專利名稱：一種黃芪提取物及其制備和應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種黃芪提取物，具體地，是以中藥黃芪為原料的提取物及其制備方法和制備治療慢性阻塞性肺疾病藥劑的用途；屬于藥物領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
慢阻肺，即慢性阻塞性肺部疾病(chronicobstructive pulmonary diseases,COPD)，其定義為具有氣流阻塞特征的慢性支氣管炎和(或)肺氣腫。在我國(guó)，COPD是肺心病的主要基礎(chǔ)病，毎年由于COPD造成的死亡可達(dá)100萬人。其危害相當(dāng)嚴(yán)重。目前用于治療COPD的化學(xué)藥物均屬于單ー靶點(diǎn)作用的制劑，主要是減輕疾病癥狀，尚無延緩慢阻肺病程、或抑制小氣道及肺實(shí)質(zhì)炎癥的有效治療手段出現(xiàn)。市場(chǎng)上現(xiàn)有產(chǎn)品補(bǔ)肺活血膠囊(BFHX)經(jīng)多年臨床使用證明，對(duì)于慢阻肺有著顯著療效。其藥方組成為黃芪、赤芍和補(bǔ)骨脂三味傳統(tǒng)中藥。君藥是黃芪，黃芪(Radix Astragali)為豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根，它是一味重要的中藥，具有補(bǔ)氣開陽(yáng)，益衛(wèi)固表，利尿消腫，斂瘡生肌等功效，在我國(guó)運(yùn)用有幾千年的歷史。中藥及其復(fù)方制劑多成分、多靶點(diǎn)和整合協(xié)同作用的特點(diǎn)，使得補(bǔ)肺活血膠囊在慢阻肺這ー緩慢進(jìn)程性疾病的治療方面凸顯出優(yōu)勢(shì)。雖然補(bǔ)肺活血膠囊臨床使用有效，但其制備流程為將水提醇沉液濃縮成浸膏后混合赤芍粉末制粒灌裝膠囊，生產(chǎn)エ藝十分粗糙。且提取物的形態(tài)為浸膏，造成制劑的穩(wěn)定性較差。因此，我們擬對(duì)補(bǔ)肺活血膠囊進(jìn)行深度開發(fā)，對(duì)其進(jìn)行物質(zhì)基礎(chǔ)研究，生產(chǎn)エ藝優(yōu)化，提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，黃芪一味藥材單煎，與赤芍、補(bǔ)骨脂三味藥材合煎出的主要成分相同，因此本發(fā)明単獨(dú)研究黃芪一味藥材，后期再合并赤芍、補(bǔ)骨脂的研究結(jié)果，深度開發(fā)補(bǔ)肺活血膠囊。目前ロ服給藥是中藥治療的主要方式，中藥或其活性提取物ロ服后，經(jīng)消化道、腸道菌群作用，生成ー種由中藥固有成分及其代謝產(chǎn)物組成的混合物，有的直接被排泄，有的被選擇性吸收，經(jīng)體內(nèi)各種藥物代謝酶作用進(jìn)入血液，通過血液運(yùn)輸?shù)礁鱾€(gè)器官組織或靶點(diǎn)，才能真正起效。由此可見，不論中藥含有多少成分，只有吸收進(jìn)入血液的成分才有可能成為有效成分(外用藥及直接刺激胃腸道藥物除外)。因此，本研究采用大鼠在體單向灌流模型，研究灌流液中黃芪提取物主要成分減少情況。采用大鼠體內(nèi)模型，研究灌胃給藥后入血成分、尿液排泄成分。結(jié)合以上兩種模型比較分析黃芪提取物被吸收成分，確定為黃芪的物質(zhì)基礎(chǔ)。篩選出能反映黃芪物質(zhì)作用基礎(chǔ)的指標(biāo)成分，可更好的控制該藥物的質(zhì)量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質(zhì)量可控、物質(zhì)基礎(chǔ)明確的黃芪藥物，以順應(yīng)中藥現(xiàn)代化的要求。目前尚無針對(duì)本發(fā)明標(biāo)準(zhǔn)的黃芪提取物及其制備和應(yīng)用方法的報(bào)道
