專利名稱：核-殼型納米藥物顆粒、其制備方法及應(yīng)用的制作方法
核-殼型納米藥物顆粒、其制備方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物領(lǐng)域，具體涉及一種靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒，其制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)的腫瘤治療手段主要有手術(shù)切除、放療及化療。手術(shù)切除與放療主要應(yīng)用于切除或殺死腫瘤的原發(fā)病灶以及其它可見的腫瘤組織。由于腫瘤發(fā)展晚期獲得的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移侵襲能力，使得腫瘤細(xì)胞的全身分布變得難以跟蹤，極大地限制了手術(shù)切除與放療方法對(duì)晚期癌癥的治療效果。以化療為基礎(chǔ)的藥物治療方法具有無(wú)創(chuàng)、可全身治療的特點(diǎn)，對(duì)擴(kuò)散的腫瘤細(xì)胞同樣具有殺傷效果，無(wú)疑是最具潛力的治療手段。可是盡管近年來(lái)新的化療藥物不斷出現(xiàn)，化療方案不斷改進(jìn)，但臨床化療效果并不理想。雖然部分癌癥目前通過(guò)藥物治療可以完全治愈，部分癌癥通過(guò)藥療可延長(zhǎng)生存期，但是大部分常見實(shí)體瘤如肺癌、肝癌、結(jié)腸癌等還無(wú)法通過(guò)藥物得到有效治療。腫瘤病人總生存率和生活質(zhì)量改善還不理想?；熜Ч患训脑蛑饕袃煞矫?。其一在于腫瘤組織和腫瘤組織的特殊的生理結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。腫瘤組織血管少，而腫瘤周圍致密的纖維結(jié)構(gòu)和腫瘤病灶內(nèi)滲透壓過(guò)高致使藥物難以達(dá)到腫瘤中心區(qū)，而腫瘤的多藥耐藥性(Multdrug resistance, MDR)使得藥物無(wú)法在腫瘤細(xì)胞內(nèi)聚集，進(jìn)而導(dǎo)致藥療失效，這也是導(dǎo)致化療失敗的主要障礙之一。另一方面在于化療藥物的作用機(jī)制，是對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)進(jìn)行抑制或直接殺死細(xì)胞，目前的化療藥物無(wú)法有效區(qū)分正常細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞，因而具有較強(qiáng)的毒副作用，在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)對(duì)正常細(xì)胞與組織造成較強(qiáng)的損傷，給病人帶來(lái)一些額外的痛苦。因此腫瘤藥物治療的關(guān)鍵科學(xué)問(wèn)題在于如何在化療過(guò)程中有效克服這些腫瘤治療領(lǐng)域的難題和障礙，將抗腫瘤藥物準(zhǔn)確有效地輸送到腫瘤部位和轉(zhuǎn)移病灶?；诩{米包裹的藥物傳遞技術(shù)相較傳統(tǒng)的給藥方式有眾多優(yōu)點(diǎn)，已成為一種新興的有效治療手段。例如納米藥物傳遞技術(shù)可通過(guò)EPR效應(yīng)(enhanced permeability andretention effect)實(shí)現(xiàn)藥物在腫瘤組織中的特異聚集；納米包裹可保護(hù)藥物免除體內(nèi)清除系統(tǒng)的作用，以延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間與效果；納米包裹技術(shù)還可實(shí)現(xiàn)多重藥物包裹，可同時(shí)包裹多種不同性質(zhì)的治療藥物，包括用基因治療藥物如SiRNA等，以實(shí)現(xiàn)綜合治療與降低耐藥性等目的；納米藥物表面可根據(jù)需要進(jìn)行多種修飾，可連接多種蛋白配體或小分子物質(zhì)以實(shí)現(xiàn)納米藥物的特異性定位，并可經(jīng)表面修飾在時(shí)間與空間上控制藥物的釋放過(guò)程。