專利名稱：一種聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料、制備方法及其在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料、制備方法及其在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
表阿霉素是蒽環(huán)類抗癌藥，其主要作用機(jī)理是直接嵌入DNA堿基對(duì)之間，干擾轉(zhuǎn)錄過程，阻止mRNA的形成，從而抑制DNA和RNA的合成，故對(duì)細(xì)胞周期各階段均有作用。為細(xì)胞周期非特異性藥物。表阿霉素對(duì)細(xì)胞膜和轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)均有作用，但最主要是作用于細(xì)胞核。另外，表阿霉素對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶亦有抑制作用。表阿霉素是阿霉素的同分異構(gòu)體，其抗腫瘤效果與阿霉素相近，但是表阿霉素相比阿霉素，具有體內(nèi)清除較快、親脂性較高、毒性較 低等特性，主要用于肝癌、肺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌和白血病的化療。表阿霉素是一種高效、廣譜的抗腫瘤藥，為同類藥物的首選，單一用藥時(shí)對(duì)多種腫瘤有廣譜的抑制作用，但臨床使用的注射用鹽酸表阿霉素容易產(chǎn)生脈管疼痛和脈管炎，長期應(yīng)用有骨髓抑制，對(duì)肝功能不全者易產(chǎn)生蓄積中毒，特別是對(duì)心臟的毒性限制了其廣泛應(yīng)用。目前人們已采用了很多方法來減小該藥物的全身毒副作用特別是心臟毒性。主要方法是應(yīng)用藥物載體，改變表阿霉素的生物分布，減少其在全身特別是心臟組織中的分布，提高在局部腫瘤中的含量。這些藥物載體包括微球、納米粒、脂質(zhì)體、膠束等。有文獻(xiàn)報(bào)道，用殼聚糖微球包裹表阿霉素，制備腦內(nèi)局部給藥緩釋微球。微球表面存在微孔，在釋藥初期水分子迅速進(jìn)入微孔溶解表阿霉素，使其迅速釋放，故微球在釋藥初期具有比較明顯的突釋效應(yīng)。由于殼聚糖吸水溶脹，在微球表面形成了親水凝膠層，關(guān)閉了藥物分子迅速釋放通道，此后的藥物釋放只能通過骨架慢慢地?cái)U(kuò)散或通過殼聚糖的降解慢慢地釋放；隨著釋藥時(shí)間的延長，微球表面親水凝膠層逐漸增厚，微球釋藥面積逐漸縮小，導(dǎo)致微球釋藥速度越來越小。微球腦部局部給藥，其突釋效應(yīng)可使給藥后短時(shí)間內(nèi)獲得較高的藥物濃度；而隨后的緩釋釋放又可以延長藥物在腦內(nèi)的治療作用，減少藥物的不良反應(yīng)。有報(bào)道制備了表阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒用于抗肝癌。聚氰基丙烯酸正丁酯納米粒是近年來研究較多的一種新的靶向給藥系統(tǒng)，具有良好的器官和細(xì)胞靶向性、藥物緩釋、可控釋性及較高藥物包封率等特點(diǎn)。將該藥物納米粒復(fù)合體注入體內(nèi)后，它能富集于靶區(qū)并定向緩慢釋放藥物，使治療指數(shù)大幅度提高，總投藥量減少，同時(shí)因藥物全身分別造成的毒副作用也明顯降低。表阿霉素脂質(zhì)體可以降低心臟毒性和骨髓抑制等毒副作用，減少對(duì)注射局部的刺激，對(duì)于治療腫瘤疾病具有重大的意義。據(jù)報(bào)道，朱家壁等人制備了由表阿霉素、磷脂、膽固醇、去氧膽酸鈉等組成的表阿霉素脂質(zhì)體，質(zhì)量穩(wěn)定，毒副作用低，更適合臨床應(yīng)用。脂質(zhì)體由磷脂和膽固醇組成，具有類似生物膜的雙分子層結(jié)構(gòu)，在水中平衡后具有親水和疏水兩性。把藥物包封于脂質(zhì)體中，減少了藥物的用量及不良反應(yīng)，延長了藥物與特定細(xì)胞的作用時(shí)間，提高了病變部位的藥物濃度，所以脂質(zhì)體是一種理想的藥物載體。脂質(zhì)體給藥系統(tǒng)在降低藥物毒性、增加藥物在靶點(diǎn)聚集和提高藥物療效等方面起了重要作用。目前已設(shè)計(jì)出膜上載有或不載靶識(shí)別分子的靶向脂質(zhì)體，包括抗腫瘤藥、抗寄生蟲藥、抗真菌藥、激素、多肽、酶類藥物及用于疫苗、基因治療和免疫診斷的藥物。