發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種黃芪提取物及其制備和應(yīng)用方法。—種黃芪提取物，是以黃芪為原料提取得到的，所述的黃芪提取物含有毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為O. 66% O. 73%，O. 36% O. 42%，34. 69Γ36. 9%。所述的黃苗來源于豆科植物蒙古黃苗(Radix Astagali)或膜莢黃苗(Astragalusmembranaceus (Fisen.) Bunge；的干燥很。所述的黃芪提取物的水分不超過5.0%、熾灼殘?jiān)坎怀^0.5%、重金屬含量O. 01%0。所述的黃芪提取物用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥劑。包括以黃芪提取物為主要有效成分與多種醫(yī)用輔料(賦型劑，稀釋劑，香味劑、甜味劑、潤(rùn)滑劑等)配合，制成多種 劑型的藥物使用，如凍干粉針，注射液，大輸液，片劑，膠囊，顆粒劑以及ロ服液等。ー種黃芪提取物的制備方法，包括如下步驟取黃芪的干燥根，粉碎，依次用其10-12，7-9倍體積量的80%こ醇各回流提取I次，毎次Ih ;合并兩次黃芪醇提液，回收こ醇并濃縮至含O. 4-0. Sg生藥· mr1，再以O(shè). 8-1. 2ml · mirT1速度通過D-101大孔樹脂；上樣量不超過3. 6g生藥· πιΓ1樹脂，依次用4-6倍柱體積純水，4-6倍柱體積15-25%こ醇洗脫，棄去，然后用5_7倍柱體積60-95%こ醇洗脫，收集60-95%こ醇洗脫部分，洗脫液減壓回收溶劑；干燥，粉碎，即得。優(yōu)選包括如下步驟取黃芪的干燥根，粉碎，依次用其12，9倍體積量的80%こ醇各回流提取I次，每次Ih ;合并兩次黃苗醇提液，回收こ醇并濃縮至含O. 6g生藥· πιΓ1,再以Iml · mirT1速度通過IOg D-101大孔樹脂，上樣量不超過3. 6g生藥《πιΓ1樹脂，依次用5倍柱體積純水，5倍柱體積20%こ醇，6倍柱體積80%こ醇洗脫，收集80%こ醇洗脫部分，洗脫液減壓回收溶剤，60°C干燥，粉碎，即得。所述的黃芪提取物含有毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為 O. 66% 0· 73%, O. 36% 0· 42%, 34. 6% 36. 9%。所述的黃芪來源于豆科植物蒙古黃芪(Radix Astagali)或膜莢黃芪(Astragalusmembranaceus (Fisen.) Bunge；的干燥很。所述的黃芪提取物的水分不超過5.0%、熾灼殘?jiān)坎怀^0.5%、重金屬含量O. 01%0。本發(fā)明提供了ー種黃芪提取物，以中藥材黃芪為原料提取而成。本發(fā)明采用大鼠在體單向灌流模型，研究灌流液中黃芪提取物主要成分減少情況。采用大鼠體內(nèi)模型，研究灌胃給藥后入血成分、尿液排泄成分。結(jié)合以上兩種模型比較分析黃芪提取物被吸收成分，即毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷。并以這些成分及其含量作為標(biāo)準(zhǔn)；根據(jù)其優(yōu)化提取エ藝和富集純化工藝，最終獲得精制而成的本發(fā)明提取物，同時(shí)水分含量、熾灼殘?jiān)?、重金屬含量也作為?biāo)準(zhǔn)，在優(yōu)化提取エ藝和富集純化工藝時(shí)考慮。本發(fā)明可更好的控制該藥物的質(zhì)量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質(zhì)量可控、物質(zhì)基礎(chǔ)明確的黃芪藥物，以順應(yīng)中藥現(xiàn)代化的要求。


圖I為黃芪提取物色譜圖；圖2為大鼠灌胃黃芪后血漿HPLC典型圖譜(a空白血漿，b含藥血漿)；圖3大鼠灌胃黃芪后尿液HPLC典型圖譜(a空白尿樣，b含藥尿樣)；
圖4為黃芪提取物指紋圖譜。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式