因此，納米顆粒介導(dǎo)的藥物傳輸載體系統(tǒng)是一種極具潛力的癌癥治療手段，目前已有多個(gè)應(yīng)用納米技術(shù)包裹常規(guī)化療藥物的研究正在進(jìn)行中，然而目前的研究仍不能很好的克服腫瘤細(xì)胞的耐藥性以及常規(guī)化療藥物的毒副作用等重要問(wèn)題?，F(xiàn)今人們已認(rèn)識(shí)到， 腫瘤細(xì)胞中由表觀遺傳學(xué)修飾引起的多個(gè)抑癌基因失活對(duì)腫瘤發(fā)生發(fā)展有重要作用。其中一些重要基因失活也直接導(dǎo)致了腫瘤細(xì)胞對(duì)常規(guī)藥物的耐藥性，例如DNA錯(cuò)配修復(fù)蛋白hMLHl與促凋亡蛋白CASP8。表觀遺傳學(xué)修飾引起的基因表達(dá)失活主要包括DNA甲基化引起的表達(dá)失活與組蛋白的去乙?；鸬娜旧w重構(gòu)，對(duì)應(yīng)的具抗腫瘤潛力的藥物包括DNA甲基化抑制劑(如5-氮-2'-脫氧胞苷)與抗組蛋白去乙酰化抑制劑(如TSA)。這類表觀遺傳學(xué)藥物相比常規(guī)化療藥物具有更小的毒性，可同時(shí)激活多個(gè)抑癌基因的表達(dá)?？笵NA甲基化藥物與常規(guī)化療藥物聯(lián)用后，可有效地逆轉(zhuǎn)腫瘤耐藥細(xì)胞對(duì)常規(guī)化療藥物的耐藥性，例如抗甲基化藥物5-氮-2'-脫氧胞苷(以下亦可用Aza表示)可有效提高耐藥細(xì)胞A2780/cp70對(duì)順鉬的敏感性。此外，腫瘤組織內(nèi)的基因甲基化標(biāo)志物在不同腫瘤與腫瘤的不同發(fā)展階段的甲基化情況均有所不同，在癌癥病人中檢測(cè)甲基化標(biāo)志物的甲基化狀況還可應(yīng)用于指導(dǎo)針對(duì)具體病人的個(gè)性化治療方式，以及作為治療后的預(yù)后恢復(fù)指標(biāo)。目前納米包裹常規(guī)化療藥物方面有較多研究，但仍不能很好克服腫瘤細(xì)胞耐藥性的問(wèn)題與常規(guī)化療藥物尤其是在高劑量時(shí)對(duì)正常細(xì)胞的殺傷問(wèn)題。化療藥物與表觀遺傳學(xué)藥物聯(lián)用后可大大提高腫瘤細(xì)胞對(duì)常規(guī)化療藥物的敏感性，但是將二者同時(shí)包載在納米載體中形成納米載藥傳遞系統(tǒng)的研究還尚未有報(bào)道，如何將二種藥物同時(shí)有效地運(yùn)送到腫瘤組織仍有待解決。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是改善化療藥物的靶向性，減小細(xì)胞毒性；提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞的耐藥性，以促進(jìn)化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力。為此，本發(fā)明一方面提供靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒，包括:疏水性內(nèi)核，所述疏水性內(nèi)核包括疏水性多聚物，以及吸附在所述疏水性多聚物上的至少一種化療藥物和至少一種表觀遺傳學(xué)藥物；包裹所述疏水性內(nèi)核的單層脂類分子層，所述脂類分子具有面向所述疏水性內(nèi)核的疏水部分和面向所述核-殼型納米藥物顆粒外部的親水部分；以及靶向腫瘤細(xì)胞的親水性外殼，所述親水性外殼由具有脂端和與所述脂端共價(jià)交聯(lián)的親水端的兩親性大分子化合物構(gòu)成，所述脂端可幫助所述兩親性大分子化合物插入所述單層脂類分子層，并且所述親水端延伸在所述納米藥物顆粒外部。所述疏水性多聚物可選自聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚已內(nèi)酯等。