專利名稱：抗腫瘤組合物的制作方法
抗腫瘤組合物本發(fā)明涉及包含禽副粘病毒(Avian Paramyxovirus, APMV)的藥物組合物,其用于治療哺乳動(dòng)物的腫瘤。新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)是禽副粘病毒(APMV)的成員之一，其導(dǎo)致多種鳥(niǎo)類感染。NDV屬于APMV I。該疾病以呼吸道、腦或胃腸道的炎癥為特征。數(shù)十年前即已知，新城疫病毒具有另一種并且相當(dāng)出乎意料的特性由于部分未知的原因，其在哺乳動(dòng)物中具有抗腫瘤作用。因此，僅次于接種禽類物種的興趣，對(duì)新城疫病毒和其他副粘病毒在癌癥治療(包括人癌癥治療)中的用途的興趣不斷增加。當(dāng)新城疫病毒在人體內(nèi)復(fù)制時(shí)，一般來(lái)講，病毒不會(huì)表現(xiàn)出毒力。感染NDV的人體最熟知的癥狀是輕度結(jié)膜炎。首次參與用活的減毒NDV對(duì)大量雞進(jìn)行接種的獸醫(yī)師常常患有這種結(jié)膜炎。然而，由于未研究透徹的原因，哺乳動(dòng)物腫瘤細(xì)胞的致病性大大高于非腫瘤細(xì)胞的致病性。據(jù)估計(jì)，ND在癌癥細(xì)胞中的復(fù)制高于正常細(xì)胞中高達(dá)約100. 000倍。NDV不是唯一具有抗腫瘤作用(例如溶瘤作用)的APMV。目前，APMV1、3、4、5、6、7、
8、9以及Mapuerta病毒和Fer-de_Lance病毒的溶瘤毒株是已知的,參見(jiàn)例如美國(guó)專利申請(qǐng)US2009/0208495。APMV有兩種類型溶解性(Iytic)和非溶解性(non-lytic)毒株。溶解性和非溶解性毒株二者均能夠殺死癌癥細(xì)胞，但是溶解性細(xì)胞具有稍快的作用模式(Schirrmacher，V.等，Int. J. Oncol. 2001 May; 18(5) : 945-52)。據(jù)推測(cè)，溶解性毒株破壞已感染細(xì)胞的質(zhì)膜，而非溶解性毒株表現(xiàn)為干擾細(xì)胞代謝。因此，盡管機(jī)制不同，溶解性和非溶解性毒株二者均對(duì)腫瘤細(xì)胞具有毒性。因此，為了避免混淆，溶解性和非溶解性毒株二者還將進(jìn)一步被稱為細(xì)胞毒性毒株。由于在文獻(xiàn)中，溶解性毒株也被稱為溶瘤毒株，因此此處溶解性毒株的用詞將指溶瘤毒株。已經(jīng)對(duì)溶解性和非溶解性NDV毒株在抗擊癌癥中的用途進(jìn)行了研究。這使得開(kāi)發(fā)出三種不同的基礎(chǔ)性抗腫瘤療法
I)對(duì)患者施用一種非溶解性或溶解性APMV毒株。2)對(duì)患者施用所謂的腫瘤溶解劑(oncolysates)，所述腫瘤溶解劑包含來(lái)自已體外感染APMV的癌癥細(xì)胞的質(zhì)膜碎片。3)對(duì)患者施用已感染非溶解性APMV毒株的完整癌癥細(xì)胞。第一種方法的理論基礎(chǔ)是溶解性病毒株的擴(kuò)散以及隨后該病毒株的復(fù)制將最終導(dǎo)致體內(nèi)所有腫瘤細(xì)胞的感染。這種方法的一個(gè)不利結(jié)果是，一段時(shí)間后免疫應(yīng)答將被誘導(dǎo)，其可能中和親本和/或子代病毒。第二種和第三種方法的理論基礎(chǔ)是當(dāng)腫瘤細(xì)胞表面上的腫瘤特異性抗原與病毒抗原相互聯(lián)系時(shí)，其被更好地識(shí)別。第二種和第三種方法之間的選擇取決于經(jīng)推測(cè)，是質(zhì)膜還是全細(xì)胞提供較好的應(yīng)答?；诓《镜目鼓[瘤方法1、2和3的弊端是一段時(shí)間后將誘導(dǎo)針對(duì)APMV的免疫應(yīng)答，其可能干擾親本和/或子代病毒并阻斷更多細(xì)胞感染。
這一難題已經(jīng)通過(guò)幾種途徑解決。一些方法依賴于La.將編碼干擾宿主免疫系統(tǒng)的化合物的異源基因引入病毒基因組中。另一種方法是一周數(shù)次給予(非常)高劑量的病毒，以克服所誘導(dǎo)抗體的作用，或誘導(dǎo)對(duì)病毒的某種免疫耐受性。
