專利名稱:薄荷提取物的化妝品應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及至少一種薄荷科植物的細胞提取物的用途，用作尤其是由情緒型應激所誘導的黑素生成的抑制劑，和/或用作除色素劑。
背景技術：
黑素生成是合成黑素的過程，其是造成細胞色素沉著的原因。它是經(jīng)L-酪氨酸氨基酸羥基化作用所引發(fā)的復雜生化過程，其導致形成L-二羥基苯基丙氨酸(L-dihydroxyphenylalamine，L-DOPA)。然后，通過特異性黑素細胞相關酶酪氨酸酶的作用將L-DOPA轉化為多巴色素，并且隨后的還原氧化反應導致多巴色素到黑素的轉化。酪氨酸酶的產生及其活性部分地決定了所產生的黑素的量。轉移到角質形成細胞的黑素的量和類型就其而言決定了人皮膚可見色素沉著的程度。
已知黑素主要提供針對皮膚抗太陽和更一般而言抗UV射線的保護功能。黑素吸收這些射線，從而顯著降低在照射期間會由產生的自由基所引起的損傷現(xiàn)象的風險。
然而，在角質形成細胞、內皮細胞、成纖維細胞和朗格漢斯細胞中，在應答外源刺激例如污染或UV射線，和/或內源刺激例如由于衰老或內部應激而導致的內源刺激時，黑素會過量地或者甚至異常地合成。
事實上，這兩類刺激方法中的幾種可以共存。
因此，UV照射首先通過直接刺激黑素細胞誘導黑素合成，其次通過角質形成細胞、內皮細胞和成纖維細胞的引發(fā)和/或促進信息經(jīng)介質間接刺激黑素生成。具體而言，角質形成細胞表現(xiàn)為通過合成介質例如α-MSH(α-黑素細胞刺激激素)、內皮縮血管肽、E2前列腺素和NO，與黑素細胞相通。
已經(jīng)提出活性劑用于對抗尤其是由外源刺激所誘導的過量色素沉著的發(fā)展，并且尤其是恢復皮膚的正常色。作為這些活性劑的實例，尤其可以提及的是L-抗壞血酸、曲酸、氫醌等。然而，這些活性劑不能治療更具體而言由內部應激所誘導的過量色素沉著。
因此需要具有可以治療由后一刺激方法所誘導的過量色素沉著的活性劑。
本發(fā)明人已經(jīng)準確地證實，完全出乎意料地，薄荷科植物的細胞提取物可以用作活性劑，其能夠抑制黑素生成過程，尤其是，由代表最近所述活性的內部應激所誘導的黑素生成過程。
在文件WO 2004/058282中，已經(jīng)提出將辣薄荷的衍生物用作對皮膚具有鎮(zhèn)靜作用的活性劑。然而所述文件沒有提及相同類型提取物針對由內部應激所誘導的黑素生成過程的特性，更不用說它在預防和/或治療由情緒型應激所誘導的過量黑素生成的相關皮膚疾病中的效果了。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的新活性有利于預防和/或減少黑素的合成和/或釋放以及對抗內部應激之后發(fā)生的過量的皮膚色素沉著或皮膚疾病。
在本發(fā)明的內容中，表述“內部應激”和“情緒型應激”是等同的，并且這兩者都用于表示由心理應激或者疲勞所誘導即引起或者擴增的內源修正。
情緒型應激尤其能夠通過將激素和/或神經(jīng)激素例如兒茶酚胺釋放進入到血液和進入到外周組織中而證實自己。
這尤其可以通過兒茶酚胺量的增加反映出來，去甲腎上腺素就是其中之一此時參考去甲腎上腺素能型應激。
為了證明薄荷提取物對由內部應激所誘導的黑素生成的作用，本發(fā)明人已經(jīng)使用了體外多細胞角質形成細胞/黑素細胞/神經(jīng)細胞模型。發(fā)現(xiàn)在體外模型中刺激的去甲腎上腺素適合用于評估有潛力的活性劑對由情緒型應激誘導的黑素生成的作用。
因此，本發(fā)明人已經(jīng)注意到在該模型中通過抑制黑素生成的另一間接伙伴即多肽化學元素降鈣素基因相關肽(CGRP)的釋放，來反映薄荷提取物的活性。
現(xiàn)在，已知角質形成細胞產生應答CGRP刺激的促黑素激素因子，其調節(jié)生長、黑素合成和黑素細胞的樹突化(dendricity)。(Mashiko.Toyoda et al.，The society for investigate dermatology，Inc，Vol.4，N°2，September 1999)。
CGRP是由降鈣素基因產生的37氨基酸肽，并且是分布最廣的和最大量的感覺神經(jīng)肽。也已經(jīng)顯示它由應答外部刺激例如UV照射的神經(jīng)末梢分泌(Scholzen et al，Journal of investigative dermatology symposiumproceedings，1999，4(1)55-60)，并且由外部攻擊例如污染刺激它的分泌。
更近期地，也已經(jīng)注意到CGRP的產生會被刺激應答情緒型應激。因此，已經(jīng)顯示可以通過應激激素例如去甲腎上腺素和腎上腺素刺激CGRP分泌。

發(fā)明內容因此，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)薄荷提取物具有抑制CGRP釋放的特性，并且因此使得可以調節(jié)并且尤其是抑制黑素生成，特別是在黑素生成由情緒型應激誘導的情況下。
為此，根據(jù)它的一個方面，本發(fā)明涉及一種用于預防和/或減少尤其是由情緒型應激所誘導的黑素的合成和/或釋放的治療性或者非治療性處理、尤其是化妝品處理的方法，其中使用包含至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物作為活性劑的化妝品組合物。
根據(jù)它的另一個方面，本發(fā)明涉及一種用于預防和/或治療尤其是由情緒型應激所誘導的過量皮膚色素沉著的治療性或者非治療性處理、尤其是化妝品處理的方法，其中使用如上所定義的組合物。