所述化療藥物可選自多柔比星、表柔比星、紫杉醇、去甲長(zhǎng)春花堿、順鉬等。所述表觀遺傳學(xué)藥物可選自5-氮雜-胞苷、5-氮雜-2'-脫氧胞苷、RG108、曲古抑菌素A、付立諾他、帕比司他、N-羥基-3-(3-苯基氨基磺?；交?丙烯酰胺、縮酚酸肽、丙戍酸、丁酸苯酯、AN-9、恩替諾特、Mocetinostat、4-乙酰氨基-N-(2'-氨基苯基)-苯甲酰胺等。所述脂類分子可選自卵磷脂、腦磷脂。所述兩親性大分子化合物的所述脂端可為二硬酯酰磷脂酰乙醇胺，所述親水端可為羧基修飾的聚乙二醇。所述化療藥物和所述表觀遺傳學(xué)藥物的質(zhì)量之和可為所述疏水性聚合物質(zhì)量的5%至 50%。所述化療藥物和所述表觀遺傳學(xué)藥物的重量比率可為0.05:1至2:1。
本發(fā)明另一方面提供一種制備該靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒的方法，包括:于疏水溶劑中，將所述疏水性多聚物與所述化療藥物和所述表觀遺傳學(xué)藥物混合溶解，得到疏水液；于親水溶劑中，將所述脂類分子與所述兩親性大分子化合物混合溶解，得到親水液；于50-80°C溫浴親水液，伴隨溫和攪拌添加疏水液至親水液中，得到混合液；溫浴條件下，混勻所述混合液，再溫和攪拌，以得到所述核-殼型納米藥物顆粒的溶液。該制備方法還可包括:以可截留納米藥物的濾膜，用重蒸水超濾離心所述核-殼型納米藥物顆粒的溶液，并用PH7.4的磷酸鹽緩沖液回收所述核-殼型納米藥物顆粒。本發(fā)明再一方面提供該核-殼型納米藥物顆粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于，通過(guò)將納米包裹技術(shù)、化療藥物及表觀遺傳學(xué)藥物三者相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)了基于納米藥物包裹技術(shù)的、可降低常規(guī)化療藥物細(xì)胞毒性、提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性、抑制腫瘤細(xì)胞耐藥性等多重目的的有效藥物傳遞與治療方法。該方案綜合了納米包裹技術(shù)、化療藥物與表觀遺傳學(xué)藥物三者的優(yōu)點(diǎn)，可以有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。

圖1為根據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例的核-殼型納米藥物顆粒結(jié)構(gòu)的示意圖。圖2為根據(jù)本發(fā)明另一實(shí)施例，制備圖1的核-殼型納米藥物顆粒的流程圖。圖3圖示根據(jù)本發(fā)明的核-殼型納米藥物顆粒與腫瘤細(xì)胞的作用。圖4圖示根據(jù)本發(fā)明的核-殼型納米藥物顆粒在抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)中的作用。圖5圖示根據(jù)本發(fā)明的核-殼型納米藥物顆粒在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞調(diào)亡中的作用。圖6圖示根據(jù)本發(fā)明的核-殼型納米藥物顆粒在抑癌基因表達(dá)激活中的作用。
具體實(shí)施方式本發(fā)明綜合了納米包裹技術(shù)、化療藥物與表觀遺傳學(xué)藥物三者的優(yōu)點(diǎn)，有效抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。