棄去，再用70%乙醇洗脫4BV，洗脫流速為5BV/h，收集70%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成丸劑?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HC13. OmL,并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，于470nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為85%。實(shí)施例4 口服液體制劑薄荷藥材采用10倍量30%乙醇提取4次，每次0. 5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為10%，以3000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為0. 2g/mL的上樣液，上樣于HPD400大孔吸附樹脂柱，生藥量與HPD400大孔吸附樹脂柱體積比為I : 8，樹脂柱徑高比為I : 7，吸附流速為3BV/h，待吸附結(jié)束后，0%乙醇洗脫2BV進(jìn)行除雜，除雜流速為3BV/h，棄去，再用95%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為5BV/h，收集95%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成口服液體制劑?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HCl 3. OmL，并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足 至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至7.01^，搖勻，于47011111處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為30%。實(shí)施例5 :注射劑薄荷藥材采用12倍量90%乙醇提取4次，每次I. Oh，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為40%，以2000r/min的速度離心40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 15g/mL的上樣液，上樣于S-8型大孔吸附樹脂柱，生藥量與SS型大孔吸附樹脂柱體積比為I : 5，樹脂柱徑高比為I : 10，吸附流速為lBV/h，待吸附結(jié)束后，40%乙醇洗脫3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為3BV/h，棄去，再用70%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為6BV/h，收集70%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物，加入常規(guī)輔料，按照常規(guī)工藝制成注射劑?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HCl 3. OmL，并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至
7.OmL，搖勻，于470nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為90%。實(shí)施例6 薄荷藥材采用12倍量70%乙醇提取2次，每次I. 5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為20%，以3000r/min的速度離心40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為0. 08g/mL的上樣液，上樣于AB-8型大孔吸附樹脂柱，生藥量與上樣于AB-8型大孔吸附樹脂柱體積比為I : 7，樹脂柱徑高比為I : 10，吸附流速為2BV/h，待吸附結(jié)束后，10%乙醇洗脫4BV進(jìn)行除雜，除雜流速為3BV/h，棄去，再用90%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為8BV/h，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物總黃酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為0. 25mg/mL的對照品溶液；
樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HCl 3. OmL，并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至
7.OmL，搖勻，于470nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為75%。實(shí)施例7 薄荷藥材采用16倍量40%乙醇提取4次，每次I. 5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為20%，以2000r/min的速度離心40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 18g/mL的上樣液，上樣于DlOl型大孔吸附樹脂柱，生藥量與DlOl型大孔吸附樹脂柱體積比為I : 8，樹脂柱徑高比為I : 7，吸附流速為3BV/h，待吸附結(jié)束后，20%乙·醇洗脫2BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，棄去，再用70%乙醇洗脫4BV，洗脫流速為7BV/h，收集70%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HC13. OmL,并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至
7.OmL，搖勻，于470nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為85%。實(shí)施例8 薄荷藥材采用12倍量90%乙醇提取4次，每次O. 5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為40%，以3000r/min的速度離心40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 2g/mL的上樣液，上樣于S-8型大孔吸附樹脂柱，生藥量與S-8型大孔吸附樹脂柱體積比為I : 5，樹脂柱徑高比為I : 11，吸附流速為3BV/h，待吸附結(jié)束后，30%乙醇洗脫4BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，棄去，再用80%乙醇洗脫3BV，洗脫流速為7BV/h，收集80 %乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物。總黃酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HC13. OmL,并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至7.01^，搖勻，于47011111處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為30%。實(shí)施例9