其他方法嘗試通過(guò)非常強(qiáng)力的首次攻擊來(lái)規(guī)避第二輪和更多輪病毒感染的必要性。這可以例如通過(guò)聯(lián)合施用NDV和一些抗腫瘤藥物(例如細(xì)胞毒性或細(xì)胞抑制性化合物)來(lái)進(jìn)行。其他此類方法依賴于將編碼例如靶向腫瘤特異性抗原的全長(zhǎng)IgG抗體的基因引入NDV 中。這些方法共有的弊端是，與采用相對(duì)低濃度的NDV的基礎(chǔ)性治療相比，每一種均使患者更加惡化。因此，需要替代性方法以減少與抗體誘導(dǎo)相關(guān)的難題。本發(fā)明的一個(gè)目的是提供減少與抗體誘導(dǎo)相關(guān)的難題并且不會(huì)面臨上面提及之弊端的方法。在該方面中，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及包含禽副粘病毒(APMV)的藥物組合物，其用于治療哺乳動(dòng)物的腫瘤，其中所述治療包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用細(xì)胞毒性量的第一APMV的步驟以及隨后在第一 APMV施用后2-56周內(nèi)對(duì)該哺乳動(dòng)物施用細(xì)胞毒性量的第二APMV的步驟，其中所述第二 APMV具有免疫學(xué)上不同于第一 APMV的HN蛋白的HN蛋白。所有APMV均攜帶編碼血細(xì)胞凝集素(Hemagglutinin) /神經(jīng)氨酸苷酶(Neuraminidase, HN)活性的基因和編碼融合(F)蛋白的基因。血細(xì)胞凝集素/神經(jīng)氨酸苷酶是保護(hù)性免疫應(yīng)答的強(qiáng)力誘導(dǎo)者，而融合蛋白也在某種(盡管較少)程度上參與保護(hù)性免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)?，F(xiàn)在令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，禽副粘病毒(APMV’s)多個(gè)成員的血細(xì)胞凝集素/神經(jīng)氨酸苷酶和融合蛋白之間具有非常低的免疫學(xué)交叉反應(yīng)性。在一些情況下甚至實(shí)際上不存在免疫學(xué)交叉反應(yīng)性。這一出乎意料的發(fā)現(xiàn)開(kāi)辟了減少或優(yōu)選避免出現(xiàn)與首次施用APMV毒株后免疫誘導(dǎo)相關(guān)之難題的新方法。達(dá)到此目的的一種途徑是對(duì)哺乳動(dòng)物施用細(xì)胞毒性量的第一 APMV，隨后在所述第
一APMV施用后2-56周內(nèi)對(duì)該哺乳動(dòng)物施用細(xì)胞毒性量的第二 APMV’注意第二 APMV具有免疫學(xué)上不同于第一 APMV的HN蛋白的HN蛋白(優(yōu)選融合蛋白)。本方面中的免疫學(xué)上不同是指第二 HN蛋白(優(yōu)選融合蛋白)來(lái)自不屬于第一 APMV的APMV。僅僅作為示例，如果第一 APMV的HN蛋白屬于APMVI，則第二 APMV的HN蛋白必須屬于另一種APMV，例如APMV3或APMV5，以符合免疫學(xué)上不同的標(biāo)準(zhǔn)。通過(guò)依照這種方法，由于不同APMV之間的(非常)低的免疫學(xué)交叉反應(yīng)性，第二APMV將較少或者甚至更少受到針對(duì)第一 APMV的可能性免疫應(yīng)答的阻礙。這使得能夠隨時(shí)間進(jìn)行數(shù)輪病毒施用。這種方法的優(yōu)勢(shì)是顯而易見(jiàn)的，當(dāng)待受治療的腫瘤是實(shí)體瘤時(shí)更是如此。特別是在這種情況下，腫瘤質(zhì)(tumor mass)的所有細(xì)胞不可能在同一時(shí)間全部被感染。腫瘤的核心將首先保持不被攻擊。第一次病毒施用后被感染的那些細(xì)胞在腫瘤質(zhì)中的較深細(xì)胞層能夠被感染之前將不得不死亡或消失。彼時(shí)，針對(duì)病毒產(chǎn)生的免疫力能夠很好去除殘留的病毒，結(jié)果使得這些較深細(xì)胞層不會(huì)被殺死。然而現(xiàn)在用未針對(duì)其產(chǎn)生免疫應(yīng)答的第二 (必要時(shí)第三或更多)APMV毒株進(jìn)行第二輪APMV施用將解決這一問(wèn)題。有幾種方法可以對(duì)第一和第二 APMV進(jìn)行選擇或篩選。一種簡(jiǎn)單的方法是使用選自由 APMV1、3、4、5、6、7、8、9、Mapuerta 病毒和 Fer-de-Lance 病毒組成的組中的一種 APMV作為第一 APMV,以及該組的另一種APMV作為第二 APMV。僅僅作為示例可以施用細(xì)胞毒性量的APMVl作為第一 APMV，隨后在首次施用后2-56周內(nèi)施用細(xì)胞毒性量的APMV3。篩選第一和第二 APMV的另一種更加復(fù)雜但是講究的方法依賴于以下事實(shí)如上面所述，針對(duì)APMV的主要的免疫應(yīng)答是針對(duì)病毒的HN，雖然較少程度上針對(duì)F蛋白。通過(guò)簡(jiǎn)單地將一種特定APMV的HN編碼基因以及如果需要F蛋白編碼基因替換為另一種APMV的那些，可以兩次使用相同的APMV骨架一次作為野生型，第二次作為重組型，所述重組型目前攜帶另一種APMV的HN以及可能地還有F蛋白(編碼基因)，以替代野生型的那些。僅僅作為示例可以使用NDV作為第一 APMV，重組NDV作為第二 APMV，其中重組NDV基于相同的NDV骨架，但是目前攜帶另一種APMV (例如APMV3)的HN以及可能地F蛋白(編碼基因)，以替代初始NDV的HN或融合蛋白。第二(重組NDV) APMV會(huì)(更)較少受到針對(duì)第一 APMV產(chǎn)生的免疫應(yīng)答的阻礙，因?yàn)?雖然事實(shí)上第二 APMV的基礎(chǔ)是NDV)第二 (重組NDV)的主要免疫原性決定子不是NDV的，而是另一種APMV (例如APMV3)的。第一和第二 APMV施用之間2-56周的時(shí)間期具有以下理論基礎(chǔ)一些腫瘤是快速生長(zhǎng)的，而其他腫瘤或者甚至已轉(zhuǎn)移的癌癥細(xì)胞可以緩慢生長(zhǎng)，或甚至在很長(zhǎng)一段時(shí)間中是“休眠的”。因此，取決于腫瘤的特征，較早或較晚及時(shí)給予第二 APMV可能是有益的。在很多情況下，第一和第二 APMV施用之間的時(shí)間期較短，因?yàn)椤靶菝摺睍r(shí)間少于56周。此外，可能希望避免細(xì)胞較早過(guò)度生長(zhǎng)的風(fēng)險(xiǎn)。因此，優(yōu)選的時(shí)間期是2和28周之間，按照優(yōu)先順序更優(yōu)選2-20、2-16、2-12或者甚至2_8周之間。這種新穎的方法具有超越現(xiàn)存方法的優(yōu)勢(shì)，即其僅僅依賴于APMV的細(xì)胞毒性作用，因而原則上無(wú)需強(qiáng)制使用如上面所述已有方法所基于的，干擾免疫系統(tǒng)和免疫應(yīng)答的細(xì)胞毒性藥物或化合物或方案。本發(fā)明的一個(gè)額外優(yōu)勢(shì)是以下如果已經(jīng)用根據(jù)本發(fā)明的組合物分兩步對(duì)患者進(jìn)行治療后，一段時(shí)間后休眠的(或)已轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞開(kāi)始分裂，可以通過(guò)施用第三APMV以及如果需要又一種APMV，s簡(jiǎn)單地重復(fù)該步驟。鑒于某些免疫應(yīng)答針對(duì)F蛋白激發(fā)的事實(shí)，優(yōu)選第二 APMV不僅具有免疫學(xué)上不同于第一 APMV的HN蛋白的HN蛋白，還具有免疫學(xué)上不同于第一 APMV的F蛋白的F蛋白。應(yīng)當(dāng)理解的是，如果例如一種NDV骨架用于第一和第二步中，那么第二重組NDV中的HN和融合蛋白應(yīng)當(dāng)優(yōu)選來(lái)源于一種且相同的非NDV APMV0作為示例，如果第一 NDV是野生型NDV，那么第二 NDV，重組NDV應(yīng)當(dāng)優(yōu)選同時(shí)攜帶例如APMV4或APMV5的HN和融合蛋白，而非APMV4的HN和APMV5的融合蛋白。因此，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第二 APMV額外地具有免疫學(xué)上不同于第一 APMV的F蛋白的F蛋白。病毒的選擇非常廣泛。APMV適用于抗腫瘤治療是已知的，并且在本領(lǐng)域已知很長(zhǎng)時(shí)間。例如，人癌癥研究中使用的NDV毒株的概況包括i. a.毒株73-T(Cassel WA, GarrettRE. Cancer 18: 863-8， 1965)>UlsterCBohle ff, Schlag P, Liebrich W等，Cancer 66
