專利名稱：水包油乳液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及改進(jìn)的用于生產(chǎn)水包油乳液(具體地，包含角鯊烯的亞微米水包油乳液)的方法。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)水包油乳液的方法。生產(chǎn)方法公開在Ott等人，2000(The Adjuvant MF59: A 10-year Perspective. Vaccine Adjuvants: Preparationmethods and Research Protocols [Methods in Molecular medicine,第 42 卷，弟 12章，第 211-228 頁]，Ott 等人，1995 (MF59 - Design and Evaluation of a Safe andPotent Adjuvant for Human Vaccines: Vaccine Design, the Subunit and AdjuvantApproach [Pharmaceutical Biotechnology 第6卷]Powel I 和 Newman 編，W006/10011OA I,以及 Lidgate 等人,1992 (Sterile Filtration of a Parenteral Emulsion.Pharmaceuticals Research 9(7): 860-863)。水包油乳液可以作為佐劑用于疫苗/免疫原性組合物中。由于這些乳液被施用給人類，因而所述乳液必須是無菌的。用作佐劑的水包油乳液是亞微米乳液，且油微滴足夠小以穿過0. 2Mffl過濾器進(jìn)行無菌過濾。本發(fā)明的ー個目的是，提供一種用于生產(chǎn)亞微米水包油乳液的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及一種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，具體地，涉及ー種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，所述方法包括下述步驟a)將表面活性劑溶解在一定體積的水或水溶液中，以生產(chǎn)表面活性劑溶液；和b)在大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中稀釋所述表面活性劑溶液，以生產(chǎn)水相。
具體實施例方式通過將油相(其包含ー種或多種油和任選的ー種或多種表面活性劑)與包含表面活性劑的水相進(jìn)行組合和混合，制備水包油乳液。所述表面活性劑允許形成穩(wěn)定的乳液，即不會在短時期內(nèi)分離成油相和水相的乳液。發(fā)明人已經(jīng)證實，通過將表面活性劑溶解在小體積的液體中，然后將得到的表面活性劑溶液加入更大體積的液體中，它們會確保所述表面活性劑在水相中的完全溶解。如果直接將表面活性劑加入大體積的液體中，所述表面活性劑會聚集在包含大體積液體的容器(例如，罐)的底部，使它難以溶解。如果表面活性劑保持在罐的底部，可能影響所述乳液的組成和穩(wěn)定性。因此，本發(fā)明提供了一種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，所述方法包括下述步驟a)將表面活性劑溶解在一定體積的水或水溶液中，以生產(chǎn)表面活性劑溶液；和b)在大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中稀釋所述表面活性劑溶液，以生產(chǎn)水相。當(dāng)生產(chǎn)大體積的水包油乳液并因而使用大體積的水相時，本發(fā)明的方法是特別有用的。因此，在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，提供了如本文所述的方法，其中生產(chǎn)的水包油乳液的體積為大于約 10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、250、300、350、400、450、500 或 550 升(L)，例如為 50L、280L 或 560L 規(guī)模。通過任意方式，例如傾倒，可以將表面活性劑溶液加入大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中。在ー個具體實施方案中，使用泵、尤其是蠕動泵或膜泵，將表面活性劑溶液加入大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中。當(dāng)使用大體積的水相時，本發(fā)明的方法是特別有用的，因而，在一個實施方案中，提供了如本文所述的方法，其中所述水相占水包油乳液的約80%至約98%、約85%至約97%、89%至96%、或約90%至95%，例如約90%、或約95% (v/v)。本發(fā)明中的表面活性劑溶液[即步驟a)的產(chǎn)物]的體積小于在步驟b)中用于稀·釋其的水或水溶液的體積。因此，在一個實施方案中，所述表面活性劑溶液占水相總體積的約0. 001%至約40%、約0. 01%至約20%、約0. 02%至約15%、約0. 03%至約10%、約0. 04至約5%，例如 0. 1,0. 2,0. 3,0. 4,0. 5,0. 6,0. 7,0. 8,0. 9、1、2、3、4、5、6、7、8、9 或 10% (v/v)。