根據(jù)它的另一個方面，本發(fā)明涉及一種用于預防和/或治療與尤其是由情緒型應激所誘導的過量黑素生成相關的皮膚疾病的治療性或者非治療性處理、尤其是化妝品處理的方法，其中使用如上所定義的化妝品組合物。
根據(jù)它的另一個方面，本發(fā)明還涉及新型組合物，其中薄荷提取物可以有利地與額外的除色素劑組合，所述額外的除色素劑根據(jù)與薄荷提取物作用機理即通過抑制CGRP的機理所不同的機理作用于黑素生成。例如，額外的除色素劑可以根據(jù)酪氨酸酶的抑制機理或者間接刺激黑素生成的第二信使如NO或前列腺素的抑制機理起作用。
根據(jù)不同的作用方法同時起作用的這種組合使得可以對于色素斑點和瑕疵獲得改善的總體效果。
因此，本發(fā)明的對象也是化妝品和/或皮膚病學組合物，其特征在于它包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物，并與至少一種除色素劑組合，所述除色素劑根據(jù)酪氨酸酶的抑制機理或者間接刺激黑素生成的第二信使如NO或前列腺素的抑制機理起作用。
根據(jù)具體實施方案，本發(fā)明涉及皮膚病學和/或化妝品組合物，其特征在于它包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物，并與至少一種角質層分離脫落、抗NO和/或螯合劑組合。
前述試劑不同于抗壞血酸及其衍生物。
根據(jù)本發(fā)明的另一個具體實施方案，本發(fā)明涉及皮膚病學和/或化妝品組合物，其特征在于它包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物和至少一種除色素劑，并與至少一種角質層分離脫落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化劑結合。
根據(jù)另一具體實施方案，本發(fā)明涉及皮膚病學和/或化妝品組合物，其特征在于它包含在生理可接受介質中的至少一種辣薄荷屬植物的至少一種細胞提取物，并與至少是抗壞血酸(維生素C)或至少一種其衍生物如抗壞血酸磷酸鎂(維生素C PMg)、抗壞血酸糖基酯(維生素C G)、抗壞血酸磷酸鈉(維生素C PNa)和3-O-乙基抗壞血酸組合。
因此本發(fā)明的一個目的也是提出薄荷提取物和/或新型組合物，其對于預防和治療由太陽等引起的皮膚色素沉著例如雀斑樣痣(單純型的或者太陽或老年型的)、PUVA雀斑樣痣、日光雀斑樣痣、網(wǎng)狀雀斑樣痣、雀斑或者黑斑病(褐黃斑)是尤其有效的，并且更具體而言對于抑制黑素生成過程是尤其有效的。
本發(fā)明人尤其已經(jīng)發(fā)現(xiàn)薄荷提取物，并且尤其是薄荷科植物的細胞提取物和下文所述額外除色素劑的組合證明尤其可用于提供這種效果。
本發(fā)明還涉及皮膚病學和/或化妝品組合物，其特征在于它包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物，所述提取物的比例以干活性物質計小于0.4wt％，相對于組合物的總重量。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可以配制來用于局部或者口服施用。
本發(fā)明還涉及至少一種薄荷科植物的細胞提取物和/或根據(jù)本發(fā)明的組合物的體內或者體外用途，作為除色素劑。
本發(fā)明還涉及至少一種薄荷科植物的細胞提取物和/或根據(jù)本發(fā)明的組合物的體內或者體外用途，作為抑制尤其是由情緒型應激所誘導的黑素生成的除色素劑。
本發(fā)明還涉及至少一種薄荷科植物的細胞提取物和/或根據(jù)本發(fā)明的組合物的用途，作為皮膚增白劑。
對本發(fā)明來說，術語“黑素生成”是指黑素合成的過程，其包括，例如與合成黑素化學前體即其中間體之一或副產物的過程相關的所有酶促和/或非酶促反應。
對本發(fā)明來說，術語“抑制”表示減少、限制或者阻斷過程的作用或者功能。
對本發(fā)明來說，當黑素生成發(fā)生時，如果一種物質直接作用于黑素生成所發(fā)生部位的表皮黑素細胞的活力，和/或如果它通過抑制黑素生成所涉及的酶中的一種或者通過作為黑素合成鏈中的化合物之一的結構類似物插入，然后該鏈可以被阻斷，并因此確保除色素作用來干擾黑素生物合成的步驟之一，則認為該物質是除色素作用的。
提取物的定義術語“至少一種薄荷的提取物”應當理解為“薄荷細胞提取物”并且因此理解為“薄荷科的至少一種植物的細胞提取物”。
至少一種薄荷的提取物可以是由得自薄荷科的任何植物材料制備的提取物，所述材料已經(jīng)通過體外或者體內培養(yǎng)獲得。
術語“體外培養(yǎng)”意指本領域中技術人員熟知的使得可以人工獲得植物或者植物部分的所有技術。
從而，例如根據(jù)本發(fā)明，提取物可以是由體外培養(yǎng)(根、莖、葉)獲得的至少一種薄荷的器官提取物、或者甚至器官細胞的提取物，或者是至少一種薄荷的未分化細胞的提取物。優(yōu)選地，使用從體外培養(yǎng)獲得的未分化細胞所獲得的提取物。
術語“未分化植物細胞”意指不表現(xiàn)特異性特化的任何特征，并且能夠獨自而不是以依賴于其他細胞的狀態(tài)生存的任何植物細胞。在誘導作用下，這些未分化植物細胞可能能夠進行任何與它們的基因組一致的分化。
