專(zhuān)利名稱(chēng)：重建高密度脂蛋白制劑及其生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及重建的高密度脂蛋白制劑。更特別地，本發(fā)明涉及毒性降低的重建高密度脂蛋白制劑。背景高密度脂蛋白(HDL)是一類(lèi)含有脂質(zhì)和蛋白質(zhì)的異源脂蛋白，其特征在于高密度(>1.063g/mL)和小的尺寸(Stoke，s直徑=5至17nm)。各種HDL亞類(lèi)的脂質(zhì)、載脂蛋白、酶和脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白的含量和質(zhì)量不同，導(dǎo)致形狀、密度、大小、電荷和抗原性的不同。載脂蛋白A-1 (Apo-AI)是主要的HDL蛋白，盡管可能存在其他載脂蛋白，如Ap0-AII和Ap0-V。流行病學(xué)和臨床研究已經(jīng)確定了高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)水平與心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)之間的逆相關(guān)(Assmann等的綜述,2004, Circulationl09III_8)。更特別地,重建HDL制劑的臨床給藥已經(jīng)顯示出能給患有近期急性冠脈綜合征(ACS)的患者提供益處。通常，這樣的重建HDL制劑包含如Apo-AI這樣的蛋白質(zhì)，如磷脂酰膽堿這樣的脂質(zhì)以及如膽酸鹽或脫氧膽酸鹽這樣的去污劑。此外，可以包括膽固醇。如美國(guó)專(zhuān)利5，652，339中公開(kāi)的，不使用有機(jī)溶劑生產(chǎn)重建的HDL制劑是有利的，在某些情況下，生產(chǎn)重建HDL制劑時(shí)，有機(jī)溶劑用于溶解脂質(zhì)成分(例如，磷脂酰膽堿)。在臨床上試驗(yàn)了這種類(lèi)型的稱(chēng)為CSL-1ll的重建HDL制劑，但早在肝功能測(cè)試異常后就沒(méi)有繼續(xù)較高劑量的治療了。用CSLlll治療的患者在斑塊負(fù)荷指數(shù)中顯示出有益趨勢(shì)。然而，與安慰劑比較時(shí)，在動(dòng)脈粥樣化體積的百分比變化或斑塊體積的標(biāo)稱(chēng)變化中沒(méi)有獲得統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(Tardif等，2007, JAMA-Exp.297E1)。概述本發(fā)明的目的是提供一種重建的HDL制劑，其減輕或避免了現(xiàn)有技術(shù)重建HDL制劑的一個(gè)或多個(gè)缺點(diǎn)。本發(fā)明的優(yōu)選目的是提供一種毒性降低或最小化的重建HDL制劑。本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選目的是提供一種重建HDL制劑，其在包括但不限于冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的疾病或病癥的預(yù)防性和/或治療性處理中是有效的。本發(fā)明寬泛地涉及一種脂蛋白制劑，其包含載脂蛋白、磷脂和去污劑，其水平是無(wú)毒的，或至少呈現(xiàn)出相對(duì)低的毒性。在特定的實(shí)施方案中，去污劑和脂質(zhì)的水平處于低于引起、導(dǎo)致肝毒性或與肝毒性相關(guān)的水平。在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種重建高密度脂蛋白(rHDL)制劑，其包含載脂蛋白或其片段；脂質(zhì)；和去污劑，其水平為給予人時(shí)呈現(xiàn)出肝毒性的rHDL制劑中存在的去污劑水平的約5-50%。在另一個(gè)方 面中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)包含載脂蛋白；脂質(zhì)；和去污劑的rHDL制劑的方法，所述方法包括提供所述去污劑的步驟，所述去污劑的水平為給予人時(shí)呈現(xiàn)出肝毒性的rHDL制劑中存在的去污劑水平的約5-50%。在再另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種治療人疾病、障礙或病癥的方法，包括將根據(jù)本發(fā)明第一個(gè)方面的rHDL或根據(jù)第二個(gè)方面的方法生產(chǎn)的rHDL給予人的步驟，以由此治療人的所述疾病、障礙或病癥。
在再另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了根據(jù)第一個(gè)方面的rHDL制劑或根據(jù)第二個(gè)方面的方法生產(chǎn)的rHDL制劑，用于治療人的疾病、障礙或病癥。優(yōu)選地，去污劑的水平為呈現(xiàn)出肝毒性的去污劑水平的約5-10%。在某些實(shí)施方案中，這等于約0.03g/g載脂蛋白。優(yōu)選地，去污劑是膽汁鹽或膽汁酸。更優(yōu)選地，去污劑是膽酸鈉。載脂蛋白可以是高密度脂蛋白(HDL)的常規(guī)和/或功能性成分的任何脂蛋白。載脂蛋白優(yōu)選為約20-50g/L的濃度。優(yōu)選地，載脂蛋白是Apo-Al或其片段。合適地，脂質(zhì)的水平為引起肝毒性或與肝毒性相關(guān)的脂質(zhì)水平的約20-70%。優(yōu)選地，脂質(zhì)濃度為約30-60g/L。特別有利的脂質(zhì)濃度為約30-50g/L，或在某些實(shí)施方案中，約34 或 47g/L。優(yōu)選地，脂質(zhì)是磷脂。更優(yōu)選地，磷脂是或包含磷脂酰膽堿(PC )。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，載脂蛋白:脂質(zhì)的摩爾比在1:20至1:100的范圍中。更優(yōu)選地，載脂蛋白:脂質(zhì)的摩爾比在1:40至1:75的范圍中。載脂蛋白:脂質(zhì)特別有利的比例為約1:40或1:55。合適地,rHDL制劑進(jìn)一步包含穩(wěn)定劑。優(yōu)選地,穩(wěn)定劑是糖,如蔗糖。優(yōu)選的濃度為約 65-85g/L rHDL 制劑。在整個(gè)說(shuō)明書(shū)中，除非文中另外需要，詞語(yǔ)“包含(comprise)”，“包含(comprises)”和“包含(comprising)”將被理解為表示包含所述的整體或整體組,但不排除任何其他整體或整體組。附圖簡(jiǎn)述參照以下附圖，其有助于理解下文詳細(xì)描述的本發(fā)明的非限制性實(shí)施方案，其中:

圖1顯示了急性大鼠研究的結(jié)果，表明膽酸鹽和磷脂酰膽堿的同時(shí)減少降低了肝
毒性；圖2顯示出急性大鼠研究的結(jié)果，表明了膽酸鹽的選擇性減少降低了肝毒性；圖3顯示出在不同濃度的膽酸鹽存在下，CSLlll的濁度分析結(jié)果；圖4顯示出在冷凍干燥和重建后，在不同濃度的膽酸鹽的存在下，CSLlll的濁度結(jié)果;圖5顯示出在室溫下(RT)，重建HDL1:50PC的濁度分析結(jié)果；圖6顯示出在37°C下，重建HDL1:50PC的濁度分析結(jié)果；圖7顯示出在RT下，重建HDL1:75PC的濁度分析結(jié)果；圖8顯示出在37°C下，重建HDL1:75PC的濁度分析結(jié)果；和圖9提供了 rHDL制劑制造方法的實(shí)施方案的概覽。詳述本發(fā)明至少部分地源于出乎意料的發(fā)現(xiàn):在現(xiàn)有技術(shù)中所述的由CSLlll重建HDL(rHDL)制劑呈現(xiàn)的肝毒性是由于過(guò)量的去污劑引起的，特別是就制劑中的去污劑與Apo-AI的比例來(lái)考慮時(shí)。在這點(diǎn)上，膽酸鈉的水平為約0.3g/g Apo-A10然而，本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了不能全部消除去污劑并且必須保留一定水平，由此rHDL制劑呈現(xiàn)出充分的穩(wěn)定性和治療活性。此外，出乎意料地發(fā)現(xiàn)了與CSLlll中存在的相比，脂質(zhì)濃度的降低減輕了肝毒性，而基本上沒(méi)有損害rHDL制劑的治療活性。在進(jìn)一步的發(fā)現(xiàn)中，鑒定出對(duì)rHDL制劑最佳的載脂蛋白:脂質(zhì)的摩爾比。因此，在一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種rHDL制劑，其包含載脂蛋白或其片段；月旨質(zhì)和一定水平的去污劑，所述去污劑的水平為給予人時(shí)呈現(xiàn)出肝毒性的rHDL制劑中存在的去污劑水平的約5-50%。如在此所用的，“重建HDL (rHDL)”制劑可以是功能上與血漿中通常存在的高密度脂蛋白(HDL)相似、類(lèi)似、相應(yīng)或模擬的任何人工生產(chǎn)的脂蛋白制劑或組合物。rHDL制劑包括在“HDL模擬物”和“合成HDL顆?！钡姆秶鷥?nèi)。關(guān)于這點(diǎn)，“將rHDL制劑給予人時(shí)呈現(xiàn)出肝毒性”意思是給予人后rHDL制劑中存在的去污劑水平引起、導(dǎo)致此后的不利事件或至少與此后的不利事件相關(guān)。通常，不利事件是肝毒性，如通過(guò)異?；蚴軗p的肝功能所證實(shí)的。異?；蚴軗p的肝功能的非限制性實(shí)例包括升高的丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性(ALT)、升高的天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)活性和/或升高的膽紅素水平。根據(jù)本發(fā)明，不會(huì)引起、導(dǎo)致不利事件或與不利事件無(wú)關(guān)的去污劑的合適水平，如前所述。通常，這將在灌輸結(jié)束時(shí)進(jìn)行測(cè)量。
·
優(yōu)選地，去污劑的水平為呈現(xiàn)肝毒性的去污劑水平的約5-35%。該范圍包括，例如，5%，10%, 15%，20%, 25%，30%和35%。更優(yōu)選地，去污劑的水平為呈現(xiàn)肝毒性的去污劑水平的約5-20%。有利地，去污劑的水平為呈現(xiàn)肝毒性的去污劑水平的約5-10%。優(yōu)選地，這些水平以呈現(xiàn)肝毒性的去污劑的最小或極限水平來(lái)表示。例如，形成本發(fā)明的工作中已經(jīng)顯示出引起、導(dǎo)致肝毒性或至少與肝毒性相關(guān)的去污劑水平為0.3g/g Apo-AI或6g/L rHDL制劑(20g/L Ap0-ADo因此，5-10%的該去污劑水平為 0.015-0.03g/gApo-AI 或 0.5-0.9g/L rHDL 制劑(30g/L Ap0-ADo去污劑的“水平”可以是去污劑的絕對(duì)量、去污劑的濃度(例如，每單位體積rHDL制劑的質(zhì)量)和/或去污劑的量或濃度相對(duì)于rHDL制劑的成分的另一個(gè)量或濃度的比例。只是舉例，去污劑的水平可以用rHDL制劑中存在的載脂蛋白(例如，Apo-AI)的總質(zhì)量來(lái)表
/Jn ο盡管安全性和肝毒性的避免是本發(fā)明的一個(gè)目的，但本發(fā)明還需要足以維持rHDL制劑穩(wěn)定性的去污劑水平。如將在實(shí)施例中更詳細(xì)描述的，不低于約0.45g/L rHDL制劑(具有30g/L載脂蛋白)的去污劑濃度就穩(wěn)定性和無(wú)毒性?xún)烧叨允亲罴训摹？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方式來(lái)有利地測(cè)量穩(wěn)定性，盡管rHDL制劑的濁度是優(yōu)選的測(cè)量方式。去污劑可以是適用于rHDL制劑中的任何離子型(例如，陽(yáng)離子、陰離子、兩性離子)去污劑或非離子去污劑，包括膽汁酸及其鹽。離子型去污劑可以包括膽汁酸及其鹽、聚山梨酸酯(例如，PS80)、CHAPS、CHAPSO、鯨蠟基三甲基-溴化銨、月桂酰肌氨酸、叔-辛基苯基丙烷磺酸和4’ -氨基-7-苯甲酰胺基-牛磺膽酸。膽汁酸通常是具有24個(gè)碳的二羥基化或三羥基化類(lèi)固醇，包括膽酸、脫氧膽酸、鵝脫氧膽酸或熊果脫氧膽酸。優(yōu)選地，去污劑是膽汁鹽，如膽酸鹽、脫氧膽酸鹽、鵝脫氧膽酸鹽或熊果脫氧膽酸鹽。特別優(yōu)選的去污劑是膽酸鈉。載脂蛋白可以是天然產(chǎn)生的HDL或重建高密度脂蛋白(rHDL)的功能性的、生物活性成分的任何載脂蛋白。通常，載脂蛋白是血漿衍生的或是重建的載脂蛋白，如Apo-A1、Apo-AII或Apo-AV、前-apo-AI或變體,如Apo-AI Milano。優(yōu)選地,載脂蛋白是Apo-AI。還考慮了載脂蛋白的生物活性片段。片段可以是天然產(chǎn)生的、化學(xué)合成的或重組的。只是舉例，Apo-AI的生物活性片段優(yōu)選具有至少50%，60%, 70%, 80%, 90%或95-100%乃至高于100%的Apo-AI的卵磷脂-膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)刺激活性。合適地，載脂蛋白的濃度為約20-50g/L。這包括20，25，30，35，40，45和50g/L以及這些含量之間的任何范圍。載脂蛋白優(yōu)選濃度為約30g/L。rHDL制劑包含其水平不會(huì)引起肝毒性的脂質(zhì)。合適地，脂質(zhì)的水平為引起肝毒性或與肝毒性相關(guān)的約20-70%。在特定的實(shí)施方案中，脂質(zhì)的水平優(yōu)選為引起肝毒性或與肝毒性相關(guān)的脂質(zhì)水平約25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%或65%，以及這些量之間的任何范圍。優(yōu)選地，這些水平以呈現(xiàn)肝毒性的脂質(zhì)的最小或極限水平來(lái)表示。例如，形成本發(fā)明的工作中已經(jīng)顯示出引起、導(dǎo)致肝毒性或至少與肝毒性相關(guān)的脂質(zhì)水平為84g/L。因此，脂質(zhì)的濃度優(yōu)選為約30-60g/L。這包括30、35、40、45、50、55和60g/L以及這些量之間的任何范圍。特別有利的脂質(zhì)濃度為約30-50g/L，或在某些實(shí)施方案中，為約34或47g/L。脂質(zhì)的“水平”可以是脂質(zhì)的絕對(duì)量、脂質(zhì)的濃度(例如，每單位體積rHDL制劑的質(zhì)量)和/或脂質(zhì)的含量或濃度相對(duì)于rHDL制劑的成分的另一個(gè)量或濃度的比例。只是舉例，脂質(zhì)的水平可以根據(jù)rHDL制劑中存在的載脂蛋白(例如，Apo-AI)的摩爾比來(lái)表示。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，載脂蛋白:脂質(zhì)的摩爾比在1:20至1:100的范圍內(nèi)。該范圍包括如1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80和1:90的莫爾比。更優(yōu)選地，載脂蛋白:脂質(zhì)的摩爾比在1:40至1:75的范 圍內(nèi)。特別有利的載脂蛋白:脂質(zhì)的比例為約1:40或1:55。脂質(zhì)可以是天然產(chǎn)生的HDL或重建高密度脂蛋白(rHDL)的功能性的、生物活性成分的任何脂質(zhì)。這樣的脂質(zhì)包括磷脂、膽固醇、膽固醇-酯、脂肪酸和/或甘油三酯。優(yōu)選地，脂質(zhì)是磷脂。磷脂的非限制性實(shí)例包括磷脂酰膽堿(PC)(卵磷脂)、磷脂酸、磷脂酰乙醇胺(PE)(腦磷脂)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)和鞘磷脂(SM)或其天然或合成的衍生物。天然衍生物包括蛋PC、蛋PG、大豆PC、氫化大豆PC、大豆PG、腦PS、鞘脂類(lèi)、腦SM、半乳糖腦苷脂、神經(jīng)節(jié)苷脂、腦苷脂、腦磷脂、心磷脂和聯(lián)十六丸劑磷酸酯。合成的衍生物包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二癸酰磷脂酰膽堿(DDPC)、二瓢兒菜基磷脂酰膽堿(DEPC)、二肉豆蘧酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)、棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿(P0PC)、棕櫚酰肉豆蘧酰磷脂酰膽堿(PMPC)、棕櫚酰硬脂酰磷脂酰膽堿(PSPC)、二油酰磷脂酰膽堿(D0PC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二月桂酰磷脂酰甘油(DLPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油(DMPG)、二棕櫚酰磷脂酰甘油(DPPG)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二油酰磷脂酰甘油(D0PG)、棕櫚酰油酰磷脂酰甘油(P0PG)、二肉豆蘧酰磷脂酸(DMPA)、二棕櫚酰磷脂酸(DPPA)、二硬脂酰磷脂酸(DSPA)、二肉豆蘧酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二油酰磷脂酰絲氨酸(DMPS)、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸(DPPS)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二油酰磷脂酰絲氨酸(D0PS)、二棕櫚酰鞘磷脂(DPSM)和二硬脂酰鞘磷脂(DSSM)。磷脂還可以是以上任一種磷脂的衍生物或類(lèi)似物。
優(yōu)選地，磷脂是或包含磷脂酰膽堿，單獨(dú)地或結(jié)合一種或多種其他磷脂。另一種磷脂的實(shí)例是鞘磷脂。合適地，rHDL制劑進(jìn)一步包含穩(wěn)定劑。特別地，穩(wěn)定劑可維持rHDL制劑在冷凍干燥過(guò)程中的穩(wěn)定性。合適地，穩(wěn)定劑是碳水化合物，如糖或糖醇。合適的糖醇的實(shí)例是甘露糖醇和山梨糖醇。優(yōu)選地，穩(wěn)定劑是雙糖，如蔗糖。優(yōu)選的蔗糖濃度為rHDL制劑的約65-85g/L (等于約6.5-8.5%w/v)。優(yōu)選地，蔗糖濃度為約75g/L (等于約7.5%w/w)。就絕對(duì)項(xiàng)而言和相對(duì)于脂蛋白濃度，與CSLlll相比，這是降低的蔗糖濃度。提出了這種相對(duì)降低的蔗糖可以使得本發(fā)明的rHDL制劑有更快速的灌輸速度。盡管對(duì)其沒(méi)有限制，但是其他穩(wěn)定劑可以是或包括氨基酸(例如，甘氨酸、脯氨酸)、抗氧化劑、乳化劑、表面活性劑、螯合劑、明膠、合成油、多元醇、海藻酸鹽或任何藥物學(xué)上可接受的載體和/或賦形劑。在這點(diǎn)上，例如參考 “Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins(肽和蛋白質(zhì)的藥物制劑研發(fā))”，F(xiàn)rokjaer 等，Taylor& ；Francis (2000), “Handbook ofPharmaceutical Excipients(藥物賦形劑手冊(cè))”,第 3 版,Kibbe 等,Pharmaceutical Press
(2000)和國(guó)際公開(kāi) W02009/025754。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，rHDL制劑包含:(i )約 30g/L Apo-AI ；(ii)約 0.03g 膽酸鈉 /g Apo-AI ；(i i i )約34或47g/L磷脂酰膽堿；和(iv)約 75g/L 鹿糖；其中Apo-A1:磷脂酰膽堿的摩爾比為約1:40或1:55。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)包含載脂蛋白；脂質(zhì)；和去污劑的rHDL制劑的方法，所述方法包括提供所述去污劑的步驟，所述去污劑的水平為給予人時(shí)呈現(xiàn)出肝毒性的rHDL制劑中存在的去污劑水平的約5-50%。優(yōu)選地，所述方法包括提供所述去污劑的步驟，所述去污劑的水平為給予人時(shí)呈現(xiàn)肝毒性的去污劑水平的約5-10%。在該方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，將去污劑的初始或起始水平降低或去除至將rHDL制劑給予人時(shí)沒(méi)有呈現(xiàn)肝毒性的水平?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方式，例如包括過(guò)濾、疏水性吸附或親水性相互作用色譜、滲析、離子交換吸附和離子交換色譜，來(lái)進(jìn)行去污劑的降低或去除。在一些實(shí)施方案中，非極性聚苯乙烯樹(shù)脂適用于降低去污劑水平。這樣的樹(shù)脂優(yōu)選是交聯(lián)共聚物的形式(例如，交聯(lián)的苯乙烯和二乙烯基苯共聚物)。非限制性實(shí)例包括Amberlite XAD-2 和 Bio Beads SM。如本領(lǐng)域公知的，過(guò)濾包括凝膠過(guò)濾、凝膠滲透、滲濾和超濾，盡管不限于此。凝膠滲透的非限制性實(shí)例可以利用多孔的、交聯(lián)葡聚糖，如Sephadex樹(shù)脂。在特別適用于大規(guī)模制造的特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過(guò)滲濾來(lái)降低去污劑水平。合適地，該方法包括在有機(jī)溶劑不存在的情況下將脂質(zhì)和載脂蛋白混合的步驟。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)rHDL制劑的方法，包括步驟:
(I)將不含有機(jī)溶劑的磷脂酰膽堿和膽酸鹽去污劑加入Apo-AI溶液中；(II)將步驟(I)產(chǎn)生的溶液中的膽酸鹽去污劑水平降至約0.03g/g Apo-AI ；(III)將穩(wěn)定劑，優(yōu)選蔗糖，加入步驟(II)的溶液中。優(yōu)選地，在步驟(I)中，加入磷脂酰膽堿，使得Apo-A1:磷脂酰膽堿比例為約1:40或 1:55。優(yōu)選地，步驟(III)中蔗糖的終濃度為約75g/L。合適地，該方法進(jìn)一步包括將步驟(III)產(chǎn)生的rHDL制劑冷凍干燥的步驟(IV)。將認(rèn)識(shí)到在特定的實(shí)施方案中，生產(chǎn)rHDL制劑的方法適用于質(zhì)量和安全性適用于給予人的rHDL制劑的大規(guī)模、商業(yè)制造。圖9中概述了大規(guī)模、商業(yè)制造方法的非限制性實(shí)例。在另一個(gè)方面中，本發(fā)明提供了治療人疾病、障礙或病癥的方法，包括將之前所述的rHDL或根據(jù)之前所述的方法產(chǎn)生的rHDL給予人的步驟，以由此治療所述的人疾病、障礙或病癥。本發(fā)明還提供了如之前所述的或根據(jù)之前所述的方法生產(chǎn)的rHDL制劑，用于治療人的疾病、障礙或病癥。合適地，所述疾病、障礙或病癥響應(yīng)所述rHDL制劑的預(yù)防性或治療性給藥。這些疾病、障礙或病癥的非限制性實(shí)例包括心血管疾病(例如，急性冠脈綜合征(ACS，動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死))或以下的疾病、障礙或病癥，如糖尿病、中風(fēng)或傾向于ACS的心肌梗死、高膽甾醇血癥(例如，升高的血清膽固醇或升高的LDL膽固醇)以及由降低水平的高密度脂蛋白(HDL)引起的低膽留醇血癥，如為T(mén)angier病的癥狀?？梢酝ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任一種給藥途徑來(lái)給予rHDL制劑。通常，將rHDL制劑通過(guò)非腸道，如通過(guò)靜脈內(nèi)灌輸或注射來(lái)給藥。rHDL制劑的給藥劑量可以在l_120mg/kg體重的范圍內(nèi)。優(yōu)選地，該劑量在5-80mg/kg 的范圍內(nèi)，包括 10mg/kg、20mg/kg、30mg/kg、40mg/kg、50mg/kg、60mg/kg 和 70mg/kg劑量。所以參照以下非限制性實(shí)施例可以完全理解本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案并付諸實(shí)踐。實(shí)施例下文中提供的實(shí)施例描述了確定rHDL制劑(如CSL111)的哪些因素引起肝毒性的最初研究(實(shí)施例1&2)以及本發(fā)明rHDL制劑的實(shí)施方案的開(kāi)發(fā)和毒性測(cè)試(實(shí)施例3至8)。實(shí)施例1
比較不同Apo-AI: PC比例的肝毒性研究和控制膽酸鹽水平的作用對(duì)含有不同Apo AIiPC比例(1:150、1:100&1:50)的HDL制劑，在大鼠模型中(參見(jiàn)以下實(shí)施例2中的模型詳情)測(cè)定了通過(guò)ALT活性測(cè)量的肝毒性水平。每種HDL制劑含有不同的膽酸鹽濃度，其水平范圍從1:150制劑的6g/L至1:50制劑的1.lg/L。結(jié)果表明了對(duì)1:150HDL制劑，從300mg/kg開(kāi)始的劑量，觀察到了提高的ALT水平。1:100HDL制劑從400mg/kg劑量開(kāi)始，引起了提高的ALT水平，在600mg/kg水平顯著提高。相反，對(duì)1:50HDL制劑，直至600mg/kg劑量，也沒(méi)有觀察到ALT活性的提高(圖1)。這些結(jié)果表明通過(guò)HDL制劑中的PC水平和/或膽酸鹽水平降低了肝毒性。為了研究是否是膽酸鹽的水平對(duì)ALT活性具有直接作用，進(jìn)行了進(jìn)一步的研究，其中將CSLlll的膽酸鹽耗盡。結(jié)果證明了當(dāng)以300mg/kg灌輸給大鼠時(shí)，CSLlll制劑中的膽酸鹽的降低導(dǎo)致了 ALT水平的降低(圖2)。此外，如果之后將膽酸鹽加回耗盡的HDL制劑中，以300mg/kg灌輸給大鼠時(shí)，重新補(bǔ)充的HDL制劑引起提高的ALT水平(圖2)。這些研究證明了將膽酸鹽降至約Ig/L實(shí)質(zhì)性地降低了 rHDL毒性，但還有另外的作用因素是PC降至約l:50apoA1:PC的比例。實(shí)施例2比較分級(jí)的膽酸鹽水平和Apo-AI: PC比例的肝毒性研究介紹該研究的目的是為了確定具有分級(jí)的膽酸鹽濃度和如下的ApoA-1與PC比例的重建 HDL 制劑(rHDL)肝中毒，rHDL PCl: 150 (3g/L 膽酸鹽)、rHDL PC1: 100 (lg/L 膽酸鹽)、rHDL PCl:50 (3g/L膽酸鹽)、rHDL PC1:50 (0.2g/L膽酸鹽)。將有意的大鼠模型用于測(cè)定上述制劑對(duì)肝功能的影響。通過(guò)測(cè)定血清中肝酶活性(ALT和AST)來(lái)評(píng)價(jià)肝中毒。認(rèn)為Apo-AI是制劑的活性成分，并且Apo-AI的血衆(zhòng)水平是暴露的關(guān)鍵指不。材料和方法測(cè)試rHDL制劑的給藥測(cè)試rHDL制劑I 物質(zhì)/INN:rHDL PCl: 150 (3g/L 膽酸鹽)制造商:CSL Behring AG,伯爾尼，瑞士批號(hào):Q.3劑量:600mg/kg b.w.
途徑: 通過(guò)尾靜脈的靜脈內(nèi)灌輸頻率: 灌輸t=0_60分鐘施用體積:31.25mL/kg/h測(cè)試rHDL制劑2物質(zhì)/INN:rHDL PC1:100 (lg/L 膽酸鹽)制造商:CSL Behring AG,伯爾尼，瑞士批號(hào):0.3-2劑量:600mg/kg b.w.
途徑:通過(guò)尾靜脈的靜脈內(nèi)灌輸頻率: 灌輸t=0_60分鐘施用體積:30.30mL/kg/h測(cè)試rHDL制劑3物質(zhì)/INN:rHDL PC1:50 (3g/L 膽酸鹽)制造商:CSL Behring AG,伯爾尼,瑞士批號(hào):P.3劑量:600mg/kg b.w.
途徑: 通過(guò)尾靜脈的靜脈內(nèi)灌輸頻率: 灌輸t=0_60分鐘
施用體積:31.58mL/kg/h到期日:n.a.
測(cè)試rHDL制劑4物質(zhì)/INN:rHDL PC1:50 (0.2g/L 膽酸鹽)制造商:CSL Behring AG,伯爾尼，瑞士批號(hào)；P.2劑量；900mg/kg b.w.
途徑； 通過(guò)尾靜脈的靜脈內(nèi)灌輸頻率；灌輸t=0_120分鐘施用體積:23.08mL/kg/h研究設(shè)計(jì)將該研究設(shè)計(jì)為總共14只大鼠的開(kāi)放式四臂試驗(yàn)。劑量給藥方案概括于表I中。處理組表1:處理組
權(quán)利要求
1.重建的高密度脂蛋白(rHDL)制劑，其包含載脂蛋白或其片段；脂質(zhì)；和去污劑，去污劑水平為給予人時(shí)呈現(xiàn)肝毒性的rHDL制劑中存在的去污劑水平的約5-50%。
2.權(quán)利要求1的rHDL制劑，其中去污劑的水平為呈現(xiàn)肝毒性的去污劑水平的約5-10%ο
3.權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的rHDL制劑，其中去污劑的水平為約0.5-1.5g/L。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的rHDL制劑，其中去污劑的水平為約0.015-0.030g/g載脂蛋白。
5.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的rHDL制劑，其中去污劑是膽汁鹽或膽汁酸。
6.權(quán)利要求6的rHDL制劑，其中去污劑是膽酸鈉。
7.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的rHDL制劑，其中載脂蛋白是Apo-Al或其片段。
8.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的rHDL制劑，其中脂質(zhì)是磷脂。
9.權(quán)利要求8的rHDL制劑，其中磷脂是磷脂酰膽堿。
10.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的rHDL制劑，其中脂質(zhì)水平為呈現(xiàn)肝毒性的脂質(zhì)水平的20-70%ο
11.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的rHDL制劑，其中制劑進(jìn)一步包含穩(wěn)定劑。
12.生產(chǎn)包含載脂蛋白、脂質(zhì)和去污劑的rHDL制劑的方法，所述方法包括提供所述去污劑的步驟，去污劑水平為給予人`時(shí)呈現(xiàn)肝毒性的rHDL制劑中存在的去污劑水平的約5-50%ο
13.權(quán)利要求12的方法，其中去污劑的水平為呈現(xiàn)肝毒性的去污劑水平的約5-10%。
14.權(quán)利要求12或權(quán)利要求13的方法，其中去污劑的水平為約0.5-1.5g/L。
15.權(quán)利要求12-14任一項(xiàng)的方法，其中去污劑的水平為約0.015-0.030g/g載脂蛋白。
16.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中去污劑是膽汁鹽或膽汁酸。
17.權(quán)利要求16的方法，其中去污劑是膽酸鈉。
18.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中載脂蛋白是Apo-Al或其片段。
19.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中脂質(zhì)是磷脂。
20.權(quán)利要求19的方法，其中磷脂是磷脂酰膽堿。
21.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，其中脂質(zhì)水平為呈現(xiàn)肝毒性的脂質(zhì)水平的20-70%。
22.之前任一項(xiàng)權(quán)利要求的方法，包括以下步驟: (A)將不含有機(jī)溶劑的磷脂酰膽堿和膽酸鹽去污劑加入Apo-Al溶液中； (B)將步驟(I)中產(chǎn)生的溶液中的膽酸鹽去污劑水平降至約0.03g/g Apo-Al ； (C)將穩(wěn)定劑加入步驟(B)的溶液中。
23.可根據(jù)權(quán)利要求12-22任一項(xiàng)的方法獲得的rHDL制劑。
24.治療人的疾病、障礙或病癥的方法，包括將根據(jù)權(quán)利要求1-11或權(quán)利要求23任一項(xiàng)的rHDL制劑給予人的步驟，以由此治療所述的人的疾病、障礙或病癥。
25.權(quán)利要求24的方法，其中疾病、障礙或病癥包括心血管疾病、高膽留醇血癥或低膽甾醇血癥。
26.權(quán)利要求25的方法,其中疾病、障礙或病癥包括急性冠脈綜合征(ACS)、動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死。
27.根據(jù)權(quán)利要求1-11或權(quán)利要求23任一項(xiàng)的rHDL制劑，用于治療人的疾病、障礙或病癥。
28.根據(jù)權(quán)利要求27使用的rHDL制劑，其中疾病、障礙或病癥包括心血管疾病、高膽甾醇血癥或低膽留醇血癥。
29.根據(jù)權(quán)利要求28使用的rHDL制劑，其中疾病、障礙或病癥包括急性冠脈綜合征(ACS )、動(dòng)脈粥樣硬化和心 肌梗死。
全文摘要
一種重建的具有相對(duì)低毒性的高密度脂蛋白制劑包含載脂蛋白(如ApoAI)或其片段、脂質(zhì)和去污劑，去污劑的水平為給予人時(shí)通常引起肝毒性的去污劑水平的約5-50%。脂質(zhì)最好為約30-50g/L的磷脂酰膽堿，并且載脂蛋白:脂質(zhì)的摩爾比最佳在1:40至1:75的范圍內(nèi)。該制劑可用于治療疾病或病癥，如心血管疾病、高膽甾醇血癥或低膽甾醇血癥，包括急性冠脈綜合征(ACS)、動(dòng)脈粥樣硬化和心肌梗死。
文檔編號(hào)A61P9/10GK103118683SQ201180036314
公開(kāi)日2013年5月22日 申請(qǐng)日期2011年6月30日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月30日
發(fā)明者S·萊特, M·伊姆波登, R·波利, M·韋爾希里 申請(qǐng)人:Csl有限公司