專利名稱：載蛋白質類藥物的plga復合微球及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種載蛋白質類藥物的聚乳酸-羥こ酸共聚物(PLGA)復合微球及其制備方法，屬于生物醫(yī)用高分子材料與生物活性藥物控釋制劑的交叉研究領域。
背景技術：
近年來，隨著基因工程重組技術和蛋白組學的發(fā)展，多肽和蛋白質類藥物已成為目前醫(yī)藥研發(fā)領域中最活躍，進展最快的部分，眾多新型多肽、蛋白類藥物在治療艾滋病、癌癥、肝炎、糖尿病、慢性疼痛等疾病效果顯著，另外在診斷以及疫苗預防疾病等方面也發(fā)揮著重要的作用。由于該類藥物體內(nèi)外不穩(wěn)定性，臨床上主要的劑型是溶液型注射劑和凍干粉針。注射給藥后，藥物很快就被清除或降解，為了達到療效常常需要頻繁、大劑量及長時間給藥，導致毒副作用及耐受性的產(chǎn)生，嚴重限制了其在臨床上的應用。
近年來，人們對于多肽、蛋白類藥物長效劑型的研究越來越多，采用可降解材料將藥物包封而成的緩釋肌注微球制劑發(fā)展很快。國內(nèi)外科學家在研制緩釋微球制劑時，使用最多的生物降解高分子材料是PLGA，因其具有良好的生物降解性、相容性和可吸收性，已被FDA批準為藥用輔料。目前已有肌注微球生產(chǎn)上市，用于治療一些激素依賴性疾病，如促黃體激素釋放激素、亮丙瑞林等聚乳酸緩釋微球，而國內(nèi)只上市了小分子肽類——亮丙瑞林的肌注微球仿制劑?？傮w而言，肌注微球的上市品種少，不能滿足臨床需求，另外還沒有成熟的制備エ藝可廣泛應用于多肽、蛋白微球的給藥體系。目前國內(nèi)外學者制備多肽及蛋白類藥物微球的方法較多，如溶劑揮發(fā)法、噴霧冷凍干燥法、相分離法、噴霧干燥法等，但都存在ー些不足。最常用的制備エ藝為溶劑揮發(fā)法，該法制得的微球包封率較好、藥物易于釋放，但藥物突釋現(xiàn)象明顯、呈現(xiàn)出兩相釋放即后期只能維持很低的血藥濃度水平難以滿足治療需求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提出ー種載蛋白質類藥物的PLGA復合微球的制備方法，該方法制備的復合微球藥物突釋低，藥物作用時間延長。實現(xiàn)上述目的的技術方案如下—種載蛋白質類藥物PLGA復合微球的制備方法，包括以下步驟(I) PLGA溶液的配制將PLGA溶解于有機溶液中形成有機相，PLGA的濃度為10% 25% (g/ml)；(2)含蛋白質類藥物的海藻酸鈉溶液的配制將蛋白質類藥物溶解于含穩(wěn)定劑的海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相，蛋白質類藥物的濃度為O. 5% 10% (g/ml),穩(wěn)定劑的濃度為O. I % 5% (g/ml);海藻酸鈉的濃度為
O.I5% (g/ml)；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進有機相中形成初乳(W/0)，有機相與內(nèi)水相的體積比為4 I 50 I ；(4)復乳的制備把初乳在攪拌的情況下加到外水相I中，乳化形成復乳(W/0/W);所述外水相I為含一定濃度乳化劑的CaCl2水溶液，初乳與外水相I的體積比為I : 10 I : 100;乳化劑的濃度為 O. 2% 5% (g/ml)，CaCl2 濃度為 O. I % 10% (g/ml)；(5)微球的形成將復乳溶液轉移到外水相2中，低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全，離心、洗滌后收集微球；所述外水相2為CaCl2溶液或含乳化劑的CaCl2溶液，其中，CaCl2濃度為O. I % 10%(g/ml)，乳化劑濃度為O. 05% 5% (g/ml)，外水相2的體積為復乳的O. 8 8倍；(6)冷凍干燥，即得載蛋白質類藥物的PLGA復合微球。 本發(fā)明的PLGA復合微球制備方法，是采用改良復乳-溶劑揮發(fā)法。將PLGA溶于有機溶媒中；將凍干的重組人干擾素或牛血清白蛋白等蛋白藥物溶解于含穩(wěn)定劑的海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；再將內(nèi)水相注射進有機相中，攪拌乳化成初乳(W/0);然后將初乳在攪拌的條件下加到含乳化劑的氯化鈣水溶液(外水相I)中，乳化成復乳(w/0/w);再在大體積的氯化鈣或含乳化劑的氯化鈣溶液(外水相2)中低速攪拌，使有機溶劑揮發(fā)完全；離心、洗滌、收集微球，冷凍干燥即得PLGA復合微球粉末。