專利名稱：水浴提取板栗總苞多酚的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及水浴提取板栗總苞多酚的方法。
背景技術(shù)：
我國是生產(chǎn)板栗的大國，產(chǎn)量位居世界第一，年產(chǎn)量仍在繼續(xù)增加，板栗(castanea mollissina Blume)屬殼斗科(Fagceae)栗屬喬木經(jīng)濟植物,素有“千果之王”的美稱，是世界著名的干果之一。隨著經(jīng)濟的發(fā)展，國家制造業(yè)、加工業(yè)的發(fā)展，板栗被加工成各種食品，但是板栗總苞卻被當(dāng)作固體垃圾處理，這樣，不僅使自然資源浪費，而且會造成環(huán)境污染。板栗總苞又名風(fēng)栗殼、板栗殼斗，具有健脾益氣、補腎強筋、散結(jié)解毒之功效，治療丹毒、腫毒、瘰疬等疾病。大量文獻證明板栗總苞中含有大量植物多酚物質(zhì)，多酚是ー類具有獨特生理活性和藥理活性的天然產(chǎn)物，多酚具有抗氧化能力、抗癌、抑菌消炎、抗病毒、預(yù)防心血管病發(fā)生的能力及保護視網(wǎng)膜等作用，所以，有了植物多酚是有待開發(fā)的醫(yī)藥“金礦”的說法。有文獻已經(jīng)報道板栗總苞的水煎液、醇溶物、こ酸こ酯提取物具有極強的抗菌、消炎作用和抗凝血、升高白細胞等生物活性，同時還具有抗氧化作用、抗衰老作用和抗糖尿病作用。隨著當(dāng)前“追求自然”消費觀念的興起，多酚在制藥、生化、食品以及精細化工等高科技領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)川前景，同時板栗毛殼資源豐富，成本低廉，對其成分開發(fā)利用可以替代飼用抗生素的使用。目前對板栗總苞的開發(fā)僅有中國專利CN102140123A報道了從板栗栗蓬中提取鞣花酸鞣質(zhì)的方法，此方法公開了鞣質(zhì)中鞣花酸的提取及其含量的測定方法，CN102115611A報道了板栗苞汽爆聯(lián)產(chǎn)色素、栲膠和活性炭的方法，板栗殼的專利有，而CN101402657A報道了板栗殼多酚的制備方法，CN101407640A報道了板栗殼棕色素的提取方法。但是板栗總苞多酚提取的專利國內(nèi)還沒有，如何處理這些廢棄物，提高其利用率，實現(xiàn)其循環(huán)產(chǎn)業(yè)發(fā)展，増加傳統(tǒng)板栗種植業(yè)新的經(jīng)濟增長點已成為新的研究方向，具有良好的開發(fā)前景和經(jīng)濟社會效益，同吋，減少環(huán)境污染，提高板栗的附加值，増加農(nóng)民的副收入，帶動農(nóng)村經(jīng)濟發(fā)展。本發(fā)明采用水浴溶劑提取法，此方法相對超聲提取法，具有成本極低、處理量大、溫度容易控制、重復(fù)性極好、易于エ業(yè)化大量生產(chǎn)等優(yōu)點。大孔樹脂是ー種不溶于酸、堿及各種有機溶劑的有機高分子聚合物，具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、比表面積大、吸附容量大、選擇性好、吸附速度快、解吸條件溫和、再生處理方便、使用周期長、易于構(gòu)成閉路循環(huán)、節(jié)省費用、安全性高等特點，目前，大孔樹脂已在醫(yī)藥、食品、化妝品等エ藝領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。本發(fā)明采取水浴提取溶劑法，從板栗總苞中提取多酚，同時結(jié)合大孔樹脂富集純化多酚，使得到純度高，活性強的板栗總苞多酚物質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于是提供一種以板栗廢棄物總苞為原料，采用こ醇水溶液浸堤，大孔樹脂純化多酚的技術(shù)，此方法可推廣到エ業(yè)化生產(chǎn)中，以應(yīng)用以醫(yī)學(xué)、食品、化妝品、飼料等エ業(yè)中，使廢棄物再利用，開發(fā)ー種天然植物多酚抗氧化資源，同時增加板栗的附加值。
本發(fā)明的技術(shù)方案包括以下步驟(I)干燥粉碎把采摘來的板栗總苞風(fēng)干、粉碎、過篩；(2)浸提取一定量板栗總苞粉末于錐形瓶中，按一定料液比加入こ醇水溶液，充分混勻，一定溫度水浴中密閉浸提，得到浸提液；(3)離心和濃縮將浸提液倒入離心管中，離心，收集上清液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮除去こ醇，定容一定體積，得到多酚粗提液(4)純化將多酚粗提液泵入已經(jīng)平衡好的的大孔吸附樹脂，對多酚進行吸附，先用蒸餾水沖洗柱子，再用30%-80%的こ醇水溶液(按體積百分比)洗脫多酚，收集洗脫液；(5)濃縮和干燥將洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥，得到板栗總苞多酚提取物。步驟I中，板栗總苞粉碎后，過40-80目的篩。步驟2中，浸提2次，首次浸提料液比為I : 15-1 35(g/mL)，密閉浸提l_3h，第二次浸提料液比為I : 5-1 20，密閉浸提lh。上述浸提過程中，水浴溫度保持在40-90°C之間，こ醇濃度為20% -70%。步驟3中，將浸提液在4000r/min條件下離心15min,取上清液在40°C、0. IMPa下減壓濃縮。步驟4中，大孔吸附樹脂為LSA-21、DlOl或AB-8柱，上樣濃度為0. 5mg/mL-4mg/mL,上樣流速為0. 5mL/min-3mL/min,蒸餾水沖洗量為2_5倍的柱體積，こ醇水溶液的洗脫量為2-5倍的柱體積，收集洗脫液。步驟5中，將洗脫液在40°C、0. IMPa下減壓濃縮，冷凍干燥，干燥溫度為(TC -60°C，時間為 12h-24h。本發(fā)明提供的方法具有如下優(yōu)點本發(fā)明的優(yōu)點是(I)提取過程采用こ醇水溶液，條件溫和，所制的多酚安全無毒，對人體沒有任何傷害，(2)エ藝簡單、成本低，可以推廣到大范圍的エ業(yè)生產(chǎn)去。(3)藥材原料處理量大，有效成分易于分離、浄化(4)提取エ藝成本低，綜合經(jīng)濟效應(yīng)顯著。(5)大孔樹脂吸附法具有選擇性好、吸附容量大、再生處理方便、安全性強、吸附迅速及解吸容易等優(yōu)點。(6)板栗總苞的多酚提取率高，且具有較強的抗氧化能力，清除自由基，同時，有抗病毒，抗誘變，抑菌作用。
具體實施方法下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施方法中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可以從商業(yè)途徑買到。本發(fā)明下述實施例中的板栗總苞多酚提取物的含量是按照以下方法進行測定的準(zhǔn)確稱取5mg沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)品，定容50mL，配成0. lmg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液，分別吸取0. 5、I. O、
I.5,2. 0和2. 5mL沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)液(0. lmg/mL)定容至IOmL,配制成質(zhì)量濃度為0. 005、
0.010,0. 015,0. 020,0. 025mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精確吸取上述標(biāo)準(zhǔn)液0. 4mL于IOmL離心管中，加入0. 2mol/LFC試劑lmL15% Na2CO3溶液2mL，蒸餾水定容至8mL，25°C反應(yīng)2h。另精確吸取蒸餾水0. 4mL,同法操作作為空白対照。在765nm處測量其吸光度A。繪制以吸光度(A)與濃度(C)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并擬合線性回歸方程。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回歸方程為y = 4. 323x+0. 0166，相關(guān)系數(shù)為 R2 = 0. 9998(I)式中y-吸光度值:x_沒食子酸標(biāo)品濃度，mg/mL總多酚提取率和含量的計算多酚濃度(mg/mL)=(吸光度值-0.0166)/4. 323 X 稀釋倍數(shù) /1000 (2)多酚含量)=提取多酚質(zhì)量/堤取物質(zhì)量X 100%(3)
多酚得率)=提取物質(zhì)量/原料質(zhì)量X 100%(4)實施例I將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入200mL的30 %こ醇水溶液混合，在60°C水浴鍋中密閉浸提IlOmin,在4000r/min條件下離心15min,殘洛重復(fù)上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用2倍50%こ醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為9. 58%，其中多酚含量為70. 28%。實施例2將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入1800mL的40 %こ醇水溶液混合，在80°C水浴鍋中密閉浸提170min,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重復(fù)上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用4倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用3倍柱體積的70%こ醇水溶液以2mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為10. 43%，其中多酚含量為 70. 64%。實施例3將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入150mL的50 %こ醇水溶液混合，在80°C水浴鍋中密閉浸提140min,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重復(fù)上述浸提60min，料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用3倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用5倍柱體積的60%こ醇水溶液以I. 5mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為9. 87%，其中多酚含量為71. 54%。實施例4將板栗總苞粉碎至60目，稱取IOg板栗總苞粉末加入210mL的20 %こ醇水溶液混合，在90°C水浴鍋中密閉浸提800min,在4000r/min條件下離心15min,,殘洛重復(fù)上述浸提60min,料液比為I : 10，收集2次上清液，真空減壓旋蒸上清液(40°C、0. IMP)除去こ醇，定容，將提取液以2mL/min的速度泵入已平衡好的LSA-21大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的蒸餾水沖洗柱子，再用4倍柱體積的70%こ醇水溶液以3mL/min的流速洗脫，收集洗脫液，于40°C、0. IMP下減壓旋蒸濃縮，冷凍干燥至粉末，提取物的得率為11. 53%，其中多酚含量為69. 62%。
權(quán)利要求
1.水浴提取板栗總苞多酚的方法。，其特征在于，它包括下列步驟 (1)干燥粉碎把采摘來的板栗總苞風(fēng)干、粉碎、過篩； (2)浸提取一定量板栗總苞粉末于錐形瓶中，按一定料液比加入乙醇水溶液，充分混勻，一定溫度水浴中密閉浸提，得到浸提液； (3)離心和濃縮將浸提液倒入離心管中，離心，收集上清液，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上減壓濃縮除去乙醇，定容一定體積，得到多酚粗提液； (4)純化將多酚粗提液泵入已經(jīng)平衡好的的大孔吸附樹脂，對多酚進行吸附，先用蒸餾水沖洗柱子，再用30%-70%的乙醇水溶液(按體積百分比)洗脫多酚，收集洗脫液； (5)濃縮和干燥將洗脫液減壓濃縮，冷凍干燥，得到板栗總苞多酚提取物。
2.如權(quán)利要求I中(I)所述，其特征在于，板栗總苞粉碎后，過40-80目篩。
3.如權(quán)利要求I中(2)所述，其特征在于，水浴浸提2次，首次浸提料液比為I 10-1 40(g/mL)，密閉浸提l-3h，第二次浸提料液比為I : 5_1 20，密閉浸提lh。上述浸提過程中，水浴溫度保持在40-100°C之間，乙醇濃度為20% -80%。
4.如權(quán)利要求I中(3)所述,其特征在于,將浸提液在4000r/min條件下離心15min,取上清液在40°C、0. IMPa下減壓濃縮。
5.如權(quán)利要求I中(4)所述，其特征在于，大孔吸附樹脂為LSA-21、DlOl或AB-8柱，上樣濃度為O. 5mg/mL-4mg/mL,上樣流速為O. 5mL/min-3mL/min,蒸懼水沖洗量為2_5倍的柱體積，乙醇水溶液的洗脫量為2-5倍的柱體積，收集洗脫液。
6.如權(quán)利要求I中(5)所述，其特征在于，將洗脫液在40°C、0.IMPa下減壓濃縮，并冷凍干燥，冷凍溫度為0°C -60°C。
全文摘要
本發(fā)明公開了水浴提取板栗總苞多酚的方法，包括如下步驟干燥粉碎、浸提、離心和濃縮、純化、濃縮、干燥得到多酚提取物。本發(fā)明的優(yōu)點(1)采用乙醇水溶液，條件溫和，所制的多酚安全無毒。(2)工藝簡單、成本低、操作簡便，可推廣到工業(yè)生產(chǎn)。(3)大孔樹脂吸附選擇性好、吸附容量大、再生處理方便、安全性強、吸附迅速及解吸容易。(4)提取率高，且具有較強的抗氧化能力，清除自由基，同時，有抗病毒，抗誘變，抑菌作用。我國大量富含植物多酚的廢棄物沒有得到綜合利用，嚴(yán)重污染著環(huán)境，該發(fā)明使占板栗近20％廢棄物-板栗總苞資源得到最大利用，提高板栗附加值，同時為食品和制藥工業(yè)開辟了一種的天然植物多酚抗氧化劑新資源。
文檔編號A61P35/00GK102626429SQ201210062760
公開日2012年8月8日 申請日期2012年3月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月12日
發(fā)明者石恩慧, 賈昌喜, 郭凱軍 申請人:北京農(nóng)學(xué)院