，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)ー步的詳細(xì)說明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :大鼠在體腸灌流方法研究黃芪吸收I試驗(yàn)材料I. I試驗(yàn)儀器 Agilent 1200-紫外檢測(cè)器；Agilent TC-C18 (250 X 4. 6mm，5 μ m) ; JA2003H 型千分之一天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；CP22 型十萬分之ー電子天平(Sartorious)；TD24-WS低速臺(tái)式離心機(jī)(湘儀離心機(jī)有限公司)；KL-R0-10型艾柯超純水機(jī)(臺(tái)灣艾柯)；WH-2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；MTN-2800D氮?dú)獯蹈蓛x(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；DDB-320型電子蠕動(dòng)泵(上海之信儀器有限公司)；紫外分光光度計(jì)(型號(hào)UV-2450)。I. 2試驗(yàn)試劑與藥品毛蕊異黃酮對(duì)照品上海同田生物技術(shù)有限公司；純度彡98% ;芒柄花素對(duì)照品上海同田生物技術(shù)有限公司；純度> 98% ;黃芪甲苷對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品鑒定所；純度彡95%;こ腈美國(guó)Tedia公司生產(chǎn)，色譜純。I. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，體重200+20g，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2試驗(yàn)方法2. I在體腸灌流實(shí)驗(yàn)測(cè)定黃芪提取液在大鼠全腸段的吸收2. I. I溶液的配制2. I. I. I黃芪提取液的制備稱取一定量的黃芪，粉碎，加入10倍量的水煎煮lh，過濾，分離藥液藥渣，在藥渣中加入8倍量的水繼續(xù)煎煮lh，合并兩次煎煮的藥液，濃縮得浸膏。用純水溶解，得黃芪提取物溶液(約含生藥2g · πιΓ1)。2. I. I. 2在體腸灌流液的配制分別稱取氯化鈉7. 8g，葡萄糖I. 4g，碳酸氫鈉I. 37g，氯化鈣O. 37g，氯化鉀O. 35g，磷酸ニ氫鈉O. 32g，氯化鎂O. 02g，加適量蒸餾水溶解，加水稀釋至1000ml，超聲混勻，即得Kreb-Ringer’ s 營(yíng)養(yǎng)液(K-R 液)。2. I. I. 3含酚紅K-R液的配制K-R液的配制同I. 2. I. I. 2。稱取酚紅約20mg，用1000ml K-R液溶解，得含酚紅約為20mg ·じ1的K-R液。2. I. 2黃芪提取物在腸灌流液中的穩(wěn)定性考察大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食而不禁水12h，麻酔后固定，沿腹中線打開腹腔，將腸段的兩端各插入塑料管，并結(jié)扎固定，用37°C生理鹽水將各腸段內(nèi)容物沖洗干凈，用線扎緊后將膠管通過蠕動(dòng)泵，先將K-R液以較快的速度泵入腸段，使腸段內(nèi)充滿K-R液，后將流速降低至0.2ml · mirT1,同時(shí)開始計(jì)時(shí)，Ih后于出口處收集空白灌流液。取9. Oml的空白灌流液,カロ入1.0ml黃芪提取液(制備方法同2. I. I. 1)，渦旋混勻，置37で水浴，并于他，111，211，311分別取樣。測(cè)定供試液中各主要峰峰面積的變化來考察黃芪提取液在腸灌流液中的穩(wěn)定性。2. I. 3大鼠在體腸灌流試驗(yàn)大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食而不禁水12h，麻酔后固定，沿腹中線打開腹腔，將腸段的兩端各插入塑料管，并結(jié)扎固定，用37°C生理鹽水將各腸段內(nèi)容物沖洗干凈。再取50ml用K-R液配制的供試藥液(5ml黃芪提取液加入到45mlK-R液中，黃芪提取液制備方法同2. I. I. I),先將藥液以較快的速度泵入腸段，使腸段內(nèi)充滿藥液，后將流速降低至O. 2ml · min—1，同時(shí)開始計(jì)吋，Ih后于出ロ處收集灌流液。2. I. 4樣品測(cè)定方法 2. I. 4. I灌流液中酚紅的測(cè)定灌流液中的酚紅濃度采用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定，于558nm處測(cè)定吸光度。灌流流出液中藥物成分峰峰面積用下式校正=C校正=C實(shí)測(cè)X (C酚紅(迸)/酚紅(出))2. I. 4. 2灌流液中黃酮類成分的測(cè)定黃酮類成分的測(cè)定采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。色譜條件色譜柱為AgilentTC_C18 (250X4. 6mm, 5 μ m);柱溫30°C ;流動(dòng)相こ月青(A)水(B) 0min, A:B=5:95 ； 15min, A:B=5:95,60min, A:B=55:45 ；70min, A:B=90:10 ；75min, A:B=5:95 ；80min, A:B=5:95 ；流速:1. Oml · mirT1 ；UV 檢測(cè)波長(zhǎng)203nm ;進(jìn)樣量:20 μ I。樣品處理方法含藥灌流液置I. 5ml的EP管里，12000r .mirT1高速離心lOmin，取
上清液進(jìn)樣。2. I. 4. 3灌流液中黃芪總皂苷的測(cè)定黃芪總皂苷采用紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定，UV檢測(cè)波長(zhǎng)544nm。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精密稱取5. Olmg黃芪甲苷對(duì)照品，置于IOml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度(每Iml儲(chǔ)備液中約含黃芪甲苷500 μ g)。標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:精密量取O. 15，O. 30，O. 45，O. 60，O. 75ml黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，放入具塞試管中，分別加入無水こ醇至O. 75ml，再加入O. 75ml8%的香草醛試劑，于冰浴中加入7. 5ml72%的硫酸，混合搖勻，放入62°C水浴中加熱20min，取出冷卻后，搖勻，在波長(zhǎng)544nm處測(cè)吸光度，制定標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y=0. 01077x+0. 02458 (r2=0. 99579)樣品處理方法取含藥灌流液10ml，加入20ml水飽和的正丁醇萃取，共萃取3次，合并正丁醇液，用20ml氨試液洗滌3次，分離出正丁醇層，將其蒸干后，用IOml無水こ醇溶解，得樣品，將樣品稀釋20倍后，取O. 5ml樣品稀釋液，加入O. 5ml8%的香草醛試劑，于冰浴中加入5ml72%的硫酸，混合搖勻，放入62°C水浴中加熱20min，取出冷卻后，搖勻，在波長(zhǎng)544nm處測(cè)吸光度。3試驗(yàn)結(jié)果3. I黃芪提取液指紋圖譜的建立通過全波長(zhǎng)掃描，對(duì)不同波長(zhǎng)下的色譜圖進(jìn)行分析比較，結(jié)果在203nm波長(zhǎng)下各峰分離良好，峰數(shù)目也比較多，故選擇203nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。2. I. 3. 2色譜條件下進(jìn)樣，得到黃芪指紋圖譜，共有8個(gè)特征峰(見圖I)。