利用納米藥物遞送的EPR效應(yīng)，提高藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性，降低細(xì)胞毒性，并延長(zhǎng)藥物的作用時(shí)間和效果；通過(guò)表觀遺傳學(xué)藥物與化療藥物的組合，激活抑癌基因的表達(dá)，提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性，逆轉(zhuǎn)腫瘤細(xì)胞耐藥性；從而利用三者之間的協(xié)同作用，更有效地抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，并殺死腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明的納米藥物顆粒為靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒，其內(nèi)核為疏水性的，由疏水性多聚物構(gòu)成，該疏水性多聚物能夠?qū)⒒熕幬锖捅碛^遺傳學(xué)藥物同時(shí)吸附于其上。例如，本發(fā)明的疏水性多聚物可為乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、聚乳酸(PLA)、聚已內(nèi)酯等，但不排除其他可用的疏水性聚合物。內(nèi)核中含有的藥物可以為至少一種化療藥物與至少一種表觀遺傳學(xué)藥物的組合，但不排除還包括其他藥物，如siRNA、miRNA、抗癌基因等基因藥物、或抗腫瘤輔助治療藥物，如昂丹司瓊、亞葉酸鈣等。常用的化療藥物包括抗腫瘤抗生素類，如多柔比星、表柔比星；抗腫瘤動(dòng)植物成分藥類，如紫杉醇、去甲長(zhǎng)春花堿等；抗代謝藥，如5-氟尿嘧啶等；烷化劑，如環(huán)磷酰胺等；抗腫瘤激素類，如阿他美坦等；雜類,如順鉬等。常用的表觀遺傳學(xué)藥物主要包括DNA甲基化抑制劑，如5-氮雜-胞苷、5_氮雜-2 '-脫氧胞苷、Zebularine, RG108、曲古抑菌素A、付立諾他、帕比司他、N-羥基-3-(3-苯基氨基磺?；交?丙烯酰胺、縮酚酸肽、丙戊酸、丁酸苯酯、AN-9、恩替諾特、Mocetinostat、4_乙酸氨基N-(2 '-氨基苯基)_苯甲酰胺(N-Acetyldinaline)等。表觀遺傳學(xué)藥物可以激活抑癌基因的表達(dá)，激活對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑癌活性，以及抑制腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的耐藥性，因此其與化療藥物同時(shí)存在時(shí)可大大提高化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷。包裹疏水性內(nèi)核的為一單層脂類分子，該脂類分子可為卵磷脂(大豆磷脂酰膽堿)、腦磷脂，或是其他可與多聚物內(nèi)核相互作用形成脂類單分子層的脂類分子。脂類分子的疏水部分面向疏水性內(nèi)核，并將疏水性內(nèi)核包裹起來(lái)；其親水部分則與水相環(huán)境相互作用，以形成穩(wěn)定的納米藥物顆粒。核-殼型納米藥物顆粒外殼由兩親性大分子化合物構(gòu)成，用于提高納米藥物顆粒的水相穩(wěn)定性，保護(hù)納米藥物顆粒在體內(nèi)的作用時(shí)間，并可以化學(xué)修飾以提供納米藥物的靶向性等功能。兩親性大分子化合物的親水端靶向腫瘤細(xì)胞，其脂端則可幫助將分子插入單層脂類分子層，親水端與脂端共價(jià)交聯(lián)，靶向腫瘤細(xì)胞。例如，兩親性大分子可為DSPE-PEG2000-C00H,其脂端為二硬酯酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)，其親水端為羧基修飾的聚乙二醇2000 (PEG2000-C00H)。兩親性大分子化合物的脂端部分和親水端部分可進(jìn)一步修飾，如用葉酸、或可特異性結(jié)合腫瘤表面受體的配體分子修飾，以提高對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向性。本發(fā)明的核-殼型納米藥物顆粒中，化療藥物和表觀遺傳學(xué)藥物的各自的量依多聚物的藥物結(jié)合效率，以及治療需要的藥物濃度來(lái)決定。通常，化療藥物和表觀遺傳學(xué)藥物的重量比率可為0.05:1至2:1。它們的總量可為所述疏水性聚合物質(zhì)量的5%至50%，例如可為10%。