專利名稱：四環(huán)素類藥物聯(lián)合應(yīng)用氟康唑在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用及其產(chǎn)品的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及四環(huán)素類藥物多西環(huán)素和米諾環(huán)素聯(lián)合氟康唑在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用，進(jìn)一步涉及鈣通道阻滯劑貝尼地平、硝苯地平及鈣離子螯合劑EDTA聯(lián)合氟氯唑及氟康唑與多西環(huán)素/米諾環(huán)素對(duì)不同敏感程度白色念珠菌的聯(lián)合抗真菌作用。本發(fā)明還涉及含有上述組份或含量的產(chǎn)品。
背景技術(shù)：
近年來，隨著惡性腫瘤、艾滋病、自身免疫病等發(fā)病率的增多，導(dǎo)管插管和器官移植等技術(shù)的開展，廣譜抗生素、皮質(zhì)激素和免疫抑制劑的廣泛使用，真菌感染的發(fā)病率急劇上升(Odds FC. Pathogenesis of Candida infections. J Am Acad Dermatol. 1994,31 :S2-S5)。特別是呼吸機(jī)與大量生物材料的應(yīng)用，使得生物膜(biofilm，BF)相關(guān)真菌的感染發(fā)生率不斷增加。BF形成是臨床耐藥性的重要機(jī)制之一，BF相關(guān)真菌感染的臨床治療非常困難。研究表明，AIDS患者晚期感染真菌后，超過三分之一耐藥，對(duì)唑類藥物耐藥率高達(dá) 65% (Saltanat H, Li H, Geng XH et al. Clinical distribution and drugresistance of Candida infection. Journal of Xingjiang Medical University 2008，31(8) :1058-1060.)。新藥研究與聯(lián)合用藥研究均是解決真菌耐藥的途徑。而聯(lián)合用藥其前期投入少、效果顯著，受到國內(nèi)外的關(guān)注。聯(lián)合用藥研究包括兩種抗真菌藥聯(lián)合及非抗真菌藥與抗真菌藥聯(lián)合，由于抗真菌藥物品種有限，新的抗真菌作用價(jià)格昂貴且副作用明顯，使得非抗真菌藥物與抗真菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用研究備受關(guān)注。氟康唑(FLC)作為安全、有效、價(jià)廉的唑類抗真菌藥物，臨床應(yīng)用非常廣泛，導(dǎo)致真菌耐藥率不斷上升。因此，與FLC的聯(lián)合抗真菌作用成為研究的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)室前期研究發(fā)現(xiàn)，米諾環(huán)素(MINO)與FLC具有協(xié)同抗真菌作用，特別是對(duì)耐藥白色念珠菌效果明顯。研究二者協(xié)同機(jī)制時(shí)發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)外鈣離子環(huán)境的改變能明顯影響協(xié)同抗真菌作用。非選擇性鈣離子通道阻滯劑貝尼地平(BEN)、選擇性L型鈣離子通道阻滯劑硝苯地平(NIF)及鈣離子螯合劑EDTA均對(duì)其協(xié)同抗真菌作用產(chǎn)生較強(qiáng)的增效作用。此外，進(jìn)一步研究表明，同為四環(huán)素類抗生素的多西環(huán)素(DOX)與FLC合用也具有良好的協(xié)同抗真菌作用，并且鈣調(diào)節(jié)劑BEN、NIF及EDTA對(duì)DOX與FLC的協(xié)同抗真菌作用同樣具有增效作用，并且NIF、EDTA對(duì)FLC也有一定的增效作用。前已述及，加強(qiáng)新藥開發(fā)是抗耐藥真菌感染的重要策略。新藥開發(fā)包括全新化合物的活性研究，老藥新作用研究。