脂質(zhì)體作為抗癌藥物載體具有能增加藥物被癌細(xì)胞的攝取量，改變藥物在組織中的分布，從而提高療效，減少劑量，降低毒性，減輕變態(tài)和免疫反應(yīng)。脂質(zhì)體已被廣泛用作藥物載體，將化療藥物包封于脂質(zhì)體中可克服某些嚴(yán)重不良反應(yīng)，提高腫瘤化療患者的依從性。脂質(zhì)體具有可生物降解和免疫原性小等優(yōu)點(diǎn)，可通過細(xì)胞內(nèi)吞和融合作用，直接將藥物送入細(xì)胞內(nèi)，避免使用高濃度游離藥物。脂質(zhì)體靜脈注射給藥時(shí)主要被肝、脾兩個(gè)器官中的網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞吞噬，藥物濃度集于肝、脾組織中。脂質(zhì)體作為藥物載體具有靶向性、淋巴定向性以及良好的生物相容性等特點(diǎn)。通過改變脂質(zhì)體粒徑、大小、表面電位等理化性質(zhì)而控制或改變藥物在組織內(nèi) 的分布和藥動(dòng)學(xué)特性，使脂質(zhì)體選擇性的在特定時(shí)間和部位釋放藥物從而減少全身毒副作用，提高治療效果。聲動(dòng)力學(xué)療法主要是利用超聲能穿透生物組織深部，它利用超聲具有深部穿透并能聚焦于腫瘤局部的能力，化學(xué)激活相對(duì)無毒的聲敏劑分子，產(chǎn)生氧自由基，有針對(duì)性的殺傷腫瘤細(xì)胞，最大限度的減少副作用，因而被認(rèn)為是一種很有推廣前景的物理療法。綜合近10年的研究成果，Misik認(rèn)為聲動(dòng)力學(xué)效應(yīng)是由于超聲的空化作用激活空化泡內(nèi)或鄰近的聲敏劑，通過直接熱分解弱鍵或與水熱分解形成的 H和 OH反應(yīng)，產(chǎn)生聲敏劑來源的自由基，再與O2反應(yīng)形成過氧基和烷氧基。與 OH和 H不同，過氧基和烷氧基與溶液中的有機(jī)分子反應(yīng)活性低，因此更容易到達(dá)靶細(xì)胞表面。光動(dòng)力學(xué)療法已廣泛應(yīng)用于臨床，并取得了很大的成效。但是，由于光在生物組織中的穿透能力較弱，只能治療一些淺表層腫瘤，從而限制了它的應(yīng)用范圍。與光動(dòng)力療法(PDT)相比，聲動(dòng)力療法(SDT)——有許多優(yōu)點(diǎn)=(I)SDT對(duì)深部腫瘤的治療無須通過內(nèi)鏡，操作簡便，患者無痛苦，可重復(fù)治療。(2)超聲裝置簡單，造價(jià)低廉。(3)SDT對(duì)腫瘤細(xì)胞有特異性殺傷作用。(4)副作用小。Suzuki等報(bào)道超聲輻照血卟啉(Hp)及絲裂霉素的結(jié)合物，即使在低功率時(shí)也有抗腫瘤效應(yīng)，表明化療藥物對(duì)SDT有增效作用。近幾年來，由于各國學(xué)者忙于對(duì)SDT機(jī)制的探索，有關(guān)SDT與化療聯(lián)合作用的研究未見報(bào)道。但治療性超聲與化療藥物作用的研究屢有報(bào)道。國外研究報(bào)道超聲不僅可增加HL-60細(xì)胞對(duì)共聚物微粒中阿霉素的攝取，還可促使微粒穿越微血管而促進(jìn)其在組織中的擴(kuò)散。國內(nèi)于廷和等研究發(fā)現(xiàn)，在超聲輻前或后加入順鉬可明顯增強(qiáng)順鉬對(duì)卵巢癌細(xì)胞的毒性作用，尤其是輻照前用藥。作者認(rèn)為，超聲增強(qiáng)順鉬的作用可能是通過增加膜通透性，使細(xì)胞內(nèi)藥物聚集量增加而實(shí)現(xiàn)的，而超聲輻照當(dāng)時(shí)的聲壓也可使部分藥物進(jìn)入細(xì)胞。1989年，日本學(xué)者N. Yumita等人利用超聲激活光敏劑血卟啉(Hp)對(duì)離體的小鼠S180、AH130細(xì)胞的殺傷效應(yīng)進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)單純超聲對(duì)兩種細(xì)胞的殺傷率分別為30% 50%，而加入Hp后殺傷率提高到959^99%.鑒于此，N. Yumita等把其命名為聲動(dòng)力學(xué)療法。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)超聲亦可增強(qiáng)一些抗癌藥物和化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，如表阿霉素。