專利名稱：樹豆酮酸a在制備糖尿病伴隨癥及高脂血癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及化合物的新用途，具體涉及樹豆酮酸A及其藥用衍生物，特別是樹豆酮酸A及其藥用鹽或酯在制備糖尿病伴隨癥或高脂血癥藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
高脂血癥是由于脂肪代謝紊亂引起的血中總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)單項或多項水平高于正常標(biāo)準(zhǔn)。高脂血癥的主要危害是導(dǎo)致動脈粥樣硬化。動脈血管堵塞使全身重要器官長期供血供氧不足，造成臟器器質(zhì)性的和功能性的損傷，從而導(dǎo)致眾多的相關(guān)疾病。其中最為常見的一種致命性疾病就是冠心病。高血脂是促進(jìn)高血壓、糖耐量異常、糖尿病的一個重要危險因素，還會導(dǎo)致脂肪肝，肝硬化，胰腺炎，膽石癥，高尿酸血癥，腎功能衰竭等。高脂血癥可分為原發(fā)性和繼發(fā)性兩類。其中原發(fā) 性高血脂癥主要是由于遺傳或者飲食不當(dāng)?shù)仍蛟斐?。而繼發(fā)性高血脂癥則是由其他中間原發(fā)疾病如糖尿病、肥胖癥、甲狀腺疾病、腎臟疾病、肝病、胰腺疾病等弓I起。肥胖伴高脂血癥者更容易出現(xiàn)胰島素抵抗進(jìn)而誘發(fā)糖尿病。糖尿病是由于體內(nèi)胰島素絕對或相對分泌不足而引起的以糖、脂肪、蛋白質(zhì)等代謝紊亂為主的內(nèi)分泌疾病，其中2型糖尿病占整個糖尿病比例的93. 7%，并且中國是全球2型糖尿病患病率增長較快的國家之一。由于長期慢性高血糖誘發(fā)脂肪和蛋白代謝紊亂，繼而引起一系列的眼、腎、神經(jīng)、心血管等并發(fā)癥，對人類健康、壽命和生活質(zhì)量構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，同時也是糖尿病患者致殘和早亡的主要原因。很多糖尿病人都伴有高脂血癥，因此人們通常把糖尿病與高脂血癥稱為姐妹病，并認(rèn)為高血脂是糖尿病的繼發(fā)癥。高血脂誘發(fā)胰島素抵抗進(jìn)而誘發(fā)糖尿病，而糖尿病引起脂代謝紊亂進(jìn)而引致高血脂，所以高血脂癥和高血糖癥之間之間是相互促進(jìn)的關(guān)系。胰島素抵抗是2型糖尿病的重要病因和顯著特征，從理論上分析，糖尿病病人針對胰島素抵抗的治療將大大減少其他降糖藥物的用量，減輕胰腺胰島細(xì)胞分泌胰島素的壓力，延緩2型糖尿病向I型轉(zhuǎn)化的進(jìn)程，使糖尿病病人減少并發(fā)癥的發(fā)生，降低死亡率。目前針對胰島素抵抗的常用治療藥物為胰島素增敏劑，噻唑烷二酮類(TZDs)是一類比較得到公認(rèn)的胰島素增敏劑。其代表藥物有曲格列酮、吡格列酮、羅格列酮。但是，這類藥物通過激活過氧化物酶體增殖子活化受體Y (PPARy)活性增強(qiáng)胰島素敏感性的同時，還可增加脂肪細(xì)胞的增殖，從而導(dǎo)致水鈉潴留，體重增加甚至肥胖等。TZDs還可致貧血、血紅蛋白和紅細(xì)胞減少，對心功能不全者宜慎重應(yīng)用。作為第一個噻唑烷二酮類藥物，曲格列酮經(jīng)過140萬例人次研究，暴露有肝臟毒性的缺點，于上市后三年被美國FDA禁止臨床使用。2010年9月以來，應(yīng)用廣泛的馬來酸羅格列酮由于可能導(dǎo)致心臟出現(xiàn)問題而相繼被歐盟藥品管理局、美國食品藥品管理局和中國國家食品藥品監(jiān)督管理局建議暫停使用，僅用于那些其他藥品不能控制血糖的2型糖尿病患者，大大限制了這類藥物的使用。因此，雖然有羅格列酮緩解糖尿病人高血脂癥狀的報道，但作為治療慢性代謝疾病的藥物，需要終身服用，其安全性是首要條件。因此PPAR Y激活劑類型的胰島素增敏劑并不適合糖尿病人長期服用，更不適合用于治療高脂血癥，或者糖尿病伴隨的其他疾病如肝損傷，胰腺損傷或者腎損傷等。樹豆酮酸A是本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的一種新化合物(CN101422450A)，并通過ob/ob型先天性肥胖高血糖小鼠證明其具有降糖減肥的功效。樹豆酮酸A的藥用衍生物，特別其藥用酯或鹽，可以按常規(guī)方法制備得到。這些衍生物在體內(nèi)可以重新解離出樹豆酮酸A，具有與樹豆酮酸A類似的生物活性。在之前的申請文件中，并未涉及治療糖尿病伴隨癥或高脂血癥用途的研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供樹豆酮酸A及其藥用衍生物在制備治療糖尿病伴隨癥藥物中的應(yīng)用。特別的，樹豆酮酸A藥用衍生物為樹豆酮酸A的藥用鹽或藥用酯；其藥用鹽優(yōu)選為樹豆酮酸A的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽；其酯優(yōu)選為樹豆酮酸A的甲基酯、乙基酯、丙基酯、異丙基 酯、丁基酯、異丁基酯、叔丁基酯。這些藥用鹽和酯在體內(nèi)可以轉(zhuǎn)化或水解成樹豆酮酸A，產(chǎn)生與樹豆酮酸A相一致的療效。糖尿病伴隨癥為糖尿病伴高脂血癥、糖尿病伴肝臟損傷、糖尿病伴腎臟損傷或糖尿病伴胰腺損傷。2型糖尿病SD大鼠模型動物的特點是糖尿病和高脂血癥。動物實驗數(shù)據(jù)表明，樹豆酮酸A在降低2型糖尿病SD大鼠血糖的同時，顯著降低了動物的血清甘油三酯水平、總膽固醇水平和低密度脂蛋白膽固醇水平，表明樹豆酮酸A可以治療或改善糖尿病伴高脂血癥。2型糖尿病SD大鼠給予樹豆酮酸A進(jìn)行試驗治療，結(jié)果表明，與模型組相比，治療組動物的肝體比、AST、ALT均有顯著下降，病理學(xué)研究結(jié)果證實，樹豆酮酸A可減少肝細(xì)胞的點狀壞死，其預(yù)防肝腫大和保護(hù)肝臟的作用優(yōu)于羅格列酮。實驗數(shù)據(jù)表明樹豆酮酸A可以治療或改善糖尿病伴肝臟損傷。給予樹豆酮酸A后，糖尿病SD大鼠與模型組相比，胰島素敏感指數(shù)、胰島P細(xì)胞功能指數(shù)顯著升高，胰島素抵抗指數(shù)顯著下降。病理學(xué)研究結(jié)果證實，樹豆酮酸A可逆轉(zhuǎn)糖對大鼠胰島組織的損傷，并對胰臟具有保護(hù)和修復(fù)作用。先天性肥胖Zucker大鼠模型動物的特點是血糖值基本正常，但出生后其血清甘油三酯水平、總膽固醇水平異常偏高，形成典型的高脂血癥。動物實驗數(shù)據(jù)表明，樹豆酮酸A能夠顯著降低先天性肥胖Zucker大鼠的血清甘油三酯水平、總膽固醇水平，表明樹豆酮酸A具有治療或改善高脂血癥的作用。


圖I.不同治療組大鼠胰臟組織HE染色病理切片圖(X 100)，圖中，(A)正常對照組，(B) 2型糖尿病模型組，(C)樹豆酮酸A治療組，(D)文迪雅治療組；
圖2.不同治療組大鼠肝臟組織HE染色病理切片圖(X 100)，圖中，(A)正常對照組，(B) 2型糖尿病模型組，(C)樹豆酮酸A治療組，(D)文迪雅治療組；
圖3.不同治療組大鼠腎臟組織HE染色病理切片圖，圖中，(A)正常對照組，(B) 2型糖尿病模型組，(C)樹豆酮酸A治療組，(D)文迪雅治療組；圖4.藥物對3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化的影響圖(XlOO)(油紅染色法)；
圖5.樹豆酮酸A對脂肪細(xì)胞PPAR y和C/EBP a mRNA水平的影響 圖6.藥物對脂肪細(xì)胞GLUT4表達(dá)的影響。
具體實施例方式下面結(jié)合實驗及實驗數(shù)據(jù)，進(jìn)一步說明本發(fā)明。 樹豆酮酸A在SD大鼠2型糖尿病動物模型上的藥效學(xué)實驗結(jié)果動物分組及給藥選取高糖高脂膳食伴腹腔注射小劑量鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病SD雄性大鼠，根據(jù)空腹血糖和體重均勻分為模型組、治療組以及陽性對照組。每組8只。另有8只正常大鼠作隨行觀察。(I)模型組等體積混合的吐溫-80和二甲基亞砜用蒸餾水十倍稀釋，以每IOOg體重ImL進(jìn)行腹腔注射，每日一次，直到實驗結(jié)束。(2)治療組樹豆酮酸A用等體積混合的吐溫80和二甲基亞砜溶解，配成lOmg/mL的儲備液。臨用時將儲備液用蒸餾水十倍稀釋，以每IOOg體重ImL進(jìn)行腹腔注射，每日一次，直到實驗結(jié)束，劑量為10mg/kg/d。(3)陽性藥組馬來酸羅格列酮片(商品名文迪雅，葛蘭素史克公司)加水崩解后制成0. 4mg/mL的懸液，以每IOOg體重ImL灌胃，每日一次,直到實驗結(jié)束,劑量為4mg/kg/d0測定方法
(1)空腹血糖測定給藥期間每隔7天大鼠尾靜脈取血，用羅康全活力型血糖儀(羅氏)測定空腹8h血糖值；
(2)葡萄糖耐受量測定末次給藥后次日大鼠禁食4h，測定空腹4h血糖值(0時)后，立即按2g/kg灌服葡萄糖溶液,并測定灌服葡萄糖后30min、60min、120min血糖值，即大鼠葡萄糖耐受量OGTT ；
(3)血清生化分析末次給藥后日大鼠禁食16h后，腹主動脈采血，離心分離得血清，采用全自動生化分析儀檢測大鼠血清中甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、高/低密度脂蛋白(H/LDL-C)，肝臟谷草轉(zhuǎn)氨酶AST、谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、尿素、肌酐水平。大鼠胰島素ELISA試劑盒測定血清胰島素水平，并計算胰島素敏感指數(shù)ISI [= I/(空腹血糖X胰島素)]，穩(wěn)態(tài)胰島抵抗指數(shù)HOMA-IR = (FBGXFINS/22. 5)、穩(wěn)態(tài)胰島^細(xì)胞功能指數(shù)HBCI [ = 22. 5X胰島素/(空腹血糖-3. 5)]。(4)臟器組織及病理切片處死大鼠，剖取肝臟稱重，計算臟器系數(shù)RLB(=肝重/體重)，同時取胰、腎臟。經(jīng)HE染色顯微鏡下進(jìn)行觀察病理切片并拍照。實驗結(jié)果
(I)樹豆酮酸A顯著降低2型糖尿病大鼠的空腹血糖水平表I顯示，正常大鼠在實驗期間的FBG水平保持在7. 5mM以下，而模型組大鼠的FBG則從實驗開始時的22. 5±4. 5mM上升到實驗結(jié)束時的26.8±4. 7mM。說明建立的糖尿病模型穩(wěn)定可靠。T2DM大鼠經(jīng)連續(xù)四周的樹豆酮酸A或文迪雅治療后，其FBG水平分別為18. 7 ±8. OmM和20. I ±7. 9mM，和模型組FBG比較有顯著性差異(P < 0. 05)。說明樹豆酮酸A同文迪雅一樣，可降低T2DM大鼠的FBG水平。
表I樹豆酮酸A對2型糖尿病大鼠的FBG水平的影響
權(quán)利要求
1.樹豆酮酸A及其藥用衍生物在制備治療糖尿病伴隨癥藥物中的應(yīng)用。
2.樹豆酮酸A及其藥用衍生物在制備有益于糖尿病伴隨癥患者食用的功能性保健品中應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于糖尿病伴隨癥為糖尿病伴高脂血癥、糖尿病伴肝臟損傷、糖尿病伴腎臟損傷或糖尿病伴胰臟損傷。
4.樹豆酮酸A及其藥用衍生物在制備治療高脂血癥藥物中的應(yīng)用。
5.樹豆酮酸A及其藥用衍生物在制備有益于高脂血癥患者食用的功能性保健品中應(yīng)用。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2、4或5所述的應(yīng)用，其特征在于樹豆酮酸A藥用衍生物為樹豆酮酸A的藥用鹽或藥用酯。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于樹豆酮酸A藥用鹽為樹豆酮酸A的鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于樹豆酮酸A藥用酯為為樹豆酮酸A的甲基酷、乙基酷、丙基酷、異丙基酷、丁基酷、異丁基酷、叔丁基酷。
全文摘要
本發(fā)明公開了樹豆酮酸A及其藥用衍生物在制備糖尿病伴隨癥或高脂血癥藥物中的應(yīng)用。動物實驗數(shù)據(jù)表明，樹豆酮酸A在降血糖的同時，可以顯著降低2型糖尿病SD大鼠的血清甘油三酯水平、總膽固醇水平和低密度脂蛋白膽固醇水平，表明樹豆酮酸A可以治療或改善糖尿病伴高脂血癥；病理學(xué)研究結(jié)果證實，樹豆酮酸A可減少肝細(xì)胞的點狀壞死，可以治療或改善糖尿病伴肝臟損傷，逆轉(zhuǎn)糖對大鼠胰島組織的損傷，并對胰腺具有保護(hù)和修復(fù)作用。樹豆酮酸A可以顯著降低先天肥胖Zucker大鼠的血清甘油三酯水平、總膽固醇水平，表明樹豆酮酸A可以治療或改善高脂血癥。
文檔編號A61P3/10GK102670576SQ20121011966
公開日2012年9月19日 申請日期2012年4月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月20日
發(fā)明者沈小玲, 王璐, 符林春, 胡英杰, 邱聲祥, 麥兆 申請人:廣州允中生物科技有限公司