將所述表面活性劑溶解在水或水溶液中。具體地，所述水可以是注射用水(WFI)，即適合腸胃外使用的水?；蛘?，將所述表面活性劑溶解在水溶液(諸如緩沖液)中。所述緩沖液也適用于腸胃外使用。合適的緩沖液是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，包括、但不限于磷酸鹽緩沖液、檸檬酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、琥珀酸鹽緩沖液、馬來酸鹽緩沖液或硼酸鹽緩沖液。在ー個具體實施方案中，所述緩沖液選自磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、改進(jìn)的PBS (PBS-mod)和檸檬酸鹽緩沖液。如果在步驟a)中使用緩沖液，那么，在ー個具體實施方案中，所述緩沖液可以相對于在水相中的終濃度進(jìn)行濃縮，例如，所述緩沖液可以濃縮約5-25倍，例如濃縮5、10、
15、20、25、30倍。如果在步驟a)中使用水，那么，在ー個具體實施方案中，使用緩沖液來稀釋表面活性劑溶液，所述緩沖液可以是或不是濃縮的。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，提供了一種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，所述方法包括下述步驟a)將表面活性劑聚氧こ烯脫水山梨糖醇單油酸酷)溶解在一定體積的濃縮緩沖液(例如PBS-mod)中，以生產(chǎn)表面活性劑溶液；和b)在大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的注射用水(WFI)中稀釋所述所述表面活性劑溶液，以生產(chǎn)水相。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，提供了一種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，所述方法包括下述步驟a)將表面活性劑(例如聚氧こ烯脫水山梨糖醇單油酸酷)溶解在一定體積的WFI中，以生產(chǎn)表面活性劑溶液；和b)在大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的緩沖液(例如檸檬酸鹽緩沖液)、任選地濃縮緩沖液中稀釋所述表面活性劑溶液，以生產(chǎn)水相。在一個實施方案中，可以在步驟a)和b)中使用緩沖液，在ー個具體實施方案中，在步驟a)和b)中使用相同的緩沖液。在這樣的情況下，所述緩沖液通常不是濃縮的；但是，在一個實施方案中，在步驟a)中的緩沖液是濃縮的，而在步驟b)中的緩沖液是稀釋的緩沖液。
合適的表面活性劑是技術(shù)人員眾所周知的，包括，但不限干聚氧こ烯脫水山梨糖醇單油酸酯(吐溫80、聚山梨酯80)、脫水山梨糖醇三油酸酯(司盤85)、磷脂酰膽堿(卵磷脂)和辛苯昔醇-9 (TRITON X-100)。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，在步驟a)中使用的表面活性劑是聚氧こ烯脫水山梨糖醇單油酸酯(吐溫80、聚山梨酯80)。在本發(fā)明的一個實施方案中，要混合進(jìn)水相中的表面活性劑的量是這樣的量其使所述表面活性劑在所述水包油乳液中的終濃度為約0. I至約I. 5%、例如約0. 5%至約1%(w/v)。應(yīng)當(dāng)指出，可以將ー種或多種其它的表面活性劑加入油相中，例如，可以將脫水山梨糖醇三油酸酯加入油相(其包含例如角鯊烯)中，然后將油相和水相混合到一起。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，提供了如本文所述的方法，所述方法進(jìn)ー步包括步驟c):將所述水相[即步驟b)的產(chǎn)物]引 入混合裝置中。本文使用的術(shù)語“混合裝置”是指，適用于混合油相和水相以形成乳液的裝置。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，所述混合裝置是高剪切混合裝置。合適的高剪切混合裝置是技術(shù)人員已知的，包括但不限于高速槳葉勻衆(zhòng)器、直列勻衆(zhòng)器(inline homogenizer)、膠體磨或聲譜顯示儀(sonolator)。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，所述混合裝置是高壓勻漿器。合適的高壓勻漿器是技術(shù)人員已知的，包括但不限于固定幾何形狀的微射流機(jī)(microfluidiser)或可變幾何形狀的高壓勻衆(zhòng)器。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，提供了如本文所述的方法，所述方法進(jìn)ー步包括步驟d):將油相引入本文所述的混合裝置中。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，水相的引入[步驟C)]和油相的引入[步驟d)]基本上同時地進(jìn)行。在ー個具體實施方案中，通過在含有油相和/或水相的罐中施加正壓，進(jìn)行步驟c)和/或d)。所述油相可以包含ー種或多種可代謝的油。在ー個具體實施方案中，所述油相包含角鯊烯或角鯊?fù)?，尤其是角鯊烯。