專利名稱：含金屬β-內(nèi)酰胺酶的組合物及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種酶制劑，尤其涉及一種以金屬0 -內(nèi)酰胺酶為主要的活性成分的組合物，以及以該組合物為主要組分制成的制劑，用于對腸道中抗生素進行分解，以降低抗生素使用過程中所引起的不良反應(yīng)。
背景技術(shù)：
腸道不僅是生物體的主要消化器官之一，也是最為復雜的微生態(tài)系統(tǒng)。目前僅在人腸道內(nèi)就已經(jīng)鑒定出500多種正常腸道微生物，其數(shù)量達1014，約是人體體細胞和生殖細胞總量的10多倍(世界華人消化雜志[J]，2006，14，1081-1088)。這些微生物雖種類不同，但又彼此又相互聯(lián)系，不僅與宿主細胞之間不斷地進行信息交流的，參與能量的消耗、存儲和重新分布，還生理性地調(diào)控重要化學物質(zhì)轉(zhuǎn)化，并通過自我復制來維持和修復自身(Science,2005,307,1915-1920)。腸道內(nèi)這些天然的微生物菌群可以抑制潛在病原微生物的生長，但是受到進入腸道內(nèi)的外源性抗生素的作用后，這種具有保護作用的“屏障效應(yīng)”也就容易被顯著減弱，從而引發(fā)社區(qū)獲得性病原體感染，如:沙門氏菌、艱難梭菌、萬古霉素耐藥腸球菌、多重耐藥革蘭氏芽孢桿菌和念珠菌等醫(yī)院病原體。尤其是大量或長期使用3-內(nèi)酰胺類抗菌素后，腸道中的大部分敏感菌被殺滅，致使不敏感菌和耐藥菌得以增殖，而成為優(yōu)勢菌，外來菌也會乘機侵入。當這類菌為致病菌時，即可引起二重感染，一般出現(xiàn)于使用抗菌藥20天以內(nèi)。對于非腸道用抗生素類藥物，由于其在腸道內(nèi)的活性并不是治療大部分感染所必需的，因此，為使治療過程中同時保持正常的腸道微生態(tài)環(huán)境，可采取對進入腸道內(nèi)的抗生素滅活的方式實現(xiàn)。在以抗生素對抗致病微生物的過程中，人們從那些對抗生素具有抗性的微生物中獲得了一種￠-內(nèi)酰胺酶-lact amases，EC 3.5.2.6)。該酶具有水解酰胺C-N鍵，而使￠-內(nèi)酰胺類抗生素失活的作用。由此，該酶被作為一種有效減少腸道內(nèi)￠-內(nèi)酰胺類抗生素的藥物，以避免抗生素對腸道微生態(tài)環(huán)境破壞而引起的副作用(W02007/147945，W02008/065247)。蛋白類生物大分子大都具有復雜的三級或四級結(jié)構(gòu)，尤其在溫度、pH值、溶液極性和蛋白酶等任一因素作用下，其生物活性都會改變亦或喪失。因此，作為藥物使用的蛋白分子的非注射途徑給藥都一直是生物醫(yī)藥領(lǐng)域的難點。W093/13795公開了一種以P -內(nèi)酰胺酶(I型)為主要活性成分，再加入多種酶抑制劑(如:胰分泌胰蛋白抑制劑、aprotinine、a 2-巨球蛋白或胰蛋白酶抑制劑等)制成的口服制劑，以降低腸道￠-內(nèi)酰胺類抗生素的殘留量。該技術(shù)雖然實現(xiàn)了蛋白質(zhì)多肽的口服給藥，簡化了給藥過程，但是所使用的酶抑制劑的安全性(如:aprotinine)和穩(wěn)定性均存在潛在用藥風險。中國發(fā)明專利申請200780042460.9公開了一種使用具有Eudragit包衣的Zn/果膠珠粒進行的結(jié)腸遞送技術(shù)，對來自嗜麥芽糖寡養(yǎng)單胞菌(Stenotrophomonasmaltophilia)的P -內(nèi)酰胺酶LI實現(xiàn)了腸道靶向藥物輸送，從而減少了抗生素治療后達到結(jié)腸的殘留抗生素的量，但該技術(shù)難以得到廣泛應(yīng)用。雖然現(xiàn)有技術(shù)已在P -內(nèi)酰胺酶的非注射藥物輸送方面取得了很大進步，但是仍有必要探索其它更為簡單且行之有效的腸道給藥技術(shù)，簡化制劑制備過程以及提高所采用輔料和穩(wěn)定劑的穩(wěn)定性和安全性，以有效降低腸道內(nèi)P -內(nèi)酰胺酶類抗生素的含量。