在其中一個實施例中，所述蛋白質類藥物為重組人干擾素_α。 在其中一個實施例中，所述蛋白質類藥物為牛血清白蛋白。在其中一個實施例中，步驟(I)中，PLGA的濃度為15% 20% (g/ml)。在其中一個實施例中，步驟⑵中，蛋白質類藥物的濃度為(g/ml)，穩(wěn)定劑的濃度為O. 5% 2. 5% (g/ml);海藻酸鈉的濃度為O. 5% 2. 0% (g/ml)。在其中一個實施例中，步驟(3)中，有機相與內(nèi)水相的體積比為10 I 15 : I ；乳化速度為3000 20000rpm，乳化時間為I 10分鐘。在其中一個實施例中，步驟(4)中，初乳與外水相I的體積比為I : 15 I : 75;乳化劑溶液的濃度為O. 2% 3% (g/ml)，CaCl2水溶液的濃度為O. 5% 4% (g/ml);復乳形成的攪拌速度為1000 3000rpm，乳化時間為5 20分鐘。在其中一個實施例中，步驟(5)中，外水相2中，CaCl2濃度為O. 5 4% (g/ml)，乳化劑濃度為O. 1% 3% (g/ml)，外水相2的體積為復乳的3 8倍；攪拌速度為200 2000rpm,離心速度為500 5000rpm,離心時間為5 20分鐘，洗漆次數(shù)為2 6次。在其中一個實施例中，步驟(2)中，所述的蛋白質類藥物的穩(wěn)定劑為泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、吐溫20、吐溫80、聚氧こ烯蓖麻油或明膠。在其中一個實施例中，所述的外水相I和外水相2中的乳化劑為聚こ烯醇、聚こニ醇1000、明膠、吐溫20或者聚こ烯吡咯烷酮。在其中一個實施例中，將所制微球進行冷凍干燥的條件為_15°C，48h ；-25°C,36h ;-50°C，24h ;-50°C 48h。本發(fā)明的另ー目的是提供ー種載蛋白質類藥物的PLGA復合微球。具體技術方案如下按照上述方法制備得到的載蛋白質類藥物的PLGA復合微球。本發(fā)明是在復乳法的內(nèi)水相中添加海藻酸鈉，外水相中添加氯化鈣，在復乳及微球固化過程中，海藻酸鈉與鈣離子螯合形成緩釋凝膠分散在微球骨架中，阻礙蛋白擴散，并使微球結構更為致密。極大地改善普通復乳法制備微球的理化性質，從而降低突釋和提高后期釋藥濃度，達到增加藥物穩(wěn)定性，延長藥物作用時間，減少注射次數(shù)和用量，提高藥物療效與經(jīng)濟效益的目的。本發(fā)明提出ー種改良復乳溶劑揮發(fā)法制備PLGA復合微球，在復乳法的基礎上，應用海藻酸鈉與鈣離子螯合形成緩釋凝膠的原理，以PLGA為微球載體，凍干注射用重組人干擾素-α、牛血清白蛋白等蛋白藥物為包裹對象，制備載藥微球。其結構致密表面孔洞較少，從體外釋放實驗可見該法制備的微球與普通復乳法相比，可降低藥物突釋，延長藥物作用時間。在同等條件下(其中，改良復乳法為本發(fā)明所述微球的制備方法，普通復乳法為內(nèi)水相中海藻酸鈉溶液改為PBS緩沖液(pH = 7. 4)，外水相I和外水相2均為不含氯化鈣的PVA溶液)制備的干擾素復合微球的理化性質數(shù)據(jù)如下表I不同制備方法所得復合微球的理化性質
^制備方法平均粒徑載藥量包封率^
「隱]_(μπι)(%)(%)(%)
改良復乳法 71.040.724361.8585.03
普通復乳法 73.690.650754.3785.27本發(fā)明的積極效果是本發(fā)明采用改良復乳-溶劑揮發(fā)法制備出的載藥PLGA復合微球，相對現(xiàn)有技術中的復乳-溶劑揮發(fā)法制備出的載藥PLGA微球，本發(fā)明所述的復合微球制備エ藝穩(wěn)定、可行，微球的形態(tài)圓整，表面光滑，結構致密，流動性好，粒度分布均勻，平均粒徑為70微米左右，載藥量為O. 6%以上，包封率為50%左右，其體外釋藥突釋小，體外釋藥性能符合長效制劑特征。將蛋白藥物制成緩釋微球制劑，可延長藥物作用時間，提高藥物療效與經(jīng)濟效益。


圖I本發(fā)明制備的干擾素PLGA復合微球的光學顯微鏡和掃描電子顯微鏡照片與現(xiàn)有技術中的干擾素PLGA復合微球的比較；圖2為實施例I所述干擾素PLGA復合微球的體外釋放曲線圖；圖3為實施例2所述干擾素PLGA復合微球的示差掃描量熱圖譜(DSC)；圖4實施例4所述牛血清白蛋白PLGA復合微球的掃描電子顯微鏡照片；圖5為實施例4所述牛血清白蛋白PLGA復合微球的考馬斯亮藍G-250染色圖。
具體實施例方式以下實施例對本發(fā)明作進ー步的描述，以便本領域的技術人員進ー步理解本發(fā)明，但不以任何形式限制本發(fā)明。實施例I干擾素PLGA復合微球的制備⑴PLGA溶液的配制將600mg PLGA溶解于4ml ニ氯甲烷中形成有機相(15% g/ml)。(2)干擾素海藻酸鈉溶液的配制
將6mg凍干重組人干擾素-α溶解于300ul含I %泊洛沙姆188和I. 5% (g/ml)海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進有機相中，在IOOOOrpm條件下攪拌乳化I分鐘以形成初乳(W/O)；(4)復乳的制備把初乳在1800rpm攪拌的情況下加到含2. 5 % (g/ml) PVA和3. 0% (g/ml) CaCl2溶液(外水相I)中，乳化10分鐘，乳化成復乳(W/0/W);其中初乳與外水相I的比例為I 40 ；(5)微球的形成將復乳溶液轉移到5倍量含O. 5 % (g/ml) PVA和O. 5 % (g/ml) CaCl2水溶液(外水相2)中,400rpm低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全，1800rpm離心5分鐘,用蒸懼水洗漆2次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為冷凍干燥的條件為_25°C，36h。將所制微球進行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀干擾素PLGA復合微球。
所得干擾素復合微球，如圖I所述，形態(tài)圓整，表面光滑，流動性好，粒度分布均勻，平均粒徑為71. 04 μ m，載藥量為O. 7243%，包封率為61. 85 %，體外釋藥性能符合長效制劑特征。圖I米用本實施例干擾素PLGA微球的光學顯微鏡(C)和掃描電子顯微鏡照片(a)，其中，(b)是根據(jù)現(xiàn)有的復乳法的技術(其中，改良復乳法為本發(fā)明所述復合微球的制備方法，普通復乳法為內(nèi)水相中海藻酸鈉溶液改為PBS緩沖液(pH = 7. 4)，外水相I和外水相2均為不含氯化鈣的PVA溶液。)得到干擾素PLGA復合微球的掃描電子顯微鏡照片，從圖中，可以顯著看出，本發(fā)明所述方法所制備的干擾素PLGA復合微球形態(tài)圓整，表面光滑，流動性更好。圖2為本實施例改良復乳法制備的干擾素PLGA復合微球( )與根據(jù)現(xiàn)有的普通復乳法(同等條件下，內(nèi)水相中海藻酸鈉溶液改為PBS緩沖液(pH = 7. 4)，外水相I和外水相2均為不含氯化鈣的PVA溶液)得到干擾素PLGA微球(X)的體外釋放曲線圖，可見，在同等條件下制備的干擾素微球，現(xiàn)有的復乳法制備的微球I天的突釋可達37%，大于本發(fā)明的所述方法制備的復合微球(改良復乳法)的突釋百分比30%。 實施例2干擾素PLGA復合微球的制備⑴PLGA溶液的配制將600mg PLGA溶解于4ml ニ氯甲烷中形成有機相(15% g/ml)。(2)干擾素海藻酸鈉(Sa)溶液的配制將6mg凍干重組人干擾素-α溶解于300ul含I %泊洛沙姆407和O. 8% (g/ml)海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進有機相中，在5000rpm條件下攪拌乳化10分鐘以形成初乳(W/O)；
(4)復乳的制備把初乳在1600rpm攪拌的情況下加到含2. 5 % (g/ml)PVA和I. 5 % (g/ml) CaCl2溶液(外水相I)中，乳化10分鐘，乳化成復乳(W/0/W);其中初乳與外水相I的比例為I 60 ；(5)微球的形成將復乳溶液轉移到3倍量含4% (g/ml) CaCl2水溶液(外水相2)中，400rpm低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全，2000rpm離心10分鐘,用蒸懼水洗漆3次、洗漆后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為冷凍干燥的條件為_15°C，48h。將所制微球進行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀干擾素PLGA復合微球。
所得干擾素微球的形態(tài)圓整，表面光滑，流動性好，粒度分布均勻(光學顯微鏡和掃描電子顯微鏡照片與實施例I基本相同，在此省略)平均粒徑為70.8 μ m，載藥量為
O.6009%，包封率為50. 1%，體外釋藥性能符合長效制劑特征。參見圖3，本實施例所述干擾素PLGA微球的差示掃描量熱器圖譜(DSC)，實驗條件為溫度范圍20 300°C ;升溫速度10°C /min ;氮氣流保護；測樣量約為5mg。DSC曲線中，橫坐標表示溫度，縱坐標為熱流速率(Heat Flow)，單位為mW/mg，峰向下為吸熱。其中，A為空白微球，B為重組人干擾素凍干粉；C為本實施例所制備的干擾素PLGA微球。從圖3可見，干擾素凍干粉分別在72°C和223°C有兩個吸熱峰?？瞻孜⑶騽t在50. 1°C和71. 4°C有吸熱峰。干擾素微球僅在57. 7°C有吸熱峰，比空白微球的第一個吸熱峰所對應的溫度升高了 7.6°C，另外在223°C的干擾素凍干粉的吸熱峰也消失了。從而初步確定至少有部分干擾素凍干粉被包裹在PLGA微球中，而不單是吸附在微球表面。實施例3干擾素PLGA復合微球的制備(I) PLGA溶液的配制將800mgPLGA溶解于4ml ニ氯甲烷中形成有機相(20% g/ml)。(2)干擾素海藻酸鈉溶液的配制將6mg凍干重組人干擾素-α溶解于300ul含I %泊洛沙姆188和O. 5% (g/ml)海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將上述內(nèi)水相注射進上述有機相中，在ISOOOrpm條件下攪拌乳化I分鐘以形成初乳(W/0)；(4)復乳的制備把初乳在2500rpm攪拌的情況下加到含2. 5 % (g/ml)PVA和I. 5 % (g/ml) CaCl2溶液(外水相I)中，乳化15分鐘，乳化形成復乳(W/0/W);其中初乳與外水相I的比例為I 30 ；(5)微球的形成將復乳溶液轉移到5倍量含O. 5 % (g/ml) PVA和3. 5 % (g/ml) CaCl2水溶液(外水相2)中，400rpm低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全,2500rpm離心10分鐘,用蒸懼水洗漆3次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為冷凍干燥的條件為_50°C，24h。
將所制微球進行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀干擾素PLGA微球。所得干擾素微球的，同實施例I和2 —祥，形態(tài)圓整，表面光滑，流動性好，粒度分布均勻，平均粒徑為53. 4 μ m，載藥量為O. 5637%，包封率為59. 9 %，體外釋藥性能符合長效制劑特征。實施例4牛血清白蛋白PLGA復合微球的制備(I) PLGA溶液的配制將300mg PLGA溶解于2ml ニ氯甲烷中形成有機相(15% g/ml)。(2)牛血清白蛋白海藻酸鈉溶液的配制
將3mg牛血清白蛋白溶解于150ul含1%泊洛沙姆188和I. 5% (g/ml)海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進有機相中，在IOOOOrpm條件下攪拌乳化I分鐘以形成初乳(W/O)；(4)復乳的制備把初乳在1500rpm攪拌的情況下加到含2. 5 % (g/ml)PVA和O. 5 % (g/ml) CaCl2溶液(外水相I)中，乳化10分鐘，乳化成復乳(W/0/W);其中初乳與外水相I的比例為I 45 ；(5)微球的形成將復乳溶液轉移到8倍量含O. 25% (g/ml)PVA和3. 5% (g/ml) CaCl2水溶液(外水相2)中，600rpm低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全,3500rpm離心5分鐘,用蒸懼水洗漆4次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為_50°C，48h。將所制微球進行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀牛血清白蛋白PLGA復合微球。所得牛血清白蛋白復合微球，參見圖4牛血清白蛋白的復合微球的掃描電子顯微鏡照片，其形態(tài)圓整，表面光滑，流動性好，粒度分布均勻，平均粒徑為100. 8 μ m，載藥量為
O.6981%，包封率為55. 48%，體外釋藥性能符合長效制劑特征?？捡R斯亮藍G-250染色液可以專屬性地對蛋白染色，游離的G-250可與蛋白結合形成藍色復合物，通過判斷復合微球的表面染色的深淺程度可得知復合微球表面蛋白的分布情況。本次實驗分別對空白微球a、本發(fā)明的改良復乳法b和普通復乳法c制備的牛血清白蛋白PLGA復合微球進行染色，結果見圖5。從圖可見空白微球呈淺藍色，普通復乳法、改良復乳法制備的牛血清白蛋白微球分別呈現(xiàn)出深藍色和藍色中夾雜著深藍色的微粒。說明與普通復乳法制備的微球比較，使用改良復乳法制備的微球表面蛋白的分布量較少。改良法制備的微球結構更緊密，更多的蛋白被包載在微球內(nèi)部，停留在微球表面的蛋白量相對減少。實施例5牛血清白蛋白PLGA復合微球的制備(I) PLGA溶液的配制將600mg PLGA溶解于4ml ニ氯甲烷中形成有機相(15% g/ml)。
(2)牛血清白蛋白海藻酸鈉溶液的配制將6mg牛血清白蛋白溶解于300ul含1%泊洛沙姆188和1.5% (g/ml)海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；⑶初乳的制備將內(nèi)水相注射進有機相中，在15000rpm條件下攪拌乳化2分鐘以形成初乳(W/O)；(4)復乳的制備把初乳在1800rpm攪拌的情況下加到含2. 5% (g/ml)PVA和I. 5% (g/ml)CaCl2溶 液(外水相I)中，乳化15分鐘成復乳(W/0/W);其中初乳與外水相I的比例為I : 52 ;(5)微球的形成將復乳溶液轉移到3. 5倍量含O. 4% (g/ml)PVA和O. 7% (g/ml)CaCl2水溶液(夕卜水相2)中,400rpm低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全,2000rpm離心10分鐘,用蒸懼水洗漆4次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為_50°C，24h。將所制微球進行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀牛血清白蛋白PLGA復合微球。所得牛血清白蛋白微球的形態(tài)圓整，表面光滑，流動性好，粒度分布均勻，平均粒徑為72. 5 μ m，載藥量為O. 524%，包封率為54. 70%，體外釋藥性能符合長效制劑特征。實施例6牛血清白蛋白PLGA復合微球的制備(I) PLGA溶液的配制將I. 2g PLGA溶解于8ml ニ氯甲烷中形成有機相(15% g/ml)。(2)牛血清白蛋白海藻酸鈉溶液的配制將12mg牛血清白蛋白溶解于600ul含2%吐溫80和1.5% (g/ml)海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相；(3)初乳的制備將內(nèi)水相注射進有機相中，在12000rpm條件下攪拌乳化I分鐘以形成初乳(W/O)；(4)復乳的制備把初乳在3000rpm攪拌的情況下加到含2% (g/ml)PVA和L 5% (g/ml) CaCl2溶液(外水相I)中，乳化5分鐘，乳化成復乳(W/0/W);其中初乳與外水相I的比例為I : 70 ;(5)微球的形成將復乳溶液轉移到6倍量含O. 25% (g/ml) PVA和O. 4375% (g/ml) CaCl2水溶液(外水相2)中，300rpm低速攪拌2h有機溶劑揮發(fā)完全,2000rpm離心15分鐘,用蒸懼水洗滌2次、洗滌后收集微球；(6)冷凍干燥的條件為_50°C，48h。將所制微球進行冷凍干燥，在上述冷凍干燥條件下得到白色疏松粉末狀牛血清白蛋白PLGA復合微球。所得牛血清白蛋白微球的形態(tài)圓整，表面光滑，流動性好，粒度分布均勻，平均粒徑為54. 7 μ m，載藥量為O. 5877%，包封率為58. 4%，體外釋藥性能符合長效制劑特征。
以上所述實施例僅表達了本發(fā)明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但并不能因此而理解為對本發(fā)明專利范圍的限制。應當指出的是，對于本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬于本發(fā)明的保護范圍。因此，本發(fā)明專利的保護范圍應以所附權利要求為準。權利要求
1.ー種載蛋白質類藥物的PLGA復合微球的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)PLGA溶液的配制 將PLGA溶解于有機溶液中形成有機相，PLGA的濃度為10% 25% (g/ml)； (2)含蛋白質類藥物的海藻酸鈉溶液的配制 將蛋白質類藥物溶解于含穩(wěn)定劑的海藻酸鈉溶液中形成內(nèi)水相，蛋白質類藥物的濃度為O. 5% 10% (g/ml),穩(wěn)定劑的濃度為O. I % 5% (g/ml);海藻酸鈉的濃度為O. I % 5% (g/ml)； (3)初乳的制備 將內(nèi)水相注射進有機相中形成初乳，有機相與內(nèi)水相的體積比為4 : I 50 : I; (4)復乳的制備 把初乳在攪拌的情況下加到外水相I中，乳化形成復乳；所述外水相I為含一定濃度乳化劑的CaCl2水溶液，初乳與外水相I的體積比為I : 10 I : 100 ;乳化劑的濃度為O. 2% 5% (g/ml)，CaCl2 濃度為 O. I % 10% (g/ml)； (5)微球的形成 將復乳溶液轉移到外水相2中，低速攪拌至有機溶劑揮發(fā)完全，離心、洗滌后收集微球；所述外水相2為CaCl2溶液或含乳化劑的CaCl2溶液，其中，CaCl2濃度為O. 1% 10%(g/ml)，乳化劑濃度為O. 05% 5% (g/ml),外水相2的體積為復乳的O. 8 8倍； (6)冷凍干燥，即得載蛋白質類藥物的PLGA復合微球。
2.根據(jù)權利要求I所述制備方法，其特征在于，所述蛋白質類藥物為重組人干擾素-α或牛血清白蛋白。
3.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在于，步驟(I)中，PLGA的濃度為15% 20% (g/ml);所述有機溶液為ニ氯甲烷。
4.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在于，步驟(2)中，蛋白質類藥物的濃度為1% 5% (g/ml),穩(wěn)定劑的濃度為O. 5% 2. 5% (g/ml);海藻酸鈉的濃度為O. 5% 2.0% (g/ml)。
5.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在于，步驟(3)中，有機相與內(nèi)水相的體積比為10:1 15:1 ;乳化速度為3000 20000rpm，乳化時間為I 10分鐘。
6.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在干，步驟(4)中，初乳與外水相I的體積比為1:15 1:75 ;乳化劑溶液的濃度為O. 2% 3%(g/ml),CaCl2水溶液的濃度為O. 5% 4% (g/ml);復乳形成的攪拌速度為1000 3000rpm,乳化時間為5 20分鐘。
7.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在于，步驟(5)中，外水相2中，CaCl2濃度為O. 5% 4% (g/ml)，乳化劑濃度為O. 1% 3% (g/ml);外水相2的體積為復乳的3 8倍；攪拌速度為200 2000rpm，離心速度為500 5000rpm，離心時間為5 20分鐘，洗漆次數(shù)為2 6次。
8.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在于，步驟(2)中，所述的蛋白質類藥物的穩(wěn)定劑為泊洛沙姆188、泊洛沙姆407、吐溫20、吐溫80、聚氧こ烯蓖麻油或明膠。
9.根據(jù)權利要求I或2所述制備方法，其特征在于，所述的外水相I和外水相2中的乳化劑為聚こ烯醇、聚こニ醇1000、明膠、吐溫20或者聚こ烯吡咯烷酮。
10.根據(jù)權利要求I或2述制備方法，其特征在干，所制微球進行冷凍干燥的條件為-15°C，48h ；-25°C，36h ；-50°C，24h ;或-50°C 48h。
11.根據(jù)權利要求1-10任一項制備方法得到的載體蛋白質類藥物的PLGA復合微球。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種載蛋白質類藥物的PLGA復合微球及其制備方法，其采用改良復乳-溶劑揮發(fā)法，即在復乳法的基礎上，應用海藻酸鈉與鈣離子螯合形成緩釋凝膠的原理，以PLGA為微球載體，凍干注射用重組人干擾素-α、牛血清白蛋白等為包裹對象，制備載藥微球。其形態(tài)圓整，粒度分布均勻，平均粒徑分布在70微米左右，載藥量為0.6％以上，包封率可達50％左右，體外釋藥性能符合長效制劑特征。
文檔編號A61K47/36GK102727899SQ20121011969
公開日2012年10月17日 申請日期2012年4月20日 優(yōu)先權日2012年4月20日
發(fā)明者張永明, 李姝瑾, 羅宇燕 申請人:中山大學附屬第三醫(yī)院