(7): 1517-23，1990)、MTH-68 (Csatary LK, Moss Rff, Beuth J 等，Anticancer Res 19(IB): 635-8, 1999) (Csatary LK, Eckhardt S, Bukosza I 等，Cancer Detect Prev 17(6) : 619-27, 1993)、Italien(Mallmann P. Hybridoma 12 (5): 559-66，1993)、Hickman(ffheelock EF, Dingle JH. N Engl J Med 271 (13) : 645-51，1964)、PV701 (PecoraAL, Rizvi N, Cohen GI 等，J Clin Oncol 20 (9) : 2251-66，2002)、HUJ (Freeman Al,Zakay-Rones Z, Gomori JM 等，Mol Ther 13 (I): 221-8，2006)和 LaSota (Liang W,Wang H, Sun TM 等，World J Gastroenterol 9 (3): 495-8，2003)。關(guān)于施用途徑，再次，本領(lǐng)域現(xiàn)存知識(shí)又給予技術(shù)人員充分的指導(dǎo)。僅僅作為本領(lǐng)域的示例，提供以下概況
在動(dòng)物研究中，已經(jīng)通過(guò)i.a.瘤內(nèi)、腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)途徑完成NDV感染，如Schirrmacher V, Griesbach A, Ahlert T. , Int J Oncol 18 (5) : 945-52，2001 中所綜述。通過(guò)肌內(nèi)或皮下途徑的NDV感染已經(jīng)由i. a. Heicappell R, Schirrmacher V, vonHoegen P等，Int J Cancer 37 (4): 569-77，1986綜述。在人體研究中，在患者已經(jīng)感染溶解性NDV毒株的情況下，已經(jīng)使用了瘤內(nèi)、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)注射(Cassel WA, Garrett RE,Cancer 18: 863-8， 1965, Csatary LK, Moss Rff, Beuth J等，Anticancer Res 19 (IB):635-8，1999，Pecora AL, Rizvi N, Cohen GI等，J Clin Oncol 20 (9): 2251-66，2002，Csatary LK, Bakacs T, JAMA 281 (17): 1588-9， 1999， ffheelock EF, Dingle JH, NEngl J Med 271 (13): 645-51，1964，Csatary LK. , Lancet 2 (7728): 825，1971。還使用以下途徑吸入和直接注射入結(jié)腸內(nèi)(即通過(guò)結(jié)腸造口術(shù)開(kāi)口)。(CsataryLK, Moss Rff, Beuth J 等，Anticancer Res 19 (IB): 635-8， 1999 Jan-Feb, CsataryLK, Eckhardt S，Bukosza I 等，Cancer Detect Prev 17 (6) : 619-27，1993)。此夕卜，可以在National Cancer Institute 的 Position DescriptionQuestionaire “Newcastle Disease Virus (PDQ ) Health Professional Version” 中找到APMV (例如NDV)在癌癥治療中的用途的全面概況。APMV的細(xì)胞毒性量是誘導(dǎo)細(xì)胞死亡所必需的病毒量。