目前聲動(dòng)力療法中所使用的聲敏劑多為學(xué)卟啉及其衍生物為代表的第一代光敏劑，它們的組分復(fù)雜，有效成分尚不清楚，使得其穩(wěn)定性和組織選擇性都有一定的局限性。以二氫卟吩為代表的第二代光敏劑為單體化合物，它們的組成單一、化學(xué)結(jié)構(gòu)明確，對(duì)腫瘤選擇性較第一代光敏劑有明顯的提高，這些優(yōu)點(diǎn)對(duì)于進(jìn)一步研究聲動(dòng)力療法的機(jī)制，有著更好的臨床應(yīng)用前景。脂質(zhì)體的通常制備方法是將卵磷脂，膽固醇等成膜材料和脂溶性藥物成分溶于氯仿或乙醚中，通過惰性氣體如氮?dú)獯祾呋驕p壓干燥方法將溶劑濃縮至干，用緩沖溶液浸泡后，再用超聲波處理得到需要粒徑的脂質(zhì)體。這類制備方法適用于實(shí)驗(yàn)室小規(guī)模生產(chǎn)，一旦放大規(guī)模會(huì)出現(xiàn)很多問題。如濃縮時(shí)不能除盡氯仿等對(duì)人體有害的物質(zhì)，濃縮后均為粘稠固體，從容器中取出基本困難；超聲波處理的容器體積比較小，處理后的脂質(zhì)體有重新凝聚趨勢(shì)，影響藥物釋放等。同時(shí)市場(chǎng)上沒有用于腫瘤的聲敏脂質(zhì)體，也沒有聲敏劑和化療藥物復(fù)合脂質(zhì)體。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料、制備方法及其在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用，本發(fā)明所述脂質(zhì)體材料將現(xiàn)有脂質(zhì)體技術(shù)和聲動(dòng)力療法結(jié)合起來，有效的解決了傳統(tǒng)脂質(zhì)體對(duì)腫瘤細(xì)胞選擇性低而導(dǎo)致治療時(shí)藥效增加同時(shí)毒性也增加的難 題，可以滿足臨床治療所需的高效，低毒的臨床需求；同時(shí)，本發(fā)明還對(duì)已有的脂質(zhì)體制備方法進(jìn)行了改進(jìn)，獲得了一種操作控制簡便，易于生產(chǎn)的脂質(zhì)體材料的制備方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案?！N聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料，該脂質(zhì)體材料包括10_40mg的卵磷脂，IOmg的膽固醇，5mg的二氫卟吩，3飛mL pH為4飛的枸椽酸鹽緩沖液以及0. ImL的表面活性劑。所述二氫卟吩為二氫卟吩e4或二氫卟吩e6。所述卵磷脂和膽固醇是成膜材料，卵磷脂為氫化大豆卵磷脂，氫化大豆卵磷脂磷脂含量為60% 99%，優(yōu)選為70% 90%。所述表面活性劑為水溶性非離子表面活性劑。表面活性劑能夠降低脂質(zhì)體的表面張力，減少絮凝和沉淀，非離子表面活性是毒性最小的一類表面活性劑。所述表面活性劑為吐溫類表面活性劑，所述吐溫類表面活性劑包括吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80或吐溫85。制備上述聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料的方法，包括以下步驟 將10-40mg卵磷脂、IOmg膽固醇以及5mg 二氫卟吩溶解于三氯甲燒中得混合物，將混合物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中常壓旋轉(zhuǎn)混合5 15分鐘使二氫卟吩與卵磷脂充分混合均勻，然后將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空至0. 09Mpa后進(jìn)行旋蒸使三氯甲烷揮干得白色半透明膜狀物，旋蒸溫度為35 40 0C，向白色半透明膜狀物中加入3 5mL溫度為35 40°C、pH為4 5的枸椽酸鹽緩沖液，再加入0. rimL的表面活性劑，然后于4(T60°C常壓旋轉(zhuǎn)混合f 2小時(shí)使白色半透明膜狀物水化，然后轉(zhuǎn)入恒溫磁力攪拌器中于1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌后采用探頭超聲機(jī)超聲處理5 15分鐘，超聲功率450瓦，得脂質(zhì)體材料。上述聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用將表阿霉素溶解于蒸餾水中得濃度為8 15mg/mL的表阿霉素水溶液，用碳酸鈉或氫氧化鈉調(diào)整脂質(zhì)體材料外相的pH為7 8，然后取2mL脂質(zhì)體材料加入ImL表阿霉素水溶液中，輕搖混合后放入4(T60°C的水浴鍋中保溫廣2小時(shí)得表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體。本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在
