專利名稱：基于細(xì)胞周期素d1衍生的腫瘤相關(guān)抗原的癌癥改進(jìn)療法的制作方法
基于細(xì)胞周期素D1衍生的腫瘤相關(guān)抗原的癌癥改進(jìn)療法本專利是關(guān)于用于患者癌癥改進(jìn)型治療的細(xì)胞周期素(Cyclin)衍生肽，尤其是以使用疫苗的聯(lián)合治療形式。另外方面是關(guān)于將該肽或其組合用作一種診斷工具的用途。
背景技術(shù)：
免疫反應(yīng)的刺激依賴于被宿主免疫系統(tǒng)視為異物的抗原的存在。腫瘤相關(guān)抗原存在的發(fā)現(xiàn)現(xiàn)在已經(jīng)提高了利用宿主免疫系統(tǒng)干預(yù)腫瘤生長(zhǎng)的可能 性。對(duì)于癌癥免疫療法，目前正在探索各種增強(qiáng)免疫系統(tǒng)的體液和細(xì)胞作用的機(jī)制。細(xì)胞免疫反應(yīng)的某些元素能特異性地識(shí)別和破壞腫瘤細(xì)胞。從腫瘤浸潤(rùn)細(xì)胞群或外周血中分離出的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)表明，這些細(xì)胞在對(duì)癌癥的天然免疫防御中發(fā)揮重要作用(Cheever et al.，Annals N. Y. Acad. Sci. 1993 690 :101_112 ;ZehHJ，Perry-Lalley D, Dudley ME, Rosenberg SA, Yang JC ；J Immunol. 1999,162(2) :989_94 ；High avidity CTLs for two self-antigens demonstrate superior in vitro and invivoantitumor efficacy.)。特別是⑶8陽(yáng)性T細(xì)胞(T⑶8+)在這種反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，TCD8+能識(shí)別細(xì)胞漿中載有源自蛋白或缺陷核糖體產(chǎn)物(DRiPS) (Schubert U, Anton LC,Gibbs J，Norbury CCiYewdell JWiBennink JR. ；Rapid degradation of a largefractionof newly synthesized proteins by proteasomes ；Nature 2000 ；404(6779) :770_774)的通常為8至10個(gè)氨基酸殘基的I類主要組織相容性復(fù)合體(MHC)分子。人類MHC分子也稱為人類白細(xì)胞抗原(HLA)。MHC分子有兩類MHC-I類分子，大部分提呈酶切內(nèi)源性蛋白、DRiPS、以及較大肽而生成的肽的有核細(xì)胞上都能發(fā)現(xiàn)此類分子。MHC-II類分子，主要見(jiàn)于在內(nèi)吞作用過(guò)程中攝取并且隨后進(jìn)行加工外源性蛋白提呈肽的專職抗原提呈細(xì)胞(APCs)上(CresswellP. Annu. Rev. Immunol. 1994 ；12 :259_93)。肽和MHC-1類分子的復(fù)合物由攜帶相應(yīng)T細(xì)胞受體(TCR)的CD8陽(yáng)性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞識(shí)別，肽和MHC-II類分子的復(fù)合物由攜帶相應(yīng)TCR的⑶4陽(yáng)性輔助T細(xì)胞的識(shí)別。眾所周知，TCR、肽和MHC由此按I : I : I的化學(xué)計(jì)算量大量存在。CD4陽(yáng)性輔助T細(xì)胞在協(xié)調(diào)抗腫瘤T細(xì)胞反應(yīng)的效應(yīng)子功能中發(fā)揮重要作用，因此，識(shí)別腫瘤相關(guān)抗原(TAA)衍生的CD4陽(yáng)性T細(xì)胞表位對(duì)於開(kāi)發(fā)能引發(fā)抗腫瘤免疫反應(yīng)的藥物可能非常重要(Kobayashi，H.，R. 0miya,M. Ruiz，E. Huarte，P. Sarobe，J. J. Lasarte，M. Herraiz，B. Sangro, J.Prieto，F(xiàn). Borras—Cuesta，and E. Celis. Identification ofan antigenic epitope for helper T lymphocytes from carcinoembryonicantigen.Clin. Cancer Res. 8 :3219_3225·，Gnjatic，S.，D_ Atanackovic, E. Mger, M. Matsuo,A. Selvakumar, N. K. Altorki, R. G.Maki, B.Dupont，G. Ritter，Y.T.Chen, A.Knuth，andL.J.Old. 2003. Survey of naturally occurring CD4+T_cell responses againstNY-ES0-1 incancer patients Correlation with antibody responses. Proc. Natl.Acad. Sci. U.S. A. 100(15) :8862_7)。