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，所述油相包含母育酚，在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，所述油相包含Ct -生育酹。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，所述油相包含角鯊烯和a-生育酚。所述油相可以另外包含本文所述的表面活性剤。在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，所述油相包含脫水山梨糖醇三油酸酯(司盤85)，且在本發(fā)明的ー個具體實施方案中，所述油相包含角鯊烯和脫水山梨糖醇三油酸酯(司盤85)。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，本文所述的水相和油相以約90:10或約95:5 (v/V百分比)的比例引入。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，提供了如本文所述的方法，所述方法進(jìn)ー步包括步驟e):混合所述油相和水相，以形成水包油乳液。在步驟e)中混合以后，如果在例如高剪切混合裝置中混合的話，所述水包油乳液可以是粗的水包油乳液。為了減小水包油乳液中的油微滴的尺寸使得它適合無菌過濾，例如，可以在例如高壓勻漿器中進(jìn)ー步加工得自步驟e)的乳液。因此，在本發(fā)明的另ー個實施方案中，提供了本文所述的方法，所述方法進(jìn)ー步包括步驟f):對步驟e)的水包油乳液進(jìn)行高壓勻漿化，以形成亞微米水包油乳液。通過改變?nèi)橐捍┻^高壓勻漿器的次數(shù)，技術(shù)人員可以實現(xiàn)所需的油微滴尺寸，因為油微滴大小在每個循環(huán)以后都會減小。因此，在本發(fā)明的一個實施方案中，提供了如本文所述的方法，其中對所述乳液進(jìn)行高壓勻漿化[步驟f)] 1、2、3、4、5、6、7、8或更多次。在本發(fā)明的另ー個實施方案中，所述高壓勻漿化是在約10000至約20000、約12000至約18000、約14000至約16000或約15000±1000 psi的壓カ進(jìn)行。在高壓勻漿化過程中，所述水包油乳液的溫度通常升高，因而，在本發(fā)明的ー個實施方案中，在對所述乳液進(jìn)行高壓勻漿化一次或多次以后，但是至少在最后一次以后，將所述水包油乳液冷卻至約15°C至約30°C、約16°C至約29°C、約17°C至約28°C、約16°C至約27°C、或約 16°C 至約 28 °C。在每種情況下，本發(fā)明人在本文中意圖任選地用術(shù)語“由……組成”、“由……構(gòu)成”分別替代術(shù)語“包含”、“包括”。詞語“基本上”不排除“完全”，例如“基本上不含有” Y的組合物可以完全不含有Y。在必要吋，詞語“基本上”可以從本發(fā)明的定義中省棹。與數(shù)字值z有關(guān)的術(shù)語“約”是指z±5或10%。現(xiàn)在將通過參考下述的非限制性實施例來進(jìn)ー步描述本發(fā)明。
實施例I. I水相制備
在使用之前，用氮(N2)惰性化用于生產(chǎn)水相(稱作罐I)和用于乳液循環(huán)(circuit)(稱作罐2)的不銹鋼罐。分2步制備水相
a.將聚山梨酯80溶解于裝在瓶子或塑料袋中的濃縮的等滲的磷酸鹽緩沖鹽水溶液(PBS-mod緩沖液20 X [參見下面表I])中。b.將注射用水(WFI)裝入不銹鋼罐(罐I)中，并在使用前用N2惰性化。就小規(guī)模エ藝(最多70L)而言，然后通過在頂板中的開ロ，將PBS-mod緩沖液20 x/聚山梨酯80混合物倒入該罐中，在罐I內(nèi)裝的WFI中稀釋，并攪拌至達(dá)到均質(zhì)。或者，在更大的規(guī)模(超過70L)，在放入罐I中的約5L水中，進(jìn)ー步稀釋在磷酸鹽緩沖鹽水溶液中稀釋的聚山梨酯80，然后用蠕動泵將稀釋的溶液抽吸至罐I中。在該情況下，為了得到可抽吸的更低粘度的溶液，在WFI中的稀釋是必要的。表 I: PBS-mod 緩沖液(20 X 濃縮)。
權(quán)利要求
1.一種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，所述方法包括下述步驟a)將表面活性劑溶解在一定體積的水或水溶液中，以生產(chǎn)表面活性劑溶液；和b)在大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中稀釋所述表面活性劑溶液，以生產(chǎn)水相。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其中所述表面活性劑溶液的體積占水相總體積的約.0.001% 至約 40%、約 0. 01% 至約 20%、約 0. 02% 至約 15%、約 0. 03% 至約 10%、約 0. 04 至約 5%、或約 0. 05% (v/v) o
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的方法，其中要生產(chǎn)的水包油乳液的體積為大于約10、15、20、25、30、35、40、50、60、70、80、90、100、200、250、300、350、400、450、500或550 升(L)，例如為 50L、280L 或 560L 規(guī)模。
4.根據(jù)任ー項前述權(quán)利要求所述的方法，其中使用泵、尤其是蠕動泵或膜泵，將所述表面活性劑溶液加入大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中。