新機(jī)制、新祀點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)會(huì)給抗真菌帶來新的希望。目前抗真菌的機(jī)制包括抑制真菌細(xì)胞壁的合成；抑制真菌細(xì)胞膜主要成分麥角留醇的合成以及直接作用于麥角留醇的結(jié)構(gòu)，作用于真菌核酸代謝等。是否還存在其它抗真菌途徑與機(jī)制有待進(jìn)一步研究。鈣離子是白色念珠菌重要的信使物質(zhì)之一，參與細(xì)胞增殖分化、生長(zhǎng)衰老等一系列生命活動(dòng)的信息傳遞與調(diào)控。細(xì)胞內(nèi)鈣超載一直被認(rèn)為是細(xì)胞損傷的重要病理環(huán)節(jié)。.研究發(fā)現(xiàn)，真菌細(xì)胞對(duì)藥物作用導(dǎo)致的病理性損傷后，穩(wěn)態(tài)平衡能力是其耐藥性產(chǎn)生的主要決定因素(Hameed S, Dhamgaye S, Singh A, Goswami SK, Prasad R(2011) CalcineurinSignaling and Membrane Lipid Homeostasis Regulates Iron Mediated MultiDrugResistance Mechanisms in Candida albicans. PLoS ONE 6(4) :el8684.)。近期研究報(bào)道及我們的研究也不斷發(fā)現(xiàn)，鈣調(diào)節(jié)通路與抗真菌有關(guān)，有望成為新的抗真菌機(jī)制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為克服目前真菌感染問題，提供一種四環(huán)素類藥物多西環(huán)素或米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用氟康唑在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用；本發(fā)明還提供了鈣通道阻滯劑貝尼地平、硝苯地平及鈣離子螯合劑EDTA聯(lián)合氟氯唑及氟康唑與多西環(huán)素/米諾環(huán)素在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及含有上述組份或含量的產(chǎn)品。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案四環(huán)素類藥物多西環(huán)素或米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用氟康唑在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用。所述真菌為白色念珠菌。聯(lián)合應(yīng)用時(shí)多西環(huán)素與氟康唑的最低抑菌濃度為16μ g/ml與4μ g/ml ;米諾環(huán)素與氟康唑的最低抑菌濃度為16 μ g/ml與2μ g/ml。結(jié)果表明，大于16 μ g/ml多西環(huán)素與大于4 μ g/ml的氟康唑聯(lián)合應(yīng)用均有效；大于16 μ g/ml米諾環(huán)素與大于2 μ g/ml的氟康唑聯(lián)合應(yīng)用均有效；加入貝尼地平、硝苯地平或金屬離子螯合劑EDTA，平板劃線與液體定量法均證實(shí)能增強(qiáng)上述聯(lián)合抗真菌作用。當(dāng)加入貝尼地平、硝苯地平或金屬離子螯合劑EDTA后，下列濃度配比有效貝尼地平多西環(huán)素氟康唑=8:4: 2 ( μ g/ml)；貝尼地平米諾環(huán)素氟康唑=8 16 I ( μ g/ml)；硝苯地平多西環(huán)素氟康唑=8:4: I ( μ g/ml)；硝苯地平米諾環(huán)素氟康唑=8:8: I ( μ g/ml)；EDTA :多西環(huán)素氟康唑=O. 5mM : 4 μ g/ml : I μ g/ml ；EDTA :米諾環(huán)素氟康唑=O. 5mM : 4 μ g/ml : O. 5 μ g/ml進(jìn)一步對(duì)鈣調(diào)節(jié)劑的有效濃度進(jìn)行評(píng)價(jià)時(shí)，發(fā)現(xiàn)當(dāng)多西環(huán)素與氟康唑濃度為16 μ g/ml與4μ g/ml,米諾環(huán)素與氟康唑的最低抑菌濃度為16 μ g/ml與2μ g/ml時(shí),加入的最低鈣調(diào)節(jié)劑的有效濃度貝尼地平為4 μ g/ml，硝苯地平為8 μ g/ml，EDTA為O. 25mM。本發(fā)明還提供了一種含有上述組份或含量的產(chǎn)品。本發(fā)明采用白色念珠菌細(xì)胞進(jìn)行研究，利用平板劃線法及液體定量法，分別評(píng)價(jià)不同聯(lián)合用藥組合的聯(lián)合抗真菌作用。具體內(nèi)容如下A:FLC與D0X/MIN0聯(lián)合抗白色念珠菌作用采用液體定量法測(cè)定聯(lián)合用藥時(shí)最低有效濃度，并以FICI法選擇最佳藥物組合濃度及評(píng)價(jià)藥物聯(lián)合用藥的作用。B :鈣調(diào)節(jié)劑對(duì)FLC與D0X/MIN0聯(lián)合抗白色念珠菌作用的影響實(shí)驗(yàn)分空白對(duì)照組，F(xiàn)LC、D0X/MIN0、BEN/NIF/EDTA 單用組，F(xiàn)LC 與 D0X/MIN 或 BEN/NIF/EDTA 兩藥聯(lián)用組，F(xiàn)LC與D0X/MIN及BEN/NIF/EDTA三藥聯(lián)用組四組，利用平板劃線法觀察加入鈣調(diào)節(jié)劑后對(duì)各組抗白色念珠作用的影響。并利用液體定量法測(cè)定鈣調(diào)節(jié)劑對(duì)FLC與D0X/MIN0合用的聯(lián)合最低有效濃度。
C :四環(huán)素類藥物為臨床常用的抗菌藥物，如果能在抗真菌方面發(fā)揮作用，特別是對(duì)細(xì)菌與真菌混合感染的治療，意義重大。本研究表明，四環(huán)素類聯(lián)合FLC產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用，可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍。鈣離子通道阻滯劑是一類常用的降壓藥，可分為非選擇性和選擇性鈣離子通道阻滯劑兩大類。擴(kuò)大鈣離子通道阻滯劑類藥物的應(yīng)用范圍既有明顯的可行性和實(shí)際的臨床意義。EDTA是FDA新認(rèn)證的可以用于食品的添加劑，其對(duì)抗真菌作用的增效作用，可使其擴(kuò)大應(yīng)用范圍，具有良好的應(yīng)用前景。總之，本發(fā)明包含 FLC與D0X/MIN0聯(lián)合應(yīng)用產(chǎn)生協(xié)同抗白色念珠菌的作用，以及鈣調(diào)節(jié)劑BEN、NIF及EDTA對(duì)FLC及FLC與四環(huán)素類藥物的聯(lián)合抗真菌作用具有增效作用。上述發(fā)現(xiàn)為臨床提供了聯(lián)合用藥作為治療真菌感染的治療方案。另外，鈣調(diào)節(jié)劑的加入可以增強(qiáng)藥物的抗真菌作用，揭示其協(xié)同作用機(jī)制可能與細(xì)胞內(nèi)鈣離子有關(guān)，為研究抗真菌藥物作用的新靶點(diǎn)提供思路。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn)與效果I.本發(fā)明表明，F(xiàn)LC與四環(huán)素類藥物DOX和MINO聯(lián)用時(shí)，可以產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用。對(duì)氟康唑耐藥的白色念珠菌菌株(MIC > 256 μ g/ml)，聯(lián)合用藥可使其最低抑菌濃度明顯降低，16 μ g/ml 的 DOX 與 4 μ g/ml 的 FLC 合用及 16 μ g/ml 的 MINO 與 2 μ g/ml 的 FLC 合用均可以殺滅80%以上的真菌，濃度再增大，效果更強(qiáng)。2.本發(fā)明表明，鈣調(diào)節(jié)劑非選擇性鈣通道阻滯劑貝尼地平、選擇性L型鈣通道阻滯劑硝苯地平及鈣離子螯合劑EDTA均能增強(qiáng)FLC與D0X/MIN0合用的聯(lián)合抗真菌作用。BEN濃度為8 μ g/ml時(shí)，NIF濃度為8 μ g/ml，EDTA濃度為O. 5mM時(shí)對(duì)上述聯(lián)合用藥組合均有明顯的聯(lián)合抗真菌作用。其中，BEN的加入，可使FLC與DOX聯(lián)用時(shí)的濃度分別從4μ g/ml、16 μ g/ml降為2 μ g/ml、4 μ g/ml ;I丐離子螯合齊Li EDTA的加入,可使其降為I μ g/ml、4 μ g/ml, NIF的加入可使其降到I μ g/ml,4 μ g/ml。另外，BEN可使FLC與MINO的濃度從2 μ g/ml、16 μ g/ml 降為 I μ g/ml>8 μ g/ml ；EDTA 可使聯(lián)合用藥的 MIC 降為 O. 5 μ g/ml>4 μ g/ml ；NIF 可使其降到 I μ g/ml、8 μ g/ml。3.本發(fā)明表明，破壞細(xì)胞內(nèi)鈣平衡可能是聯(lián)合抗真菌作用的機(jī)制，為新藥的開發(fā)及老藥新用提供可能的研究方向。4.四環(huán)素及鈣離子通道阻滯劑在臨床上廣泛應(yīng)用，其對(duì)FLC抗真菌的增效作用，可擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，并且降低FLC的最低有效濃度，降低抗真菌藥物的用藥量，從而降低藥物的不良反應(yīng)的發(fā)生。


圖I :鈣調(diào)節(jié)劑貝尼地平(BEN)，硝苯地平(NIF)，鈣螯合劑EDTA對(duì)氟康唑(FLC)及多西環(huán)素(DOX)抗白色念珠菌(CA10、CA137、CA8、CA14)作用的影響(48h生長(zhǎng)結(jié)果)。菌株的分布如示意圖。 圖2 :鈣調(diào)節(jié)劑貝尼地平(BEN)，硝苯地平(NIF)，鈣螯合劑EDTA對(duì)氟康唑(FLC)及米諾環(huán)素(MINO)抗白色念珠菌(CA10、CA137、CA8、CA14)作用的影響(48h生長(zhǎng)結(jié)果)。菌株的分布如示意圖。圖3 :生長(zhǎng)率差值法(ΛΕ法)評(píng)價(jià)非選擇性鈣離子通道阻滯劑貝尼地平(BEN)對(duì)氟康唑(FLC)與四環(huán)素類藥物(TC)聯(lián)合用藥的增效作用。縱坐標(biāo)表示BEN對(duì)兩藥合用的生長(zhǎng)率差值，橫坐標(biāo)表示不同的四環(huán)素類藥物與氟康唑聯(lián)合。(FT :氟康唑與四環(huán)素類藥物合用；FLC+MINO :氟康唑與米諾環(huán)素合用；FLC+DOX :氟康唑與多西環(huán)素合用)。圖4 :生長(zhǎng)率差值法(Λ E法)評(píng)價(jià)選擇性鈣離子通道阻滯劑硝苯地平(NIF)對(duì)對(duì)氟康唑(FLC)與四環(huán)素類藥物(TC)聯(lián)合用藥的增效作用?？v坐標(biāo)表示NIF對(duì)兩藥合用的生長(zhǎng)率差值，橫坐標(biāo)表示不同的四環(huán)素類藥物與氟康唑聯(lián)合。(FT :氟康唑與四環(huán)素類藥物合用；FLC+MIN0 :氟康唑與米諾環(huán)素合用；FLC+D0X :氟康唑與多西環(huán)素合用)。圖5 :生長(zhǎng)率差值法(ΛΕ法)評(píng)價(jià)鈣離子螯合劑EDTA對(duì)對(duì)氟康唑(FLC)與四環(huán)素類藥物(TC)聯(lián)合用藥的增效作用?？v坐標(biāo)表示EDTA對(duì)兩藥合用的生長(zhǎng)率差值，橫坐標(biāo)表 示不同的四環(huán)素類藥物與氟康唑聯(lián)合。(FT:氟康唑與四環(huán)素類藥物合用；FLC+MIN0:氟康唑與米諾環(huán)素合用；FLC+D0X:氟康唑與多西環(huán)素合用)。
圖6 :四株不同敏感程度的白色念珠菌接種順序圖。
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡述，應(yīng)該說明的是，下述說明僅是為了解釋本發(fā)明，并不對(duì)其內(nèi)容進(jìn)行限定。實(shí)施例IFLC與D0X/MIN0聯(lián)合抗真菌作用測(cè)定I.材料I. I藥品與試劑氟康唑(fluconazole, FLC),山東誠創(chuàng)醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司；米諾環(huán)素(minocycline，ΜΙΝ0)，鹽酸米諾環(huán)素，山東磐信生物科技有限公司；多西環(huán)素(Doxycycline, D0X),山東省藥物鑒定所；科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基，鄭州博賽生物工程有限公司；TTC-沙保羅瓊脂，杭州天和微生物試劑有限公司；氫氧化鈉，國營山東單縣有機(jī)化工廠,批號(hào)940420 ；磷酸二氫鉀，上海新寶精細(xì)化工廠，批號(hào)200602132。二甲基亞砜(DMSO)，中國堯舜進(jìn)出口有限公司，批號(hào)031012 ;RPMI 1640原料藥粉，美國GIBCO公司；3- (N-嗎啉代)丙磺酸(MOPS)，濟(jì)南朋遠(yuǎn)生物技術(shù)有限公司；甲萘醌(Menadione),美國Sigma 公司；XTT ( 二甲氧唑黃)，南京旋光科技有限公司；乳酸林格氏液(復(fù)方氯化鈉溶液)，山東魯抗辰欣藥業(yè)有限公司；丙酮，上海振興化工一廠，批號(hào)200209510 ；XTT-甲萘醌溶液的配制取XTT粉末0. 0500g，溶解于IOOml已滅菌的林格氏液配成0. 5mg/ml的溶液,用0. 22 μ m濾膜濾過滅菌；加入10 μ I的10mmol/L的甲萘醌丙酮溶液(取甲萘醌0.0860g溶解于5ml丙酮)，使其終濃度為lymol/L，搖勻，2°C 8°C避光保存。藥物溶液氟康唑用無菌蒸懼水溶解，配成2560 μ g/ml的儲(chǔ)備液,過濾分裝；磷霉素用無菌水，其他藥物用二甲基亞砜溶解，分別配成6400 μ g/ml的儲(chǔ)備液，分裝。所有藥液于-20°C冰箱保存，備用。
PBS :根據(jù)中國藥典2005版二部量取O. 2mol/L磷酸二氫鉀50ml，O. 2mol/L氫氧化鈉，35ml溶于200ml雙蒸水中即得到PH 7. 2的PBS緩沖溶液。121°C高溫高壓濕熱滅菌20min,冷卻備用。
RPMI 1640液體培養(yǎng)液取RPMI 1640 (含L-谷氨酰胺，不含碳酸氫鈉)粉末2. 08g，加入10%葡萄糖溶液40ml (含糖終濃度2% )及MOPS粉6. 906g，加蒸餾水至約為200ml，混合均勻后在22°C用lmol/L的NaOH溶液調(diào)pH約為7. 0±0. 1，臨用前用O. 22 μ m混合纖維膜過濾滅菌。I. 2 儀器
AB204-N電子天平梅特勒-托利(上海)公司
SVE-4A1超凈工作臺(tái)新加坡ESCO公司
INCUCELL 55恒溫培養(yǎng)箱德國MMM公司
VENTICELL 55干熱滅菌箱德國MMM公司
HS-9041尚溫尚壓滅囷器韓國HANSHIN公司
不銹鋼過濾器(2000ml)江蘇天和儀器廠
96孔培養(yǎng)板美國COSTAR公司
可調(diào)式移液器Thermo Electron (上海)公司
SC-329常溫冰箱中國海爾公司
-20 0C低溫冰柜中國海爾公司
G-560E渦旋混合器美國Si公司
Multiscan MK3 酶標(biāo)儀美國 Thermo Iabsystems 公司I. 3實(shí)驗(yàn)菌株質(zhì)控菌株白念珠菌ATCC10231，山東大學(xué)藥理教研室惠贈(zèng)；實(shí)驗(yàn)菌株省立醫(yī)院、千佛山醫(yī)院臨床分離的白色念珠菌；菌株鑒定實(shí)驗(yàn)用菌株在科瑪嘉念珠菌顯色培養(yǎng)基35°C下培養(yǎng)48小時(shí)，菌落呈綠色或翠綠色的所有菌株再經(jīng)山東省疾病預(yù)防控制中心微生物研究室以標(biāo)準(zhǔn)微生物學(xué)方法鑒定為白色念珠菌。菌液制備-20°C下保存的白色念珠菌室溫下解凍，接種到TTC-沙保羅瓊脂培養(yǎng)基上，35°C培養(yǎng)24 48h，取發(fā)育良好的單一菌落再次接種，35 °C培養(yǎng)24h，以保證菌株處于生長(zhǎng)期。選取若干單個(gè)較大菌落，PBS配制成菌懸液，經(jīng)渦旋器振蕩均勻后以中國細(xì)菌濁度標(biāo)準(zhǔn)管比濁，調(diào)整樣品管與標(biāo)準(zhǔn)管濁度一致，此時(shí)白色念珠菌的菌濃度約為4. 5X IO6CFU/ml，系列稀釋即得到工作菌液，并以活菌計(jì)數(shù)進(jìn)行濃度驗(yàn)證。2.內(nèi)容與方法
2. I氟康唑與D0X/MIN0聯(lián)合抗白色念珠菌作用測(cè)定根據(jù)CLSI M27-A2方案的棋盤法，以RPMI-1640液體培養(yǎng)基稀釋藥液使其成為4倍工作濃度，篩選DOX和MINO與FLC濃度應(yīng)用范圍，即DOX和MINO的終濃度分別為32
O.5 μ g/ml和64 I μ g/ml, FLC為512 O. 5 μ g/ml。按濃度從高到低的順序吸取唑類藥液50 μ 1，分別加入96孔平板的第12 2列，按濃度從高到低的順序吸取米諾環(huán)素等藥液50 μ I，分別加入96孔平板的第A G行，除Α12外各孔再分別加100 μ I菌液，其余不足200 μ I的孔用RPMI-1640培養(yǎng)液補(bǔ) 足。其中Hl為生長(zhǎng)對(duì)照，只含菌液不含藥物，Α12為空白對(duì)照，只含藥液不含菌液。將96孔平板置35°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，用XTT負(fù)載后以酶標(biāo)儀測(cè)定并記錄結(jié)果。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。2. 2評(píng)價(jià)方法與結(jié)果判定Loewe additivity (LA)理論的基本思想認(rèn)為藥物不可能和它本身發(fā)生相互作用，因此將藥物單用或聯(lián)用產(chǎn)生相同藥效的濃度(等效位點(diǎn))進(jìn)行比較。其分析方法分?jǐn)?shù)抑菌濃度指數(shù)法(fractional inhibitory concentration index, FICI)，表述如下Σ FIC = FICa+FICb = CA/MICA+CB/MICBMICa和MICb分別是藥物A和B單用時(shí)的最小抑菌濃度，Ca與Cb為兩藥聯(lián)用時(shí)達(dá)到相同藥效時(shí)各自的濃度。FICI > 4為拮抗作用，F(xiàn)ICI在O. 5與4之間為相加或無關(guān)作用，F(xiàn)ICI ( O. 5定義為協(xié)同作用。3.結(jié)果3. I氟康唑與抗菌藥物的聯(lián)合抗真菌作用結(jié)果3. I. I氟康唑與抗菌藥物聯(lián)合的最低有效菌濃度各孔中真菌生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)的計(jì)算方法為真菌生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)=(各孔OD值-空白對(duì)照孔OD值)/生長(zhǎng)對(duì)照孔OD值按上述公式計(jì)算平板中各孔真菌生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)，取能夠抑制真菌生長(zhǎng)80%的最低聯(lián)用藥物濃度為判讀終點(diǎn)，如果真菌生長(zhǎng)率不恰好等于20 %，取與之最接近的藥物聯(lián)合孔為判讀終點(diǎn)。FLC與D0X/MIN0的聯(lián)合抗真菌作用，對(duì)敏感株來說不明顯，多為無關(guān)，而對(duì)耐藥株，則呈現(xiàn)強(qiáng)協(xié)同作用。其中耐藥株CAlO平板中的生長(zhǎng)百分?jǐn)?shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表I所示。表.I.用棋盤表示FLC與D0X/MIN0的聯(lián)合用藥抗白色念珠菌CAltl生長(zhǎng)百分率(以FICI法換算的藥物最佳作用組合用灰色標(biāo)出)。
權(quán)利要求
1.四環(huán)素類藥物多西環(huán)素或米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用氟康唑在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征是，所述真菌為白色念珠菌。
3.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征是，聯(lián)合應(yīng)用時(shí)多西環(huán)素與氟康唑的最低抑菌濃度為16 V- g/ml與4 ii g/ml ;米諾環(huán)素與氟康唑的最低抑菌濃度為16 u g/ml與2 y g/ml。
4.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征是，還加入貝尼地平、硝苯地平或金屬離子螯合劑EDTA。
5.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征是，當(dāng)加入貝尼地平、硝苯地平或金屬離子螯合劑EDTA后，其濃度配比為 貝尼地平多西環(huán)素氟康唑=8:4:2 ( u g/ml)； 貝尼地平米諾環(huán)素氟康唑=8:16:1 ( V- g/ml)； 硝苯地平多西環(huán)素氟康唑=8:4:1 ( u g/ml)； 硝苯地平米諾環(huán)素氟康唑=8:8:1 (u g/ml)； EDTA:多西環(huán)素:氟康唑=O. 5mM: 4 u g/ml: I u g/ml ； EDTA:米諾環(huán)素:氟康唑=0. 5mM:4 u g/ml :0. 5 u g/ml。
6.如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征是，當(dāng)多西環(huán)素與氟康唑濃度為16y g/ml與4 V- g/ml或者米諾環(huán)素與氟康唑的最低抑菌濃度為16 ii g/ml與2 ii g/ml時(shí),加入的最低I丐調(diào)節(jié)劑的有效濃度貝尼地平為4 u g/ml、硝苯地平為8 u g/ml或EDTA為0. 25mM。
7.ー種抗真菌產(chǎn)品，其特征為含有權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述組份或含量。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種四環(huán)素類藥物聯(lián)合應(yīng)用氟康唑在制備抗真菌產(chǎn)品中的應(yīng)用及其產(chǎn)品，氟康唑與四環(huán)素類抗菌藥物多西環(huán)素、米諾環(huán)素聯(lián)合應(yīng)用可以產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用，以及三種細(xì)胞鈣調(diào)節(jié)劑非選擇性鈣通道阻滯劑貝尼地平、選擇性L型鈣通道阻滯劑硝苯地平及鈣離子螯合劑乙二胺四乙酸(EDTA)對(duì)氟康唑及上述兩種用藥組合的增效作用及其在抗白色念珠菌中的應(yīng)用。經(jīng)結(jié)果證實(shí)，F(xiàn)LC與DOX/MINO合用可以產(chǎn)生協(xié)同抗真菌作用，特別是對(duì)耐藥白色念珠菌有顯著的殺傷作用；BEN、NIF及EDTA均能夠明顯增強(qiáng)FLC與DOX/MINO對(duì)白色念珠菌的聯(lián)合抗真菌作用，可以明顯降低FLC、MINO和DOX聯(lián)合用藥時(shí)的最低有效濃度；并且三種鈣調(diào)節(jié)劑與氟康唑聯(lián)用，也能增強(qiáng)其抗真菌作用。
文檔編號(hào)A61K31/198GK102626415SQ20121007641
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月21日
發(fā)明者劉萍, 孫淑娟, 高媛 申請(qǐng)人:山東省千佛山醫(yī)院