CD4+T細(xì)胞可能導(dǎo)致局部-干擾素水平的增加(QinZ， Schwartzkopff J， Pradera F， Kammertoens T， Seliger B， Pircher H， BlankensteinT ;Acritical requirement of interferon gamma—mediated angiostasis for tumorrejection byCD8+T cells ；Cancer Res. 2003 J ；63 (14) :4095_4100)。在沒(méi)有炎癥的情況下，MHC II類分子的表達(dá)主要局限于免疫系統(tǒng)細(xì)胞，尤其是專職抗原提呈細(xì)胞(APC)，例如，單核細(xì)胞、單核細(xì)胞衍生細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞。令人驚異的是，在腫瘤患者的腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)有MHC-II類分子的表達(dá)(Dengjel J,Nastke MD，Gouttefangeas C, Gitsioudis G, Schoor O, Altenberend F, MillIerM,Kramer B, MissiouA, Sauter M, Hennenlotter J, Wernet D, Stenzl A, Rammensee HG, Klingel K,SlevanovicS. !Unexpected abundance of HLA class II presented peptides inprimary renal cellcarcinomas ；Clin Cancer Res. 2006 ； 12 :4163_4170)。由于HLA-II類分子的組成型表達(dá)通常僅限于免疫系統(tǒng)的細(xì)胞(Mach，B.，V. Steimle, E. Martinez-Soria, and ff. Reith. 1996. Regulation of MHC class II genes lessonsfrom a disease. Annu. Rev. Immunol. 14 :301_331),因此，直接從原發(fā)腫瘤中分離II類肽被認(rèn)為是不可能的。然而，Dengjel等人最近成功地直接在腫瘤中識(shí)別了數(shù)個(gè) MHC-II 類抗原的表位(EP 04023546. 7, EP 05019254. I ；Dengjel J, Nastke MD,·Gouttefangeas C, Gitsioudis G, Schoor O, Altenberend F, Miiller M,Kramer B Missiou
A,Sauter M, Hennenlotter J, Wernet D, Stenzl A, Rammensee HG, Klingel K,StesaiuisicS. !Unexpected abundance of HLA class II presented peptides in primary renalcellcarcinomas ；Clin Cancer Res. 2006 ； 12 :4163_4170)。對(duì)于觸發(fā)(引發(fā))細(xì)胞免疫反應(yīng)的肽，它必須與MHC分子結(jié)合。這一過(guò)程依賴于MHC分子的等位基因以及肽氨基酸序列。MHC-I類-結(jié)合肽的長(zhǎng)度通常為8-10個(gè)氨基酸殘基，并且在其與MHC分子相應(yīng)結(jié)合溝槽相互作用的序列中通常包含兩個(gè)保守殘基(“錨”)。這樣，每個(gè)MHC的等位基因都有“結(jié)合基序”，從而確定哪些肽能與結(jié)合溝槽特異性結(jié)合(Rammensee H. G. , Bachmann J. and Stevanovic, S ；MHC Ligands and Peptide Motifs,Chapman&Hall 1998)。在MHC-I類依賴性免疫反應(yīng)中，肽不僅能與腫瘤細(xì)胞表達(dá)的某些MHC-I類分子結(jié)合，而且它們還必須能被負(fù)載特異性T細(xì)胞受體(TCR)的T細(xì)胞識(shí)別。腫瘤特異性的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞所識(shí)別的抗原，即它們的表位，可以是源自所有蛋白質(zhì)種類的分子，例如，酶、受體、轉(zhuǎn)錄因子等，這些分子在各種腫瘤的細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)。此外，腫瘤相關(guān)抗原也可以是腫瘤細(xì)胞特異的，例如，突變基因或替代開(kāi)放閱讀框架(ORF)產(chǎn)物或蛋白質(zhì)剪接產(chǎn)物(Vigneron N, Stroobant V, Chapiro J, Ooms A, DegiovanniG, Morel S, van der Bruggen P, Boon T, Van den Eynde BJ. Anantigenic peptideproduced by peptide splicing in the proteasome,Science 2004 Apr 23 ；304(5670)587-90)。另一種重要的腫瘤相關(guān)抗原是組織特異性抗原，例如，表達(dá)于不同類型腫瘤和健康睪丸組織中的癌睪丸(CT)抗原?；旧?，任何能與MHC分子結(jié)合的肽都可能充當(dāng)一個(gè)T細(xì)胞表位。誘導(dǎo)體外或體內(nèi)T細(xì)胞反應(yīng)的前提是存在有著相應(yīng)TCR的T細(xì)胞，并且沒(méi)有對(duì)這個(gè)特定表位的免疫耐受性。因此，TAA是開(kāi)發(fā)腫瘤疫苗的起點(diǎn)。識(shí)別和標(biāo)記TAA的方法基于對(duì)可以從患者或健康受試者分離出來(lái)的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的使用情況，或基于腫瘤與正常組織之間的差別轉(zhuǎn)錄譜或差別肽表達(dá)模式的產(chǎn)生(Lemmel C. ,Weik S. ,Eberle U. ,Dengjel J. ,Kratt T.，Becker H. D. , Rammensee H. G. , Stevanovic S. Nat. Biotechnol. 2004Apr. ；22(4) :450_4,T.ffeinschenk, C.Gouttefangeas, Μ. Schirle, F. Obermayr, S. Walter,O.Schoor, R. Kurek,W. Loeser, Κ. H. Bichler，D. Wernet, S. Stevanovic, and H. G. Rammensee. Integratedfunctional genomics approach for the design of patient-individualantitumorvaccines. Cancer Res. 62(20) :5818_5827，2002)。然而，識(shí)別腫瘤組織或人腫瘤細(xì)胞株中過(guò)量或選擇性表達(dá)的基因，不能提供免疫療法中使用這些基因所轉(zhuǎn)錄抗原的準(zhǔn)確信息。這是因?yàn)檫@些抗原表位只有一部分適用于這個(gè)應(yīng)用，必須要有具有相應(yīng)T細(xì)胞受體的T細(xì)胞的存在，以及對(duì)這個(gè)特定表位的免疫耐受性的缺失或達(dá)到最低水平。因此，非常重要的一點(diǎn)是只選擇那些由過(guò)量或選擇性表達(dá)的蛋白質(zhì)的肽，并且這些肽能與相關(guān)的MHC分子一起提呈給功能性的T細(xì)胞。這種功能性T細(xì)胞被定義為“效應(yīng)T細(xì)胞”，其在特異性抗原刺激后，可復(fù)制擴(kuò)增并可執(zhí)行效應(yīng)功能。輔助T細(xì)胞在協(xié)調(diào)抗腫瘤免疫的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞效應(yīng)子功能中發(fā)揮著重 要作用。觸發(fā)THl細(xì)胞反應(yīng)的輔助T細(xì)胞表位支持CD8陽(yáng)性殺傷T細(xì)胞的效應(yīng)子功能，其中包括直接作用于腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性功能(該類腫瘤細(xì)胞表面顯示有腫瘤相關(guān)的肽/MHC復(fù)合物)。這樣，以單獨(dú)形式或與其他腫瘤相關(guān)肽形成組合物的腫瘤相關(guān)T輔助細(xì)胞表位可作為刺激抗腫瘤免疫反應(yīng)的疫苗組合物的活性藥物成分。由于⑶8依賴型和⑶4依賴型這兩種類型反應(yīng)共同并協(xié)同增強(qiáng)地促進(jìn)抗腫瘤作用，因此，確定和表征由CD8+細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(配體=MHC-I類分子+肽表位)或CD4陽(yáng)性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(配體:MHC-II類分子+肽表位)識(shí)別的腫瘤相關(guān)抗原對(duì)開(kāi)發(fā)腫
瘤疫苗非常重要。細(xì)胞周期素Dl屬高度保守的細(xì)胞周期蛋白家族，更具體而言屬細(xì)胞周期素D亞族(Lew DJ, Dulic V, Reed SI(1991). Isolation of three novel human cyclins byrescueof Gl cyclin (Cln) function in yeast. Cell 66,1197-1206 ;Xiong Y, ConnollyT, Futcher B, Beach D (1991). Human D-type cyclin. Cell 65,691-699)。細(xì)胞周期素的功能是作為細(xì)胞周期素依賴性激酶(CDK)的調(diào)節(jié)器。不同的細(xì)胞周期素表現(xiàn)出不同的表達(dá)和降解模式，以進(jìn)行細(xì)胞周期中每個(gè)活動(dòng)的時(shí)序協(xié)調(diào)(Deshpande A, Sicinski P, HindsPff(2005). Cyclins and cdks in development and cancer a perspective. Oncogene 24,2909-2915.)。