5.根據(jù)任ー項前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述水相占所述水包油乳液的約80%至約98%、約85%至約97%,89%至96%、或約90%至95%,例如約90%或約95% (v/v)。
6.根據(jù)任ー項前述權(quán)利要求所述的方法，其中所述表面活性劑是聚氧こ烯脫水山梨糖醇單油酸酯(吐溫80/聚山梨酯80)。
7.根據(jù)任ー項前述權(quán)利要求所述的方法，其中步驟a)的水溶液包括緩沖液，任選為濃縮緩沖液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中在步驟b)中使用了水。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中在步驟a)中使用了水。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其中步驟b)中的水溶液包括緩沖液，任選為濃縮緩沖液。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項所述的方法，其中在步驟a)和步驟b)中使用水溶液，該水溶液包括緩沖液。
12.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中所述緩沖液或濃縮緩沖液包括檸檬酸鈉-檸檬酸緩沖液。
13.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項所述的方法，其中所述緩沖液或濃縮緩沖液是磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)溶液。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的方法，其中所述PBS是改進(jìn)的PBS。
15.根據(jù)任ー項前述權(quán)利要求所述的方法，所述方法進(jìn)ー步包括步驟c):將所述水相引入混合裝置中。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，所述方法包括步驟d):將油相引入混合裝置中。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的方法，其中步驟c)和d)基本上同時地進(jìn)行。
18.根據(jù)權(quán)利要求15-17中任一項所述的方法，其中通過在含有油相和/或水相的罐中施加正壓，進(jìn)行步驟c)和或d)。
19.根據(jù)權(quán)利要求16-18中任一項所述的方法，其中以約90:10(v/v百分比)的比例引入所述水相和油相。
20.根據(jù)權(quán)利要求15-19中任一項所述的方法，其中所述混合裝置是高剪切勻漿器或高壓勻漿器。
21.根據(jù)權(quán)利要求16-20中任一項所述的方法，所述方法包括步驟e):混合所述油相和水相，以形成水包油乳液。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，所述方法進(jìn)ー步包括步驟f):對步驟e)的水包油乳液進(jìn)行高壓勻漿化，以形成亞微米水包油乳液。
23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其中步驟f)進(jìn)行2、3、4、5或6次。
24.根據(jù)權(quán)利要求22或23所述的方法，其中在約10000至約20000、約12000至約18000、約14000至約16000、或約15000±1000 psi，進(jìn)行所述高壓勻漿化。
25.根據(jù)權(quán)利要求22-24中任一項所述的方法，其中在每次進(jìn)行步驟f)以后，將水包油亞微米乳液冷卻至約15°C至約30°C、約16°C至約29°C、約17°C至約28°C、約16°C至約27°C、或約 16°C 至約 28 °C。
26.根據(jù)權(quán)利要求16-25中任一項所述的方法，其中所述油相包含角鯊烯。
27.根據(jù)權(quán)利要求16-26中任一項所述的方法，其中所述油相包含表面活性剤。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述表面活性劑是脫水山梨糖醇三油酸酯(司盤 85)。
29.根據(jù)權(quán)利要求16-26中任一項所述的方法，其中所述油相包含母育酚。
30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述母育酚是a-生育酚。
全文摘要
本發(fā)明提供一種用于生產(chǎn)水包油乳液的方法，所述方法包括下述步驟a)將表面活性劑溶解在一定體積的水或水溶液中，以生產(chǎn)表面活性劑溶液；和b)在大于所述表面活性劑溶液的體積的一定體積的水或水溶液中稀釋所述表面活性劑溶液，以生產(chǎn)水相。
文檔編號A61K31/00GK102970976SQ201180028601
公開日2013年3月13日 申請日期2011年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月10日
發(fā)明者J.科龍瓦爾 申請人:葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司