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種以金屬內(nèi)酰胺酶為主要的活性成分的組合物，提高金屬內(nèi)酰胺酶的腸道穩(wěn)定性，對進入腸道中的抗生素進行高效分解，以降低抗生素使用過程中對腸道所引起的不良反應(yīng)。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的制劑，實現(xiàn)對腸道的靶向給藥，使金屬￠-內(nèi)酰胺酶在腸道中定向釋放，對進入腸道中的抗生素進行高效分解，以降低抗生素使用過程中對腸道所引起的不良反應(yīng)。本發(fā)明提供的一種含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物，按重量份，主要由如下組分組
成:
金屬P-內(nèi)酰胺酶 1-20 Zn2+0.2-3
蔗糖10-45
乳糖80-150本發(fā)明提供的另一種含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物，按重量份，主要由如下組分組成:
金屬P-內(nèi)酰胺酶1-20
Zn2+0.2-3
蔗糖10-45
乳糖80-150
硬脂酸鎂2-10本發(fā)明提供的另一種含金屬￠-內(nèi)酰胺 酶的組合物，按重量份，主要由如下組分組成:
金屬P-內(nèi)酰胺酶1-20
Zn2+0.2-3
蔗糖10-45
乳糖80-150
硬脂酸鎂2-10
氯化鈉6-16
將這些組合物按比例混勻后，裝載于腸溶性生物材料(如:但不僅限于腸溶性丙烯酸樹脂、羥丙基甲基纖維素、聚-DL-天冬氨酸、聚甲基丙烯酸甲酯、乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素酞酸酯)中制得腸溶包衣劑。當該包衣劑到達腸道后，腸溶性生物材料溶于腸液，釋放出含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物，其中的金屬￠-內(nèi)酰胺酶在乳糖、蔗糖、硬脂酸鎂和氯化鈉綜合作用下能穩(wěn)定存在于腸道中，配合以二價鋅離子，能對進入腸道中的￠-內(nèi)酰胺抗生素進行高效并快速降解。本發(fā)明提供一種含金屬P -內(nèi)酰胺酶的制劑，主要包括含金屬P -內(nèi)酰胺酶的組合物和腸溶性生物材料。其中，含金屬3 -內(nèi)酰胺酶的組合物，按重量份，由如下組分組成:
金屬P-內(nèi)酰胺酶 1-20 甘露醇10-60
Zn2+0.2-3
蔗糖10-45
乳糖80-150
硬脂酸鎂2-10
氯化鈉6-16本發(fā)明提供另一種含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的制劑，主要包括含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物和腸溶性生物材料。其中，含金屬3 -內(nèi)酰胺酶的組合物，按重量份，由如下組分組 成:
金屬P-內(nèi)酰胺酶5
甘露醇50
Zn2+1.72
蔗糖25
乳糖125.4
硬脂酸鎂3.6
氯化鈉11本發(fā)明提供含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的制劑一般按一日三次的方式口服，每次服用的最低量為一個制劑單位。各種含金屬3 -內(nèi)酰胺酶的制劑還可理解為I個或幾個制劑單位，還可以根據(jù)病患的實際病情，在此基礎(chǔ)上增加或減少制劑單位，如:但不僅限于0.5個、1.5個、2個、2.5個、3個和3.5個制劑單位。本發(fā)明技術(shù)方案實現(xiàn)的有益效果:本發(fā)明提供含金 屬P -內(nèi)酰胺酶的組合物，以金屬P -內(nèi)酰胺酶為主要活性成分，再配以多種輔料及其用量關(guān)系實現(xiàn)了金屬￠-內(nèi)酰胺酶在腸道內(nèi)穩(wěn)定存在。通過外包腸溶性生物材料的方式，實現(xiàn)了金屬￠-內(nèi)酰胺酶的定向給藥，并在輔料的配合下使該酶對進入腸道中的抗生素進行高效分解，以降低抗生素使用過程中對腸道所引起的不良反應(yīng)。