細(xì)胞周期素Dl與⑶K4或⑶Κ6形成一個(gè)復(fù)合物，并作為其的一種調(diào)節(jié)亞基，其活性是細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換所需的。細(xì)胞周期素Dl (CCNDl)與CDK4和CDK6形成絲氨酸/蘇氨酸激酶全酶復(fù)合物，賦予該復(fù)合物的底物特異性(Bates S，Bonetta L, MacAllanD, Parry D, Holder A, Dickson C, Peters G(1994) · CDK6(PLSTIRE)and CDK4(PSK-J3)area distinct subset of the cyclin-dependent kinases that associatewith cyclinDl. Oncogene 9，71-79)。改變細(xì)胞周期進(jìn)程的這個(gè)基因之突變、擴(kuò)增和過(guò)量表達(dá)經(jīng)?？稍诟鞣N腫瘤中觀察到，并可能有助于腫瘤形成(Hedberg Y, DavoodiE, Roos G, Ljungberg
B,Landberg G(1999). Cyclin-Dl expression in human renal-cellcarcinoma. Int.J.Cancer 84,268-272 ；Vasef MA, Brynes RK, Sturm M, Bromley C, Robinson RA(1999).Expression of cyclin D Iin parathyroid carcinomas, adenomas, andhyperplasias a paraffin immunohistochemical study.Mod. Pathol. 12,412-416 ；TroussardX,vet-Loiseau H, Macro M, Mellerin MP, Malet M, Roussel M, Sola B(2000). CyclinDlexpression in patients with multiple myeloma. Hematol. J. 1,181-185)。細(xì)胞周期素Dl在結(jié)直腸、胃、食管、肺、腎和乳腺癌，以及白血病和淋巴瘤中過(guò)量表達(dá)，在正常組織中很少表達(dá)。它通常也在套細(xì)胞淋巴瘤中過(guò)量表達(dá)，其特征為t(ll ；14) (ql3 ；q32)迀移，使llql3染色體上的CCNDl原癌基因與14q32染色體的Ig重鏈基因并列(Wang et al.，2009 ；Kondo et al.，2008)。常見(jiàn)的A/G單核苷酸多態(tài)性(A870G)導(dǎo)致細(xì)胞周期素Dl的a、b兩種不同的mRNA異構(gòu)體。交替拼接異構(gòu)體b可編碼一種截短蛋白，該截短蛋白與較高的腫瘤發(fā)病率有關(guān)(包括散發(fā)性腎細(xì)胞癌、肺癌、結(jié)腸癌和其它種類的癌)(Fu M，Wang C，LI Z，SakamakiT，PestelI RG(2004). Minireview Cyc I in Dl normal and abnormalfunctions.Endocrinology 145,5439-5447 ；Yu J，Habuchi T， Tsuchiya N，Nakamura E，Kakinuma H，Horikawa Y，Inoue T，Ogawa 0,Kato T (2004). Association of the cyclinDl gene G870Apolymorphism with susceptibility to sporadic renal cell carcinoma. J Urol. 172,2410-2413)。CCNDl增強(qiáng)表達(dá)預(yù)示著腫瘤分級(jí)高、有轉(zhuǎn)移以及生存期下降(Maeda K，Chung Y，Kang S，Ogawa M，Onoda N，Nishiguchi Y，Ikehara T，Nakata B，Okuno M，SowaM(1998).Cyclin Dl overexpression and prognosis in colorectaladenocarcinoma.Oncology 55，145—151 ；McKay JA，Douglas JJ, Ross VG，Curran S，Murray GI,Cassidy J，·McLeod HL(2000). Cyclin Dl protein expression and genepolymorphism in colorectalcancer. Aberdeen Colorectal Initiative. Int. J Cancer 88，77—81 ；Bahnassy AA，ZekriAR，El-Houssini S,El-Shehaby AM，Mahmoud MR，Abdallah S,El-Serafi M(2004). CyclinA and cyclin Dl as significant prognostic markers in colorectalcancer patients.BMC. Gastroenterol. 4, 22 ；Balcerczak E，Pasz-Walczak G，Kumor P，Panczyk M，KordekR, Wierzbicki R, Mirowski M(2005). Cyclin D lprotein and CCNDlgene expression incolorectal cancer. Eur. J Surg. Oncol. 