本發(fā)明所述脂質(zhì)體材料包含聲敏劑二氫卟吩，可以利用脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)增加人體對(duì)聲敏劑二氫卟吩的吸收，使聲敏劑二氫卟吩協(xié)同增強(qiáng)藥效成分的療效，同時(shí)又能減少聲敏劑二氫卟吩的光毒性以及藥效成分的副作用，可應(yīng)用于制備治療各種惡性腫瘤的脂質(zhì)體中。本發(fā)明所述脂質(zhì)體材料中包含表面活性劑，加入表面活性劑可防止脂質(zhì)體的凝聚，并可通過調(diào)節(jié)表面活性劑的用量來控制脂質(zhì)體的粒徑。由于脂質(zhì)體生成過程中同時(shí)存在凝聚趨勢(shì)，其凝聚速度決定了脂質(zhì)體的粒徑，加入表面活性劑越大復(fù)合脂質(zhì)體粒徑越小，透皮作用越強(qiáng)，但表面活性劑量超過一定量，其過度增溶作用會(huì)導(dǎo)致卵磷脂包合的藥物從復(fù)合脂質(zhì)體中泄露出來。本發(fā)明所述脂質(zhì)體材料的制備方法與現(xiàn)有脂質(zhì)體的制備方法比較，設(shè)備簡單，成本較低，不需要高壓勻質(zhì)機(jī)等大型生產(chǎn)設(shè)備，探頭超聲機(jī)制備的脂質(zhì)體粒徑很小，穩(wěn)定性較 好，操作方法更為簡單，宜于控制，適合于生產(chǎn)。本發(fā)明利用所述脂質(zhì)體材料制備的表阿霉素脂質(zhì)體，通過表面活性劑的作用將表阿霉素與二氫卟吩同時(shí)包合于卵磷脂中形成復(fù)合脂質(zhì)體，利用脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)成份與人體細(xì)胞膜類似，相互易發(fā)生粘附、融合及吞噬效應(yīng)，可將脂質(zhì)體所包含的藥物直接轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)的吸收特性，提高了表阿霉素和二氫卟吩的藥理作用，并降低了毒副作用，復(fù)合脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，其粒徑為10(T300nm，可用于肝癌、肺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌等惡性腫瘤的化療。


圖I為表阿霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線；圖2為本發(fā)明所制備脂質(zhì)體材料的光鏡圖；圖3為本發(fā)明所制備脂質(zhì)體材料的電鏡圖；圖4為本發(fā)明所制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體的流出曲線圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。精密稱量表阿霉素I. 5mg,溶于25mL的蒸餾水中，儲(chǔ)備液的濃度為60 U g/mL。精密量取儲(chǔ)備液0. 5,1. 0,2. 0,3. 0,4. 0,5. OmL于5mL容量瓶中，蒸餾水定容得到6、12、24,36,48,60 u g/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列，在233nm處測(cè)紫外吸收度(A)，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖I所示，y=0. 0081x+0. 0088，R2=0. 9993。