理論上來(lái)講,一個(gè)APMV能夠感染并且殺死一個(gè)細(xì)胞。然而在實(shí)際環(huán)境中會(huì)施用多于將要被感染的腫瘤細(xì)胞數(shù)目的量。適且的量例如不于 Csatary LK, Eckhardt S，Bukosza I 等Attenuated veterinaryvirus vaccine for the treatment of cancer. Cancer Detect Prev 17 (6): 619-27，1993中。一般來(lái)講，哺乳動(dòng)物非腫瘤細(xì)胞中非常溫和的感染行為使得允許施用相對(duì)高的劑量。IO4和IO12Pfu之間廣泛范圍的劑量均是可以接受的劑量。IO5和IO9Pfu之間的劑量是大多數(shù)應(yīng)用的優(yōu)選劑量。上面引用的文獻(xiàn)給予了這方面的充分指導(dǎo)。在新城疫感染是由強(qiáng)毒力或中等毒力NDV毒株引起的情況下，在大多數(shù)西方國(guó)家中該疾病是需要上報(bào)的。因此，如果抗腫瘤組合物中使用NDV毒株，應(yīng)當(dāng)選擇低毒力毒株，以規(guī)避上報(bào)。在所有的APMV中，新城疫病毒(NDV)是最常使用的病毒。因此，可以優(yōu)先使用該病毒作為第一或第二 APMV。因此，本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第一 APMV是新城疫病毒。在第二 APMV是重組APMV因而攜帶另一種APMV的HN蛋白以及如果需要還有F蛋白(編碼基因)以替代該APMV野生型基因的情況下，第一和第二 APMV 二者的優(yōu)選APMV骨架是 NDV。另一種誘人的APMV是APMV3，其可以作為第一或第二 APMV。因此，本發(fā)明的另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第一 APMV是APMV3。
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甚至更優(yōu)選的是根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第一 APMV是新城疫病毒，第二APMV是APMV3，反之亦可。因此，本發(fā)明的一個(gè)甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第一 APMV是新城疫病毒，第二 APMV是APMV3。本發(fā)明的另一個(gè)這種甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第一 APMV是APMV3，第二 APMV是新城疫病毒。如上面所提及，如果與非溶解性APMV相比，溶解性APMV在較快殺死細(xì)胞的意義上來(lái)說(shuō)作用較快。因此，優(yōu)選APMV的一種或多種應(yīng)當(dāng)是溶解性APMV0因此，本發(fā)明的一個(gè)甚至更優(yōu)選的實(shí)施方案涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中至少第一或第二 APMV是溶解性的。該實(shí)施方案的最優(yōu)選形式涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中第一和第二 APMV二者均是溶解性的。特別是在發(fā)達(dá)國(guó)家，對(duì)罹患癌癥的貓科動(dòng)物和犬科動(dòng)物的興趣和愛(ài)護(hù)不斷增加。與人類似，壽命的增加使這些動(dòng)物中的癌癥率增加。已經(jīng)顯示根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物在貓科動(dòng)物和犬科動(dòng)物中療效非常好。因此，該實(shí)施方案的另一種形式是用于伴侶動(dòng)物(companion animals)中的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，所述伴侶動(dòng)物例如馬科、雪貂、貓科和犬科動(dòng)物物種。