31，721-726)。對(duì)于結(jié)直腸癌，也經(jīng)常報(bào)道有CCNDl在mRNA和蛋白質(zhì)水平上過(guò)量表達(dá)。CCNDl是結(jié)直腸癌中經(jīng)常上調(diào)的β-Catenin-TCF/LEF途徑的靶向基因這一既定事實(shí)可以解釋上述現(xiàn)象(Shtutman M，Zhurinsky J，Simcha I，Albanese C，Df Amico M，PestellR， Ben-Ze’ev A(1999).The cyclin Dl gene is a target of the beta-catenin/LEF-Ipathway. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96，5522-5527 ；Tetsu 0，McCormick F (1999).Beta-catenin regulates expression of cyclin D Iin colon carcinoma cells. Nature398,422-426)。CCN-OOl細(xì)胞周期素肽(LLGATCMFV)是由Sadovnikova及其同事發(fā)現(xiàn)的(Sadovnikova E，Jopling LA，Soo KS, Stauss HJ(1998). Generation of humantumor-reactive cytotoxic T cells against peptides presented by non-self HLAclass I molecules. Eur. J. Immunol. 28，193-200)。研究表明，在誘導(dǎo)針對(duì)數(shù)個(gè)細(xì)胞周期素Dl衍生的HLA-A*02結(jié)合肽的同種限制T細(xì)胞(即HLA-A2陰性供體)后，識(shí)別CCN-OOl的T細(xì)胞克隆體可以裂解內(nèi)源性表達(dá)細(xì)胞周期素Dl的HLA-A*02陽(yáng)性腫瘤細(xì)胞，但是對(duì)細(xì)胞周期素Dl陰性的HLA-A*02陽(yáng)性細(xì)胞無(wú)作用。因此，只有間接證據(jù)表明CCN-OOl是天然加工和提呈的。在過(guò)去一段時(shí)間內(nèi)的研究認(rèn)為，由于細(xì)胞周期素Dl的胸腺表達(dá)，整個(gè)T細(xì)胞群中不存在識(shí)別細(xì)胞周期素Dl衍生表位的T細(xì)胞。如果真是這樣，產(chǎn)生針對(duì)細(xì)胞周期素Dl的自體細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞將是不可能的。
但是，Kondo等人(Kondo E, Maecker B, Weihrauch MR, Wickenhauser C,Zengff, Nadler LM, Schultze JL, von Bergwelt-BaiIdon MS(2008).Cyclin D1-specificcytotoxic T lymphocytes are present in the repertoire of cancerpatients-implications forcancer immunotherapy. Clin Cancer Res 14,6574-6579)發(fā)現(xiàn)對(duì)CCN-OOl表位(LLGATCMFV)有特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞也可由HLA-A2+供體生成。他們?cè)诮】倒w及結(jié)腸癌患者和套細(xì)胞淋巴瘤患者中證實(shí)了這一點(diǎn)。他們使用自體⑶40激活的B細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞(APC)。 Wang 等人(Wang M, Sun L, Qian J, Han X，Zhang L, Lin P，Cai Z, Yi Q (2009).Cyclin Dl as a universally expressed mantle cell lymphoma-associated tumorantigen forimmunotherapy. Leukemia 23,1320-1328)以來(lái)自套細(xì)胞淋巴瘤患者的 T 細(xì)胞和成熟的自體單核細(xì)胞衍生的樹(shù)突狀細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞，生成了作用于CCN-OOl的細(xì)胞周期素Dl特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。他們沒(méi)有使用原始肽，而是使用了一種不規(guī)則肽，其第一個(gè)氨基酸亮氨酸(L)被酪氨酸(Y)取代，因而增強(qiáng)了 MHC結(jié)合作用。所產(chǎn)生的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞可以殺傷表達(dá)細(xì)胞周期素Dl+的細(xì)胞，包括來(lái)自HLA-A2+套細(xì)胞淋巴瘤患者的原發(fā)性淋巴瘤細(xì)胞。其它研究也采用了這種肽(Kondo E, Gryschok L, Klein-GonzalezN,Rademacher S,Weihrauch MR,Liebig T,Shimabukuro-Vornhagen A,Kochanek M,DraubeA, von BergweIt-BaiIdon MS(2009a). CD40-activated B cells can be generated inhigh number and purity in cancerpatients analysis of immunogenicity and homingpotential. Clin Exp.Immunol. 155,249-256 ；Kondo E, Gryschok L, Schultze JL, vonBergwelt-Baildon MS(2009b). Using CD40_activated B cells to efficiently identifyepitopes of tumor antigens. J Immunother. 32,157-160)來(lái)證明 CD40 激活的 B 細(xì)胞作為抗原提呈細(xì)胞的有效性。Buchner 等人(Buchner et al. Phase I Trial of AllogeneicGene-Modified Tumor Cell Vaccine RCC-26/CD80/IL-2 in Patients with MetastaticRenal Cell Carcinoma. Human Gene Therapy. March 2010,21 (3) :285-297)在一項(xiàng)臨床研究中也提到了 CCN-OOl肽。WO 2005/035714描述了用于治療或預(yù)防癌癥的疫苗，包括腫瘤相關(guān)HLA限制性抗原，特別是HLA-A2限制性抗原。在具體的方面，該專利提供了細(xì)胞周期素D肽。此類肽可用于誘導(dǎo)出優(yōu)先進(jìn)攻腫瘤細(xì)胞的特異性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞。細(xì)胞周期素D肽可能包括LLGATCMFV序列或其片段。該專利進(jìn)一步描述了一種治療或預(yù)防患者癌癥的方法，包括給予患者有效治療量的由肽組成的疫苗。該方法可能進(jìn)一步包括以第二種抗癌藥物治療患者，其中第二種抗癌藥物選自一個(gè)很長(zhǎng)的藥劑列表，例如化療藥物，如環(huán)磷酰胺。第二種抗癌藥物可與疫苗同時(shí)使用，或與疫苗在不同時(shí)間使用。不過(guò)，WO 2005/035714沒(méi)有描述采用細(xì)胞周期素Dl肽的組合治療的任何優(yōu)點(diǎn)。鑒于以上情況，關(guān)于在癌癥免疫療法中有效使用細(xì)胞周期素Dl衍生肽的有效用途知之甚少。因此，本發(fā)明的一個(gè)目標(biāo)是提出基于細(xì)胞周期素Dl衍生肽的、更有效的癌癥免疫治療的新方法。本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明的目標(biāo)是通過(guò)以下多肽達(dá)到由或基本由選自SEQ識(shí)別序列號(hào)I至SEQ識(shí)別序列號(hào)18的氨基酸序列組成、用于治療患者癌癥的肽，或包括至少一種由或基本由選自SEQ識(shí)別序列號(hào)I至SEQ識(shí)別序列號(hào)18的氨基酸序列組成的肽、用于治療患者癌癥的組合物。根據(jù)本發(fā)明，癌癥可選自肺癌、頭頸部癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、食管癌、骨癌、睪丸癌、宮頸癌、胃腸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、白血病、淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、肺部瘤前病變、結(jié)腸癌、黑色素瘤、膀胱癌和任何其他腫瘤性疾病組成的群組。優(yōu)選為腎癌、結(jié)腸癌和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。在本發(fā)明的內(nèi)容中，優(yōu)選肽為由根據(jù)SEQ識(shí)別序列號(hào)I至SEQ識(shí)別序列號(hào)18的任一氨基酸序列組成的肽?！盎居?..組成”系指本發(fā)明的肽，除了根據(jù)SEQ識(shí)別序列號(hào)I至SEQ識(shí)別序列號(hào)18的任一序列組成外,還含有位于其它在N和/或C端延伸處的氨基酸，而它們不一定能形成作為含結(jié)合基序肽的核心序列并作為免疫原T輔助表位的肽。但這些延伸區(qū)域?qū)τ谟行㈦囊M(jìn)細(xì)胞具有重要作用。下表列出了本發(fā)明中所用的細(xì)胞周期素Dl衍生肽。
表I :本發(fā)明內(nèi)容中所用的肽
權(quán)利要求
1.一種由或基本由選自SEQ識(shí)別序列號(hào)I至SEQ識(shí)別序列號(hào)18的氨基酸序列組成、用于治療患者癌癥的肽，或一種包括至少一種由或基本由選自SEQ識(shí)別序列號(hào)I至SEQ識(shí)別序列號(hào)18的氨基酸序列組成的肽、用于治療患者癌癥的組合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的肽或組合物，其中所述肽選自SEQ識(shí)別序列號(hào)1、SEQ識(shí)別序列號(hào)4和/或SEQ識(shí)別序列號(hào)18。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2的肽或組合物，其中所述癌癥選自肺癌、頭頸部癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、腎癌、食管癌、骨癌、睪丸癌、宮頸癌、胃腸癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、白血病、淋巴瘤、套細(xì)胞淋巴瘤、肺部瘤前病變、結(jié)腸癌、黑色素瘤、膀胱癌和任何其他腫瘤病組成的組群。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任意一項(xiàng)的肽或組合物，其中所述肽或組合物以抗癌疫苗的形式給予，可選擇地進(jìn)一步包括至少一種佐劑，如(舉例)GM-CSF。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任意一項(xiàng)的肽或組合物，進(jìn)一步包括給予至少一種非細(xì)胞周期素Dl衍生的附加腫瘤相關(guān)肽，如(舉例)選自SEQ識(shí)別序列號(hào)19至SEQ識(shí)別序列號(hào)26中的任意一種肽。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的組合物，其中所述至少一種附加腫瘤相關(guān)肽是根據(jù)其與所述組合物中存在的其它肽相比結(jié)合不同HLA分子的能力進(jìn)行選擇。
7.根據(jù)權(quán)利要求I至6中任意一項(xiàng)的肽或組合物，其中所述肽或組合物為重復(fù)給予，如(舉例)每月一次，每周一次或每周兩次。
8.根據(jù)權(quán)利要求I至7中任意一項(xiàng)的肽或組合物，進(jìn)一步包括以至少一種化療藥物進(jìn)行治療，如(舉例)鈍化和/或消除所述患者中免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞(如CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞)數(shù)目的藥物，如(舉例)環(huán)磷酰胺。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的肽或組合物，其中以所述至少一種化療藥物進(jìn)行的所述治療在給予所述肽或組合物之前進(jìn)行，優(yōu)選為單次劑量給予，如(舉例)劑量300mg/m2的環(huán)磷酰胺，優(yōu)選為單次輸注。
10.根據(jù)權(quán)利要求I至9中任意一項(xiàng)的肽或組合物，其中所述治療為輔助治療，在先期TKI療法(如[舉例]舒尼替單抗或索拉非尼)和/或先期細(xì)胞因子療法(如[舉例]干擾素或白細(xì)胞介素)后進(jìn)行。
11.根據(jù)權(quán)利要求I至10中任意一項(xiàng)的肽或組合物，其中所述治療包括細(xì)胞因子療法，然后是單劑環(huán)磷酰胺療法，隨后每天給予疫苗進(jìn)行激活，持續(xù)一周，然后每?jī)芍芙o予疫苗，持續(xù)6個(gè)月。
12.使用根據(jù)權(quán)利要求I至6中任意一項(xiàng)的肽或組合物體外產(chǎn)生激活的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)的用途，包括將CTL與載有肽或組合物的人I或II類MHC分子進(jìn)行體外連接，這些分子在合適的抗原提呈細(xì)胞表面表達(dá)一段時(shí)間足夠以抗原特異性方式激活所述CTL。
13.將根據(jù)權(quán)利要求I至6中任意一項(xiàng)的肽或組合物用作一種診斷工具的用途，旨在檢測(cè)和/或監(jiān)控患者免疫系統(tǒng)的激活或調(diào)節(jié)。
14.將根據(jù)權(quán)利要求I至6中任意一項(xiàng)的肽或組合物用作一種癌癥診斷工具的用途。
15.—種由或基本由選自SEQ識(shí)別序列號(hào)5或SEQ識(shí)別序列號(hào)6的氨基酸序列組成的腫瘤相關(guān)肽。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于用于患者癌癥改進(jìn)型治療的細(xì)胞周期素D1衍生肽，尤其是以使用疫苗聯(lián)合治療的形式。另外方面是關(guān)于將肽或其組合作為一種診斷工具的用途。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102971003SQ201180026656
公開(kāi)日2013年3月13日 申請(qǐng)日期2011年6月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年6月2日
發(fā)明者哈普利特·辛格, 托尼·懷申克, 斯特芬·沃爾特 申請(qǐng)人:伊瑪提克斯生物技術(shù)有限公司