以本發(fā)明提供的含金屬P-內(nèi)酰胺酶的組合物制成的藥物制劑，制作過程簡單易行，通用性強，適合于口服給藥。
具體實施例方式以下詳細描述本發(fā)明的技術(shù)方案。本發(fā)明實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的精神和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍中。本發(fā)明所用的試劑若未明確指明，則均購自于西格瑪-奧德里奇(Sigma-Aldrich)。實施例1金屬0 -內(nèi)酰胺酶的組合物在腸液中的穩(wěn)定性測定將5mg金屬@ -內(nèi)酰胺酶、50mg甘露醇、25mg鹿糖、Ilmg氯化鈉、12mg葡萄糖酸鋅、125.4mg乳糖和3.6mg硬脂酸鎂混合制得含金屬P -內(nèi)酰胺酶的組合物，然后置于人工腸液(取6.8gKH2P04溶于500ml水，用0.4w/w%的NaOH調(diào)pH至6.8，加入Ig胰蛋白酶/IOOml液體，混勻后經(jīng)0.2 y m無菌過濾即得)，考察金屬@ -內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性，結(jié)果見表I。表1:6小時內(nèi)各組金屬@ -內(nèi)酰胺酶的活性測定(U/mg)
權(quán)利要求
1.一種含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物，其特征在于，按重量份，主要由如下組分組成: 金屬P-內(nèi)酰胺酶 1-20Zn2+0.2-3蔗糖10-45乳糖80-150
2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物，其特征在于，按重量份，還包括如下組分: 硬脂酸鎂2-10 氯化鈉6-16
3.一種制劑，其特征在于主要包括權(quán)利要求1或2所述的含金屬￠-內(nèi)酰胺酶的組合物和腸溶性生物材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其特征在于所述腸溶性生物材料選自于腸溶性丙烯酸樹脂、羥丙基甲基纖維素、聚-DL-天冬氨酸、聚甲基丙烯酸甲酯、乙基纖維素和羥丙基甲基纖維素酞酸酯之一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其特征在于所述含金屬3-內(nèi)酰胺酶的組合物，按重量份，由如下組分組成: 金屬P-內(nèi)酰胺酶 1-20 甘露醇10-60Zn2+0.2-3蔗糖10-45乳糖80-150硬脂酸鎂2-10氯化鈉6-16
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其特征在于所述含金屬3-內(nèi)酰胺酶的組合物，按重量份，由如下組分組成:金屬P-內(nèi)酰胺酶5甘露醇50Zn2+1.72蔗糖25乳糖125.4硬脂酸鎂3.6氯化鈉11
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制劑，其特征在于以所述制劑為I個制劑單位口服給予患者。
全文摘要
一種含金屬β-內(nèi)酰胺酶的組合物，以金屬β-內(nèi)酰胺酶為主要活性成分，再配以多種輔料(如蔗糖、乳糖、硬脂酸鎂和Zn2+等)實現(xiàn)了金屬β-內(nèi)酰胺酶在腸道內(nèi)穩(wěn)定存在，使該酶對進入腸道中的抗生素進行高效分解，以降低抗生素使用過程中對腸道所引起的不良反應(yīng)。本發(fā)明提供的含金屬β-內(nèi)酰胺酶的組合物制成的藥物制劑，制作過程簡單易行，通用性強，適合于口服給藥。
文檔編號A61P39/02GK103203015SQ20121001242
公開日2013年7月17日 申請日期2012年1月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月16日
發(fā)明者郭鴻, 耿雨虹, 戚英, 盛菡, 楊芳 申請人:上海聯(lián)合賽爾生物工程有限公司