3. 2腸灌流試驗(yàn)結(jié)果可見8個(gè)黃酮類成分和黃芪總皂苷吸收入血，根據(jù)對(duì)照品比對(duì)，可初歩判斷其中2個(gè)黃酮類成分分別為毛蕊異黃酮和芒柄花素。實(shí)施例2 :黃芪入血成分研究I試驗(yàn)材料I. I試驗(yàn)儀器Agilent 1200-紫外檢測(cè)器；Agilent TC-C18 (250 X 4. 6mm，5 μ m) ; JA2003H 型千分之一天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；CP22 型十萬分之ー電子天平(Sartorious)；TD24-WS低速臺(tái)式離心機(jī)(湘儀離心機(jī)有限公司)；KL-R0-10型艾柯超純水機(jī)(臺(tái)灣艾柯)；WH-2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；MTN-2800D氮?dú)獯蹈蓛x(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；紫外分光光度計(jì)(型號(hào)UV-2450)。I. 2試驗(yàn)試劑與藥品毛蕊異黃酮對(duì)照品上海同田生物技術(shù)有限公司；純度彡98% ;芒柄花素對(duì)照品上海同田生物技術(shù)有限公司；純度> 98% ;黃芪甲苷對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品鑒定所；純度彡95%;こ腈美國(guó)Tedia公司生產(chǎn)，色譜純。I. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，體重200+20g，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2試驗(yàn)方法2. I供試品溶液制備黃芪提取物的制備同實(shí)施例I中的2. I. I. 1，用盡可能少的水溶解制得的浸膏，得供試品溶液(含生藥約2. Sg · πιΓ1)，作為待灌胃的樣品溶液。2. 2血漿樣品的采集取大鼠9只，禁食，自由飲水，每只大鼠給予2.5ml的供試品溶液，灌胃Ih后脫椎處死，心臟取血，每3只大鼠的血樣合并在一起，共得三份血樣。高速離心(12000r · mirT1)IOmin,分離出血衆(zhòng)樣品。2. 3血樣中黃酮類成分的測(cè)定黃酮類成分血的測(cè)定采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。色譜條件色譜柱為AgilentTC_C18 (250X4. 6mm, 5 μ m);柱溫30°C ;流動(dòng)相こ月青(A)水(B) 0min, A:B=5:95 ； 15min, A:B=5:95,60min, A:B=55:45 ；70min, A:B=90:10 ；75min, A:B=5:95 ；80min, A:B=5:95 ；流速:1. Oml · mirT1 ；UV 檢測(cè)波長(zhǎng)203nm ;進(jìn)樣量:20 μ I。樣品處理方法I. Oml血漿樣品中加入4mlこ酸こ酷，渦旋混合2min后，2500r · mirT1離心5min,吸取上層溶液,在下層溶液中再加入4mlこ酸こ酷，同樣方法處理，合并兩次萃取液，于60°C下氮?dú)獯蹈桑瑲堅(jiān)芙庥?0 μ 160%甲醇的復(fù)溶液中，進(jìn)樣量20 μ I。、
3試驗(yàn)結(jié)果黃芪提取物中的8個(gè)黃酮類成份均在大鼠灌胃給藥后的血漿中出現(xiàn)(見圖2)。實(shí)施例3 :黃芪入尿成分研究I試驗(yàn)材料I. I試驗(yàn)儀器
Agilent 1200-紫外檢測(cè)器；Agilent TC-C18 (250 X 4. 6mm，5 μ m) ; JA2003H 型千分之一天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司)；CP22 型十萬分之ー電子天平(Sartorious)；TD24-WS低速臺(tái)式離心機(jī)(湘儀離心機(jī)有限公司)；KL-R0-10型艾柯超純水機(jī)(臺(tái)灣艾柯)；WH-2微型旋渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；MTN-2800D氮?dú)獯蹈蓛x(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；3700M071型代謝籠(Tecniplast公司)；紫外分光光度計(jì)(型號(hào)UV_2450)。I. 2試驗(yàn)試劑與藥品毛蕊異黃酮對(duì)照品上海同田生物技術(shù)有限公司；純度彡98% ;芒柄花素對(duì)照品上海同田生物技術(shù)有限公司；純度> 98% ;黃芪甲苷對(duì)照品中國(guó)藥品生物制品鑒定所；純度彡95%;こ腈美國(guó)Tedia公司生產(chǎn)，色譜純。I. 3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，體重200+20g，中南大學(xué)湘雅醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。2試驗(yàn)方法2. I供試品溶液制備黃芪提取物的制備實(shí)施例I中的2. I. I. 1，用盡可能少的水溶解制得的浸膏，得供試品溶液(含生藥約2. 8g · πιΓ1)，作為待灌胃的樣品溶液。2. 2尿樣的采集取大鼠3只，禁食，自由飲水，每只大鼠給予2. 5ml的供試品溶液，灌胃后收集O 24h尿樣。2. 3尿樣中黃酮類成分的測(cè)定黃酮類成分血的測(cè)定采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。色譜條件色譜柱為AgilentTC_C18 (250X4. 6mm, 5 μ m);柱溫30°C ;流動(dòng)相こ月青(A)水(B) 0min, A:B=5:95 ； 15min, A:B=5:95,60min, A:B=55:45 ；70min, A:B=90:10 ；75min, A:B=5:95 ；80min, A:B=5:95 ；流速I. Oml · mirT1 ；UV 檢測(cè)波長(zhǎng)203nm ;進(jìn)樣量:20 μ I。樣品處理方法L Oml尿樣中加入4mlこ酸こ酯，潤(rùn)旋震蕩2min后，2500r · mirT1離心5min，吸取上層溶液，在下層溶液中再加入4mlこ酸こ酷，同樣方法處理，合并兩次萃取液，于60°C下氮?dú)獯蹈?，殘?jiān)芙庥?0 μ 160%甲醇的復(fù)溶液中，進(jìn)樣量20 μ I。另取大鼠空白尿樣，處理方法同上。3試驗(yàn)結(jié)果黃芪提取物中的4個(gè)黃酮類成份在大鼠灌胃給藥后的尿樣中出現(xiàn)(見圖3)。實(shí)施例4 :本發(fā)明黃芪提取物的制備根據(jù)實(shí)施例I和2的結(jié)果以毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪甲苷為指標(biāo)成分優(yōu)化黃芪的提取エ藝和純化工藝。得到的最佳エ藝如下取黃芪的干燥根，粉碎，依次用12，9倍量80%的こ醇各回流提取I次，每次lh。合并兩次黃芪醇提液，回收こ醇并濃縮至適量(含O. 6g生藥· mr1)，取黃芪提取液(O. 6g生藥- πιΓ1)以Iml .mirT1速度通過IOgD-IOl大孔樹脂，上樣量不超過3. 6g生藥- πιΓ1樹脂，然后依次用5倍柱體積純水，5倍柱體積20%こ醇，6倍柱體積80%こ醇洗脫，收集80%こ醇洗脫部分，洗脫液減壓回收溶劑，60°C干燥，粉碎，即得。
黃芪提取エ藝優(yōu)化
藥材對(duì)提取溶劑的吸收稱取30g黃芪藥材，粉碎后，逐步加入含水こ醇回流，所用溶劑量為300ml時(shí)，藥材潤(rùn)透，濾出提取溶劑，測(cè)得體積約為210ml，由此可知，藥材與吸收的溶劑體積比為I :3。提取溶劑的選擇水提、20%こ醇、40%こ醇、60%こ醇、80%こ醇、100%こ醇提取液經(jīng)測(cè)定，20%、40%、60%,80%こ醇提效果均比原先水提エ藝得到的目標(biāo)成分成分含量高，其中80%こ醇提效果最佳，40%、60%こ醇提效果也較好。確定回流次數(shù)將黃芪藥材回流提取3次，第一次加入12倍量80%こ醇，后兩次均加入9倍量80%こ醇，每次提取lh，測(cè)定黃芪總皂苷的提取率，三次結(jié)果分別為2. 78%, O. 64%, O. 06%,第3次提取率僅占總提取率的I. 72% ;測(cè)定毛蕊異黃酮的提取率，第I次提取率為O. 014%，第2，3次提取率很低，可以忽略不計(jì)；測(cè)定芒柄花素的提取率，第I次提取率為O. 