專利名稱：15價(jià)肺炎球菌多糖蛋白質(zhì)綴合物疫苗組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了具有15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物的多價(jià)免疫原性組合物。每種綴合物由與載體蛋白質(zhì)優(yōu)選CRM197綴合的莢膜多糖組成，所述莢膜多糖由肺炎鏈球菌{Streptococcus pneumoniae)的不同血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F或33F)制備。優(yōu)選配制為在基于鋁的佐劑上的疫苗的免疫原性組合物提供了針對(duì)特別是在嬰兒和幼兒中的肺炎球菌疾病的廣泛覆蓋。發(fā)明背景 肺炎鏈球菌是全世界的嚴(yán)重疾病的顯著原因。在1997年，疾病控制與預(yù)防中心(Centers for Disease Control and Prevention) (CDC)估計(jì)在美國姆年存在 3，000 個(gè)肺炎球菌性腦膜炎病例、50，000個(gè)肺炎球菌性菌血癥病例、7，000, 000個(gè)肺炎球菌性中耳炎病例和500，000個(gè)肺炎球菌性肺炎病例。參見Centers for Disease Control andPrevention,MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1997，46 (RR-8) : 1-13。此外，這些疾病的并發(fā)癥可以是顯著的，某些研究報(bào)道伴隨肺炎球菌性腦膜炎的高達(dá)8%死亡率和25%神經(jīng)病學(xué)后遺癥。參見 Arditi 等人，1998，Pediatrics 102:1087-97。已得到許可多年的多價(jià)肺炎球菌多糖疫苗已證明在預(yù)防成人特別是老年人和處于高危中的那些人中的肺炎球菌疾病中是有價(jià)值的。然而，嬰兒和幼兒對(duì)未綴合的肺炎球菌多糖響應(yīng)弱。肺炎球菌綴合物疫苗，即含有當(dāng)時(shí)在幼兒和嬰兒中引起侵入性肺炎球菌疾病的7種最頻繁分離的血清型(4、68、抑、14、18(、19 和23 )的Prevnar ，首先在美國在2000年2月得到許可。在Prevnar 在美國普遍使用后，由于Prevnar 中存在的血清型，已存在兒童中侵入性肺炎球菌疾病的顯著減少。參見Centers for Disease Control andPrevention,MMWR Morb Mortal Wkly Rep 2005，54(36) :893_7。然而，在全世界的特定地區(qū)中存在由Prevna/的血清型覆蓋中的限制和在美國特定新出現(xiàn)血清型的某些證據(jù)(例如19A 及其他)。參見 O’Brien 等人,2004, Am J Epidemiol 159:634-44 ;Whitney 等人，2003,N Engl J Med 348:1737-46 ;Kyaw 等人，2006，N Engl J Med 354:1455-63 ;Hicks 等人，2007，J Infect Dis 196:1346-54 ;Traore 等人，2009，Clin Infect Dis 48: S181-S189。美國專利申請(qǐng)公開號(hào)US 2006/0228380 Al描述了包括血清型1、3、4、5、6A、6B、7 、抑、14、18(、194、19 和23 的13價(jià)肺炎球菌多糖蛋白質(zhì)綴合物疫苗。中國專利申請(qǐng)公開號(hào) CN 101590224 A 描述了包括血清型 1、2、4、5、6A、6B、7F、9N、9V、14、18C、19A、19F和 23F的14價(jià)肺炎球菌多糖蛋白質(zhì)綴合物疫苗。其他PCVs已覆蓋PCV-15中含有的血清型中的7、10、11或13種，但已觀察到對(duì)于某些血清型的免疫干擾(例如在GSK的PCV-Il中對(duì)于血清型3的更低保護(hù))和在Pfizer的PCV-13中對(duì)于血清型6B的更低應(yīng)答率。參見2008年10月25-28日在48th AnnualICAAC/ISDA 46th Annual Meeting, Washington DC 呈現(xiàn)的 Prymula 等人，2006, Lancet367:740-48 和 Kieninger 等人,Safety and Immunologic Non-inferiority of 13-valentPneumococcal Conjugate Vaccine Compared to 7—valent Pneumococcal ConjugateVaccine biven as a 4-Dose Series in Healthy Infants and Toddlers。發(fā)明概述
本發(fā)明提供了包含下述的免疫原性組合物(I)由與載體蛋白質(zhì)綴合的來自15種不同血清型的肺炎鏈球菌的莢膜多糖組成的多價(jià)多糖蛋白質(zhì)綴合物混合物，和(2)藥學(xué)可接受的載體。更具體而言，本發(fā)明提供了包含下述的15價(jià)肺炎球菌綴合物疫苗(PCV-15)組合物由與載體蛋白質(zhì)綴合的來自肺炎鏈球菌的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F的莢膜多糖組成的多價(jià)多糖蛋白質(zhì)綴合物混合物；和藥學(xué)可接受的載體。在ー個(gè)特定實(shí)施方案中，免疫原性組合物含有來自血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F的莢膜多糖，并且載體蛋白質(zhì)是CRM197。在特定實(shí)施方案中，組合物進(jìn)ー步包含佐劑。在特定實(shí)施方案中，佐劑是基于鋁的 佐劑，例如磷酸鋁、硫酸鋁或氫氧化鋁。在本發(fā)明的ー個(gè)特定實(shí)施方案中，佐劑是磷酸鋁。本發(fā)明還提供了誘導(dǎo)針對(duì)肺炎鏈球菌莢膜多糖的免疫應(yīng)答的方法，其包括給人施用免疫有效量的上述免疫原性組合物。本發(fā)明進(jìn)一歩提供了作為單個(gè)0. 5 mL劑量施用的免疫原性組合物，所述劑量配制為含有2 μ g每種多糖，除了 4 Ug的6B外；約32 μ g CRM197載體蛋白質(zhì)；0. 125 mg元素鋁(0. 5 mg磷酸鋁)佐劑；150 mM氯化鈉和20 mM L-組氨酸緩沖液。附圖
簡(jiǎn)述
圖I :關(guān)于PCV-15相對(duì)于Prevnar 在嬰兒恒河猴(Prevnar血清型，TO-2和TO-3)中的GMCs比較。誤差條(Error bar)指示2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)誤。圖2 :在用PCV-15免疫接種的嬰兒恒河猴中針對(duì)非Prevnar 血清型的血清型特異性GMCs。誤差條指示2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)誤。圖3 =NZffR-I :在用PCV-15不連同(OxA)或連同APA(Bl)(劑量2后)免疫接種的兔中的幾何平均滴度比較。誤差條指示對(duì)幾何平均值倍數(shù)差異的95% CI(PCV-15不連同APA / PCV-15 連同 APA)。發(fā)明詳述
本發(fā)明提供了包含15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物連同藥學(xué)可接受的載體、基本上由15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物連同藥學(xué)可接受的載體組成、或可替代地由15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物連同藥學(xué)可接受的載體組成的多價(jià)免疫原性組合物，其中綴合物各自含有與載體蛋白質(zhì)綴合的不同莢膜多糖，并且其中莢膜多糖由肺炎鏈球菌的血清型1、3、4、5、6A、6B、7卩、9￥、14、18(、19ム、19 、22 、23 和33 制備。在特定實(shí)施方案中，載體蛋白質(zhì)是CRM197。免疫原性組合物可以進(jìn)一歩包含佐劑，例如基于鋁的佐劑，例如磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁。本發(fā)明還提供了誘導(dǎo)針對(duì)肺炎鏈球菌莢膜多糖綴合物的免疫應(yīng)答的方法，其包括給人施用免疫有效量的上述多價(jià)免疫原性組合物。