脂類分子、兩親性大分子的摩爾比率可根據(jù)具體的分子、藥物、多聚物的種類，以及所需的納米顆粒性質(zhì)來(lái)調(diào)整，通?？稍?:1至6: 5的范圍，例如可為6: 4。圖1所示為根據(jù)本發(fā)明一實(shí)施例的核-殼型納米藥物顆粒的結(jié)構(gòu)示意圖。從圖中可見，該核-殼型納米藥物顆粒的內(nèi)核部分為PLGA聚合物，以及化療藥物多柔比星、表觀遺傳學(xué)藥物5-氮-2’ -脫氧胞苷。多柔比星(DOX)和5-氮-2’ -脫氧胞苷(Aza)吸附在PLGA聚合物上，形成疏水性內(nèi)核。包覆內(nèi)核的是單層卵磷脂分子層，卵磷脂的疏水部分包裹內(nèi)核，形成納米顆粒；卵磷脂的親水部分則處于納米顆粒外層，促使納米顆粒得以穩(wěn)定形成。在卵磷脂層外部的是親水性外殼，其由兩親性大分子(DSPE-PEG2000-C00H)構(gòu)成，脂端(DSPE，二硬酯酰磷脂酰乙醇胺)因其疏水性，而可幫助將PEG部分插入到卵磷脂單分子層的疏水部分中，親水端(PEG2000-C00H，羧基修飾的聚乙二醇2000)延伸在納米藥物顆粒之夕卜。羧基部分的親水性有助于進(jìn)一步提高納米藥物顆粒的水相穩(wěn)定性，并促使納米藥物顆粒靶向于腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明還提供制備該核-殼型納米藥物顆粒的方法，如圖2所示，主要包括以下步驟: 首先，制備疏水液I。疏水液I中包含混合在疏水溶劑(如乙腈)中的疏水性多聚物、至少一種化療藥物，以及至少一種表觀遺傳學(xué)藥物，即用于形成核-殼型納米藥物顆粒內(nèi)核部分的組分。藥物的加入順序沒(méi)有限制?？赏ㄟ^(guò)攪拌、震蕩、超聲等方式來(lái)幫助均勻混合 。
其次，制備親水液II。親水液II中包含溶解在親水溶劑(如乙醇或各濃度的乙醇水溶液，優(yōu)選為4%乙醇水溶液)中的脂類分子和兩親性大分子化合物，即用于形成核-殼型納米藥物顆粒的脂類單分子層及親水性外殼部分的組分?？赏ㄟ^(guò)攪拌、震蕩、超聲等方式來(lái)促進(jìn)溶解。然后，在溫浴環(huán)境中，伴隨溫和攪拌，將疏水液I添加到親水液II中，以形成混合液。溫浴溫度可在50-80°C，優(yōu)選為65°C。添加過(guò)程溫和進(jìn)行，可逐滴添加。溫浴的作用是提供合適的溶劑揮發(fā)條件，促進(jìn)多聚物與脂類相互作用。接著，繼續(xù)在溫浴條件下，混勻混合液，促進(jìn)疏水液I與親水液II的混合作用，以使吸附有藥物的疏水性聚合物能夠被親水液中的脂類分子包裹。可采用多種方法來(lái)實(shí)現(xiàn)混勻，如劇烈震蕩、攪拌、超聲等。之后，溫和攪拌一段時(shí)間，使得在溶液中形成穩(wěn)定的納米藥物顆粒。形成在溶液中的納米藥物顆?？梢赃M(jìn)一步純化和濃縮。以可截留納米藥物的濾膜，例如通過(guò)在分子量截流的超濾離心管中用重蒸水洗滌，并離心，再用PH7.4的磷酸鹽緩沖液(PBS)溶液回收該核-殼型納米藥物顆粒。截留的分子量根據(jù)所需獲得的納米藥物粒徑來(lái)選定，例如可為10kD，或其他分子量。超濾離心的目的是去除未被包裹的各種小分子與聚合物分子。在檢測(cè)本發(fā)明的核-殼型納米藥物顆粒時(shí)，可用90% DMSO將其溶解，以檢測(cè)所包裹藥物的濃度。同時(shí)也可根據(jù)需要檢測(cè)納米顆粒的其它物理化學(xué)性質(zhì)，如平均粒徑，表面電荷等。實(shí)施例原料與試劑:乳酸-輕基乙酸共聚物:Sigma_Aldrich;多柔比星:Jinhe Bio-TechnologyC0.Ltd ;5_ 氮-2 '-脫氧胞苷:Sigma-AIdrich ；卵憐脂:Avanti ;DSPE-PEG_C00H:Avanti ;乙腈；乙醇；重蒸水；PBS緩沖液；DMS0 ;培養(yǎng)基:1640 (Hyclone) ；Hoechst染料:Sigma-Aldrich, 1:1000 稀釋；Dio 突光染料:Life Technologies ；MTS (3_ (4,5 一二甲基噻唑-2)-5-(3-羧基-甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑，內(nèi)鹽)=Promega ;Annexin V FITC 凋亡檢測(cè)試劑盒:BD Pharmingen ;碘化丙唳:Sigma-Aldrich ;PCR 引物于 Invitrogen 合成；PCR 反應(yīng)用 Taq Gold:Applied Biosystems ;逆轉(zhuǎn)錄(RT)試劑盒:Applied Biosystems ;實(shí)驗(yàn)中所用細(xì)胞系均來(lái)自ATCC細(xì)胞庫(kù)。制備核-殼型納米藥物顆粒的制備實(shí)施例1-包裹DOX與Aza的納米藥物顆粒的制備制備疏水液1:將包含2mg/ml PLGA的乙腈溶液與多柔比星(DOX)、5_氮-2’-脫氧胞苷(Aza)相混合，DOX與Aza的質(zhì)量之和為PLGA質(zhì)量的10 %，DOX與Aza的比例0.2: 1，。制備親水液I1:將分別包含lmg/ml卵磷脂與包含25mg/mlDSPE-PEG2000-C00H的水溶液按卵磷脂:DSPE-PEG2000-C00H摩爾比6:4混合，并稀釋于4%的乙醇溶液中，卵磷脂與DSPE-PEG2000-C00H的總質(zhì)量為PLGA質(zhì)量的20%。制備混合液:將親水液II在65°C溫浴3分鐘后，于溫和攪拌下逐滴加入帶有藥物的PLGA疏水液I,混合完成后劇烈振蕩3分鐘，再于65°C混合攪拌4小時(shí)，得包裹藥物的納米顆粒的溶液。
純化:將制備所得的納米藥物顆粒溶液在分子量截流10 kD的超濾離心管中用重蒸水洗滌3次，離心15分鐘。用pH 7.4 PBS溶液回收納米顆粒。對(duì)照實(shí)施例A-包裹DOX的納米藥物顆粒的制備制備方法與實(shí)施例1類似，區(qū)別在于疏水液I中僅使用多聚物總質(zhì)量10%的D0X，而不使用Aza。對(duì)照實(shí)施例B-包裹Aza的納米藥物顆粒的制備制備方法與實(shí)施例1類似，區(qū)別在于疏水液I中僅使用多聚物總質(zhì)量10%的Aza，而不使用DOX。納米藥物顆粒的表征1、包裹藥物的濃度以90 % DMSO分別溶解包裹DOX、Aza、DOX+Aza的納米藥物顆粒(NPs+DOX、NPs+Aza、NPs+DOX+Aza)后，使用熒光光譜儀在480nm處檢測(cè)DOX的吸收峰值，用紫外光譜儀在260nm處檢測(cè)Aza的吸收峰值，在與DOX或Aza標(biāo)準(zhǔn)濃度樣本的吸收標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照后可得出所包裹的藥物濃度。三種包裹方式的包裹效率分別為NPs+Aza+Dox: 20-40 %，NPs+Aza: 20-40 %，NPs+DOX:20-40%。2、平均粒徑表征方法:所得納米藥物用Zeta Pals instrument (Brookhaven, USA)檢測(cè)顆粒粒徑分布。3、表面電荷表征方法:所得納米藥物用DelsaTM Nano C(Beckman Instruments, USA)檢測(cè)顆粒表面電勢(shì)分布。以上表征結(jié)果示于下表中。
權(quán)利要求
1.一種靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒，包括: 疏水性內(nèi)核，所述疏水性內(nèi)核包括疏水性多聚物，以及吸附在所述疏水性多聚物上的至少一種化療藥物和至少一種表觀遺傳學(xué)藥物； 包裹所述疏水性內(nèi)核的單層脂類分子層，所述脂類分子具有面向所述疏水性內(nèi)核的疏水部分和面向所述核-殼型納米藥物顆粒外部的親水部分；以及 靶向腫瘤細(xì)胞的親水性外殼，所述親水性外殼由具有脂端和與所述脂端共價(jià)交聯(lián)的親水端的兩親性大分子化合物構(gòu)成，所述脂端可幫助所述兩親性大分子化合物插入所述單層脂類分子層，并且所述親水端延伸在所述納米藥物顆粒外部。