實(shí)施例I(I)采用薄膜分散-pH梯度法相結(jié)合來制備復(fù)合脂質(zhì)體，將30mg卵磷脂、IOmg膽固醇以及5mg 二氫卟吩e4溶解于三氯甲烷中得混合物，將混合物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中常壓旋轉(zhuǎn)混合5分鐘使二氫P卜吩e4與卵磷脂充分混合均勻,然后將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空至0. 09Mpa后進(jìn)行旋蒸使三氯甲烷揮干得白色半透明膜狀物，旋蒸溫度為35°C，向白色半透明膜狀物中加入3ml溫度為35°C、pH為4的枸椽酸鹽緩沖液，再加入0. 5ml的表面活性劑吐溫20，然后于40°C常壓旋轉(zhuǎn)混合2小時(shí)使白色半透明膜狀物水化，然后轉(zhuǎn)入恒溫磁力攪拌器中于1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌后采用探頭超聲機(jī)超聲處理10分鐘，超聲功率450瓦，得脂質(zhì)體材料，參見圖2以及圖3 ；(2)將表阿霉素溶解于蒸餾水中得濃度為8mg/mL的表阿霉素水溶液，用碳酸鈉調(diào)整脂質(zhì)體材料外相的pH為7，然后取2mL脂質(zhì)體材料加入ImL表阿霉素水溶液中，輕搖混合后放入40°C的水浴鍋中保溫I小時(shí)得表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體。實(shí)施例2(I)采用薄膜分散-pH梯度法相結(jié)合來制備復(fù)合脂質(zhì)體，將40mg卵磷脂、IOmg份膽固醇以及5mg 二氫卟吩e4溶解于三氯甲烷中得混合物，將混合物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中常壓旋轉(zhuǎn)混合10分鐘使二氫卟吩e4與卵磷脂充分混合均勻，然后將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空至0. 09Mpa后進(jìn)行旋蒸使三氯甲烷揮干得白色半透明膜狀物，旋蒸溫度為37°C，向白色半透明膜狀物中加入3. 5ml溫度為38°C、pH為4的枸椽酸鹽緩沖液，再加入0. 7ml的表面活性劑吐溫40，然后于50°C常壓旋轉(zhuǎn)混合I小時(shí)使白色半透明膜狀物水化，然后轉(zhuǎn)入恒溫磁力攪拌器中于1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌后采用探頭超聲機(jī)超聲處理5分鐘，超聲功率450瓦，得脂質(zhì)體材料；(2)將表阿霉素溶解于蒸餾水中得濃度為15mg/mL的表阿霉素水溶液，用氫氧化鈉調(diào)整脂質(zhì)體材料外相的pH為7. 5，然后取2mL脂質(zhì)體材料加入ImL表阿霉素水溶液中，輕搖混合后放入50°C的水浴鍋中保溫I. 5小時(shí)得表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體?！?shí)施例3(I)采用薄膜分散-pH梯度法相結(jié)合來制備復(fù)合脂質(zhì)體，將20mg卵磷脂、IOmg膽固醇以及5mg 二氫卟吩e6溶解于三氯甲烷中得混合物，將混合物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中常壓旋轉(zhuǎn)混合15分鐘使二氫卩卜吩e6與卵磷脂充分混合均勻，然后將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空至0. 09Mpa后進(jìn)行旋蒸使三氯甲烷揮干得白色半透明膜狀物，旋蒸溫度為40°C，向白色半透明膜狀物中加入4mL溫度為40°C、pH為5的枸椽酸鹽緩沖液，再加入ImL表面活性劑吐溫60，然后于60°C常壓旋轉(zhuǎn)混合I. 5小時(shí)使白色半透明膜狀物水化，然后轉(zhuǎn)入恒溫磁力攪拌器中于1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌后采用探頭超聲機(jī)超聲處理15分鐘，超聲功率450瓦，得脂質(zhì)體材料；(2)將表阿霉素溶解于蒸餾水中得濃度為10mg/mL的表阿霉素水溶液，用碳酸鈉調(diào)整脂質(zhì)體材料外相的pH為8，然后取2mL脂質(zhì)體材料加入ImL表阿霉素水溶液中，輕搖混合后放入60°C的水浴鍋中保溫2小時(shí)得表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體。