薄荷藥材采用12倍量80%乙醇提取2次，每次2. 0h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為10%，以2000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 05g/mL的上樣液，上樣于30 60目聚酰胺柱，生藥量與聚酰胺體積比為
I 6，聚酰胺柱徑高比為I : 9，吸附流速為2BV/h，待吸附結(jié)束后，10%乙醇洗脫3BV進(jìn)行除雜，除雜流速為4BV/h，棄去，再用90%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為8BV/h，收集90%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙 醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HCl 3. OmL，并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至
7.OmL，搖勻，于470nm處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為60%。實(shí)施例10 薄荷藥材采用15倍量60%乙醇提取3次，每次I. 5h，提取液回收溶劑至所含乙醇濃度為30%，以4000r/min的速度離心30min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以生藥量計(jì)，即得濃度為O. 15g/mL的上樣液，上樣于HPD400型大孔吸附樹脂柱，生藥量與HPD400型大孔吸附樹脂柱體積比為I : 6，樹脂柱徑高比為I : 7，吸附流速為2BV/h，待吸附結(jié)束后，30%乙醇洗脫IBV進(jìn)行除雜，除雜流速為2BV/h，棄去，再用80%乙醇洗脫2BV，洗脫流速為7BV/h,收集80%乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物?？傸S酮含量測定方法對照品溶液的制備取蒙花苷對照品2. 5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋到刻度，搖勻，即得濃度為O. 25mg/mL的對照品溶液；樣品溶液制備取薄荷黃酮提取物約5mg，精密稱定，置IOmL容量瓶中，加70%乙醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得黃酮提取物供試品溶液；測定方法精密吸取對照品和樣品溶液適量，置于加有鎂粉IOOmg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴中，緩慢滴加濃HCl 3. OmL，并不時(shí)振搖試管，最后加70%乙醇補(bǔ)足至7. OmL，搖勻，置80°C水浴中加熱30min，取出，迅速冷卻至室溫后再加70%乙醇補(bǔ)足至7.01^，搖勻，于47011111處測定吸光度。外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算含量，經(jīng)測定總黃酮含量為50%。


圖I是維生素C抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖 圖2是黃酮提取物I抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖 圖3是黃酮提取物2抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖 圖4是黃酮提取物3抗氧化實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖。
權(quán)利要求
1.一種具有抗氧化作用的薄荷黃酮提取物，其特征在于該提取物的制備方法包括如下步驟 步驟I :取薄荷藥材，用30 90%乙醇回流提取2 4次，每次提取O. 5 2小時(shí)； 步驟2 :聚酰胺或大孔吸附樹脂純化。
2.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物，其特征在于該薄荷黃酮提取物中總黃酮含量為30 90%。
3.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物，其特征在于步驟2中，取步驟I所得乙醇提取液，回收溶劑至所含乙醇濃度為O 40%，以2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速離心20 40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為O. 05 O. 2g/mL，通過聚酰胺柱或大孔吸附樹脂柱，生藥量與聚酰胺或大孔樹脂體積比為I : 4 8，聚酰胺或大孔樹脂柱徑高比為I : 7 11，吸附流速為I 3BV/h，待吸附結(jié)束后，O 30%乙醇洗脫I 4BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2 5BV/h，棄去，再用70 95%乙醇洗脫I 4BV，洗脫流速為5 9BV/h,收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物。
4.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物，其特征在于加入常規(guī)輔料，按常規(guī)的制劑工藝制成藥劑學(xué)可接受的任意常規(guī)劑型，包括膠囊劑、片劑、丸劑、口服液體制劑、注射劑、顆粒劑、凝膠劑、緩釋劑。
5.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物的制備方法，其特征在于步驟I中，取薄荷藥材，用30 90%乙醇回流提取2 4次，每次提取O. 5 2小時(shí)，合并提取液，得薄荷乙醇提取液。
6.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物的制備方法，取步驟I所得乙醇提取液，減壓回收溶劑至所含乙醇濃度為O 40%，以2000 4000r/min的轉(zhuǎn)速離心20 40min，取上清液，回收溶劑至無醇味，以薄荷藥材計(jì)，上樣液濃度為O. 05 O. 2g/mL，通過聚酰胺柱或大孔吸附樹脂柱，生藥量與聚酰胺或大孔樹脂體積比為I : 4 8，聚酰胺或大孔樹脂柱徑高比為I : 7 11，吸附流速為I 3BV/h，待吸附結(jié)束后，O 30%乙醇洗脫I 4BV進(jìn)行除雜，除雜流速為2 5BV/h，棄去，再用70 95%乙醇洗脫I 4BV，洗脫流速為5 9BV/h,收集乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即得薄荷黃酮提取物。
7.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物的制備方法，其特征在于步驟2中所用大孔吸附樹脂為D101、AB-8、HPD-400、S-8大孔吸附樹脂。
8.如權(quán)利要求I所述的薄荷黃酮提取物在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種薄荷黃酮提取物及其制備方法以及其在制備抗氧化藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明薄荷黃酮提取物通過乙醇提取，再通過聚酰胺或大孔吸附樹脂分離純化得到薄荷黃酮提取物；該薄荷黃酮提取物具有良好的抗氧化作用，可以制備成任何常用劑型。
文檔編號A61K36/534GK102836208SQ201210323799
公開日2012年12月26日 申請日期2012年9月5日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月5日
發(fā)明者劉斌, 姜艷艷, 張凡, 石任兵, 熱增才旦 申請人:劉斌