優(yōu)選這種組合物用于馬科和犬科動(dòng)物物種中，更優(yōu)選用于犬科動(dòng)物物種中。如上面所示，藥物組合物當(dāng)如此使用時(shí)具有超越已知抗癌癥方法的顯著優(yōu)勢(shì)。但是仍然有理由將根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物與任何抗腫瘤藥劑聯(lián)合使用。這種抗腫瘤藥劑的全面列表提供于例如美國(guó)專利申請(qǐng)US2009/0208495中。因此，該實(shí)施方案的另一種形式涉及根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中在至少第一或第二 APMV施用期間，共施用一定量的抗腫瘤藥劑，例如細(xì)胞毒性藥物。 第一和/或第二 APMV可以是額外地?cái)y帶異源基因或結(jié)合蛋白的重組APMV，所述異源基因例如編碼使前體藥物轉(zhuǎn)化的酶。這種結(jié)合蛋白可以例如是抗體。這種基因的另一個(gè)示例可以是編碼攜帶免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的融合蛋白的基因，如WO 2006/050984中所描述。因此，該實(shí)施方案的另一個(gè)形式是根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其中至少第一或第
二APMV是攜帶額外基因的重組APMV。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物原則上應(yīng)當(dāng)包含藥學(xué)上可接受的載體中的APMV，以使得能夠施用APMV。載體的性質(zhì)取決于La.施用途徑。如果施用途徑是通過(guò)吸入，載體可以簡(jiǎn)單地是無(wú)菌水、生理鹽水溶液或緩沖液。如果優(yōu)選途徑是注射，載體應(yīng)當(dāng)優(yōu)選是等滲的并且具有使其適于注射的PH限制。然而這種載體是本領(lǐng)域廣泛已知的。本發(fā)明中使用的藥學(xué)上可接受的載體的示例包括穩(wěn)定劑(例如SPGA)、碳水化合物(例如山梨醇、甘露醇、淀粉、蔗糖、葡萄糖、右旋糖苷)、蛋白(例如白蛋白和酪蛋白)、含有例如胎牛血清或脫脂乳試劑的蛋白以及緩沖液(例如磷酸鹽緩沖液)。特別是當(dāng)疫苗中加入這種穩(wěn)定劑時(shí)，疫苗非常適于冷凍干燥。冷凍干燥是防止APMV失活的十分適宜的方法。因此，在一個(gè)更優(yōu)選的形式中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物是凍干形式的。攜帶異源基因的重組APMV可以i. a.通過(guò)描述用于很多非分段(non-segmented)負(fù)鏈RNA病毒的公知的逆向基因技術(shù)制備。參見(jiàn)例如Conzelmann, J. Gen. Virol. 77:381-389 (1996), Conzelmann, Ann. Rev. Genet. 32, 123-162 (1998), Palese 等，Proc. Natl. Acad. Sci. 93: 11354-11358 (1996), Peeters 等，J. Virology 73:5001-5009 (1999)，R0mer_Oberd0rfer 等，J. Genvirol. 80: 2987-2995 (1999)。實(shí)施例:
實(shí)施例I
犬中不同低毒力APMV株的安全性和復(fù)制I簡(jiǎn)介
I.I本實(shí)驗(yàn)的目的是評(píng)定低毒力禽副粘病毒(APMV) NDV Clone 30、NDV Ulster和APMV3在犬中是否是安全并且能夠復(fù)制的。2材料和方法2.1實(shí)驗(yàn)的簡(jiǎn)短概述