實(shí)施例4(I)采用薄膜分散-pH梯度法相結(jié)合來制備復(fù)合脂質(zhì)體，將IOmg卵磷脂、IOmg膽固醇以及5mg 二氫卟吩e4溶解于三氯甲烷中得混合物，將混合物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中常壓旋轉(zhuǎn)混合10分鐘使二氫卟吩e4與卵磷脂充分混合均勻，然后將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空至0. 09Mpa后進(jìn)行旋蒸使三氯甲烷揮干得白色半透明膜狀物，旋蒸溫度為35°C，向白色半透明膜狀物中加入5mL溫度為35°C、pH為4的枸椽酸鹽緩沖液，再加入0. ImL表面活性劑吐溫80，然后于50°C常壓旋轉(zhuǎn)混合I. 5小時(shí)使白色半透明膜狀物水化，然后轉(zhuǎn)入恒溫磁力攪拌器中于1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌后采用探頭超聲機(jī)超聲處理10分鐘，超聲功率450瓦，得脂質(zhì)體材料；(2)將表阿霉素溶解于蒸餾水中得濃度為12mg/mL的表阿霉素水溶液，用氫氧化鈉調(diào)整脂質(zhì)體材料外相的pH為7，然后取2mL脂質(zhì)體材料加入ImL表阿霉素水溶液中，輕搖混合后放入50°C的水浴鍋中保溫I小時(shí)得表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體。脂質(zhì)體包封率的測(cè)定
I)流出曲線的測(cè)定采用葡聚糖凝膠柱過濾法分離表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體與游離藥物，稱取葡聚糖凝膠G-1001. 5g，用生理鹽水充分溶漲24小時(shí)，濕法裝柱(柱長20cm，內(nèi)徑I. 3cm)。精密吸取表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體0. 20mL上柱，以生理鹽水洗脫，流速lmL/min。收集洗脫液，每份lmL，共收集30份。將每一份收集的洗脫液以甲醇定容至5mL搖勻，過微孔濾膜，用高效液相色譜法測(cè)定。以洗脫體積為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制流出曲線，結(jié)果見圖4。其中I 6mL洗脫液為生理鹽水，7 13mL洗脫液為表阿霉素脂質(zhì)體，19 30mL洗脫液為表阿霉素游離藥物部分。流出曲線表明，表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體通過凝膠柱后，脂質(zhì)體和游離藥物分離良好。

取表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體0. 2mL上葡聚糖凝膠G-100柱，根據(jù)流出曲線，收集7 13mL表阿霉素脂質(zhì)體部分加入甲醇定容到12mL破膜，用高效液相色譜法測(cè)定脂質(zhì)體中表阿霉素的含量Cl。另取等量上柱前的表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體，同法測(cè)定表阿霉素的總含量C2。按照公式包封率=(C1/C2) X 100%計(jì)算脂質(zhì)體的包封率。結(jié)果表明，用薄膜分散-pH梯度法制備的表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體包封率為87. 93%。本發(fā)明經(jīng)過深入細(xì)致的大量研究，提出在脂質(zhì)體中加入聲敏劑二氫卟吩的技術(shù)方案，在一定的超聲輻射作用下，制成的表阿霉素-二氫卟吩復(fù)合脂質(zhì)體能夠在腫瘤組織中富集，增強(qiáng)表阿霉素對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用，同時(shí)降低了表阿霉素的心臟毒性和二氫卟吩的光毒性。此復(fù)合脂質(zhì)體特征在于表阿霉素和二氫卟吩的雙重腫瘤細(xì)胞靶向性，有效的解決傳統(tǒng)脂質(zhì)體對(duì)腫瘤細(xì)胞選擇性低而導(dǎo)致治療時(shí)藥效增加同時(shí)毒性也增加的難題，可以滿足臨床治療所需的高效，低毒的臨床需求。
權(quán)利要求
1.一種聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料，其特征在于該脂質(zhì)體材料包括10-40mg的卵磷脂，IOmg的膽固醇，5mg的ニ氫卟吩，3飛mL pH為4飛的枸椽酸鹽緩沖液以及O. ImL的表面活性剤。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種聲動(dòng)カ脂質(zhì)體材料，其特征在于所述ニ氫卟吩為ニ氫卟吩e4或ニ氫卟吩e6。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種聲動(dòng)カ脂質(zhì)體材料，其特征在于所述卵磷脂為氫化大豆卵磷脂，磷脂含量為6(Γ99%。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述ー種聲動(dòng)カ脂質(zhì)體材料，其特征在于所述表面活性劑為水溶性非離子表面活性剤。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述ー種聲動(dòng)カ脂質(zhì)體材料，其特征在于所述表面活性劑為吐溫類表面活性劑，所述吐溫類表面活性劑包括吐溫20、吐溫40、吐溫60、吐溫80或吐溫85。
6.一種制備如權(quán)利要求I所述聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料的方法，其特征在于包括以下步驟 將10-40mg卵磷脂、IOmg膽固醇以及5mg ニ氫卟吩溶解于三氯甲烷中得混合物，將混合物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中常壓旋轉(zhuǎn)混合5 15分鐘，然后將旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀抽真空至O. 09Mpa后進(jìn)行旋蒸使三氯甲烷揮干得白色半透明膜狀物，旋蒸溫度為35 40°C，向白色半透明膜狀物中加入3 5mL溫度為35 40°C、pH為4 5的枸椽酸鹽緩沖液，再加入O. f ImL的表面活性剤，然后于4(T60°C常壓旋轉(zhuǎn)混合f 2小吋，然后轉(zhuǎn)入恒溫磁力攪拌器中于1500轉(zhuǎn)/分?jǐn)嚢?0分鐘，攪拌后采用探頭超聲機(jī)超聲處理5 15分鐘，超聲功率450瓦，得脂質(zhì)體材料。
7.—種如權(quán)利要求I所述聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述ー種聲動(dòng)カ脂質(zhì)體材料在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用，其特征在于將表阿霉素溶解于蒸餾水中得濃度為8 15mg/mL的表阿霉素水溶液，用碳酸鈉或氫氧化鈉調(diào)整脂質(zhì)體材料外相的PH為7 8，然后取2mL脂質(zhì)體材料加入ImL表阿霉素水溶液中，輕搖混合后放入4(T60°C的水浴鍋中保溫f 2小時(shí)得表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體。
全文摘要
本發(fā)明提供一種聲動(dòng)力脂質(zhì)體材料、制備方法及其在制備表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體中的應(yīng)用，該脂質(zhì)體材料包括10-40mg的卵磷脂，10mg的膽固醇，5mg的二氫卟吩，3~5mL pH為4~5的枸椽酸鹽緩沖液以及0.1~1mL的表面活性劑，主要涉及表阿霉素和聲敏劑二氫卟吩的復(fù)合脂質(zhì)體，制備方法是用薄膜分散法-pH梯度法將表阿霉素和二氫卟吩包合于卵磷脂中，形成復(fù)合脂質(zhì)體，使表阿霉素復(fù)合脂質(zhì)體更好的靶向到腫瘤組織，雙重殺傷腫瘤細(xì)胞，用于多種腫瘤的治療，具有良好的發(fā)展前景。
文檔編號(hào)A61K47/28GK102670512SQ201210171178
公開日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年5月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月29日
發(fā)明者代志軍, 仵文英, 徐曉娜, 李莎, 趙暖暖, 高潔 申請(qǐng)人:西安交通大學(xué)