香椿子多酚的提取方法及治療帕金森病的用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及天然產(chǎn)物提取工藝領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種香椿子多酪的提取方法及治療 帕金森病的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 帕金森?。≒arkinson'Sdisease,PD)是一種嚴(yán)重危害中老年人健康的中樞神 經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病，其主要病理改變是中腦黑質(zhì)多己胺（dopamine,DA)能神經(jīng)元漸進(jìn)性變 性、死亡，在臨床癥狀出現(xiàn)時(shí)往往已喪失達(dá)70-80%，殘余的神經(jīng)元仍繼續(xù)發(fā)生變性，導(dǎo)致紋 狀體中PD的特征性神經(jīng)遞質(zhì)DA含量明顯減少。臨床表現(xiàn)除了有靜止性震顫、肌僵直、隨 意運(yùn)動(dòng)減慢及姿勢(shì)、步態(tài)異常等運(yùn)動(dòng)癥狀外，還伴發(fā)有非運(yùn)動(dòng)癥狀（non-motorsymptoms， 醒巧，包括感覺(jué)障礙、睡眠障礙、神經(jīng)精神障礙化及自主神經(jīng)功能障礙。在65歲W上人群中 發(fā)病率約為1-3%，目前全世界已有約400萬(wàn)PD患者，預(yù)計(jì)到2030年可能會(huì)增加一倍。該 病具有發(fā)病率高、病程長(zhǎng)、致殘率高、治療效果差、費(fèi)用昂貴等特點(diǎn)，給家庭和社會(huì)帶來(lái)巨大 的危害和負(fù)擔(dān)。
[0003] PD病因不清，可能與環(huán)境、遺傳、老化等多種因素有關(guān)；PD發(fā)病機(jī)理尚不明確，可 能與神經(jīng)免疫炎癥、氧化應(yīng)激、線粒體功能障礙、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子不足、興奮性氨基酸毒性作 用、蛋白酶體功能異常等有關(guān)，是多種因素協(xié)同作用的結(jié)果。目前的研究結(jié)果表明，氧化應(yīng) 激和神經(jīng)炎癥所引起的連鎖反應(yīng)是PD黑質(zhì)DA能神經(jīng)元受損的核屯、病理環(huán)節(jié)。
[0004]PD病程長(zhǎng)達(dá)十幾到幾十年，尚無(wú)令人滿意的治療手段。目前，PD的治療方法大多 限于通過(guò)調(diào)節(jié)神經(jīng)遞質(zhì)或受體來(lái)恢復(fù)多己胺水平，如通過(guò)增加多己胺的水平（例如，左旋 多己或多己胺激動(dòng)劑）或防止其降解（MA0-B抑制劑）。盡管運(yùn)些治療方法有代償性保護(hù)作 用，但沒(méi)有解決氧化應(yīng)激、神經(jīng)炎癥和線粒體損傷運(yùn)些導(dǎo)致細(xì)胞死亡的潛在因素。W深部腦 刺激（deepbrainstimulation,DB巧為代表的手術(shù)治療取得了的快速進(jìn)展，但其手術(shù)多種 禁忌阻礙了DBS的普及推廣。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子對(duì)于維持神經(jīng)元的存活、阻止神經(jīng)元的變性和 受損神經(jīng)元的修復(fù)與再生均具有至關(guān)重要的作用，被公認(rèn)是PD等神經(jīng)退行性疾病預(yù)防和 治療的希望所在，但由于神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子都是大分子蛋白質(zhì)，不能透過(guò)血腦屏障，嚴(yán)重限制 了其在臨床的應(yīng)用。因此，PD作為一種慢性，進(jìn)行性和多因素神經(jīng)系統(tǒng)疾病，如能發(fā)現(xiàn)具有 抗神經(jīng)免疫炎癥、抗氧化應(yīng)激及促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的多祀點(diǎn)的小分子物 質(zhì)，從而保護(hù)DA能神經(jīng)元，延緩疾病不斷惡化的結(jié)局，將可能從根本上解決PD治療運(yùn)一醫(yī) 學(xué)難題。
[0005] 香椿子又名椿樹子，為香椿的干燥果實(shí)。近年來(lái)有關(guān)香椿的藥理作用有不少報(bào)道， 香椿的藥用價(jià)值主要來(lái)源于香椿嫩葉、老葉、巧W及其它部位含有的類黃酬、搬皮素、皂巧 和多酪等化合物；新近的研究表明多酪類能促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞的分化和軸突生長(zhǎng)，并 能對(duì)抗神經(jīng)毒素引起的炎癥損傷。研究發(fā)現(xiàn)，香椿子總多酪具有明顯的抗炎作用，能減輕大 鼠屯、肌缺血再灌注時(shí)的形態(tài)學(xué)損傷，減輕炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，具有抗遷移作用，有助于動(dòng)脈粥樣 硬化的預(yù)防。另外，香椿提取物也有較強(qiáng)的抗細(xì)胞調(diào)亡作用?；诖?，本實(shí)驗(yàn)利用PD細(xì)胞 模型探究了香椿子多酪提取物（polyphenolsfromT.sinensisseeds,PTS巧對(duì)神經(jīng)毒素 6-OHDA誘導(dǎo)的細(xì)胞炎癥和細(xì)胞調(diào)亡的預(yù)防作用。中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元的丟失是PD的主 要病理特點(diǎn)，用免疫組化方法測(cè)定PD患者死亡后腦組織時(shí)發(fā)現(xiàn)，Caspase-3陽(yáng)性神經(jīng)元的 表達(dá)與中腦DA能神經(jīng)元的丟失呈正相關(guān)。Kuida等發(fā)現(xiàn)化spase-3缺乏的小鼠在中樞神 經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過(guò)程中發(fā)生的大量細(xì)胞調(diào)亡，由此表明Caspase-3在誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞調(diào)亡中起重 要作用。Ochu等人用一定濃度6-0HDA處理PC12細(xì)胞后，Caspase-3蛋白酶抑制劑能抑制 6-0HDA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞調(diào)亡。Hartmann等研究提示化spase-3是PD患者和PD動(dòng)物模型 黑質(zhì)多己胺能神經(jīng)元調(diào)亡的易感因子和最終效應(yīng)器。
[0006] 神經(jīng)炎癥、氧化應(yīng)激和線粒體損傷等在黑質(zhì)DA能神經(jīng)元調(diào)亡的發(fā)生過(guò)程中既可 單獨(dú)啟動(dòng)，又可聯(lián)合作用，是許多因素誘導(dǎo)調(diào)亡的共同通路。運(yùn)幾種機(jī)制常常是互相聯(lián)系、 互為因果的，黑質(zhì)DA能神經(jīng)元調(diào)亡的細(xì)胞內(nèi)部調(diào)控是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，Caspase-3充 當(dāng)了重要的角色，其核屯、環(huán)節(jié)可能是內(nèi)外環(huán)境的毒素、氧自由基、活性離子抑制線粒體呼吸 鏈復(fù)合酶I，使細(xì)胞的ATP和GSH減少，破壞了巧離子平衡，造成巧超載，導(dǎo)致呼吸鏈產(chǎn)生自 由基增多，伴有小膠質(zhì)細(xì)胞激活炎性因子大量產(chǎn)生，并激活化spase-3,最終引起DA能神經(jīng) 元的調(diào)亡。
[0007] 綜上可知，現(xiàn)有技術(shù)在實(shí)際使用上顯然存在不便與缺陷，所W有必要加W改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 針對(duì)上述的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種香椿子多酪的提取方法及治療帕金 森病的用途，其方法可W高效的提取香椿子中的多酪，香椿子多酪具有抗氧化、抗炎、抗腫 瘤、神經(jīng)保護(hù)、抗高血壓及糖尿病等多種生物學(xué)功能，對(duì)治療帕金森病有一定的作用。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種香椿子多酪的提取方法及治療帕金森病的用 途。其提取方法包括W下步驟：步驟A:將香椿子破碎處理，過(guò)藥篩得到香椿子藥粉；步驟 B:將得到的香椿子藥粉加入石油酸，常壓水浴回流提取得到藥渣，將藥渣中的溶劑揮發(fā)掉 后進(jìn)行低溫烘干處理，使所述藥渣含水量控制在3 %;步驟C:將步驟B得到的香椿子藥渣放 入超聲波細(xì)胞破碎機(jī)處理，加入乙醇，提取香椿子多酪。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的香椿子多酪的提取方法，所述步驟A之前還包括：將所述香椿子干 燥處理。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的香椿子多酪的提取方法，所述步驟B中，回流次數(shù)為2次，第一次回 流時(shí)間為1.化，第二次回流時(shí)間為比。
[0012] 根據(jù)本發(fā)明的香椿子多酪的提取方法，所述步驟A中，所述藥篩為100目。
[0013] 根據(jù)本發(fā)明的香椿子多酪的提取方法，所述步驟B中，所述低溫烘干處理為在低 溫40°C下烘干化。
[0014] 根據(jù)本發(fā)明的香椿子多酪的提取方法，所述步驟C具體為：將步驟B得到的香椿 子藥渣放入超聲波細(xì)胞破碎機(jī)處理，加入乙醇，控制乙醇的含量為30 %~70 %，香椿子藥 渣與所述乙醇的液料比為10:1血/g~50:1血/g,提取時(shí)間為5min~25min，提取功率為 IOOw~300w，提取香椿子多酪。
[0015] 根據(jù)本發(fā)明的香椿子多酪的提取方法，所述步驟C具體為：將步驟B得到的香椿子 藥渣放入超聲波細(xì)胞破碎機(jī)處理，加入乙醇，控制乙醇的含量為43%，香椿子藥渣與所述乙 醇的液料比為19:lmL/g，提取時(shí)間為13min，提取功率為211w，提取香椿子多酪。
[0016] 本發(fā)明還提供一種根據(jù)上述方法提取得到的香椿子多酪。
[0017] 本發(fā)明還提供了香椿子多酪在治療帕金森病中的用途。
[0018] 本發(fā)明通過(guò)一種香椿子多酪的提取方法及治療帕金森病的用途，其方法可W高效 的提取香椿子中的多酪，香椿子多酪具有抗氧化、抗炎、抗腫瘤、神經(jīng)保護(hù)、抗高血壓及糖尿 病等多種生物學(xué)功能，流式細(xì)胞儀檢測(cè)PTSS可W減少6-OHDA引起的細(xì)胞早期調(diào)亡，對(duì)細(xì)胞 產(chǎn)生明顯的保護(hù)作用，對(duì)治療帕金森病有一定的作用。
【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)曲線；
[0020] 圖2乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)香椿子多酪提取率的影響；
[0021] 圖3液料比對(duì)香椿子多酪提取率的影響；
[0022] 圖4提取時(shí)間對(duì)香椿子多酪提取率的影響；
[0023] 圖5提取功率對(duì)香椿子多酪提取率的影響；
[0024] 圖6乙醇體積分?jǐn)?shù)與液料比交互作用；
[00巧]圖7乙醇體積分?jǐn)?shù)與時(shí)間交互作用；
[0026] 圖8乙醇體積分?jǐn)?shù)與功率交互作用；
[0027] 圖9液料比與提取時(shí)間交互作用；
[0028] 圖10液料比與提取功率交互作用；
[0029] 圖11提取時(shí)間與提取功率交互作用；
[0030] 圖12PTSS和6-0HDA對(duì)PC12細(xì)胞存活狀態(tài)的影響；其中，A:對(duì)照組；B:PTSS組； C:6-0HDA組；1 :加入PTSS或 6-0HDA后化；2 :加入PTSS或 6-0HDA后 12h;3 :加入PTSS或 6-0HDA后 2地；4 :加入PTSS或 6-0HDA后 4她.Bar= 100ym;
[003。圖13不同濃度PTSS預(yù)處理后對(duì)6-OHDA誘導(dǎo)PC12細(xì)胞調(diào)亡的影響；
[0032]其中，A:PTSS+6-0HDA組（20ymol/LPTSS預(yù)處理）；B:PTSS+6-0HDA組 (100ymol/LPTSS預(yù)處理）；C:PTSS+6-0HDA組（200ymol/LPTSS預(yù)處理）；PTSS+6-0HDA 組：1 :加入PTSS后化；2 :加入PTSS后12h;3 :加入PTSS后24h;4 :加入PTSS后4她.Bar =100Jim；
[0033] 圖14PTSS抗6-0HDA誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞毒性作用；
[0034]其中，平<0. 05vsmodelgroupbp<〇. 〇5vsmodelgroup;
[0035] 圖15PTSS對(duì)6-OHDA介導(dǎo)PC12細(xì)胞調(diào)亡的影響；
[0036]其中，A:對(duì)照組；B:6-0HDA組；C:PTSS+6-0HDA(20ymol/L)組；D:PTSS+6-0HDA( 100ymol/L)組；E: