專利名稱：穩(wěn)定化的人免疫球蛋白組合物的制作方法
穩(wěn)定化的人免疫球蛋白組合物本發(fā)明涉及可用于治療的人免疫球蛋白G的制劑。目前采用免疫球蛋白G(IgG)組合物來(lái)治療許多病狀?？梢蕴峒暗睦鐬榫哂锌贵w生產(chǎn)缺陷的原發(fā)性免疫缺陷、川崎病、兒童和成人的免疫性血小板減少性紫癜、具有抗體生產(chǎn)缺陷的繼發(fā)性免疫缺陷、特別是與反復(fù)感染相關(guān)的慢性淋巴性白血病或骨髓瘤、與細(xì)菌感染相關(guān)的患HIV的兒童的感染、多灶性運(yùn)動(dòng)神經(jīng)病、格林-巴利綜合征、慢性或嚴(yán)重的急性細(xì)小病毒B19感染、獲得性或組成性免疫缺陷、皮質(zhì)耐藥性(corticoresistant)皮肌炎、急性肌無(wú)力、原發(fā)性慢性多神經(jīng)根神經(jīng)炎、免疫性血小板減少性紫癜(例如與HIV感染相關(guān)的)、僵人綜合癥、自身免疫性中性粒細(xì)胞減少癥、耐藥性自身免疫性幼紅細(xì)胞減少癥、自身抗體誘導(dǎo)的獲得性抗凝血綜合癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。在最近幾年里，對(duì)IgG的非常高的需求產(chǎn)生了在供應(yīng)方面極度緊張的情況，在歐 洲和美國(guó)出現(xiàn)了缺貨的情況。在這種情況下，越來(lái)越需要生產(chǎn)來(lái)自例如人血漿的可通過(guò)靜脈內(nèi)途徑注射的IgG組合物。隨著對(duì)IgG的這些需求的增長(zhǎng)，從這些IgG組合物的治療用途和保存的角度來(lái)看，這些可通過(guò)靜脈內(nèi)途徑注射的IgG組合物(IgGIV)的穩(wěn)定化是至關(guān)重要的。在這方面，已知為了特別避免形成能夠激活補(bǔ)體系統(tǒng)的聚集物(低聚物和多聚物)，所述補(bǔ)體系統(tǒng)與過(guò)敏反應(yīng)、頭痛、發(fā)熱、疫塊、血壓下降(Bolli等,Biologicals, 2010,38 =150-157)的風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，有必要將IgGIV穩(wěn)定化。而且，IgGIV中二聚物的存在與體內(nèi)血壓下降相關(guān)。在IgG的保存期間也可能發(fā)生其它物理化學(xué)降解，例如氧化和水解等。因此，IgG的穩(wěn)定化需要添加化合物，所述化合物通常選自糖和氨基酸，從而獲得不僅適合治療用途的無(wú)降解的IgG組合物，而且也獲得在保存期間穩(wěn)定性增加的IgG組合物。已經(jīng)提出了幾種計(jì)劃用于靜脈內(nèi)施用的人免疫球蛋白制劑(參見(jiàn)，特別是專利US5945098，專利申請(qǐng)WO 2005/049078或WO 96/07429)。一種用于穩(wěn)定免疫球蛋白組合物的特別有效的制劑被描述在本申請(qǐng)人提交的國(guó)際專利申請(qǐng)WO 2004/091656中。該專利申請(qǐng)公開(kāi)了一種含有50g/l的IgG、50g/l的甘露醇、10g/l的甘氨酸和50ppm清潔劑的組合物，50ppm清潔劑相當(dāng)于濃度為50mg/l的清潔劑。冷凍干燥的IgGIV組合物是可商購(gòu)的，例如以商品名PoIygam (American RedCross)、Gammar IV (Armour Pharmaceutical 公司)和 Venoglobulin I (Alpha)，它們分別含有2%的葡萄糖、5%的蔗糖和2%的D-甘露醇作為穩(wěn)定劑。含有10%的麥芽糖、0. 16至0. 24M的甘氨酸和5%的D-山梨醇作為穩(wěn)定劑的IgGIV液體組合物是已知的，其商品名分別為Octagam (Octapharma)、Gamunex 10 %(Talecris)和 Venoglobulin (Alpha)。然而，對(duì)于具有良好耐受性并足夠穩(wěn)定以獲得最佳保存、便于使用的IgGIV制劑，仍然存在需求。發(fā)明概述本申請(qǐng)人現(xiàn)在開(kāi)發(fā)了一種用甘氨酸和非離子型清潔劑配制的包含人免疫球蛋白G的藥物組合物，其pH小于或等于4. 8。更具體地，本發(fā)明人示出了低pH對(duì)穩(wěn)定該制劑的重要性。因此，本發(fā)明的主題是包含人免疫球蛋白G(IgG)的藥物組合物，其包含至少200mM的甘氨酸，優(yōu)選250mM+/-50mM的甘氨酸，以及在20和100mg/l之間、優(yōu)選35mg/l+/-15mg/l、還優(yōu)選50mg/l的非離子型清潔劑，其特征在于，所述組合物具有小于或等于4. 8 的 pH。優(yōu)選地，所述組合物具有在4. 4和4. 8之間的pH。優(yōu)選地，pH為4. 6。本發(fā)明的組合物有利地為液體形式?？梢灾苯又苽渌鼋M合物或可以通過(guò)用水重構(gòu)冷凍干燥產(chǎn)品獲得所述組合物。本發(fā)明的另一個(gè)主題是通過(guò)干燥、優(yōu)選冷凍干燥本文所述液體組合物而獲得的固 體組合物。發(fā)明詳述定義在本發(fā)明的上下文中，表述“人免疫球蛋白G”或“人IgG”應(yīng)理解為指的是任選包含IgM的本質(zhì)上為IgG的多價(jià)免疫球蛋白。它們可以為完整的免疫球蛋白，或片段例如F (ab’)2或F (ab)，或在多價(jià)免疫球蛋白的制備方法中獲得的任何中間級(jí)分。 術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定性”對(duì)應(yīng)于IgG的物理和/或化學(xué)穩(wěn)定性。術(shù)語(yǔ)“物理穩(wěn)定性”是指免疫球蛋白的二聚、低聚或多聚形式的不溶性或可溶性聚集物的形成減少或不存在，以及分子的任何結(jié)構(gòu)變性減少或不存在。術(shù)語(yǔ)“化學(xué)穩(wěn)定性”是指在加速條件下，在儲(chǔ)存期間，固態(tài)或溶解形式的IgG的任何化學(xué)修飾減少或不存在。例如，水解、去氨基和/或氧化的現(xiàn)象被避免或延遲。含硫氨基酸的氧化被限制。制劑優(yōu)選地，IgG的濃度為 100g/l+/_20g/l。所確定的濃度是相對(duì)于干燥前液體形式的組合物或重構(gòu)后可注射制劑形式的組合物而言的。根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述組合物不含有甘露醇。實(shí)際上，據(jù)顯示，甘露醇對(duì)于穩(wěn)定制劑而目不是必需的。更具體地，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，僅有的賦形劑是甘氨酸和非離子型清潔劑。本發(fā)明的組合物中所使用的合適的非離子型清潔劑有利地選自聚山梨醇酯80(或吐溫(Tween) 80，其為聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯)、聚山梨醇酯20(或吐溫 20，其為聚氧乙烯山梨醇酐月桂酸酯)、Triton X 100(辛基酚聚醚10)、泊洛沙姆、聚氧乙烯烷基醚、乙烯/聚丙烯嵌段共聚物、以及普朗尼克(Pluronic) :F68(聚乙二醇-聚丙二醇(polyethylene-polypropylene glycol))。所述非離子型清潔劑優(yōu)選地選自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、和/或聚乙二醇-聚丙二醇例如普朗尼克 F68。所述非離子型清潔劑還可以彼此組合。 本發(fā)明的組合物還可以包含其它添加劑。這樣的添加劑可以是選自本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域中常規(guī)使用的各種類別的穩(wěn)定劑的化合物，例如表面活性劑、糖和氨基酸；以及加入到制劑中以例如調(diào)節(jié)其pH、離子強(qiáng)度等的賦形劑?；蛘撸景l(fā)明的組合物不包含除所述甘氨酸和非離子型清潔劑之外的其它賦形劑。這樣的組合物具有的優(yōu)點(diǎn)是憑借存在有效的最小數(shù)量的賦形劑以及存在有效的最低量的賦形劑來(lái)提供免疫球蛋白組合物的良好穩(wěn)定化，并降低工業(yè)規(guī)模制備的周期和成本。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的組合物包含-100g/l 的 IgG-250mM的甘氨酸_50mg/l的聚山梨醇酯80。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的組合物包含-100g/l 的 IgG-25OmM的甘氨酸-20mg/l的聚山梨醇酯20。免疫球蛋白G —般是通過(guò)將人血漿分級(jí)而獲得的，并被提供在水性介質(zhì)中。所述水性介質(zhì)由注射用水組成，所述注射用水可以含有藥學(xué)可接受的并與IgG相容的賦形劑。IgG組合物可以預(yù)先經(jīng)受特定的病毒滅活/消除步驟，例如清潔劑溶劑處理、巴氏滅菌和/或納米過(guò)濾。本發(fā)明的組合物包含可以為多克隆或單克隆的IgG。所述IgG可以是從人或動(dòng)物血液中分離的或通過(guò)其它方法例如通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)、例如在本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的細(xì)胞系統(tǒng)中制備的。本發(fā)明的組合物特別適合于高度純化的IgG。有利地，本發(fā)明的IgG是通過(guò)將人血衆(zhòng)分級(jí)而獲得的。Cohn等(J. Am. Chem. Soc. , 68,459,1946)、Kistler等(VoxSang.，7，1962，414-424)、Steinbuch 等(Rev. Franc. Et. Clin. Et Biol.，XIV,1054，1969)以及在專利申請(qǐng)WO 94/9334中描述了將人血漿分級(jí)的優(yōu)選方法，這些文獻(xiàn)通過(guò)參考以其全文結(jié)合于此。制備免疫球蛋白G組合物的方法也被描述在專利申請(qǐng)WO 02/092632中，所述專利申請(qǐng)通過(guò)參考以其全文結(jié)合于此。本發(fā)明的液體組合物可以進(jìn)行干燥，以便獲得能夠被保存得更長(zhǎng)久并更方便運(yùn)輸和銷售的固體形式。干燥是在很大程度上去除水的過(guò)程。其包括脫水，目的在于去除盡可能多的水。這種現(xiàn)象可以是天然的或被迫的。這樣的干燥可以借助冷凍干燥、噴霧干燥和冷凍噴霧干燥技術(shù)來(lái)實(shí)施。制備本發(fā)明的藥用組合物的固體形式的優(yōu)選方式為冷凍干燥。冷凍干燥方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，參見(jiàn)例如[Wang等，固體蛋白質(zhì)藥物的凍干和發(fā)展(Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals),International Journal of Pharmaceutics,第 203 卷，第 1-60 頁(yè)，2000]。也可以設(shè)想出用于降低組合物的含水率或含水量的其它合適的方法。優(yōu)選地，含水率為小于或等于3重量％，優(yōu)選小于或等于2. 5 %，優(yōu)選小于或等于2 %，優(yōu)選小于或等于1.5%。本發(fā)明的組合物可以有利地經(jīng)受用于去除或滅活傳染原的方法，例如通過(guò)將冷凍干燥產(chǎn)品干燥加熱。本發(fā)明的固體組合物，優(yōu)選為冷凍干燥的形式，可以被溶解在注射用水(WFI)中，以便獲得治療用制劑。施用途徑本發(fā)明的組合物可用于治療，具體地為可注射的形式，優(yōu)選通過(guò)靜脈內(nèi)途徑注射。因此，所述組合物為液體形式。以下附圖和實(shí)施例闡述本發(fā)明，但不限制其范圍。


圖1A和IB是示出了在甘氨酸中的免疫球蛋白制劑在不同pH值下的動(dòng)態(tài)模式(圖1A)或靜態(tài)模式(圖1B)光散射測(cè)量結(jié)果的柱狀圖。圖2是示出了免疫球蛋白制劑在熱應(yīng)力條件(57°C )下在不同pH值下的濁度(400nm下的0D)測(cè)量的監(jiān)測(cè)結(jié)果的圖?！D3是示出了在旋轉(zhuǎn)攪拌應(yīng)力(顛倒燒瓶)條件下pH對(duì)免疫球蛋白制劑濁度的影響的圖。
實(shí)施例實(shí)施例1 :pH對(duì)免疫球蛋白行為的影響的研究在IOOmM的甘氨酸緩沖液中的10%的濃人免疫球蛋白G制劑上測(cè)試pH的影響，其中在不變性條件下調(diào)節(jié)PH，也就是說(shuō)通過(guò)用具有調(diào)節(jié)后的pH的緩沖液進(jìn)行透析來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)pH的獲得。測(cè)試了幾種pH值:4. 6 ；5. 2 ；5. 7 ；6. 4 ;6. 8。在調(diào)節(jié)PH(t = 0)后，通過(guò)光散射測(cè)試(90°角)來(lái)監(jiān)測(cè)免疫球蛋白的聚集狀態(tài)。在調(diào)節(jié)后并且在沒(méi)有對(duì)制劑施加應(yīng)力的情況下，溶液顯示出不同的聚集狀態(tài)。實(shí)際上，靜態(tài)模式和動(dòng)態(tài)模式的光散射測(cè)量顯示，隨著pH的升高，亞微米級(jí)聚集增加(圖1A和1B)。蛋白質(zhì)溶液是由不同亞類的免疫球蛋白(Igl、Ig2、Ig3和Ig4)組成的，不同亞類的免疫球蛋白在異電點(diǎn)(Pl)方面表現(xiàn)出異質(zhì)性，范圍大致為5至9。pH實(shí)際上被認(rèn)為直接影響那些具有低Pl (< 7.0)的免疫球蛋白(Ig)的有效電荷。在這個(gè)pH范圍內(nèi)，一些免疫球蛋白從全正電荷轉(zhuǎn)變?yōu)槿?fù)電荷，這改變了其與其它免疫球蛋白靜電相互作用的性質(zhì)。本文中在調(diào)節(jié)PH后觀察到的聚集類似于低聚化。測(cè)試顯示，為了具有排斥性的相互作用并因此在整體上穩(wěn)定化，約4. 6的pH是有利的。圖2示出了在熱應(yīng)力條件(57V )下濁度(400nm下的0D)測(cè)量的監(jiān)測(cè)結(jié)果，顯示了 PH對(duì)免疫球蛋白的肉眼可見(jiàn)的聚集的影響。在此，同樣地，4. 6的pH是最有利的，pH增加會(huì)促進(jìn)聚集現(xiàn)象。還執(zhí)行了旋轉(zhuǎn)攪拌應(yīng)力(顛倒燒瓶)，以證明pH對(duì)水-空氣界面處的聚集的作用。在離心并重懸以去除潛在的微泡后進(jìn)行濁度測(cè)量。圖3顯示免疫球蛋白在界面處的聚集極大地受到pH的影響。實(shí)施例2 免疫球蛋白制劑在pH 4. 6下用以下賦形劑制備了幾種10%濃度的人免疫球蛋白制劑表1:所測(cè)試的制劑
權(quán)利要求
1.包含人免疫球蛋白G(IgG)的液體藥物組合物，其包含至少200mM的甘氨酸，優(yōu)選250mM+/-50mM的甘氨酸，以及在20mg/l和100mg/l之間的非離子型清潔劑,其特征在于,所述組合物具有小于或等于4. 8的pH。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物,所述組合物具有在4.4和4. 8之間的pH、優(yōu)選4. 6的pH。
3.權(quán)利要求1或2的組合物，其特征在于，所述組合物不含有甘露醇。
4.權(quán)利要求1至3之一的組合物，其特征在于，免疫球蛋白G的濃度為100g/l+/-20g/I0
5.權(quán)利要求1至4之一的組合物,其特征在于,所述組合物包含35mg/l+/-15mg/l、優(yōu)選50mg/l的非離子型清潔劑。
6.權(quán)利要求1至5之一的組合物，其特征在于，僅有的賦形劑為甘氨酸和非離子型清潔劑。
7.權(quán)利要求1至6之一的組合物，其特征在于，非離子型清潔劑選自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、和/或聚乙二醇-聚丙二醇如普朗尼克 F68。
8.權(quán)利要求7的組合物，其包含-100g/l 的 IgG -250mM的甘氨酸 -50mg/l的聚山梨醇酯80。
9.權(quán)利要求7的組合物，其包含 -100g/l 的 IgG -250mM的甘氨酸 -20mg/l的聚山梨醇酯20。
10.權(quán)利要求1至9之一的組合物，其特征在于，免疫球蛋白G是通過(guò)將人血漿分級(jí)而獲得的。
11.權(quán)利要求1至10之一的組合物，其是通過(guò)用水重構(gòu)冷凍干燥產(chǎn)品獲得的。
12.固體組合物，其是通過(guò)干燥、優(yōu)選冷凍干燥權(quán)利要求1至10之一的液體組合物而獲得的。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含人免疫球蛋白G(IgG)的液體藥物組合物，其包含至少200mM、優(yōu)選250mM+/-50mM的甘氨酸以及在20mg/l和100mg/l之間的非離子型清潔劑，并具有小于或等于4.8的pH。
文檔編號(hào)A61K38/00GK103025355SQ201180029648
公開(kāi)日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2011年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月15日
發(fā)明者西爾萬(wàn)·惠勒, 萊蒂迪亞·科亨-塔諾德吉 申請(qǐng)人:分餾及生物技術(shù)法國(guó)實(shí)驗(yàn)室