薄荷科包括幾個種。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的薄荷科的屬中，作為實例可以提及的屬是水薄荷(Mentha aquatica)、野薄荷(Mentha arvensis)、歐薄荷(Mentha longifolia)、辣薄荷(Mentha piperita)、唇萼薄荷(Mentha pulegium)和留蘭香(Menthaspicata)。
根據(jù)本發(fā)明更具體而言所考慮的種來自辣薄荷屬。
根據(jù)本發(fā)明可以使用本領域中技術人員已知的任何提取方法。尤其可以提及的是醇提取物，尤其是乙醇提取物和水-醇提取物。也可以使用文件WO04/058282中所述的方法制備的提取物。這種提取物可包含10-110g/l，或者甚至45-75g/l的干活性物質。例如，這種提取物可包含2-30g/l的糖類(通過M.Dubois et al.，Analytical Chemistry 28，n°3笫350-356頁，1956的方法確定)和0.2-2.7g/l的多酚(用鐵氰化鉀通過比色試驗測量)，包括羥基苯乙烯(hydroxycinnamic)化合物、黃酮、黃烷酮和香豆素。
薄荷提取物也可購得。因此，根據(jù)本發(fā)明可以使用GREENTECH公司銷售的加拿大薄荷葉的水-乙二醇提取物，ALBAN MULLER公司銷售的辣薄荷葉的丙二醇提取物，以及SILAB公司以名稱CALMISKIN銷售的辣薄荷葉提取物。
薄荷提取物以有效賦予用其配制的組合物以根據(jù)本發(fā)明所需特性的量存在。
除非另外提及，薄荷提取物的量以干活性物質表示。術語“干活性物質”用來表示在將提取物干燥之后殘余物的量，正如它能通過本領域中技術人員已知的任何方法測量的那樣。例如，能夠根據(jù)申請WO 2004/058282中所述的方案實施測量。
因此，本發(fā)明的化妝品或者皮膚病學組合物可包含的薄荷提取物干活性物質的量小于0.4wt％，尤其是小于0.1wt％，甚至是0.05wt％～0.001wt％，相對于組合物的總重量。
由于明顯的原因，薄荷提取物用量可以大范圍地變化，并且尤其取決于所希望的CGRP-抑制活性和/或施用方法，即根據(jù)相應的組合物選擇局部或者口服施用。
例如，根據(jù)本發(fā)明的組合物中，更具體而言是旨在局部應用的組合物中，薄荷提取物可使用的量以干活性物質計為0.001wt％～0.4wt％，尤其是0.002wt％～0.35wt％，特別是0.003wt％～0.1wt％。
薄荷提取物與除色素劑的組合如上所具體說明的那樣，本發(fā)明還涉及一種組合物，其包含與至少一種除色素劑組合的至少一種薄荷提取物，所述除色素劑根據(jù)與CGRP抑制機理不同的機理作用于黑素生成。它尤其可以包括根據(jù)酪氨酸酶的抑制機理或者間接刺激黑素生成的第二信使的抑制機理起作用的除色素劑。
作為根據(jù)本發(fā)明可以使用的除色素劑的非限制性代表，尤其可以提及的是曲酸、熊果苷、鞣花酸、lucinol、S亞油酸、凝血酸、4-甲氧基水楊酸鉀、一磷酸腺苷二鈉OT或者二羥基二丙基聯(lián)苯(DDB)。
根據(jù)具體實施方案，本發(fā)明還涉及一種組合物，其包含至少一種辣薄荷屬植物的至少一種細胞提取物，并與至少是抗壞血酸(維生素C)或其一種衍生物如抗壞血酸磷酸鎂(維生素C PMg)、抗壞血酸糖基酯(維生素C G)、抗壞血酸磷酸鈉(維生素C PNa)和3-O-乙基抗壞血酸組合。
當根據(jù)本發(fā)明的組合物包含與至少一種除色素劑尤其是如上所列的除色素劑組合的至少一種薄荷提取物時，其中所述除色素劑根據(jù)酪氨酸酶抑制機理或者間接刺激黑素生成的第二信使的抑制機理起作用，它們也可額外地包含如下所述的至少一種角質層分離脫落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化劑。
本發(fā)明的化妝品和/或皮膚病學組合物可包含0.1～7wt％、優(yōu)選0.5～7wt％的除色素劑，相對于組合物的總重量。
當然，該量本身也可以尤其是根據(jù)所用除色素劑的性質而大范圍地變化，并且也可以取決于所希望的除色素活性和/或為相應組合物所選擇的施用方法。
皮膚疾病如上所具體說明的那樣，根據(jù)本發(fā)明的薄荷提取物和/或組合物證實對于預防和/或治療過量皮膚色素沉著以及尤其是與具體而言由情緒型應激所誘導的過量黑素生成相關的皮膚疾病而言是特別有利的。
此外，根據(jù)本發(fā)明的薄荷提取物和/或組合物也可以用于預防和/或治療黑素沉著過多癥。
黑素沉著過多癥對應于皮膚中黑素過載或者黑素異常分布。
在黑素沉著過多癥中，可以將與表皮相關的異常病癥黑皮病與真皮異常病癥藍皮病(ceruloderma)區(qū)分開來。
黑皮病可以由表皮基底層中活性黑素細胞量的增加或者在黑素細胞量沒有任何改變的情況下表皮中黑素量的增加所導致。后一種情況構成大多數(shù)的皮膚色素沉著過多。
它們尤其可以由增加的酪氨酸酶合成、黑素體黑變作用的增加、向角質形成細胞的轉移的增加和/或在角質形成細胞中黑素體存活率的增加所誘導。
作為黑素沉著過多(hypermellanose)的實例，更具體而言可以提及的是雀斑樣痣、PUVA雀斑樣痣、日光雀斑樣痣、網(wǎng)狀雀斑樣痣、雀斑和黑斑病(或褐黃斑)。
雀斑樣痣是表皮的黑素細胞增生過多癥(hypermelanocytoses)。如果它們的顏色沒有被日光改變，那么它們屬于單純型，否則屬于太陽或者老年型。后者通常具有更大的尺寸。在暴露于光照的區(qū)域中觀察它們。它們出現(xiàn)在日曬后的年輕個體中，以及暴露于太陽下后的年長個體中。超過70歲的個體中90％以上表現(xiàn)出太陽型雀斑樣痣，尤其是在手背、面部、手臂、背部的上半部分和頸部和肩膀上。幾個太陽型雀斑樣痣可以連接，從而形成大的覆蓋物。
PUVA雀斑樣痣是略微不同于太陽型雀斑樣痣的斑，并且出現(xiàn)在接受長時間PUVA治療的患者中。它們出現(xiàn)在暴露于UVA照射的區(qū)域中。
日光雀斑樣痣出現(xiàn)在無補骨脂素(psoralene)的情況下使用日光浴在一次強烈暴曬之后或者在長期有規(guī)律的暴曬之后的輕微光照型患者中。
網(wǎng)狀雀斑樣痣是太陽型雀斑樣痣的變體，其顏色非常暗，幾乎是黑色。
雀斑，或者說斑點，出現(xiàn)在暴露于光照的區(qū)域中(面部、手背、前臂)，更具體而言出現(xiàn)在具有非常淺色皮膚的個體中。暴露在太陽下后它們的顏色加重。
至于黑斑病或者褐黃斑，它是只存在于暴露于光照的區(qū)域中的色素沉著過多。它出現(xiàn)在懷孕或者激素治療期間，或者出現(xiàn)在服用某種藥物時。
發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明考慮的薄荷提取物和/或組合物對于預防和/或治療所有這些表皮黑素細胞增生過多癥都是有效的。根據(jù)本發(fā)明的有利實施方案，薄荷提取物也可以與對于皮膚呈活性并且尤其是能夠與所希望的除色素作用協(xié)作的其他試劑組合。
活性試劑尤其可以選自角質層分離脫落、抗NO、抗UV、增白、螯合和/或抗氧化劑，應當理解相同的化合物可以具有這些特性中的幾種。
對本發(fā)明來說，角質層分離或脫落劑是使表皮上層脫落以及除去負載有黑素的死細胞的試劑。
在這個方面，酚衍生物，更具體而言，水楊酸或其衍生物之一和/或山毛櫸樹芽提取物，是最合適的。
因此，優(yōu)選地，酚衍生物選自撲熱息痛、所謂的N-(4-羥基酚)乙酰胺或者作為替代方案的對乙酰氨基酚、水楊酸和水楊酸衍生物。
當酚衍生物是水楊酸衍生物時，它優(yōu)選選自自5-正辛?；畻钏?、5-正癸酰基水楊酸和5-正十二烷?；畻钏峄蛘咚鼈兊柠}中的一種。
還可以提及的是AHA、BHA、及衍生物、氨基酸及酸的衍生物。
作為UV射線吸收劑(或者抗UV劑)的非限制性代表，更具體而言可以提及的是對氨基苯甲酸(PABA)、對氨基苯甲酸甘油酯、對氨基苯甲酸乙基二羥基丙酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、對甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、2，4-二羥基二苯酮、2-羥基-4-甲氧基二苯酮、2-羥基-4-甲氧基-4-甲基苯精(benzine)二苯酮、2-羥基-4-甲氧基-4-甲基二苯酮-5-磺酸酯、尿刊酸乙酯、2-苯基-5-甲基苯并唑、4-甲氧基-4-叔丁基二苯酰甲烷和對甲氧基肉桂酸乙基己酯及其類似物。
作為抗氧化劑，尤其可以提及的是多酚衍生物。
可以用于本發(fā)明組合物的多酚化合物可選自例如a)黃酮類化合物，b)鼠尾草酸或者鼠尾草酚，c)任選取代的(2，5-二羥基苯基)羧酸和(2，5-二羥基苯基)亞烷基羧酸、及其衍生物、尤其是其鹽、酯或酰胺，d)咖啡酸的酯或者酰胺e)單寧酸及其混合物。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的黃酮類化合物中，尤其可以提及的是紫杉葉素、兒茶素、表兒茶素、圣草酚、柑橘素、蕓香苷、曲克蘆丁、柯因、紅橘素、木犀草素、表沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、槲皮素、漆樹黃酮、山柰素、高良姜素、沒食子兒茶素、和表兒茶素沒食子酸酯。
可以使用的某些多酚存在于可以以已知的方式提取它們的植物中?？梢允褂貌枞~提取物(茶(Camellia sinensis)或山茶(Camellia japonica))。尤其將提及的是Nikko公司以名稱Sunphenon銷售的綠茶提取物，其具體而言包含黃酮類化合物。
如上所定義的多酚存在的比例可以是0.1wt％～1wt％，相對于組合物的總重量。
抗NO劑可以更具體地選自銀杏(gingko biloba)、山楂、橄欖樹、葡萄、羅勒、姜、蒜和綠茶的提取物及其混合物。
發(fā)現(xiàn)銀杏提取物尤其最有利。這種提取物尤其以商業(yè)形式配銷。在根據(jù)本發(fā)明的化妝品或者皮膚病組合物中，銀杏提取物通常以基于固體的0.01wt％～10wt％的濃度存在，相對于組合物的總重量。
作為根據(jù)本發(fā)明可以使用的螯合劑的非限制性代表，尤其可以提及的是乙二胺四乙酸四鈉(tetrasodium hedetate)和/或檸檬酸。
作為根據(jù)本發(fā)明可以使用的增白劑的非限制性代表，尤其可以提及的是抗壞血酸(維生素C)和衍生物，例如抗壞血酸磷酸鎂(維生素C PMg)、抗壞血酸糖基酯(維生素C G)、抗壞血酸磷酸鈉(維生素C PNa)、3-O-乙基抗壞血酸，春黃菊，多酚例如鞣花酸、曲酸、或者甘草提取物。
它尤其可以包含至少是維生素C G和/或甘草提取物。
維生素C G得自維生素C，并且使用環(huán)糊精葡聚糖轉移酶(CGTase)通過生物技術從該維生素和淀粉中獲得。它同時作為增白劑、自由基清除劑和角質層分離劑。
根據(jù)一個變化實施方案，尤其是用于局部應用的化妝品和/或皮膚病學組合物，除薄荷提取物之外，可包含至少一種抗NO劑例如銀杏提取物和增白劑例如維生素C G。
例如，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以包含至少一種辣薄荷提取物，銀杏提取物、維生素C G、甘草提取物、水楊酸和山毛櫸樹芽提取物。
當然，根據(jù)本發(fā)明的組合物，除薄荷提取物以外，可包含適當組合的一種或者多種用于該制劑的其他活性劑、添加劑和/或載體，更具體而言根據(jù)基于組合物考慮的施用方法進行選擇。
尤其是，根據(jù)所選擇的應用方法或者施用方法，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以是通常所用的藥物形式中的任何一種。
更具體地，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以配制來局部應用或口服施用。
更具體而言關于用于局部應用的組合物，它們可以是水、水-醇或者油溶液、溶液類型的分散體、或者洗液或乳清(serum)類型的分散體、具有奶類的液體或者半液體稠度的乳液、霜或者含水或無水凝膠類型的懸浮液或者乳液、微乳液、微膠囊、微粒、或者離子和/或非離子類型的泡狀(vesicular)分散體。
例如它們可以是護理霜、護理啫哩、支撐面膜、粉底化妝品、遮暇產品、掩飾用化妝品、眼影、眉筆、眼圈粉、睫毛膏或者卸妝產品。
當本發(fā)明的組合物是乳液時，脂肪相的比例可以是5wt％～80wt％，優(yōu)選為5wt％～50wt％，相對于組合物的總重量。在該組合物中以乳液形式所用的油、乳化劑和輔助乳化劑選自化妝品和/或皮膚病領域中通常使用的那些。乳化劑和輔助乳化劑可以以相對于組合物的總重量0.3wt％～30wt％、優(yōu)選0.5wt％～20wt％的比例存在于組合物中。
當本發(fā)明的組合物是油溶液或者凝膠時，脂肪相可以占組合物總重量的90wt％以上。
根據(jù)通常的方法制備這些組合物。
以已知的方式，本發(fā)明的化妝品或者皮膚病學組合物可包含化妝品或者皮膚病領域的常用佐劑，例如脂肪物質、乳化劑、親水或親脂膠凝劑、親水或親脂活性劑、防腐劑、抗氧化劑、香料、填料、遮蔽劑和顏料。
至于本發(fā)明中可以使用的脂肪物質，可以提及的是礦物油例如氫化聚異丁烯和液體凡士林，植物油例如牛油樹脂的液體級分、向日葵油和杏仁油，動物油例如全氫化角鯊烯、合成油、尤其是Purcellin oil、肉豆蔻酸異丙酯和棕櫚酸乙基己酯，和氟油例如全氟聚醚。也可使用脂肪醇、脂肪酸，例如硬脂酸，以及例如蠟尤其是石蠟、巴西棕櫚蠟和蜂蠟。也可使用硅氧烷化合物例如硅油以及例如環(huán)狀聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷的混合物、和硅橡膠純膠料、樹脂和蠟。
至于本發(fā)明可以使用的乳化劑，可以提及的是，例如硬脂酸甘油酯、聚山梨醇酯60、HENKEL公司以名稱Sinnowax AO銷售的十六十八烷醇/含33mol環(huán)氧乙烷的氧乙烯基化十六十八烷醇的混合物、GATTEFOSSE公司以名稱Tefose63銷售的PEG-6/PEG-32/乙二醇硬脂酸酯的混合物、PPG-3十四烷基醚、硅氧烷乳化劑例如十六烷基聚二甲基硅氧烷共聚醇和山梨聚糖單或三硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、或者氧乙烯基化山梨聚糖單硬脂酸酯(20 EO)。
至于本發(fā)明可以使用的溶劑，可以提及的是低級醇，尤其是乙醇和異丙醇、和丙二醇。
作為親水膠凝劑，可以提及的是羧酸聚合物例如CARBOMER、丙烯酸共聚物例如丙烯酸酯/丙烯酸烷基酯共聚物、聚丙烯酰胺、和尤其是聚丙烯酰胺的混合物、SEPPIC公司以商品名Sepigel 305銷售的C13-14-異鏈烷烴和月桂基聚氧乙烯(7)醚、多糖例如纖維素衍生物例如羥烷基纖維素，尤其是羥丙基纖維素和羥乙基纖維素、天然膠例如瓜耳膠、角豆樹膠和黃原膠，和粘土。
作為親脂膠凝劑，可以提及的是改性粘土例如有機皂土、脂肪酸的金屬鹽例如硬脂酸鋁、和疏水性二氧化硅、或者乙基纖維素和聚乙烯。
各種佐劑的用量是化妝品和/或皮膚病領域中常用的那些，例如是組合物總重量的0.01wt％～20wt％。根據(jù)它們的性質，可以將這些佐劑引入到脂肪相、水相和/或脂囊泡中。
根據(jù)本發(fā)明的化妝品方法可以通過根據(jù)本發(fā)明組合物的局部應用實施，例如每日，所述組合物例如可以配制為凝膠、洗液或者乳液的形式。
因此，根據(jù)本發(fā)明的方法可以包含單一應用。
根據(jù)另一個實施方案，重復該應用，例如每日2-3次，施用超過一天或者更多天，并且通常超過至少4周或者甚至4-15周的持續(xù)期，適合的時候存在一個或者多個中斷期。
在口服施用根據(jù)本發(fā)明的組合物的情況中，使用可吸收的載體是有利的。
為了吸收，口服組合物，尤其是食品增補劑的許多實施方案，是可以的。通過生產糖衣丸、明膠膠囊、凝膠、乳液、片劑或膠囊劑的常用方法實施它們的制劑。在口服施用前，粉末能夠稀釋在可吸收的液體例如水中。
具體實施方式下文中出現(xiàn)的實施例用于非限制性舉例說明本發(fā)明的領域。
實施例1在維持在存活條件下的人皮膚模型中，用根據(jù)本發(fā)明的提取物評估皮膚色素沉著和CGRP(降鈣素基因相關肽)誘導的黑素生成的調節(jié)。
材料和方法所用提取物是由SILAB公司以商標名CALMISKIN配銷的產品。這是薄荷(辣薄荷)葉提取物在水中的100％(v/v)溶液。以2wt％的比率使用。
以黑素細胞和鄰近角質形成細胞的水平，通過由Fontana-Masson染色顯示后，在光學顯微鏡下組織學評估皮膚色素沉著。活性黑素細胞的數(shù)目也在全部表皮上的多巴反應后進行量化。
除色素或抗色素(propigmenting)產品的具體化在于評估存在于使用該產品處理的皮膚中黑素細胞和鄰近的角質形成細胞中的黑素色素量，并與未處理的皮膚進行比較。
試驗方案將來自6位不同供者的正常人皮膚的碎片置于插入物中，所述插入物自身被置于培養(yǎng)孔中。將尤其適合維持在存活條件(抗生素，F(xiàn)CS)下的培養(yǎng)基加入到孔底部，在兩個隔室間通過多孔膜(3μm)的慢擴散形成通道。
將10-7M濃度的CGRP加入到D0上的培養(yǎng)基上。以2％(D0、D1和D2)局部應用根據(jù)本發(fā)明的產品。
進行以下的比較-對照組(未處理)皮膚-皮膚+10-7M CGRP-皮膚+10-7M CGRP+2％薄荷提取物全部在存活條件下維持72小時。
通過Fontana-Masson染色的組織學顯示在前述方案結束時，在Bouin’s溶液中固定皮膚碎片，并且包埋到石蠟中用于Fontana-Masson染色后的組織學研究。在顯微鏡下，在300-400個細胞的基底層上實施含黑素粒的細胞數(shù)目的定量評估。計算三種細胞的數(shù)目-等級1無色素細胞或者呈現(xiàn)少數(shù)粒的細胞、有空泡外觀的細胞；-等級2呈現(xiàn)中等黑素量的細胞(分散的、非均勻的黑素粒)；-等級3呈現(xiàn)相當大黑素量的細胞(均勻的黑色沉積物，覆蓋超過細胞中細胞質的一半)。
通過多巴反應的黑素細胞的組織學顯示使用通過0.5M、pH7.5的EDTA.2Na溶液(60℃下90秒)分離的新鮮表皮評估活性黑素細胞數(shù)。
用0.1％多巴溶液顯示黑素細胞(37℃下培養(yǎng)過夜)。
在光學顯微鏡下評估每個單位視界中多巴陽性細胞的數(shù)目(40倍放大下10-12個視界)。計算在每種情況中存在于每個視界的活性黑素細胞的平均數(shù)目。
統(tǒng)計分析基于6種皮膚獲得的結果，對每個參數(shù)進行平均。統(tǒng)計分析通過被稱為Z分數(shù)(Z-score)的t檢驗(Student’s test)或者配對樣本檢驗(pairedsample test)來實施，具有5％的風險。
結果通過Fontana-Masson染色的組織學顯示表1示出每個色素形成等級的上皮細胞百分數(shù)。
表1Fontana-Masson染色后的組織學分析。
該結果表示為相對于分析總數(shù)的細胞百分數(shù)(n＝6種不同的皮膚)。
*對比于對照組皮膚統(tǒng)計學顯著的差異(配對t檢驗，p＜0.05)。
**對比于皮膚+CGRP統(tǒng)計學顯著的差異(配對t檢驗，p＜0.05)。
在維持在存活條件下的CGRP刺激的人皮膚模型中，注意到黑素粒從黑素細胞到鄰近的角質形成細胞的轉移的增加。具體地，具有大量色素的細胞(等級3)的百分數(shù)在用10-7M的CGRP刺激后顯著增加30.3％的Fontana陽性細胞相比于對照組皮膚中的19.7％。同時，具有很少或者沒有色素沉著的細胞(等級1)的百分數(shù)在應用CGRP后相比于對照組皮膚顯著減少(24.9％相比于39.8％，p＝0.03)。在應用CGRP后，等級2的細胞百分數(shù)沒有改變。
因此，2％的所測試薄荷提取物顯著抑制CGRP誘導的色素沉著(等級1細胞的50.1％對比用CGRP的24.9％，p＝0.004)。類似地，具有大量色素的細胞(等級3)的數(shù)目顯著減少(17.3％對比用CGRP的30.3％)。
還發(fā)現(xiàn)等級2細胞的百分數(shù)統(tǒng)計學顯著減少(32.6％相比于單獨使用CGRP的45％)。
通過多巴反應的黑素細胞的組織學顯示
表2表皮層上的黑素細胞(多巴反應后)的數(shù)目(n＝8)。
*對比于對照組皮膚統(tǒng)計學顯著的差異(配對t檢驗，p＜0.05)。
**對比于皮膚+CGRP統(tǒng)計學顯著的差異(配對t檢驗，p＜0.05)。
由多巴反應證實的黑素細胞數(shù)揭示黑素生成主要由CGRP誘導56個多巴陽性細胞對比于對照組皮膚的31個(p＝0.01)。
2％的所測試薄荷提取物顯著抑制這種CGRP誘導的黑素生成(相應地，38個陽性細胞)。
實施例2對于體外多細胞的角質形成細胞/黑素細胞/神經(jīng)細胞模型，評估在情緒應激的情境過程中使用薄荷提取物對皮膚色素沉著和CGRP(降鈣素基因相關肽)誘導的黑素生成的調節(jié)。
所用的提取物是SILAB公司以商標名CALMISKIN配銷的產品。這是薄荷(辣薄荷)葉提取物在水中的100％(v/v)溶液。以0.03wt％的比率使用。
多細胞的角質形成細胞/黑素細胞/經(jīng)細胞模型由在24孔板的培養(yǎng)插入物中培養(yǎng)的神經(jīng)細胞(N)制備第一培養(yǎng)物，以20000個細胞每個沉積物(ThinCertTM，Greiner bio-one ref.662 610)的比率，在補充了2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen 25030024)、50 IU/ml青霉素-50μg/ml鏈霉素(Invitrogen 15070063)、N2補充物(17502-048)、神經(jīng)生長因子(神經(jīng)生長因子，NGF，Invitrogen 13290.010)和神經(jīng)營養(yǎng)素3(NT-3，Tebu 450-03-b)的DMEM-HAM F12培養(yǎng)基(Invitrogen 21331-020)中進行，并且在37℃、被水分飽和的5％CO2的培養(yǎng)器中保持5天。
用在補充了無PMA(Tebu 058M-016-5)的HMGS-2和50 IU/ml青霉素與50μg/ml鏈霉素(Invitrogen 15070063)的混合物的培養(yǎng)基(培養(yǎng)基254(Tebu 058M-254-500))中以100000個細胞/孔的比率在24孔板上接種的角質形成細胞(K)(從整形手術中分離并且在第3通道(R3 K015)處使用的正常人角質形成細胞(NHEK))和以50000個細胞/孔的比率在角質形成細胞培養(yǎng)物中接種的黑素細胞(M)(在第6通道處使用的正常人表皮黑素細胞(NHEM-2))制備第二培養(yǎng)物。
在培養(yǎng)4天后，將包含神經(jīng)細胞的插入物置于包含角質形成細胞/黑素細胞共培養(yǎng)物(在培養(yǎng)該共培養(yǎng)物1天后)的孔中，從而在N/K/M培養(yǎng)基存在下，獲得多細胞的神經(jīng)細胞-角質形成細胞-黑素細胞(N/K/M)模型。
N/K/M培養(yǎng)基包含50％的補充了2mM L-谷氨酰胺(Invitrogen25030024)、50IU/ml青霉素、50μg/ml鏈霉素(Invitrogen 15070063)、N2補充物(17502-048)、神經(jīng)生長因子(NGF，Invitrogen)和神經(jīng)營養(yǎng)素3(NT-3)的DMEM-HAM F12(Invitrogen 21331-020)、33％的補充了0.2mMCaCl2(Tebu S-013-154)和角質形成細胞生長因子(人角質形成細胞生長補充物(HKGS)Tebu S-001-5)的M 154基質(Tebu M 154 CF/PRF)和17％的M 154基質(Tebu M 154 CF/PRF)。
因此獲得的多細胞模型在培養(yǎng)物中維持至少10天。
每天更新50％的孔和插入物的培養(yǎng)基。
去甲腎上腺素能型的情緒應激對黑素生成的作用如上所獲得的多細胞模型的細胞在不存在或者存在10-5M去甲腎上腺素的情況下維持10天，根據(jù)類似于上述的方案，向其中加入或者不加入0.03％CALMISKIN或者10-6M CGRP8-37。
CGRP8-37是參照CGRP受體拮抗劑。
培養(yǎng)結束時，用0.5N NaOH溶液從角質形成細胞/黑素細胞共培養(yǎng)物中提取黑素，然后通過測量光密度(405nm)進行分析，并且與外源黑素(0.39-100μg/ml的黑素，Sigma M8631)的標準曲線比較。
通過PRISM軟件(Graph Pad Software)分析試驗數(shù)據(jù)。
使用Dunnett’s多重對比實驗，通過方差分析法(ANOVA)進行組間比較。
通過使用T檢驗的分析進行兩個樣品間的比較。
獲得的結果在下表中給出。它們代表4個獨立試驗的平均值。它們以μg黑素/ml表示。
10-5M去甲腎上腺素的存在顯著刺激(#；p＜0.01)在共培養(yǎng)物中合成的黑素量(+15％)。
在存在去甲腎上腺素的情況下，0.03％濃度的CALMISKIN產品以及CGRP-受體拮抗劑CGRP8-37顯著減少(*；p＜0.05以及#；p＜0.01)黑素量(分別為-7.3％和-17.2％)。
CGRP釋放的測量前述試驗結束時，分別收集孔和插入物中的上清液，并且立即在-80℃下冷凍以便分析CGRP含量。
根據(jù)供應商推薦的方案，通過ELISA試驗(大鼠CGRP酶免疫測定試劑盒，Spi Bio A05482)測量培養(yǎng)物上清液中的CGRP含量。
以pg CGRP/ml基質表示結果。
如前所述進行結果分析。
*p＜0.05在去甲腎上腺素存在的情況下，在對照組培養(yǎng)物插入物中釋放的CGRP量非常大。CALMISKIN產品略微調節(jié)CGRP釋放。
在孔的培養(yǎng)基(與角質形成細胞/黑素細胞共培養(yǎng)物接觸)中測試的CGRP量顯示CGRP擴散或者被橫跨多孔插入物的神經(jīng)末梢釋放。在這種水平下，CALMISKIN產品顯著減少CGRP釋放(對照組的-21％；p＜0.05)。
結論根據(jù)本發(fā)明向多細胞模型加入去甲腎上腺素通過神經(jīng)細胞誘導釋放到培養(yǎng)基的CGRP量增加。
盡管在該神經(jīng)細胞水平下的該量更大，但是也可以在接近角質形成細胞/黑素細胞共培養(yǎng)物處測量。
因此，通過CGRP釋放在角質形成細胞/黑素細胞共培養(yǎng)物中，去甲腎上腺素表現(xiàn)出以可測量的方式(+15％)增加黑素生成。
應用0.03％濃度的CALMISKIN產品來減少這種刺激。
實施例3用于各種皮膚的增白乳清制劑的實施例。
以本領域技術人員常規(guī)的方式制備水包油乳液，并且具有以下的組成
角質層分離劑 1.1％抗氧化劑 0.2％抗NO劑 0.01％增白劑 2.5％薄荷提取物*0.05％油 7％增稠劑 1％乳化劑 2.6％膠凝劑 1.6％螯合劑 0.05％中和劑 0.8％防腐劑 1％芳香物 0.1％乙二醇 3.5％粉末 0.5％緩沖劑 0.35％水 qs 100％*以CALMISKIN產品的形式
權利要求
1.用于預防和/或減少由情緒型應激所誘導的黑素的合成和/或釋放的非治療性處理方法，其中使用包含至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物作為活性劑的化妝品組合物。
2.用于預防和/或治療由情緒型應激所誘導的過量皮膚色素沉著的非治療性處理方法，其中使用包含至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物作為活性劑的組合物。
3.用于預防和/或治療由情緒型應激所誘導的與過量黑素生成相關的皮膚疾病的非治療性處理方法，其中使用包含至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物作為活性劑的組合物。
4.根據(jù)前述權利要求
中任一項的方法，其中所述提取物得自源于選自水薄荷、野薄荷、歐薄荷、辣薄荷、唇萼薄荷和留蘭香的屬的薄荷的細胞。
5.根據(jù)前述權利要求
的方法，其中所述提取物得自源于辣薄荷屬的薄荷的細胞。
6.根據(jù)前述權利要求
中任一項的方法，其中所述提取物得自源于體外培養(yǎng)而得到的薄荷植物材料的細胞。
7.根據(jù)前述權利要求
中任一項的方法，其中所述提取物的使用量以干活性物質計為0.001wt％～0.4wt％，尤其是0.002wt％～0.35wt％，特別是0.003wt％～0.1wt％，相對于所述組合物的總重量。
8.一種化妝品組合物，其包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物，并與至少一種除色素劑組合，所述除色素劑根據(jù)酪氨酸酶的抑制機理或者間接刺激黑素生成的第二信使的抑制機理起作用。
9.根據(jù)前述權利要求
的組合物，其中所述除色素劑選自曲酸、熊果苷、鞣花酸、lucinol、S亞油酸、凝血酸、4-甲氧基水楊酸鉀、一磷酸腺苷二鈉OT或者二羥基二丙基聯(lián)苯(DDB)。
10.根據(jù)權利要求
8或9的組合物，其還包含至少一種角質層分離脫落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化劑。
11.一種化妝品組合物，其包含在生理可接受介質中的至少一種辣薄荷屬植物的至少一種細胞提取物，并與至少是抗壞血酸(維生素C)或至少一種其衍生物如抗壞血酸磷酸鎂(維生素C PMg)、抗壞血酸糖基酯(維生素CG)、抗壞血酸磷酸鈉(維生素C PNa)和3-O-乙基抗壞血酸組合。
12.一種化妝品組合物，其包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物，并與至少一種角質層分離脫落、抗NO和/或螯合劑組合。
13.一種化妝品組合物，其包含在生理可接受介質中的至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物和至少一種除色素劑，并與至少一種角質層分離脫落、抗NO、抗UV、增白、消炎、螯合和/或抗氧化劑組合。
14.根據(jù)權利要求
8-13中任一項的組合物，其中所述提取物的存在比例以干活性物質計小于0.4wt％，相對于組合物的總重量。
15.根據(jù)權利要求
8-10和12-14中任一項的組合物，其中至少一種薄荷科植物的細胞提取物如權利要求
4-6中任一項所定義。
16.根據(jù)權利要求
8-15中任一項的組合物，其中所述提取物的用量以干活性物質計為0.001wt％～0.4wt％，尤其是0.002wt％～0.35wt％，特別是0.003wt％～0.1wt％，相對于組合物的總重量。
17.根據(jù)權利要求
10和12-16中任一項的組合物，其中角質層分離劑是酚衍生物、尤其是水楊酸或者其衍生物之一或者山毛櫸樹芽提取物。
18.根據(jù)前述權利要求
的組合物，其中角質層分離劑選自撲熱息痛、水楊酸和水楊酸衍生物、尤其是5-正辛酰基水楊酸、5-正癸?；畻钏岷?-正十二烷?；畻钏峄蛘咚鼈兊柠}中的一種。
19.根據(jù)權利要求
8-18中任一項的組合物，其包含至少一種選自水楊酸和/或山毛櫸樹芽提取物的化合物。
20.根據(jù)權利要求
10和12-19中任一項的組合物，其中抗NO劑是銀杏提取物。
21.根據(jù)權利要求
8-20中任一項的組合物，其包含至少一種選自以下的抗UV劑對氨基苯甲酸(PABA)、對氨基苯甲酸甘油酯、對氨基苯甲酸乙基二羥基丙酯、辛基甲氧基肉桂酸酯、對甲氧基肉桂酸2-乙氧基乙酯、2，4-二羥基二苯酮、2-羥基-4-甲氧基二苯酮、2-羥基-4-甲氧基-4-甲基苯精二苯酮、2-羥基-4-甲氧基-4-甲基二苯酮-5-磺酸酯、尿刊酸乙酯、2-苯基-5-甲基苯并唑、4-甲氧基-4-叔丁基二苯酰甲烷和對甲氧基肉桂酸乙基己酯及其類似物。
22.根據(jù)權利要求
10和12-21中任一項的組合物，其中螯合劑是乙二胺四乙酸四鈉和/或檸檬酸。
23.根據(jù)權利要求
10和12-22中任一項的組合物，其中增白劑是維生素CG和/或甘草提取物。
24.根據(jù)權利要求
8-23中任一項的組合物，其包含至少一種辣薄荷提取物、銀杏提取物、維生素C G、甘草提取物、水楊酸和山毛櫸樹芽提取物。
25.如權利要求
8-24所定義的組合物的用途，作為除色素劑。
26.如權利要求
8-24所定義的組合物的用途，作為皮膚增白劑。
27.至少一種薄荷科植物的細胞提取物和/或如權利要求
8-24所定義的組合物的用途，作為抑制由情緒型應激誘導的黑素生成的試劑。
28.根據(jù)前述權利要求
的用途，其特征在于所述提取物如權利要求
4-6中任一項所定義。
專利摘要
本發(fā)明涉及一種預防和/或減少尤其是由情緒型應激所誘導的黑素的合成和/或釋放的非治療性處理方法，其中使用包含至少一種薄荷科植物的至少一種細胞提取物作為活性劑的化妝品組合物。
文檔編號A61K8/49GK1994272SQ200710000016
公開日2007年7月11日 申請日期2007年1月4日
發(fā)明者法妮·普利斯米, 埃馬紐埃勒·拉布魯斯 申請人:歐萊雅公司導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan