專利名稱：輔酶Q10 (CoQ10)的靜脈內(nèi)制劑及其使用方法
輔酶Q10(CoQ10)的靜脈內(nèi)制劑及其使用方法相關(guān)申請本申請要求2010年3月12日提交的標(biāo)題為“輔酶QlO (CoQlO)的靜脈內(nèi)制劑及其使用方法”的第61/313，632號臨時申請和2010年9月21日提交的標(biāo)題為“輔酶QlO (CoQlO)的靜脈內(nèi)制劑及其使用方法”的第61/385，107號臨時申請的優(yōu)先權(quán)。各上述申請的全部內(nèi)容通過引用并入本文。
背景技術(shù)：
癌癥目前是發(fā)達(dá)國家中導(dǎo)致死亡的首要原因之一。雖然最近的研究已極大地增加了我們對許多腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制的理解并且已提供了許多用于治療癌癥的新途徑，但用于大多數(shù)惡性腫瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療仍然是全切除術(shù)(gross resection)、化學(xué)療法和放射療法。雖然不斷獲得成功，但此類療法的每一種可引起許多不希望的副作用。例如，手術(shù)可導(dǎo)致疼 痛、對健康組織的外傷性損傷和結(jié)瘢。放射療法和化學(xué)療法可能會導(dǎo)致惡心、免疫抑制、胃潰瘍和繼發(fā)性腫瘤發(fā)生。仍需要治療包括癌癥在內(nèi)的疾病的改進(jìn)方法和能夠遞送生物活性劑以幫助治療疾病和其他病癥的組合物。在給住院患者施用的用于包括癌癥的病癥的所有藥物中，有大約60%的藥物是以注射劑的形式來給予的?，F(xiàn)在靜脈內(nèi)制劑具有作為藥物媒介的主要地位。因?yàn)樗目煽啃浴?zhǔn)確性、便利性、避免口服施用藥物的胃刺激可能性以及連續(xù)和間斷的藥物治療的重要性，靜脈內(nèi)注射劑在藥物施用中有了更大的應(yīng)用。在過去的十年間，提供靜脈內(nèi)施用的技術(shù)有了穩(wěn)定的改進(jìn)，且這類靜脈注射劑的使用也在逐年增加。國際專利申請公開No.W0/2009/126764(2009年4月9日提交)公開了用輔酶CoQlO治療癌癥。該申請的全部內(nèi)容通過引用并入本文。CoQlO具有10個類異戊二烯單元的長側(cè)鏈，其導(dǎo)致此藥物極度地親脂和幾乎不溶于水。經(jīng)口施用的CoQlO的生物利用度一般極低和易變，且被發(fā)現(xiàn)與該制劑的溶解速度有關(guān)。由于低的經(jīng)口生物利用度和其固有的高可變性，靜脈內(nèi)施用系統(tǒng)尤其在癌癥患者的護(hù)理中得到了特別的關(guān)注。由于其親脂性，CoQlO需要被引入用于靜脈內(nèi)施用的載體中，從而其藥代動力學(xué)受到載體體系的影響。輔酶Q10，本文中也稱為CoQIO、泛醌或泛癸利酮，是一種普遍的營養(yǎng)補(bǔ)充劑，且可在營養(yǎng)品店、保健食品店、藥店等處作為通過泛醇(CoQlO的還原形式)的抗氧化特性幫助保護(hù)免疫系統(tǒng)的維生素樣補(bǔ)充劑以膠囊形式找到。CoQlO在人體的大多數(shù)組織和其他哺乳類動物的組織中發(fā)現(xiàn)且集中在線粒體中。CoQlO非常親脂，且對于其大部分而言，不溶于水。該不溶性與如下CoQlO的結(jié)構(gòu)中所示的烴性質(zhì)的50個碳原子的類異戊二烯側(cè)鏈有關(guān)。
OCH3CH3CH3
H3G、0^V^CH3
Il
O
高度疏水的CoQlO在水性溶液中基本上不溶。為使CoQlO用于腸胃外施用，它必須包含在與例如靜脈內(nèi)注射相容的穩(wěn)定制劑中。在水性介質(zhì)中制備CoQlO的靜脈內(nèi)制劑的一種方法需要包含一種或多種表面活性劑和允許產(chǎn)生CoQlO微粒于水性介質(zhì)中的分散體的其他實(shí)體。這種方法有許多相關(guān)的難題。主要的難題與CoQlO在低于約50°C的溫度下為固體的事實(shí)有關(guān)。CoQlO的固體顆粒在水性介質(zhì)中的分散涉及到制備穩(wěn)定性最長達(dá)兩年以用于臨床應(yīng)用的安全制劑的困難。已經(jīng)對這種固體顆粒分散體進(jìn)行了研究，但是在靜置時，包含CoQlO的顆粒會落到容器的底部，且通過攪拌或振搖使其重分散不符合醫(yī)學(xué)應(yīng)用的要求。成功的制劑應(yīng)該有最長約兩年的化學(xué)和物理穩(wěn)定性，并提供用于臨床使用的精確劑量。第二個主要的困難是獲得在靜脈內(nèi)施用時不會在血流中產(chǎn)生顆粒分離或者沉積的制劑。這樣的分離危害血流并潛在地是威脅生命的。在專利文獻(xiàn)中可找到許多以提高CoQlO的生物利用度為目的的不同制劑。在1981年2月4日的EP23349中，Taki和Takahira公開了通過共施用長鏈脂肪酸和單酸甘油酯提高口服施用的CoQlO的淋巴吸收。不同的專利如1986年8月14日的W08604503A1、1988年 8 月 4 日的 JP 63188623A2、1987 年 3 月 26 日的 JP 620667019A2、1984 年 8 月 25 日的 JP 59148735A2和1981年2月6日的JP 56012309公開了通過施用含有CoQlO的油性(表面活性劑)溶液的膠囊增加腸吸收。1993年I月13日的EP 522433A1、1988年5月5日的TO 8803019A1、1984年8月25日的JP 59148718A2描述了 CoQlO在膠束溶液中的增溶。Ueno等人(Acta Pharm. Nord. , I (1989) 99-104)報道了在與環(huán)糊精的復(fù)合物中包含CoQlO提高了經(jīng)口生物利用度。1981年8月31日的JP 56109590A2公開了類似的制劑。另外，如在例如1992年7月15日的EP494654A2中Yano等所描述的，將CoQlO合并到乳液中被報道增強(qiáng)腸吸收。于2001年3月6日授權(quán)的美國專利No. 6，197，349和于2001年3月27日授權(quán)的No. 6，207，178描述了無定形物理狀態(tài)的CoQlO顆粒，特別是超冷熔體。對于腸胃外的，特別是靜脈內(nèi)施用，CoQlO必須合并到載體媒介中，因?yàn)?，由于CoQlO的親脂性，不可能制造出具有治療濃度的CoQlO的水溶液。Groke和Polzer (1987年
I月 22 日的 DE 3524788Al)、Sugio等(1987年6 月 4 日的 JP 62123113A2)以及 Mizushima等(1985年10月9日的JP 60199814A2)公開了用于靜脈內(nèi)施用泛癸利酮的卵磷脂穩(wěn)定的大豆油乳液。1988年12月27日的JP 63319046A2描述了由多糖包被的大豆油乳液媒介。但是，由于CoQlO在植物油中相對差的溶解度，可被包含在乳液中的CoQlO濃度是有限的。1983年I月12日的EP 69399A2公開了含泛癸利酮的雞蛋卵磷脂和膽固醇的脂質(zhì)體制劑。例如在1983年11月23日的EP 94692A1U985年I月7日的JP 60001124A2和1988年12月21日的JP 63313727A2描述了多糖改性的脂質(zhì)體。但是，由于藥物生物分布受載體的生物分布、其RES活性和藥物從載體媒介的釋放的影響，將藥物并入到載體系統(tǒng)中的缺點(diǎn)可能是該物質(zhì)的藥代動力學(xué)會產(chǎn)生不希望的變化或顯著的變異性。Bogentoft 等(Folkers K. , Littaru G. P. , Yamagami T.編輯，《輔酶 Q 的生物醫(yī)學(xué)和臨床特征(Biomedical and Clinical Aspects of Coenzyme Q)》，第六卷，Elsevier 1991年，第215到224頁)觀察到，當(dāng)分別以混合的膠束體系或乳液媒介靜脈內(nèi)施用時泛癸利酮在RES器官中蓄積。生物活性物質(zhì)在載體中的溶解度通常過低而不能在可接受的制劑體積中獲得治療劑量。另外，載體顆粒本身的毒性副作用已在文獻(xiàn)中特別地對于腸胃外脂質(zhì)乳液進(jìn)行了討論(見Hajri T.等，Biochem. Biophys. Acta1047(1990) 121-130 ；Connelly P. ff.等，Biochim. Biophys. Acta 666(1981)80-89 ；AviramM.等，Biochem. Biophys. Res. Commun. 155 (1988) 709-713 ;Singh M. J. Parenter. Sci.Technol. 40(1986) 34-40 ；Cotter R.等，Am J. Clin. Nutr. 41(1985)994-1001 ；UntrachtS.，Biochim. Biophys. Acta711(1982) 176-192)。CoQlO就該藥物的藥物制劑而言是有問題的物質(zhì)。對于CoQlO藥用IV制劑(其中有必要減小顆粒尺寸)，傳統(tǒng)的方法沒有得到成功。例如使用球磨機(jī)、錘磨機(jī)、噴磨機(jī)或低溫粉碎機(jī)等不可能粉碎該物質(zhì)，這是由于輔酶QlO的不易碎的性質(zhì)和低熔點(diǎn)。
發(fā)明概要本發(fā)明包括適用于靜脈內(nèi)施用于受試者以產(chǎn)生具有臨床有效的輔酶Q10(本文中也稱為CoQlO或Q10)血液水平的穩(wěn)定和非毒性的CoQlO制劑。本發(fā)明也包括用于制備適用于靜脈內(nèi)施用于受試者以產(chǎn)生臨床有效的CoQlO血·液水平的穩(wěn)定和非毒性的CoQlO制劑的方法。在本文所述的某些本發(fā)明非限制性的實(shí)施方案中，提供了適用于靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑。在某些實(shí)施方案中，治療制劑包含水性溶液、被分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑及分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑(opsonization reducer)中的至少一種?；钚詣┑哪z體納米分散體物質(zhì)被分散成尺寸小于200納米的納米分散體顆粒。在某些實(shí)施方案中，分散穩(wěn)定劑選自天然或者半合成的磷脂。例如，合適的穩(wěn)定劑包括聚乙氧基化(也稱為聚乙二醇化)的蓖麻油(Cremophor EL)、聚乙氧基化的氫化蓖麻油(Crem0phor RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(聚乙二醇化的維生素E，維生素E TPGS)、山梨聚糖脂肪酸酯(Spans )、膽汁酸和膽汁酸鹽或者二肉豆蘧酰基磷脂酰膽堿(DMPC)。在某些實(shí)施方案中，穩(wěn)定劑為DMPC。在某些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑選自poloxamine (聚氧乙烯聚氧丙烯共聚物)和泊洛沙姆。合適的泊洛沙姆包括泊洛沙姆188。在某些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是輔酶QlO (即，CoQIO、泛癸利酮、泛醌等)。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是CoQIO。調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188和分散穩(wěn)定劑是DMPC。在某些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體是懸浮液；在某些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體是乳液；在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的活性劑是晶體形式。在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的活性劑是超冷熔體形式。還提供了其中制劑分別具有4%、3%和I. 5%重量/體積比的CoQ10、DMPC和泊洛沙姆的實(shí)施方案。在其它實(shí)施方案中，CoQ10、DMPC和泊洛沙姆的重量/體積比分別為8%、6%和 3. 0%。在一些實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約10納米至大約200納米之間。在一些實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約10納米至大約100納米之間。
在一些實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約30納米至大約80納米之間。在一些實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約35納米至大約40納米之間。
在一些實(shí)施方案中，納米分散顆粒的平均尺寸小于約45納米。在某些實(shí)施方案中，制劑包含水性溶液、分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑及分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑中的至少一種?；钚詣┑哪z體狀納米分散體分散成尺寸小于200納米的脂質(zhì)體。在一些實(shí)施方案中，分散穩(wěn)定劑形成為單層的脂質(zhì)體。在其它實(shí)施方案中，脂質(zhì)體是雙層的復(fù)層脂質(zhì)體，其具有該雙層之間的水性空間和雙層內(nèi)的親脂性空間。在其它實(shí)施方案中，疏水活性劑封閉在雙層的親脂性空間內(nèi)。在其它實(shí)施方案中，復(fù)層脂質(zhì)體還包括封閉在雙層之間的水性空間中的親水試劑。在某些實(shí)施方案中，制劑包含水性溶液、分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑及DMPC和調(diào)理素作用縮減劑。在一些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑選自poloxamine和泊洛沙姆。在一些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是輔酶QlO (CoQlO)。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是輔酶QIO(CoQIO)和調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。在一些實(shí)施方案中，制劑具有重量/體積比分別為4%、3%和I. 5%的CoQ10、DMPC和泊洛沙姆188。在其它實(shí)施方案中，制劑具有重量/體積比分別為8%、6%和3%的CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188。在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體是懸浮液。在其它實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體是乳液。在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的活性劑是晶體形式。在其它實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的活性劑是超冷熔體形式。在一些實(shí)施方案中，制劑包含水性溶液、分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑和DMPC?；钚詣┑哪z體狀納米分散體分散成平均尺寸小于200納米的納米分散體顆粒。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是輔酶QlO(C0QlO)。在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體是懸浮液。在其它實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體是乳液。在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的活性劑是晶體形式。在其它實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的活性劑是超冷熔體形式。在一些實(shí)施方案中，制劑具有重量/體積比分別為4 %和3 %的CoQlO和DMPC0在其它實(shí)施方案中，制劑具有重量/體積比分別為8%和6%的CoQlO和DMPC。在一些實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約10納米至大約200納米之間。在其它實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約10納米至大約100納米之間。在其它實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約30納米至大約80納米之間。在其它實(shí)施方案中，納米分散體顆粒的平均尺寸在大約35納米至大約40納米之間。在其它實(shí)施方案中，納米分散顆粒的平均尺寸小于約45納米。在某些實(shí)施方案中，制劑包含水性溶液、分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的CoQIO、選自聚乙二醇化的蓖麻油、Cremophor EL、CremophorRH40、聚乙二醇化的維生素ETPGS和二肉豆蘧?；字Ｄ憠A(DMPC)的分散穩(wěn)定劑及選自泊洛沙姆和poloxamine的調(diào)理素作用縮減劑。CoQlO的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸在約10納米至約100納米之間的納米分散體顆粒。
在某些實(shí)施方案中，制劑包含水性溶液、分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188。CoQlO的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸在約30納米至約80納米之間的納米分散體顆粒。在某些實(shí)施方案中，提供了制備適用于靜脈內(nèi)施用的CoQlO納米分散體的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括通過(I)將疏水活性劑加入65°C的水浴中并混合以形成疏水活性劑/水混合物；(2)向疏水活性劑/水混合物中加入分散穩(wěn)定劑并在65°C下混合以形成疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑混合物；(3)加入調(diào)理素作用縮減劑以形成疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑/縮減劑混合物；(4)預(yù)熱微射流均質(zhì)機(jī)到65°C ;和(5)通過在65°C的微射流均質(zhì)機(jī)中混合疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑/縮減劑混合物進(jìn)行加工以形成平均粒徑小于200納米的疏水活性劑膠體狀納米分散體而利用高壓勻質(zhì)化來分散疏水活性劑。在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括凍干膠體狀納米分散體以使CoQlO膠體狀納米分散體顆粒結(jié)晶的步驟。在一些實(shí)施方案中，該方法進(jìn)一步包括添加凍干保護(hù)劑的步驟。在一些實(shí)施方案中，凍干保護(hù)劑是營養(yǎng)糖。在一些實(shí)施方案中，營養(yǎng)糖選自乳糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神經(jīng)氨酸、葡糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡糖胺、甘露醇、山梨糖醇、精氨酸、甘氨酸和蔗糖。 在一些實(shí)施方案中，該方法包括選自聚乙二醇化蓖麻油、Cremophor EL、Cremophor RH40、聚乙二醇化維生素E、維生素E TPGS和二肉豆蘧酰基磷脂酰膽堿(DMPC)的分散穩(wěn)定劑。在一些實(shí)施方案中，分散穩(wěn)定劑是DMPC。在一些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑是選自泊洛沙姆和poloxamine。在一些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。在一些實(shí)施方案中，調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188和分散穩(wěn)定劑是DMPC。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是CoQIO。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑是CoQIO，調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188和分散穩(wěn)定劑是DMPC。在一些實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的CoQlO是超冷熔體的形式。在其它實(shí)施方案中，膠體狀納米分散體的CoQlO是晶體形式。在一些實(shí)施方案中，由本方法得到的制劑包含水性溶液、分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑及分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑中的至少一種?；钚詣┑哪z體狀納米分散體分散成平均粒徑小于200納米的納米分散體顆粒。在一些實(shí)施方案中，CoQ10、DMPC和泊洛沙姆188的重量/體積比分別為4%、3%和I. 5%0在其它實(shí)施方案中，CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188的重量/體積比分別為8%、6%和3%。在一些實(shí)施方案中，疏水活性劑膠體狀納米分散體的平均粒徑在約10納米至100納米之間。在其它實(shí)施方案中，疏水活性劑膠體狀納米分散體的平均粒徑在約35納米至40納米之間。在其它實(shí)施方案中，疏水活性劑膠體狀納米分散體的平均粒徑小于45納米。在一個實(shí)施方案中，制劑在使用前用與血液等滲的標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)用腸胃外稀釋劑來稀釋。合適的腸胃外稀釋劑的非限制性實(shí)施包括N鹽水、5%葡萄糖、乳酸化林格氏溶液和磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。稀釋的制劑，即輸注液，可以經(jīng)4小時或者更短的時間施用。輸注液可以作為慢滴或通過計量泵送系統(tǒng)間斷地或連續(xù)地施用。這種輸注液可以在使用前用過濾器如1-5微米的過濾器在線過濾。在一些實(shí)施方案中，制劑制備成用來輸注的無菌產(chǎn)品，其中滅菌通過過濾、熱壓、輻射或類似的方法實(shí)現(xiàn)。滅菌的各種方法是本領(lǐng)域中已知的。在一個實(shí)施方案中，制備制劑以使得其為無內(nèi)毒素的。在一個實(shí)施方案中，制備制劑以使得其不含可能引起傳染性海綿狀腦病(BSE/TSE)的有機(jī)體。本文也提供了用于治療或者預(yù)防受試者中的腫瘤疾病的方法。在一些實(shí)施方案中，治療或者預(yù)防受試者中的腫瘤疾病的方法包括向受試者靜脈內(nèi)施用如本文所述的治療制劑從而實(shí)現(xiàn)腫瘤疾病的治療或預(yù)防。在一些實(shí)施方案中，靜脈內(nèi)施用是通過經(jīng)選擇以在受試者中提供對于待治療的腫瘤疾病的效力的劑量。在一些實(shí)施方案中，腫瘤疾病是侵襲性的或轉(zhuǎn)移性的腫瘤疾病。在一些實(shí)施方案中，侵襲性的或轉(zhuǎn)移性的腫瘤疾病選自胰腺癌、肝細(xì)胞癌、尤文氏肉瘤、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、腦癌(星形細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、結(jié)腸癌、肺癌、骨肉瘤、雄激素依賴性前列腺癌、卵巢癌和非霍奇金氏淋巴瘤。在其它實(shí)施方案中，腫瘤疾病是非侵襲性腫瘤疾病。在一些實(shí)施方案中，非侵襲性腫瘤疾病選自非轉(zhuǎn)移性乳腺癌、雄激素依賴性前列腺癌、小細(xì)胞肺癌和急性淋巴細(xì)胞性白血病。
在治療方法的一些實(shí)施方案中，該制劑包含約4%的輔酶Q10、約3%的DMPC和約I. 5%的泊洛沙姆188。在某些實(shí)施方案中，提供了用于抑制受試者中的腫瘤細(xì)胞生長的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括向受試者靜脈內(nèi)施用如本文所述的治療制劑，從而腫瘤細(xì)胞的生長受到抑制。在一些實(shí)施方案中，靜脈內(nèi)施用是通過經(jīng)選擇以在受試者中提供抑制腫瘤細(xì)胞生長的效力的劑量。在一些實(shí)施方案中，制劑包含約4%的輔酶Q10、約3%的DMPC和約I. 5%的泊洛沙姆188。在一些實(shí)施方案中，腫瘤疾病是涉及Bcl-2蛋白家族的失調(diào)或與之相關(guān)的腫瘤性病癥。附圖簡要說明本發(fā)明的各種實(shí)施方案將在以下參照附圖進(jìn)行描述，附圖中圖I描繪了 CoQlO納米顆粒的凍干樣品，其如從左至右顯示的標(biāo)記為R、A、O和C型，其中R、O和C型各經(jīng)受20輪的均質(zhì)化處理，而A型經(jīng)受40輪的均質(zhì)化處理。圖2描繪了 CoQlO納米顆粒的凍干樣品，其如從左至右顯示的標(biāo)記為G、Q、S和T型，其中G、Q、S和T型各經(jīng)受20輪的均質(zhì)化處理。圖3描繪了 CoQlO納米顆粒的凍干樣品，其如從左至右顯示的標(biāo)記為U和V型，其中U和V型各經(jīng)受20輪的均質(zhì)化處理。圖4描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)(bulk substance)的圖譜疊加的A型凍干樣品的XRDP圖譜。圖5描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的C型凍干樣品的XRDP圖譜。圖6描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的G型凍干樣品的XRDP圖譜。圖7描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的O型凍干樣品的XRDP圖譜。圖8描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的Q型凍干樣品的XRDP圖譜。圖9描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的R型凍干樣品的XRDP圖譜。

圖10描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的S型凍干樣品的XRDP圖譜。圖11描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的T型凍干樣品的XRDP圖譜。圖12描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的U型凍干樣品的XRDP圖譜。圖13描繪了與得自CoQlO整體物質(zhì)的圖譜疊加的V型凍干樣品的XRDP圖譜。
圖14描繪了處理時間對于其中CoQlO為2. 5g、DMPC為I. 5g的膠體狀納米顆粒在46mL水中均質(zhì)化的效應(yīng)。圖15描繪了由本文公開的方法形成的脂質(zhì)體，其中該脂質(zhì)體是雙層的復(fù)層脂質(zhì)體。圖16描繪了由本文公開的方法形成的脂質(zhì)體，其中該脂質(zhì)體是雙層的復(fù)層脂質(zhì)體。圖17描繪了處理輪數(shù)對膠體納米顆粒尺寸的效應(yīng)，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制劑比例為4 : I : 0、4 : 2 : O和4 : 3 : O。圖18描繪了處理輪數(shù)對膠體納米顆粒尺寸的效應(yīng)，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制劑比例為4 : I : 1、4 : 2 : I和4 : 3 : I。 圖19描繪了處理輪數(shù)對膠體納米顆粒尺寸的效應(yīng)，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制劑比例為4 : 3 : O. 5、4 : 3 : I和4 : 3 : 1.5。圖20描繪了處理輪數(shù)對膠體納米顆粒的尺寸的效應(yīng)，其中CoQlO DMPC :泊洛沙姆的制劑比例為4 : 2 : O. 5、4 : 2 : I和4 : 2 : 1.5。圖21以圖形的形式描繪了基于制劑I (其不包含泊洛沙姆)的施用，隨時間(min)的CoQlO平均血漿濃度。圖22以圖形的形式描繪了基于制劑II (其包含泊洛沙姆)的施用，隨時間(min)的CoQlO平均血漿濃度。圖23以圖形的形式描繪了與單獨(dú)化療和與化療結(jié)合相比，CoQlO納米顆粒的IV制劑以4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188比率治療惡性綠色瘤的肝克隆的效力。圖24以圖形的形式描繪了與單獨(dú)化療和與化療結(jié)合相比，CoQlO納米顆粒的IV制劑以4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188比率治療惡性綠色瘤的肺克隆的效力。圖25使用以O(shè)CR作為讀出裝置的圖形形式描繪了兩種CoQlO IV制劑對于!fepG2細(xì)胞的效應(yīng)。制劑I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制劑II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。圖26使用以O(shè)CR作為讀出裝置的圖形形式描繪了兩種CoQIOIV制劑對于MCF-7細(xì)胞的效應(yīng)。制劑I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制劑II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。圖27使用以O(shè)CR作為讀出裝置的圖形形式描繪了兩種C0QlOIV制劑對于PC-3細(xì)胞的效應(yīng)。制劑I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制劑II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。圖28使用以O(shè)CR作為讀出裝置的圖形形式描繪了兩種CoQlO IV制劑對于PaCa2細(xì)胞的效應(yīng)。制劑I是4 3 O的CoQlO DMPC 泊洛沙姆188和制劑II是4 3 I. 5的CoQlO DMPC :泊洛沙姆188。圖29描繪了用以測定處理后24小時凝膠I中的半胱天冬酶水平的蛋白質(zhì)印跡。圖30描繪了用以測定處理后24小時凝膠I中的肌動蛋白水平的蛋白質(zhì)印跡。圖31描繪了用以測定處理后24小時凝膠2中的半胱天冬酶水平的蛋白質(zhì)印跡。圖32描繪了用以測定處理后24小時凝膠2中的肌動蛋白水平的蛋白質(zhì)印跡。圖33描繪了在PC3中觀察到的標(biāo)準(zhǔn)化的半胱天冬酶3蛋白質(zhì)水平。
圖34描繪了在PaCa2中觀察到的標(biāo)準(zhǔn)化的半胱天冬酶3蛋白質(zhì)水平。圖35描繪了在H印G2細(xì)胞中觀察到的未標(biāo)準(zhǔn)化的半胱天冬酶3蛋白質(zhì)水平。圖36描繪了在HDfa細(xì)胞中觀察到的標(biāo)準(zhǔn)化的半胱天冬酶3蛋白質(zhì)水平。圖37描繪了在MiaPACA2研究中未處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖38描繪了在MiaPACA2研究中未處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖39描繪了在MiaPACA2研究中用賦形劑對照處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖40描繪了在MiaPACA2研究中經(jīng)約4小時通過靜脈內(nèi)輸注施用O. 5mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制劑處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖41描繪了在MiaPACA2研究中經(jīng)約4小時通過靜脈內(nèi)輸注施用5mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制劑處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖42描繪了在MiaPACA2研究中經(jīng)約4小時通過靜脈內(nèi)輸注施用10mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制劑處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖43描繪了在MiaPACA2研究中經(jīng)約4小時通過靜脈內(nèi)輸注施用25mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制劑處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖44描繪了在MiaPACA2研究中經(jīng)約4小時通過靜脈內(nèi)輸注施用50mg/kg的.4:3: 1.5CoQ10IV制劑處理的NSG小鼠的結(jié)果。圖45描繪了用單一阿霉素療法治療的小鼠的存活率結(jié)果。圖46描繪了用阿霉素和4 3 1.5CoQ10IV制劑聯(lián)合療法治療的小鼠的存活率結(jié)果。圖47描繪了相對于用于雄性和雌性大鼠和狗的劑量，CoQlO的平均肝濃度。本發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明涉及水溶性差的活性藥劑如CoQlO的靜脈內(nèi)制劑。本發(fā)明的靜脈內(nèi)制劑允許遞送精確量的活性治療劑如CoQlO到血流中以輸送到器官如肝臟和心臟及其它組織(包括腫瘤)中。本發(fā)明提供了臨床和治療有效的且可用的例如CoQlO的靜脈內(nèi)制劑，其在通常的環(huán)境溫度下是穩(wěn)定的且在至少12個月的時期內(nèi)保持基本不變的分散特性。為了優(yōu)化可讀性的目的和幫助理解本文所述的本發(fā)明，可能有益的是考慮以下本文中所用的術(shù)語和短語的定義。按照本公開及如本文中所使用的，以下術(shù)語定義為具有以下含義，除非明確表明為其它情況。如本文中所用的，“一”、“一個”和“該”包括復(fù)數(shù)指代，除非上下文清楚地指示為其它的情況。如本文中所用的，“藥學(xué)上可接受的”成分是適合用于人和/或動物而無過度的副作用(如毒性、刺激性和變態(tài)反應(yīng))、與合理的利益/風(fēng)險比相稱的成分。如本文中所用的，術(shù)語“安全和治療有效量”是指當(dāng)以本公開的方式使用時，足以產(chǎn)生與合理的利益/風(fēng)險比相稱的希望的治療反應(yīng)而無過度副作用(如毒性、刺激性和變態(tài)反應(yīng))的成分量。“治療有效量”是指足以產(chǎn)生希望的治療反應(yīng)的本公開化合物的量。例如，加速的傷口愈合、疼痛和疲勞的減輕。具體的安全和有效量或治療有效量隨著如待治療的特定病癥、患者的生理狀況、待治療的哺乳動物或動物的類型、治療的持續(xù)時間、同時治療(如果有的話)的特性及采用的具體制劑和化合物或其衍生物的結(jié)構(gòu)的因素而變化。“治療”是以防止疾病的發(fā)生或改變疾病的病理或癥狀為目的的干預(yù)。因此，“治療”是指治療性的處理和預(yù)防性或防止性的措施。需要治療的那些是指已經(jīng)患有病癥訴那些以及將發(fā)生病癥的那些。如本文中所用的，“改善”或“治療”指的是接近于標(biāo)準(zhǔn)化值(例如在健康患者或個體中獲得的值)的癥狀，例如，如使用常 規(guī)統(tǒng)計檢驗(yàn)測定的，與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異小于50%，在一些實(shí)施方案中與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異小于約25%，在其它實(shí)施方案中與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異小于10%，和在再其它的實(shí)施方案中存在與標(biāo)準(zhǔn)化值無明顯差異的癥狀。如本文中所用的，“改善的癥狀”或“治療的癥狀”是指接近于標(biāo)準(zhǔn)化值的癥狀，例如，如使用常規(guī)統(tǒng)計檢驗(yàn)測定的，與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異小于50%，在一些實(shí)施方案中與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異小于約25%，在其它實(shí)施方案中與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異小于10%，和在再其它的實(shí)施方案中存在與標(biāo)準(zhǔn)化值無明顯差異的癥狀。如本文中所用的，“調(diào)理素作用(opsonization) ”是指本文所述的親脂性生物活性劑經(jīng)標(biāo)記以被吞噬細(xì)胞攝取和破壞的過程。調(diào)理素作用包括調(diào)理素與生物活性劑的結(jié)合。在調(diào)理素結(jié)合到膜上后，吞噬細(xì)胞被吸引至活性劑。調(diào)理劑是用作吞噬作用過程的結(jié)合增強(qiáng)劑的任何分子。如本文中所用的，術(shù)語“調(diào)理素作用縮減劑”是指與活性劑一起起到降低調(diào)理素用作吞噬作用過程的結(jié)合增強(qiáng)劑的能力的任何試劑。按照本公開，提供了用于改善親脂性生物活性劑(其在本文中也可稱為疏水性生物活性劑)的施用的制劑。如本文中所用的，“親脂性生物活性劑”或“疏水性生物活性劑”包括不溶于或基本上不溶于水的試劑。特別地，如本文中所用的親脂性生物活性劑在水中具有低于約1000份的水中約I份生物活性藥物的溶解度。如本文中所用的，術(shù)語“膠體狀”是指細(xì)分的狀態(tài)，暗示分散于介質(zhì)中的分子或多分子顆粒在至少一個方向上具有粗略地在Inm至I μπι之間的尺寸。如本文中所用的，“分散體”或“膠體狀分散體”是指其中任何特性(如固體、液體或氣體)的膠體大小的顆粒分散于不同組成或狀態(tài)的連續(xù)相中。在靜脈內(nèi)藥物遞送中，該連續(xù)相基本上是水且分散的顆?？梢允枪腆w(懸浮液)或不混溶的液體(乳液)。如本文中所用的，“超冷熔體”是指均質(zhì)化后活性劑的狀態(tài)，其中在低于活性劑整體物質(zhì)的熔點(diǎn)的溫度下，膠體顆粒不是處于固體或晶體形式而是處于無定形狀態(tài)。如本文中所用的，“凍干保護(hù)劑”是指藥學(xué)可接受的賦形劑，其在凍干處理、后續(xù)的儲存和重構(gòu)過程中保護(hù)分散的活性劑對抗去穩(wěn)定化的條件。術(shù)語“膠體顆?！?、“分散體顆?！薄ⅰ凹{米分散體顆?！焙汀澳z體狀分散體顆?！痹诒疚闹卸伎苫Q使用，且是指活性劑分散成整塊狀態(tài)或熔融狀態(tài)的納米顆粒的分散形式。如本文中用于指稱CoQlO的術(shù)語“制劑”包括泊洛沙姆，除非另外地指明。通過本發(fā)明的方法治療的“患者”或“受試者”可以指人或非人類動物，優(yōu)選哺乳動物。應(yīng)注意，本文描述的臨床觀察是對于人類受試者進(jìn)行的，且在至少一些實(shí)施方案中，受:試者是人?！爸委熡行Я俊币馑际钱?dāng)施用于患者以治療疾病時，足以實(shí)現(xiàn)這種對疾病的治療的化合物量。當(dāng)施用以預(yù)防疾病時，該量足以避免或延遲疾病的發(fā)作?！爸委熡行Я俊彪S化合物、疾病及其嚴(yán)重性和待治療的患者的年齡、體重等等而變化?！邦A(yù)防”或“防止”是指獲致疾病或障礙的風(fēng)險的降低(即使得疾病的至少一種臨床癥狀不在可能暴露于或易患疾病但還未發(fā)生或顯示該疾病的癥狀的患者中發(fā)生)。術(shù)語“預(yù)防性的”或“治療性的”治療是指向受試者施用一種或多種所述的組合物。如果在不希望的病癥(例如，疾病或主體動物的其它不希望的狀態(tài))的臨床表現(xiàn)之前施用，則治療是預(yù)防性的，即保護(hù)主體免于發(fā)生不希望的病癥，而如果在不希望的病癥表現(xiàn)出來之后施用，該治療是治療性的(即，意圖消除、改善或維持現(xiàn)有的不希望的病癥或其副作用)。術(shù)語“治療效果”是指在動物，特別是哺乳動物和更特別是人類中由藥理活性物質(zhì)引起的局部或系統(tǒng)效應(yīng)。因此該術(shù)語意思是任何意圖用于診斷、治愈、緩解、治療或預(yù)防疾病或用于在動物或人中增強(qiáng)希望的生理或精神進(jìn)展或狀態(tài)的物質(zhì)。短語“治療有效量”意思是以可應(yīng)用于任何治療的合理效益/風(fēng)險比產(chǎn)生一些希望的局部或系統(tǒng)效應(yīng)的這種物 質(zhì)的量。在某些實(shí)施方案中，化合物的治療有效量取決于其治療指數(shù)、溶解性等等。例如，本發(fā)明的方法公開的某些化合物可以以產(chǎn)生適用于這種治療的合理效益/風(fēng)險比的足夠量施用。術(shù)語“障礙”和“疾病”包含性地使用，且是指與身體任何部分、器官或系統(tǒng)(或其任何組合)的正常結(jié)構(gòu)或功能的任何偏離。特定的疾病通過特征性的癥狀和征兆表現(xiàn)，包括生物的、化學(xué)的和物理的變化，且通常與多種其它的因素(包括，但不限于人口統(tǒng)計學(xué)的、環(huán)境的、職業(yè)的、遺傳的和病史的因素)相關(guān)。某些特征性的征兆、癥狀和相關(guān)因素可以通過多種方法量化以產(chǎn)生重要的診斷信息。術(shù)語“表達(dá)”在本文中用于指從DNA產(chǎn)生多肽的過程。該過程涉及基因轉(zhuǎn)錄成mRNA和該mRNA翻譯成多肽。取決于其使用的語境，“表達(dá)”可以指RNA、蛋白質(zhì)或這兩者的產(chǎn)生。術(shù)語“基因的表達(dá)水平”或“基因表達(dá)水平”是指細(xì)胞中由基因編碼的mRNA以及前mRNA新生轉(zhuǎn)錄本、轉(zhuǎn)錄本加工中間體、成熟mRNA和降解產(chǎn)物的水平，或者蛋白質(zhì)的水平。將詳細(xì)地參照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行說明。盡管本發(fā)明結(jié)合優(yōu)選的實(shí)施方案進(jìn)行描述，但應(yīng)理解，這并非意圖將本發(fā)明限制于這些優(yōu)選實(shí)施方案。相反，意圖的是覆蓋可以包括在如所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明精神和范圍內(nèi)的替代、改進(jìn)和等同方式。在本申請中，在其中存在一系列述及的數(shù)值的所有情況中，應(yīng)理解任何所述及的數(shù)值可以是數(shù)值范圍的上限或下限。還應(yīng)理解，本發(fā)明包括所有的這些數(shù)值范圍，即具有該數(shù)值上限和數(shù)值下限的組合的范圍，其中各該上限和下限的數(shù)值可以是本文中述及的任何數(shù)值。II.組合物本公開提供了用于治療和預(yù)防癌癥的CoQlO組合物。本發(fā)明的組合物可以以其本身或以其中本發(fā)明的組合物與適宜的載體或賦形劑混合的藥物組合物的形式施用。在治療表現(xiàn)出目標(biāo)障礙的患者時，施用治療有效量的一種或多種藥劑如這些藥劑。治療有效的劑量是指導(dǎo)致患者的癥狀緩解或生存延長的化合物的量。來自許多不同物種的受試者可以用本發(fā)明的組合物治療。這些動物的非窮盡的示例性列表包括哺乳動物如小鼠、大鼠、兔、山羊、綿羊、豬、馬、牛、狗、貓和靈長類(如猴、猿和人類)。已知患有肌肉疲勞、疼痛、創(chuàng)傷等等的那些動物受試者可能適合用于本公開的應(yīng)用。特別地，具有損傷、手術(shù)、關(guān)節(jié)炎、肌肉疲勞、癌癥等等的人類患者是適合用于本文公開的本發(fā)明用途的動物受試者。通過使本文教導(dǎo)的方法適應(yīng)于醫(yī)學(xué)或獸醫(yī)學(xué)中已知的其它方法(例如，根據(jù)受試動物的體重調(diào)整所施用物質(zhì)的劑量)，本發(fā)明中使用的組合物可以方便地為用于其它動物中而進(jìn)行優(yōu)化。本發(fā)明的適宜施用途徑可以包括腸胃外遞送，包括，舉例來說，靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射。在一個實(shí)施方案中，本文提供的組合物可以通過直接注射到腫瘤而施用。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑可以通過靜脈內(nèi)注射或靜脈內(nèi)輸注施用。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物通過靜脈內(nèi)注射施用。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物通過靜脈內(nèi)輸注施用。在施用途徑為例如靜脈 內(nèi)輸注的情況下，本文提供了其中IV輸注液包含約40mg/mL濃度的活性劑(例如輔酶Q10)的實(shí)施方案。在組合物通過IV輸注施用的情況下，其在磷酸鹽緩沖鹽水中稀釋。在一些實(shí)施方案中，可以組合一種或多種施用途徑，例如，靜脈內(nèi)和腫瘤內(nèi)，或者靜脈內(nèi)和經(jīng)口，或者靜脈內(nèi)和口服，或者靜脈內(nèi)和透皮或透粘膜。本文描述的組合物可以以任何合適的制劑施用于受試者。例如，CoQlO可以配制用于腸胃外遞送，例如用于皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或腫瘤內(nèi)注射。組合物可以以單次濃注、多次注射或通過連續(xù)輸注(例如，靜脈內(nèi)或通過腹膜透析)施用。對于腸胃外施用，組合物可以配制成滅菌的無熱原形式。本發(fā)明的組合物也可以通過簡單地將該組合物添加到包含細(xì)胞的流體中而體外施用于細(xì)胞(例如應(yīng)用于細(xì)胞中或體外培養(yǎng)物中的Bcl-2產(chǎn)生)。為實(shí)施本發(fā)明而使用藥學(xué)可接受的載體將本文公開的化合物配制成適合全身施用的劑量是在本公開的范圍內(nèi)。通過適當(dāng)?shù)妮d體選擇和適宜的制備實(shí)踐，本發(fā)明的組合物，特別是配制為溶液的那些，可以腸胃外施用，如通過靜脈內(nèi)注射。這些化合物的毒性和治療效力可以通過在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動物中的標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)過程測定，例如測定LD50(50%群體致死的劑量)和ED50(50%群體中治療有效的劑量)。毒性和治療效應(yīng)之間的劑量比率為治療指數(shù)，且其可表示為LD50/ED50比。表現(xiàn)出大的治療指數(shù)的化合物可能是理想的。從這些細(xì)胞培養(yǎng)物試驗(yàn)和動物研究獲得的數(shù)據(jù)可以用于確定在人體中使用的劑量范圍。這些化合物的劑量可以在具有很少或沒有毒性而包括ED50的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。劑量可以根據(jù)采用的劑型和利用的施用途徑在該范圍內(nèi)變化。適用于本發(fā)明中的藥物組合物包括其中以有效量包含活性成分以實(shí)現(xiàn)預(yù)期的目的的組合物。有效量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)，特別是按照本文提供的詳細(xì)公開內(nèi)容。除了活性成分外，這些藥物組合物可以包含適宜的藥學(xué)可接受的載體，包括有助于將活性化合物加工成可以作為藥物使用的制劑的賦形劑和輔劑。配制用于靜脈內(nèi)施用的制劑可以為膠體狀分散體的溶液的形式。用于腸胃外施用的藥物組合物包括水溶性形式的活性化合物的水性溶液。另外，活性化合物的懸浮液可以制備為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸鋺腋∫?。適合的親脂性溶劑或媒介包括脂肪油如芝麻油或合成脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酸酯，或者脂質(zhì)體。水性注射懸浮液可以包含提高懸浮液粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。任選地，懸浮液還可以包含合適的穩(wěn)定劑或提高化合物的溶解性的試劑以允許制備高度濃縮的溶液。III.制劑本發(fā)明提供了如上所述適合靜脈內(nèi)施用于受試者的包含疏水活性劑如輔酶QIO(CoQIO)的治療制劑。通過高壓均質(zhì)化，活性劑(例如，CoQlO)顆粒被減小從而產(chǎn)生足夠小以通過200nm無菌濾器的顆粒。足夠小以通過200nm無菌濾器的顆?？梢造o脈內(nèi)注射。這些顆粒比血細(xì)胞小得多而因此不會栓塞毛細(xì)管。例如紅細(xì)胞為6mm X 2mm的圓盤。該顆粒分散并被穩(wěn)定劑包裝或包圍。盡管不希望限制于任何理論，據(jù)認(rèn)為穩(wěn)定劑被吸引到疏水活性劑上以使得分散的疏水活性劑顆粒被穩(wěn)定劑包圍從而形成懸浮液或乳液。懸浮液或乳液中的分散顆粒包括穩(wěn)定劑表面和由固體顆粒形式(懸浮液)或不可混溶的液體形式(乳液)的疏水活性劑組成的核心。在某些方面，分散的顆粒占據(jù)在脂質(zhì)體的親水性區(qū)域中。本文提供的分散的膠體體系提供了優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)的特定性能優(yōu)勢。例如，本發(fā)明允許制劑中的高藥物載量而無需使用共溶劑。另外，獲得了高的和相對可再現(xiàn)的血漿水平而不依賴于內(nèi)源的低密度脂蛋白載體。更重要的是，由于疏水活性劑的膠體顆粒的被動累積，本發(fā)明允許在實(shí)體腫瘤中維持高藥物水平。本靜脈內(nèi)制劑主要包含連續(xù)的水相和分散的固體物質(zhì)(懸浮液)或分散的不混溶的液體(乳液)。分散的膠體體系(其中顆粒大部分由活性劑(藥物)本身組成)通?？?以比連續(xù)的增溶體系每單位體積遞送更多的藥物，如果可以使得該體系足夠穩(wěn)定。本發(fā)明提供了水溶性差的活性劑如CoQlO的膠體狀分散體。通過利用機(jī)械裝置如微射流均質(zhì)機(jī)，顆粒尺寸通過高壓連續(xù)均質(zhì)化而減小，從而在噴射系統(tǒng)中形成膠體尺寸的小滴，或者通過在受限制的和曲折的通道中以高速率流動的液體中剪切顆粒而減小。需要大量的能量以切割整體顆粒本身。較小的顆粒增加了活性劑的界面面積。表面活性劑用于降低界面能從而穩(wěn)定該分散體。顆粒尺寸決定著總界面面積和必須適應(yīng)于獲得穩(wěn)定體系的界面能。隨著顆粒尺寸下降，需要更多的能量來產(chǎn)生該顆粒，且由于總表面積上升，表面活性劑必須適應(yīng)于更高的界面能。通過如本文中所例示的高壓均質(zhì)化，活性劑例如CoQlO的顆粒尺寸減小到低于200nm。在一些實(shí)施方案中，顆粒尺寸減小到IOnm至200nm或IOnm至IOOnm或更優(yōu)選30nm至80nm。在一些實(shí)施方案中，所獲得的膠體狀活性劑(例如CoQlO)顆粒為如本文中定義的無定形超冷狀態(tài)。在某些實(shí)施方案中，分散的CoQlO顆粒通過凍干過程結(jié)晶以產(chǎn)生其中活性劑核心為晶體形式的納米分散體顆粒(參見圖1-3)。偏振光學(xué)顯微術(shù)(PLM)或X-射線粉末衍射(XRDP)用于確認(rèn)CoQlO膠體狀分散體的晶體性并與整體CoQlO的XRDP進(jìn)行比較(參見圖4-13)。在R型中，如圖I所示，包含5. Owt % ^ CoQIO,3. 3wt%的泊洛沙姆和91wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖I中左側(cè)第一個小瓶中所示的顆粒。如圖9中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在A型中，如圖I中左側(cè)第二個小瓶所示，包含3被％的CoQlOU. 8wt%的類脂SPC-3和95. 2wt %的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)以減小顆粒尺寸。然后顆粒凍干以產(chǎn)生圖I中左側(cè)第二個小瓶中所示的顆粒。如以下圖4中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在O型中，如圖I中所示，包含5. 0 丨％的CoQ10、3. 0 丨％的DMPC和92wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖I中左側(cè)第三個小瓶中所示的顆粒。如以下圖7中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在C型中，如圖I中所示，包含5. Owt%的CoQ10、3. 3wt%的泊洛沙姆和91wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖I中左側(cè)第四個小瓶中所示的顆粒。如圖5中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在G型中，如圖2中所示，包含5. Owt%的CoQIO、3. Owt%的類脂SPC-3和92wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖2中左側(cè)第一個小瓶中所示的顆粒。如圖6中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在Q型中，如圖2中所示，包含5. Owt%的CoQ10、2. 5被％的DMPC、0. 5被％的去氧膽酸鈉和92wt %的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖2中左側(cè)第二個小瓶中所示的顆粒。如圖8中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在S型中，如圖2中所示，包含7. 5wt%的CoQ10、4. 5wt%的DMPC和88wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖2中左側(cè)第三個小瓶中所示的顆粒。如圖10中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在T型中，如圖2中所示，包含7. 5 七％的CoQ10、5. Owt%的泊洛沙姆和87. 5wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖2中左側(cè)第四個小瓶中所示的顆粒。如圖11中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在U型中，如圖3中所示，包含7. 5wt%的CoQ10、4. Owt %的DMPC、1. Owt %的泊洛沙姆188和87. 5wt%的水的制劑在微射流均質(zhì)
機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖3中左側(cè)第一個小瓶中所示的顆粒。如圖12中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在V型中，如圖3中所示，包含3. Owt%的CoQIO、I. 5wt %的DMPC和95. 5wt %的水的制劑在微射流均質(zhì)機(jī)中經(jīng)過20次循環(huán)，且然后凍干以產(chǎn)生圖3中左側(cè)第二個小瓶中所示的顆粒。如圖13中所示的XRDP表明，該CoQlO顆粒是晶體。在凍干顆粒的過程中，干燥器冷卻至_35°C。3毫升的上述各種制劑一式兩份地加入5mL的血清小瓶中。血清瓶塞置于頂上但留出水蒸汽逸出的空隙。制劑置于_78°C的冷凍箱中I小時以快速冷凍。在這一時間后，全部轉(zhuǎn)移到干燥器的中間架子上。立即啟動真空。16小時后，溫度從_35°C調(diào)整到-30°C。在24小時后，溫度從_30°C調(diào)整到_28°C。在2小時后，溫度從-28 V調(diào)整到-26°C。在4小時后，溫度進(jìn)一步調(diào)整到_26°C至-25°C之間。在達(dá)到-25°C后，小瓶加塞并釋放真空到環(huán)境空氣中。小瓶被綁扎并如圖1-3中所示對干燥的產(chǎn)物照相。在減小分散體顆粒尺寸的過程中，可能希望的是CoQlO混合物通過微射流均質(zhì)機(jī)數(shù)輪以獲得希望的顆粒尺寸。在通過具有75 μ m通道的F12Y相互作用室的Ml IOP微射流均質(zhì)機(jī)一輪后，產(chǎn)生小于200nm平均直徑的顆粒。在20輪后，顆粒的平均直徑小于50nm(參見圖14)。制劑包含5g CoQIO,3g DMPC和92mL水。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以理解，CoQIO、DMPC和水的量可以根據(jù)希望的治療用途而調(diào)節(jié)。微射流均質(zhì)機(jī)在25，OOOPSI的最大壓力下操作。在某些實(shí)施方案中，優(yōu)選的是添加分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑中的至少一種。在某些實(shí)施方案中，膠體顆粒使用分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑兩者來制備。優(yōu)選的分散穩(wěn)定劑包括聚乙氧基化的(即聚乙二醇化的)蓖麻油(Cremophor EL)、聚乙氧基化的氫化蓖麻油(Cremophor RH 40)、生育酚聚乙二醇琥珀酸酯(聚乙二醇維生素E、維生素E TPGS)、聚山梨醇酯(Tweens )、山梨聚糖脂肪酸酯(Spans )、膽汁酸和膽汁酸鹽及DMPC，而優(yōu)選的調(diào)理素作用縮減劑包括各種鏈長的聚乙二醇、多糖、其它含PEG的共聚物、poloxamine或泊洛沙姆如泊洛沙姆188。在某些實(shí)施方案中，肝素也構(gòu)成合適的調(diào)理素作用縮減劑。泊洛沙姆提供了親水表面以在施用后降低顆粒調(diào)理素作用。泊洛沙姆也起到顆粒表面改性劑的作用以添加大體積鏈而通過空間相互作用降低調(diào)理素作用。泊洛沙姆188 (Pluronic F68，Lutrol F68)大約在中央嵌段具有28個PPG單元和在末端嵌段具有79個PEG單元。疏水的中央嵌段將分子錨定至顆粒上，且PEG末端嵌段從顆粒延伸。調(diào)理素作用通過PEG鏈的親水性和通過鏈的空間(空間填充)效應(yīng)(即蛋白質(zhì)不能達(dá)到表面)而降低。通過本文中進(jìn)一步描述的方法，本發(fā)明提供了適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制齊U。該治療制劑包含水性溶液。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，水性溶液是水。該水性溶液可以起到膠體體系的分散介質(zhì)或用于腸胃外施用和膠體顆粒遞送的制劑介質(zhì)中的任一種或這兩者的作用。作為分散介質(zhì)，水性溶液可以包含其它水溶性的或水可分散的穩(wěn)定劑，等滲劑如甘油或木糖醇，凍干保護(hù)劑如蔗糖、葡萄糖、海藻糖等，電解質(zhì)，緩 沖劑，抗絮凝劑如檸檬酸鈉、焦磷酸鈉或十二烷基硫酸鈉或防腐劑。凍干保護(hù)劑包括，但不限于，由糖、多元醇(例如，糖醇)和氨基酸組成的組。優(yōu)選的凍干保護(hù)劑包括糖如蔗糖、海藻糖和葡萄糖。其它合適的糖包括乳糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神經(jīng)氨酸、氨基糖(如葡糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡糖胺(“甲葡胺”))、多元醇(如甘露醇和山梨糖醇)及氨基酸(如精氨酸和甘氨酸)。作為制劑介質(zhì)，水性溶液可以包括Hank’ s溶液、林格氏液、磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)、生理鹽水緩沖液或其它合適的鹽或組合以獲得用于腸胃外遞送制劑的適宜pH和摩爾滲透壓濃度。水性溶液可以包含提高溶液的粘度的物質(zhì)，如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖。本發(fā)明的治療制劑包含疏水的或另外地水溶性差的活性劑。疏水活性劑分散于水性溶液中從而形成其中疏水活性劑的納米分散體顆粒被分散穩(wěn)定劑覆蓋或包裝或環(huán)繞的膠體狀分散體，以形成活性劑(例如，CoQlO)顆粒的納米分散體。納米分散的活性劑(例如，CoQlO)顆粒具有由所述穩(wěn)定劑包圍的疏水活性劑形成的核心。類似地，在某些方面中，穩(wěn)定劑是同時具有親水性和疏水性部分的磷脂。磷脂在均質(zhì)化時形成脂質(zhì)體或其它納米顆粒。在某些方面中，這些脂質(zhì)體是雙層的單層脂質(zhì)體，而在其它方面中，脂質(zhì)體是雙層的復(fù)層脂質(zhì)體。分散的活性劑(例如，CoQlO)顆粒分散于由磷脂形成的脂質(zhì)體的雙層結(jié)構(gòu)的親脂性部分中。在其它的某些方面中，脂質(zhì)體的核心，如活性劑(例如，CoQlO)顆粒的納米分散體的核心由疏水活性劑形成，而外層由磷脂的雙層結(jié)構(gòu)形成。在某些實(shí)施方案中，膠體狀分散體通過凍干過程處理，從而納米顆粒分散體轉(zhuǎn)化成干粉。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，疏水活性劑是輔酶QlO (CoQIO)。輔酶QlO，在本文中也稱為CoQIO，也以泛醌或泛癸利酮為人所知。CoQlO是本領(lǐng)域公知的且在國際公開No. WO2005/069916中進(jìn)一步描述，其全部公開內(nèi)容通過引用并入本文。CoQlO是存在于真核細(xì)胞的線粒體電子傳遞系統(tǒng)中的一系列聚異戊二烯基2，3_ 二甲氧基-5-甲基苯醌(泛醌)之一。人體細(xì)胞專門地產(chǎn)生CoQlO且其存在于細(xì)胞中和所有人體細(xì)胞的線粒體膜中，在具有高能量需求的器官如肝臟和心臟中以最高水平存在。CoQlO的身體池(body pool)據(jù)估計為約2克，其中超過50%是內(nèi)源的。每天需要大約O. 5克的CoQlO來自于飲食或生物合成。CoQlO以噸的數(shù)量由全世界的補(bǔ)充劑市場產(chǎn)生出來且可以從Kaneka(具有位于帕薩迪納，德克薩斯的工廠)和Takasagoshi,日本獲得。CoQlO在人體中的組織分布和氧化還原狀態(tài)已經(jīng)被表征。典型地，具有高能量需求或代謝活性的組織如心臟、腎臟、肝臟和肌肉具有相對高的CoQlO濃度。血漿中的大部分CoQlO作為還原的泛醇存在。組織中CoQlO的主要部分作為氫醌或泛醇以還原形式存在。例外的是腦和肺。氧化狀態(tài)推測是組織中氧化應(yīng)激增加的反映。更具體地，在心臟、腎臟、肝臟、肌肉、腸和血液(血漿)中，分別約61%、75%、95%、65%、95%和96%的CoQlO是還
原形式。CoQlO 是高度親脂的且很大程度上是不溶于水的。由于其在水中的不溶性、在脂質(zhì)中的有限溶解性和相對大的分子量，口服施用CoQlO的吸收效率是差的。Bhagavan等Free Rad. Res. 40 :445-453(2006))報道，在大鼠中，僅約2_3%的口服施用的CoQlO被吸收且在腸的吸收過程中或者在腸吸收之后CoQlO被還原成泛醇。在Matthews等進(jìn)行的研究(Proc. Natl. Acad. Sci. USA95 :8892-8897(1998))中，發(fā)現(xiàn) CoQlO 攝取在一些組織中是年齡依賴的。例如，在幼年大鼠中，血漿、肝和脾濃度在給藥四天后提高，但在心臟和腎中沒有觀察到提高。類似地，在1-2月大的動物中口服施用不提高腦中的CoQlO濃度。但是，CoQlO施用于12個月大和24個月大的大鼠導(dǎo)致CoQlO在腦組織中以氧化和還原形式蓄積。有趣的是，在局部缺血-再灌注損傷后，CoQlO的產(chǎn)生在幼年大鼠而不在老年大鼠中受到刺激。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，疏水活性劑是CoQ10、CoQ10的代謝物、CoQlO的結(jié)構(gòu)塊、CoQlO的類似物或CoQlO的衍生物。CoQlO的類似物包括不具有或具有至少一個異戊二烯重復(fù)單元的類似物。CoQlO具有以下結(jié)構(gòu)
O
3 T TV π
OCH,
L3Jx其中X是10。在本發(fā)明中，CoQlO可以包括CoQlO的衍生物，其中X代表4-10個的多個異戊二烯單元，或6-10個的多個異戊二烯單元，或8-10個的多個異戊二烯單元，或9-10個異戊二烯單元。CoQlO包括完全氧化的形式(也稱作泛醌)、部分氧化的形式(也稱作半醌或泛半醌)或者完全還原的形式(也稱作泛醇)，或者它們的任何混合物或組合。CoQlO的結(jié)構(gòu)塊包括CoQlO的任何元件或合成前體，優(yōu)選生物相關(guān)前體。因此，CoQlO的結(jié)構(gòu)塊包括，但不限于，苯丙氨酸、酪氨酸、4-羥基苯基丙酮酸、苯基乙酸、3-甲氧基-4-羥基扁桃酸、香草酸、4-羥基苯甲酸、甲羥戊酸、法呢基、2，3-二甲氧基-5-甲基-P-苯醌以及對應(yīng)的酸或其離子。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，CoQlO生物合成的結(jié)構(gòu)塊，如用于苯醌環(huán)生物合成的前體及用于類異戊二烯重復(fù)單元生物合成的那些和它們與苯醌環(huán)的連接物，可以單獨(dú)地施用或組合地施用于靶細(xì)胞以調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡抑制劑Bcl-2的表達(dá)和/或細(xì)胞凋亡促進(jìn)劑半胱天冬酶-3的表達(dá)。參見，例如，美國專利申請系列號12/778，094和本文中提供的實(shí)施例。CoQlO的代謝物包括任何已知的CoQlO的代謝物。參見，例如，Turunen, M.等，Biochemica et Biophysica Acta 1660 :171-199 (2004),其全部內(nèi)容通過引用并入本文。主要代謝物已經(jīng)確認(rèn)為具有帶縮短到5-7個原子的側(cè)鏈的芳香環(huán)。這種代謝物顯示如下。該代謝物可以任選地在碳4或碳I處磷酸化。
權(quán)利要求
1.適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑，包含 水性溶液； 分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑；和 分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑中的至少一種； 其中活性劑的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸小于200nm的納米分散體顆粒。
2.權(quán)利要求I的制劑，其中所述分散穩(wěn)定劑選自聚乙二醇化蓖麻油、CremphorEL、Cremophor RH 40、聚乙二醇化維生素E、維生素E TPGS和二肉豆蘧?；字Ｄ憠A(DMPC)。
3.權(quán)利要求2的制劑，其中所述分散穩(wěn)定劑是DMPC。
4.權(quán)利要求I的制劑，其中所述調(diào)理素作用縮減劑選自泊洛沙姆和poloxamine。
5.權(quán)利要求4的制劑，其中所述調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。
6.權(quán)利要求I的制劑，其中所述疏水活性劑是輔酶QlO(C0QlO)。
7.前述權(quán)利要求任一項(xiàng)的制劑，其中所述疏水活性劑是CoQIO，所述調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188和所述分散穩(wěn)定劑是DMPC。
8.權(quán)利要求I的制劑，其中所述膠體狀納米分散體是懸浮液。
9.權(quán)利要求I的制劑，其中所述膠體狀納米分散體是乳液。
10.權(quán)利要求I的制劑，其中所述膠體狀納米分散體的活性劑是晶體形式。
11.權(quán)利要求I的制劑，其中所述膠體狀納米分散體的活性劑是超冷熔體形式。
12.權(quán)利要求7的制劑，其中所述制劑分別具有4%、3%和1.5%重量/體積比的CoQIO, DMPC和泊洛沙姆188。
13.權(quán)利要求7的制劑，其中所述制劑分別具有8%、6%和3%重量/體積比的CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188。
14.權(quán)利要求I的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約IOnm至約200nm。
15.權(quán)利要求I的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約IOnm至約lOOnm。
16.權(quán)利要求I的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約30nm至約80nm。
17.權(quán)利要求I的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約35nm至約40nm。
18.權(quán)利要求I的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸小于約45nm。
19.適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑，包含 水性溶液； 分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑；和 分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑中的至少一種； 其中所述活性劑的膠體狀納米分散體分散成尺寸小于200nm的脂質(zhì)體。
20.權(quán)利要求19的制劑，其中所述脂質(zhì)體是單層的。
21.權(quán)利要求19的制劑，其中所述脂質(zhì)體是雙層的復(fù)層脂質(zhì)體，其具有該雙層之間的水性空間和該雙層內(nèi)的親脂性空間。
22.權(quán)利要求21的制劑，其中所述疏水活性劑封閉在所述雙層的親脂性空間內(nèi)。
23.權(quán)利要求21的制劑，其中所述復(fù)層脂質(zhì)體進(jìn)一步包括封閉在所述雙層之間的水性空間中的親水試劑。
24.適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑，包含水性溶液； 分散以 形成顆粒膠體狀納米分散體的疏水活性劑；和 DMPC和調(diào)理素作用縮減劑。
25.權(quán)利要求24的制劑,其中所述調(diào)理素作用縮減劑選自泊洛沙姆和poloxamine。
26.權(quán)利要求24的制劑，其中所述調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。
27.權(quán)利要求24的制劑，其中所述疏水活性劑是輔酶QlO(CoQlO)。
28.權(quán)利要求24的制劑，其中所述疏水活性劑是輔酶QlO(CoQlO)和所述調(diào)理素作用縮減劑是泊洛沙姆188。
29.權(quán)利要求28的制劑，其中所述制劑分別具有4%、3%和I.5%重量/體積比的CoQIO, DMPC和泊洛沙姆188。
30.權(quán)利要求28的制劑，其中所述制劑分別具有8%、6 %和3 %重量/體積比的CoQlO、DMPC和泊洛沙姆188。
31.權(quán)利要求24的制劑，其中所述膠體狀納米分散體為懸浮液。
32.權(quán)利要求24的制劑，其中所述膠體狀納米分散體為乳液。
33.權(quán)利要求24的制劑，其中所述膠體狀納米分散體的活性劑為晶體形式。
34.權(quán)利要求24的制劑，其中所述膠體狀納米分散體的活性劑為超冷熔體形式。
35.適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑，包含 水性溶液； 分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑；和 DMPC ； 其中所述活性劑的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸小于200nm的納米分散體顆粒。
36.權(quán)利要求35的制劑，其中所述疏水活性劑是輔酶QlO(CoQlO)。
37.權(quán)利要求35的制劑，其中所述膠體狀納米分散體為懸浮液。
38.權(quán)利要求35的制劑，其中所述膠體狀納米分散體為乳液。
39.權(quán)利要求35的制劑，其中所述膠體狀納米分散體的活性劑為晶體形式。
40.權(quán)利要求35的制劑，其中所述膠體狀納米分散體的活性劑為超冷熔體形式。
41.權(quán)利要求36的制劑，其中所述制劑分別具有4%和3%重量/體積比的CoQlO和DMPC。
42.權(quán)利要求36的制劑，其中所述制劑分別具有8%和6%重量/體積比的CoQlO和DMPC。
43.權(quán)利要求35的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約IOnm至約200nm。
44.權(quán)利要求35的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約IOnm至約lOOnm。
45.權(quán)利要求35的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約30nm至約80nm。
46.權(quán)利要求35的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸為約35nm至約40nm。
47.權(quán)利要求35的制劑，其中所述納米分散體顆粒的平均尺寸小于約45nm。
48.適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑，包含 水性溶液； 分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的CoQlO ； 選自聚乙二醇化蓖麻油、Cremphor EL>Cremophor RH 40、聚乙二醇化維生素E、維生素E TPGS和二肉豆蘧?；字Ｄ憠A(DMPC)的分散穩(wěn)定劑；和選自泊洛沙姆和poloxamine的調(diào)理素作用縮減劑； 其中所述CoQlO的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸為IOnm至IOOnm的納米分散體顆粒。
49.適合靜脈內(nèi)施用于受試者的治療制劑，包含 水性溶液； 分散以形成顆粒的膠體狀納米分散體的CoQlO ；DMPC ;和泊洛沙姆188 ； 其中所述CoQlO的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸為30nm至80nm的納米分散體顆粒。
50.制備權(quán)利要求I的治療制劑的方法，其中該方法包括通過以下步驟利用高壓均質(zhì)化使疏水活性劑分散 將疏水活性劑添加到65°C水浴中并混合以形成疏水活性劑/水混合物； 向所述疏水活性劑/水混合物中加入分散穩(wěn)定劑并在65°C下混合以形成疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑混合物； 加入調(diào)理素作用縮減劑以形成疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑/縮減劑混合物； 預(yù)熱微射流均質(zhì)機(jī)到65 °C ;和 通過在65°C的微射流均質(zhì)機(jī)中混合所述疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑/縮減劑混合物進(jìn)行加工，以使得形成平均粒徑小于200nm的疏水活性劑膠體狀納米分散體。
51.權(quán)利要求I的治療制劑，通過權(quán)利要求50的方法制備。
52.權(quán)利要求50的方法，其中所述分散穩(wěn)定劑選自聚乙二醇化蓖麻油、CremphorEL, Cremophor RH 40、聚乙二醇化維生素E、維生素E TPGS和二肉豆蘧?；字Ｄ憠A(DMPC)。
53.權(quán)利要求52的方法，其中所述分散穩(wěn)定劑為DMPC。
54.權(quán)利要求50的方法,其中所述調(diào)理素作用縮減劑選自泊洛沙姆和poloxamine。
55.權(quán)利要求54的方法，其中所述調(diào)理素作用縮減劑為泊洛沙姆188。
56.權(quán)利要求50的方法，其中所述調(diào)理素作用縮減劑為泊洛沙姆188和所述分散穩(wěn)定劑為DMPC。
57.權(quán)利要求50的方法，其中所述疏水活性劑為CoQIO。
58.權(quán)利要求50的方法，其中所述疏水活性劑為CoQIO，所述調(diào)理素作用縮減劑為泊洛沙姆188和所述分散穩(wěn)定劑為DMPC。
59.權(quán)利要求57或58的方法，其中所述膠體狀納米分散體的CoQlO為超冷熔體的形式。
60.權(quán)利要求58的方法，其中所述制劑分別具有4%、3%和I.5%重量/體積比的CoQIO、DMPC和泊洛沙姆188。
61.權(quán)利要求58的方法，其中所述制劑分別具有8%、6 %和3 %重量/體積比的CoQ IO、DMPC和泊洛沙姆188。
62.權(quán)利要求50的方法，其中形成平均尺寸為IOnm至IOOnm的疏水活性劑膠體狀納米分散體。
63.權(quán)利要求50的方法，其中形成平均尺寸為35nm至40nm的疏水活性劑膠體狀納米分散體。
64.權(quán)利要求50的方法，其中形成平均尺寸小于約45nm的疏水活性劑膠體狀納米分散體。
65.權(quán)利要求50的方法，進(jìn)一步包括凍干所述膠體狀納米分散體以使所述CoQlO膠體狀納米分散體顆粒結(jié)晶的步驟。
66.權(quán)利要求65的方法，進(jìn)一步包括加入凍干保護(hù)劑的步驟。
67.權(quán)利要求66的方法,其中所述凍干保護(hù)劑為營養(yǎng)糖。
68.權(quán)利要求67的方法，其中所述營養(yǎng)糖選自乳糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、神經(jīng)氨酸、葡糖胺、半乳糖胺、N-甲基葡糖胺、甘露醇、山梨糖醇、精氨酸、甘氨酸和蔗糖。
69.治療或預(yù)防受試者的腫瘤疾病的方法,包括 向所述受試者靜脈內(nèi)施用權(quán)利要求1-49中任一項(xiàng)所述的治療制劑，從而實(shí)現(xiàn)所述腫瘤疾病的治療或預(yù)防。
70.權(quán)利要求69的方法，其中所述靜脈內(nèi)施用是通過經(jīng)選擇以在受試者中提供對于所治療的腫瘤疾病的效力的劑量。
71.權(quán)利要求69的方法，其中所述腫瘤疾病是侵襲性的或轉(zhuǎn)移性的腫瘤疾病。
72.權(quán)利要求71的方法，其中所述侵襲性的或轉(zhuǎn)移性的腫瘤疾病選自胰腺癌、肝細(xì)胞癌、尤文氏肉瘤、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、腦癌(星形細(xì)胞瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)、神經(jīng)內(nèi)分泌癌、結(jié)腸癌、肺癌、骨肉瘤、雄激素依賴性前列腺癌、卵巢癌和非霍奇金氏淋巴瘤。
73.權(quán)利要求69的方法，其中所述腫瘤疾病是非侵襲性腫瘤疾病。
74.權(quán)利要求73的方法，其中所述非侵襲性腫瘤疾病選自非轉(zhuǎn)移性乳腺癌、雄激素依賴性前列腺癌、小細(xì)胞肺癌和急性淋巴細(xì)胞性白血病。
75.權(quán)利要求69的方法，其中所述制劑包含約4%的輔酶Q10、3%的DMPC和I.5%的泊洛沙姆188。
76.用于抑制受試者中的腫瘤細(xì)胞生長的方法，包括 向所述受試者靜脈內(nèi)施用權(quán)利要求1-49中任一項(xiàng)所述的治療制劑，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長。
77.權(quán)利要求76的方法，其中所述靜脈內(nèi)施用是通過經(jīng)選擇以在受試者中提供抑制腫瘤細(xì)胞生長的效力的劑量。
78.權(quán)利要求76的方法，其中所述制劑包含約4%的輔酶Q10、3%的DMPC和I.5%的泊洛沙姆188。
全文摘要
本文公開了適于腸胃外施用特定疏水活性劑如輔酶Q10的制劑。還公開了其制備方法和使用該制劑治療腫瘤疾病的方法。制劑包含水性溶液、分散形成顆粒的膠體狀納米分散體的疏水活性劑及分散穩(wěn)定劑和調(diào)理素作用縮減劑中的至少一種，其中活性劑的膠體狀納米分散體分散成平均尺寸小于200nm的納米分散體顆粒。制備腸胃外制劑的方法包括通過(1)將疏水活性劑加入65℃的水浴中并混合以形成疏水活性劑/水混合物；(2)向疏水活性劑/水混合物中加入分散穩(wěn)定劑并在65℃下混合以形成疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑混合物；(3)加入調(diào)理素作用縮減劑以形成疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑/縮減劑混合物；(4)預(yù)熱微射流均質(zhì)機(jī)到65℃；和(5)通過在65℃的微射流均質(zhì)機(jī)中混合疏水活性劑/水/穩(wěn)定劑/縮減劑混合物進(jìn)行加工以致形成平均粒徑小于200nm的疏水活性劑膠體狀納米分散體而利用高壓勻質(zhì)化來分散疏水活性劑。本文還提供通過向受試者施用本文描述的制劑治療腫瘤疾病的方法從而治療或預(yù)防腫瘤疾病發(fā)生。
文檔編號A61K9/107GK102892412SQ201180023809
公開日2013年1月23日 申請日期2011年3月11日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月12日
發(fā)明者N·R·納萊恩, J·P·麥庫克 申請人:博格制藥有限責(zé)任公司