006%，第2，3次提取率很低，可以忽略不計(jì)。因此，提取2次已經(jīng)可以較充分提取出黃芪的目標(biāo)成分。黃芪純化工藝優(yōu)化研究大孔樹脂的篩選大孔吸附樹脂技術(shù)在黃酮類、皂苷類化學(xué)成分分離純化方面的應(yīng)用比較成熟，常用于黃酮、皂苷的型號(hào)主要是D101，AB-8。同時(shí)AB-8大孔樹脂有較好的除雜能力(除蛋白、鞣質(zhì)、多糖等)，因此擬通過靜態(tài)吸附試驗(yàn)，篩選D101、AB-8、DM-130型號(hào)的樹脂中的ー種，作為分離純化黃芪黃酮和皂苷類成分效果較好的樹脂。準(zhǔn)確量取已經(jīng)處理好的各種類型的大孔樹脂各取已處理好的D-101，AB-8和DM-130大孔樹脂各2g，分別加入黃芪提取液溶液(含生藥O. 5g -πιΓ1) 10ml，每5min振搖ー次，2h后分別取樹脂吸附后的溶液，測(cè)定毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷的含量，計(jì)算樹脂對(duì)其吸附率。將靜態(tài)吸附的樹脂抽干，加10ml80%こ醇解吸，每5min振搖一次，2h后分別取解吸液，測(cè)定毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷的含量，計(jì)算樹脂對(duì)其解吸率?？疾禳S芪提取液濃度對(duì)吸附的影響準(zhǔn)確量取已經(jīng)處理好的D-101大孔樹脂各10g，裝柱，另取IOml含生藥Ig -πιΓ1的黃苗樣品液，稀釋至合適的濃度(含生藥O. 2g · ι Γ1,?！?4g · πιΓ1,?！?6g · πιΓ1,?！?8g · ι Γ1)，上樣，將已吸附好的樹脂先用純水洗至流出液無色，用90%的こ醇洗脫，分別收集解吸液，定容至60ml。測(cè)定吸附前溶液和解吸液中毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷的含量，計(jì)算其洗脫百分比。洗脫百分比=解吸液中有效成分的量/上樣液中有效成分的量X 100%?？疾禳S芪提取液上樣流速對(duì)吸附的影響準(zhǔn)確量取已經(jīng)處理好的D-101大孔樹脂各10g，裝柱，另取IOml含生藥O. 6g -πιΓ1的黃芪提取液，以不同的流速通入樹脂柱，將已吸附好的樹脂先用純水洗至流出液無色，然 后用90%的こ醇洗脫，分別收集解吸液，定容至60ml。測(cè)定吸附前溶液和解吸液中黃芪總皂苷，毛蕊異黃酮和芒柄花素的含量，計(jì)算其洗脫百分比。洗脫百分比=解吸液中有效成分的量/上樣液中有效成分的量X 100%?？疾熳畲笊蠘恿繙?zhǔn)確量取已處理好的D-101大孔樹脂10g，濕法裝柱，量取黃芪上樣液(含生藥O.6g ^r1),上柱,調(diào)節(jié)流出液的流速約為I. Oml ^irT1,收集流出液,姆IOml收集ー份。測(cè)定每份流出液中毛蕊異黃酮，芒柄花素和黃芪總皂苷的含量。洗脫液濃度對(duì)洗脫的影響將已經(jīng)吸附好的樹脂先用純水洗至流出液無色后，依次以4倍柱體積的20%，40%,60%，80%, 95%こ醇分次洗脫樹脂柱，收集各濃度梯度的洗脫流出液，測(cè)定流出液中毛蕊異黃酮，芒柄花素和黃苗總阜苷的含量。洗脫液用量考察將已經(jīng)吸附好的樹脂先用純水洗至流出液無色后，用20%的こ醇洗脫5倍柱體積，棄去，然后依次以整數(shù)倍的柱體積洗脫液80%こ醇分次洗脫樹脂柱，收集各段洗脫液，測(cè)定洗脫液中黃芪總皂苷，毛蕊異黃酮，芒柄花素的含量。
試驗(yàn)結(jié)果DlOl樹脂對(duì)毛蕊異黃酮的吸附解吸效果較佳，不同型號(hào)大孔樹脂對(duì)毛蕊異黃酮的吸附解吸比較見表I。表I不同型號(hào)大孔樹脂對(duì)毛蕊異黃酮的吸附解吸比較
權(quán)利要求