用活的低毒力NDV Clone 30,NDV Ulster或APMV3通過(guò)口腔、鼻腔、眼部以及皮下途徑對(duì)3組比格犬(每組2只動(dòng)物)進(jìn)行接種，如表7 “分組和劑量”中積元、。將4只犬分成3組(1-1-2),用作接觸對(duì)照(contact control)(sentinel)。在接種后第 3-6-9-13 和 15 天獲取口腔、眼部和直腸拭子。鼻腔試子僅在接種后第3和6天獲取。每周采集血液樣品，至接種后8周。首次接種后第6周，用NDV Clone 30或APMV3通過(guò)口腔、鼻腔、眼部以及皮下途徑對(duì)犬進(jìn)行第2 '伙參見(jiàn)表1“分組和劑量第2次接種后第3和6天，獲取口腔、鼻腔、眼部和直腸拭子。拭子計(jì)劃用于病毒再分離。第I次和第2次接種后第3和6天，經(jīng)由膀胱采集尿液樣品(必要的話使用利尿劑)。在每次接種后14天的期間內(nèi)，利用植入芯片測(cè)量每只犬的體溫。每日觀察犬中疾病或其他異常的臨床指征的出現(xiàn)情況。第I次接種后8周，即第2次接種后2周，對(duì)犬實(shí)施安樂(lè)死并進(jìn)行肉眼研究。從胰臟、脾臟、肝臟、腎臟、腦、心臟、氣管、肺和腹股溝淋巴結(jié)中獲取組織學(xué)樣品。2. 2所使用的毒株
活的 NDV Ulster - 9. 7 IoglO EID50/ml
活的 NDV Clone 30 : - 9. 5 IoglO EID50/ml活的 APMV3:- 8.7 IoglO EID5(l/ml。表I :分組和劑量
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權(quán)利要求
1.包含禽副粘病毒(APMV)的藥物組合物，其用于治療哺乳動(dòng)物的腫瘤，其中所述治療包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用細(xì)胞毒性量的第一 APMV的步驟以及隨后在所述第一 APMV施用后2-56周內(nèi)對(duì)所述哺乳動(dòng)物施用細(xì)胞毒性量的第二 APMV的步驟，其中所述第二 APMV具有免疫學(xué)上不同于第一 APMV的HN蛋白的HN蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的藥物組合物，其中所述第二APMV額外地具有免疫學(xué)上不同于第一APMV的F蛋白的F蛋白。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的藥物組合物，其中所述第一APMV是新城疫病毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求I或2的藥物組合物，其中所述第一APMV是APMV3。
5.根據(jù)權(quán)利要求3的藥物組合物，其中所述第一APMV是新城疫病毒，所述第二 APMV是APMV30
6.根據(jù)權(quán)利要求4的藥物組合物，其中所述第一APMV是APMV3，所述第二 APMV是新城疫病毒。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于至少第一或第二APMV是溶解性的。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的藥物組合物，其特征在于第一和第二APMV均是溶解性的。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于所述哺乳動(dòng)物是馬科動(dòng)物、犬科動(dòng)物或貓科動(dòng)物物種。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于在至少第一或第二APMV施用期間共施用一定量的抗腫瘤藥劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于至少第一或第二APMV是攜帶額外基因的重組APMV。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含禽副粘病毒(Avian Paramyxovirus,APMV)的藥物組合物，其用于治療哺乳動(dòng)物的腫瘤。
文檔編號(hào)A61K35/76GK102917717SQ201180028519
公開(kāi)日2013年2月6日 申請(qǐng)日期2011年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月10日
發(fā)明者C.C.施里爾, H.J.M.賈格特 申請(qǐng)人:英特維特國(guó)際股份有限公司