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述疏水性多聚物選自聚乳酸-羥基乙酸共聚物、聚乳酸、聚已內(nèi)酯。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述化療藥物選自多柔比星、表柔比星、紫杉醇、去甲長(zhǎng)春花堿、順鉬。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述表觀遺傳學(xué)藥物選自5-氮雜-胞苷、5-氮雜-2'-脫氧胞苷、Zebularine、RG108、曲古抑菌素A、付立諾他、帕比司他、N-羥基-3-(3-苯基氨基磺?；交?丙烯酰胺、縮酚酸肽、丙戊酸、丁酸苯酯、AN-9、恩替諾特、Mocetinostat、4_乙酸氛基-N-(2' _氛基苯基)-苯甲酸胺。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述脂類分子選自卵磷脂、腦磷脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述兩親性大分子化合物的所述脂端為二硬酯酰磷脂酰乙醇胺，所述親水端為羧基修飾的聚乙二醇。
7.根據(jù)權(quán)利要 求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述化療藥物和所述表觀遺傳學(xué)藥物的質(zhì)量之和為所述疏水性聚合物質(zhì)量的5%至50%。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的核-殼型納米藥物顆粒，其中，所述化療藥物和所述表觀遺傳學(xué)藥物的重量比率為0.05:1至2:1。
9.制備權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒的方法，包括: 于疏水溶劑中，將所述疏水性多聚物與所述化療藥物和所述表觀遺傳學(xué)藥物混合溶解，得到疏水液； 于親水溶劑中，將所述脂類分子與所述兩親性大分子化合物混合溶解，得到親水液； 于50-80°C溫浴親水液，伴隨溫和攪拌添加疏水液至親水液中，得到混合液； 溫浴條件下，混勻所述混合液，再溫和攪拌，以得到所述核-殼型納米藥物顆粒的溶液。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制備方法，還包括: 以可截留納米藥物的濾膜，用重蒸水超濾離心所述核-殼型納米藥物顆粒的溶液，并用pH7.4的磷酸鹽緩沖液回收所述核-殼型納米藥物顆粒。
11.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的核-殼型納米藥物顆粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種靶向腫瘤細(xì)胞的核-殼型納米藥物顆粒，包括吸附有化療藥物和表觀遺傳學(xué)藥物的疏水性聚合物內(nèi)核；包裹所述疏水性內(nèi)核的單層脂類分子層；以及靶向腫瘤細(xì)胞的親水性外殼。本發(fā)明還涉及該核-殼型納米藥物顆粒的制備方法，及其在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明將納米包裹、化療藥物和表觀遺傳學(xué)藥物三者相結(jié)合，具有改善藥物遞送靶向性、提高腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，以及抑制腫瘤細(xì)胞耐藥性等優(yōu)勢(shì)。
文檔編號(hào)A61K47/34GK103099782SQ20121028471
公開日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2012年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月10日
發(fā)明者蔡林濤, 王朝暉, 李力力, 蘇獻(xiàn)偉, 龔萍, 鄭明彬 申請(qǐng)人:深圳先進(jìn)技術(shù)研究院