1.ー種黃芪提取物，其特征在干是以黃芪為原料提取得到的，所述的黃芪提取物含有毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為O. 669Γ0. 73%，O. 369Γ0. 42%, 34. 69Γ36. 9%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃芪提取物，其特征在于所述的黃芪來源于豆科植物蒙古黃苗(Radix Astagali )或膜莢黃苗(Astragalus membranaceus (Fisch. ) Bunge)的干燥根。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的黃芪提取物，其特征在于所述的黃芪提取物的水分不超過5. 0%、熾灼殘?jiān)坎怀^O. 5%、重金屬含量O. 01%0。
4.權(quán)利要求1-3任意一項(xiàng)所述的黃芪提取物的應(yīng)用方法，其特征在于，用于制備治療慢性阻塞性肺疾病的藥劑。
5.ー種黃芪提取物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 取黃芪的干燥根，粉碎，依次用其I O-12，7-9倍體積量的80%こ醇各回流提取I次，每次Ih ;合并兩次黃芪醇提液，回收こ醇并濃縮至含O. 4-0. 8g生藥· πιΓ1，再以O(shè). 8-1. 2ml · HiirT1速度通過D-101大孔樹脂；上樣量不超過3. 6g生藥· πιΓ1樹脂，依次用4-6倍柱體積純水，4-6倍柱體積15-25%こ醇洗脫，棄去，然后用5_7倍柱體積60-95%こ醇洗脫，收集60-95%こ醇洗脫部分，洗脫液減壓回收溶劑；干燥，粉碎，即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，包括如下步驟 取黃芪的干燥根，粉碎，依次用其12，9倍體積量的80%こ醇各回流提取I次，每次Ih ；合并兩次黃苗醇提液，回收こ醇并濃縮至含O. 6g生藥^mr1,再以Iml · mirT1速度通過IOgD-101大孔樹脂，上樣量不超過3. 6g生藥· πιΓ1樹脂，依次用5倍柱體積純水，5倍柱體積20%こ醇，6倍柱體積80%こ醇洗脫，收集80%こ醇洗脫部分，洗脫液減壓回收溶剤，60°C干燥，粉碎，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在干，所述的黃芪提取物含有毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷，質(zhì)量百分比分別相應(yīng)為O. 669Γ0. 73%,O. 369Γ0. 42%，34. 69Γ36. 9%。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于所述的黃芪來源于豆科植物蒙古黃芪或膜莢黃芪的干燥根。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的制備方法，其特征在于所述的黃芪提取物的水分不超過5. 0%、熾灼殘?jiān)坎怀^O. 5%、重金屬含量O. 01%。。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種黃芪提取物及其制備和應(yīng)用方法；該提取物以中藥黃芪為原料提取而成，其中含有毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷的質(zhì)量百分比分別為0.66%~0.73%，0.36%~0.42%，34.6%~36.9%。本發(fā)明提取物的制備方法以該提取物中的毛蕊異黃酮、芒柄花素和黃芪總皂苷含量、水分含量、熾灼殘?jiān)?、重金屬含量為指?biāo)進(jìn)行優(yōu)化得到。本發(fā)明可更好的控制黃芪提取物的質(zhì)量，保證用藥安全性，深度開發(fā)質(zhì)量可控、物質(zhì)基礎(chǔ)明確的黃芪藥物，以順應(yīng)中藥現(xiàn)代化的要求。
文檔編號(hào)A61P11/00GK102641326SQ20121015446
公開日2012年8月22日 申請(qǐng)日期2012年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月17日
發(fā)明者云筠筠, 張弘, 王霆, 程澤能, 蔡凝芳, 袁玉 申請(qǐng)人:中南大學(xué)