如下文實(shí)施例中舉例說明的，在嬰兒恒河猴中的臨床前研究證實(shí)針對(duì)PCV-15中的所有15種血清型的強(qiáng)抗體應(yīng)答，這可與關(guān)于Prevna/中的7種常見血清型的應(yīng)答相當(dāng)。包括含有血清型22F和33F的新多糖蛋白質(zhì)綴合物添加的15價(jià)肺炎球菌綴合物疫苗提供強(qiáng)抗體應(yīng)答的申請(qǐng)人的發(fā)現(xiàn)證實(shí)，未由現(xiàn)有肺炎球菌疫苗覆蓋的肺炎球菌血清型的擴(kuò)展覆蓋的可行性。當(dāng)與本發(fā)明的免疫原性組合物一起使用吋，術(shù)語“包含”指任何其他組分的包括(遭受用于抗原混合物的語言“由……組成”的限制)，例如佐劑和賦形劑。當(dāng)與多價(jià)多糖蛋白質(zhì)綴合物混合物一起使用吋，術(shù)語“由……組成”指具有那些15種特定肺炎鏈球菌多糖蛋白質(zhì)綴合物且不具有來自不同血清型的其他肺炎鏈球菌多糖蛋白質(zhì)綴合物的混合物。肺炎鏈球菌莢膜多糖-蛋白質(zhì)綴合物
來自肺炎鏈球菌的莢膜多糖可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)進(jìn)行制備。例如，多糖可以從細(xì)菌中分離，并且可以通過已知方法(參見例如，歐洲專利號(hào)EP497524和EP497525)且優(yōu)選通過微流化使大小調(diào)節(jié)至一定程度。多糖可以調(diào)節(jié)大小，以便減少多糖樣品中的粘度和/或改善用于綴合產(chǎn)物的過濾性。在本發(fā)明中，莢膜多糖由肺炎鏈球菌的血清型 1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F 和 33F 制備。
在一個(gè)實(shí)施方案中，每種肺炎球菌多糖血清型在基于大豆的培養(yǎng)基中生長。隨后通過包括離心、沉淀和超濾的標(biāo)準(zhǔn)步驟純化個(gè)別多糖。參見例如，美國專利申請(qǐng)公開號(hào)2008/0286838 和美國專利號(hào) 5，847，112。載體蛋白質(zhì)優(yōu)選是無毒和無反應(yīng)原性且以足夠量和純度可獲得的蛋白質(zhì)。載體蛋白質(zhì)可以與肺炎鏈球菌多糖綴合或連接，以增強(qiáng)多糖的免疫原性。載體蛋白質(zhì)應(yīng)可順應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)綴合程序。在本發(fā)明的ー個(gè)特定實(shí)施方案中，CRM197用作載體蛋白質(zhì)。在一個(gè)實(shí)施方案中，每種莢膜多糖與相同載體蛋白質(zhì)綴合(每種莢膜多糖分子與單ー載體蛋白質(zhì)綴合)。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，莢膜多糖與兩種或更多種載體蛋白質(zhì)綴合(每種莢膜多糖分子與単一載體蛋白質(zhì)綴合)。在此類實(shí)施方案中，相同血清型的每種莢膜多糖一般與相同載體蛋白質(zhì)
全ヌヌム
ロ οCRM197是白喉毒素的無毒變體(即類毒素)。在一個(gè)實(shí)施方案中，它從在基于酪蛋白氨基酸和酵母提取物的培養(yǎng)基中生長的白喉?xiàng)U菌{Corynebacterium diphtheria)菌株07(β 197)培養(yǎng)物中分離。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，CRM197依照美國專利號(hào)5，614，382中所述的方法重組制備。一般地，CRM197通過超濾、硫酸銨沉淀和離子交換層析的組合進(jìn)行純化。在某些實(shí)施方案中，CRM197 使用 Pfenex Expression Technology (Pfenex Inc. , San Diego,CA)在突光假單胞菌(Pseudomonas fluorescens)中進(jìn)行制備。其他合適的載體蛋白質(zhì)包括另外的滅活細(xì)菌毒素例如DT (白喉類毒素)、TT (破傷風(fēng)毒素)或TT的片段C、百日咳類毒素、霍亂類毒素(例如如國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 2004/083251中描述的)、大腸桿菌(￡ cWi)LT、大腸桿菌ST、和來自銅綠假單胞菌iPseudomonas aeruginosa)的外毒素A。還可以使用細(xì)菌外膜蛋白質(zhì)例如外膜復(fù)合物c (OMPC)，孔蛋白，轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合蛋白，肺炎球菌表面蛋白質(zhì)A(PspA ;參見國際申請(qǐng)專利公開號(hào)WO 02/091998)，肺炎球菌粘附素蛋白質(zhì)(PsaA)，來自A組或B組鏈球菌的C5a肽酶，或流感嗜血桿菌^HaemophiIus influenzae)蛋白D,肺炎球菌溶血素(Kuo等人，1995,Infect Immun 63 ;2706_13)包括以某些形式解毒的ply，例如dPLY_GMBS (參見國際專利申請(qǐng)公開號(hào) WO 04/081515)或 dPLY-甲醛，PhtX 包括 PhtA、PhtB、PhtD、PhtE，和 Pht 蛋白質(zhì)的融合物例如PhtDE融合物、PhtBE融合物(參見國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 01/98334和TO 03/54007)。其他蛋白質(zhì)例如卵清蛋白、鑰孔血藍(lán)蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)或結(jié)核菌素純蛋白衍生物(PPD)、PorB (來自腦膜炎奈瑟菌{N. meningitidis)) > PD(流感嗜血桿菌蛋白D ;參見例如，歐洲專利號(hào)EP O 594 610 B)或其免疫功能等價(jià)物、合成肽(參見歐洲專利號(hào)EP0378881和EP0427347)、熱休克蛋白(參見國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO93/17712和WO 94/03208)、百日咳蛋白質(zhì)(參見國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 98/58668和歐洲專利號(hào)EP0471177)、細(xì)胞因子、淋巴因子、生長因子或激素(參見國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 91/01146)、包含來自多種病原體衍生抗原的多重人⑶4+ T細(xì)胞表位的人工蛋白質(zhì)(參見 Falugi 等人，2001, Eur J Tmmunol 31:3816-3824),例如 N19 蛋白質(zhì)(參見 Baraldoi等人,2004, Infect Immun 72:4884-7)、鐵攝取蛋白質(zhì)(參見國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO01/72337)、艱難梭菌{C. difficile)的毒素A或B (參見國際專利公開號(hào)WO 00/61761)、和鞭毛蛋白(參見Ben-Yedidia等人，1998, Immunol Lett 64:9)也可以用作載體蛋白質(zhì)?？梢允褂闷渌鸇T 突變體，例如 CRMl76、CRM228、CRM 45 (Uchida 等人，1973，J BiolChem 218:3838-3844) ；CRM 9,CRM 45、CRM102、CRM 103 和 CRM107 和由 Nicholls 和 Youle在 Genetically Engineered Toxins, Ed :Frankel, Maecel Dekker Inc, 1992 中描述的其他突變；Glu-148至Asp、Gln或Ser和/或Ala 158至Gly的缺失或突變和公開于美國專利號(hào)4，709，017或美國專利號(hào)4，950，740中的其他突變；至少ー個(gè)或多個(gè)殘基Lys 516、Lys 526、Phe 530和/或Lys 534的突變和公開于美國專利號(hào)5，917，017或美國專利號(hào) 6，455，673中的其他突變；或公開于美國專利號(hào)5，843，711中的片段。純化的多糖化學(xué)地激活以使得糖類能夠與載體蛋白質(zhì)反應(yīng)。一旦激活，每種莢膜多糖就與載體蛋白質(zhì)分開綴合，以形成糖綴合物。多糖綴合物可以通過已知偶聯(lián)技術(shù)進(jìn)行制備。在一個(gè)實(shí)施方案中，多糖的化學(xué)激活和與載體蛋白質(zhì)的后續(xù)綴合通過美國專利號(hào)4，365，170,4, 673，574和4，902，506中所述的方法達(dá)到。簡(jiǎn)言之，通過應(yīng)用將末端羥基氧化為醛的任何氧化劑例如高碘酸鹽(包括高碘酸鈉、高碘酸鉀或高碘酸)的反應(yīng)，那種化學(xué)法使得肺炎球菌多糖能夠激活。反應(yīng)導(dǎo)致糖的鄰位羥基的隨機(jī)氧化切割，伴隨反應(yīng)醛基的形成。與蛋白質(zhì)載體(例如CRM197)的偶聯(lián)可以是通過經(jīng)由蛋白質(zhì)的賴氨?；闹苯影坊倪€原胺化。例如，綴合通過激活多糖和載體蛋白質(zhì)的混合物與還原劑例如氰基硼氫化鈉反應(yīng)執(zhí)行。未反應(yīng)的醛隨后利用強(qiáng)還原劑例如硼氫化鈉的添加進(jìn)行加帽。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，綴合方法可以依賴用I-氰基-4-ニ甲氨基吡啶鎗四氟硼酸酷(CDAP)的糖類激活，以形成氰酸酷。激活糖類因此可以直接或經(jīng)由間隔物(接頭)基團(tuán)與載體蛋白質(zhì)上的氨基偶聯(lián)。例如，間隔物可以是胱胺或半胱胺，以給出巰基化多糖，其可以經(jīng)由硫醚鍵與載體偶聯(lián)，所述硫醚鍵在與馬來酰亞胺激活的載體蛋白質(zhì)(例如使用GMBS)或鹵代こ?；d體蛋白質(zhì)(例如使用碘こ酰胺[例如こ基碘こ酰胺HCl]或溴こ酸N-琥珀酰亞胺酯或SIAB、或SIA、或SBAP)反應(yīng)后獲得。優(yōu)選地，氰酸酯(任選通過CDAP化學(xué)制備)與己烷ニ胺或己ニ酸ニ酰肼(ADH)偶聯(lián)，并且氨基衍生的糖類與載體蛋白質(zhì)綴合，其使用碳ニ亞胺(例如EDAC或EDC)化學(xué)經(jīng)由在蛋白質(zhì)載體上的羧基進(jìn)行。此類綴合物在國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 93/15760、WO 95/08348和WO 96/29094 ;和Chu等人，1983，Infect. Immunity 40:245-256 中描述。其他合適技術(shù)使用碳ニ亞胺、酰肼、活性酷、norborane、對(duì)硝基苯甲酸、N-羥基琥珀酰亞胺、S—NHS、EDC、TSTU。許多在國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 98/42721中描述。綴合可以涉及羰基接頭，其可以通過糖類的游離羥基與⑶I的反應(yīng)形成(參見Bethell等人，1979，J. Biol. Chem. 254:2572-4 ;Hearn 等人，1981，J. Chromatogr. 218:509-18)，隨后為與蛋白質(zhì)的反應(yīng)以形成氨基甲酸酯鍵。這可以涉及異頭末端至伯羥基的還原，伯羥基的任選保護(hù)/脫保護(hù)，伯羥基與CDI的反應(yīng)以形成CDI氨基甲酸酯中間體，且偶聯(lián)CDI氨基甲酸酯中間體與蛋白質(zhì)上的氨基。在一個(gè)實(shí)施方案中，在配制前，每種肺炎球菌莢膜多糖抗原由肺炎鏈球菌個(gè)別純化，激活以形成反應(yīng)醛，且隨后使用還原胺化與載體蛋白質(zhì)CRM197共價(jià)綴合。在英膜多糖與載體蛋白質(zhì)綴合后，通過多種技術(shù)中的一種或多種純化多糖蛋白質(zhì)綴合物(就多糖蛋白質(zhì)綴合物的量而言富集)。這些技術(shù)的例子是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，并且包括濃縮/滲濾操作、超濾、沉淀/洗脫、柱層析和深層過濾。參見例如，美國專利號(hào) 6，146，902。
藥物/疫苗組合物
本發(fā)明進(jìn)一歩提供了組合物，包括藥物、免疫原性和疫苗組合物，其包含15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物連同藥學(xué)可接受的載體和佐劑、基本上由15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物連同藥學(xué)可接受的載體和佐劑組成、或可替代地由15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物連同藥學(xué)可接受的載體和佐劑組成，其中綴合物各自含有與載體蛋白質(zhì)綴合的不同莢膜多糖，并且其中莢膜多糖由肺炎鏈球菌的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F制備。這些肺炎球菌綴合物通過分開過程制備且整體(bulk)配制成單ー劑量制劑。如本文定義的，“佐劑”是用于增強(qiáng)本發(fā)明的免疫原性組合物的免疫原性的物質(zhì)。免疫佐劑可以增強(qiáng)針對(duì)抗原的免疫應(yīng)答，所述抗原當(dāng)単獨(dú)施用時(shí)是弱免疫原性的，例如未誘導(dǎo)抗體滴度或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答或誘導(dǎo)弱抗體滴度或細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，増加對(duì)于抗原的抗體滴度，和/或降低在個(gè)體中有效達(dá)到免疫應(yīng)答的抗原劑量。因此，通常給予佐劑以加強(qiáng)免疫應(yīng)答且其是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。增強(qiáng)組合物的有效性的合適佐劑包括但不限于
(1)鋁鹽(明礬)，例如氫氧化鋁、磷酸鋁、硫酸鋁等；
(2)水包油乳液佐劑(含或不含其他特異性免疫刺激劑例如胞壁酰肽(下文定義的)或細(xì)菌細(xì)胞壁組分)，例如(a)MF59(國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 90/14837)，含有5%Squalene,O. 5% Tween 80和O. 5% Span 85 (任選含有不同量的MTP-PE)，使用微射流機(jī)(microfluidizer)例如型號(hào)IlOY微射流機(jī)(Microfluidics,Newton,MA)配制成亞微米顆粒，(b)SAF，含有 10% Squalene,O. 4% Tween 80、5%普朗尼克嵌段聚合物 L121、和 thr-MDP，微射流成亞微米乳化液或渦旋以生成較大顆粒大小的乳液(c)Ribi 佐劑系統(tǒng)(RAS)，(Corixa,Hamilton,MT),含有 2% Squalene>O. 2% Tween 80和一種或多種細(xì)菌細(xì)胞壁組分，其來自美國專利號(hào)4，912，094中描述的3-0-脫酰化(deaylated)單磷酰脂質(zhì)A (MPL )、海藻糖ニ霉菌酸(TDM)、和細(xì)胞壁支架(CWS)，優(yōu)選MPL+CWS(Detox );和(d)Montanide ISA ；
(3)可以使用阜苷佐劑，例如Quil A 或 STIMULON QS-21 (Antigenics, Framingham,MA)(參見例如，美國專利號(hào)5，057，540)或由其生成的粒子，例如ISCOM(通過膽固醇、皂苷、磷脂和兩親蛋白質(zhì)的組合形成的免疫刺激復(fù)合物)和Iscomatrix (具有與ISCOM基本上相同的結(jié)構(gòu)但不含蛋白質(zhì))；
(4)細(xì)菌脂多糖、合成脂質(zhì)A類似物例如氨基烷基葡糖胺磷酸鹽化合物(AGP)或其衍生物或類似物，其可從Corixa獲得，且在美國專利號(hào)6，113,918中描述；一種此類AGP是2-[(R) -3-十四酰氧基十四酰氨基]こ基2-脫氧-4-0-膦?；?3-0-[ (R) -3-十四酰氧基十四酰]-2-[(R)-3-十四酰氧基十四酰氨基]-b-D-吡喃葡糖苷，其也稱為529 (以前稱為RC529)，其配制為水形式或穩(wěn)定乳液；
(5)合成多核苷酸例如含有ー個(gè)或多個(gè)CpG基序的寡核苷酸(美國專利號(hào)6, 207, 646);和
(6)細(xì)胞因子，例如白細(xì)胞介素(例如IL-U IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18等)、干擾素(例如Y干擾素)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)、腫瘤壞死因子(TNF)、共刺激分子B7-1和B7-2等；和
(7)補(bǔ)體，例如補(bǔ)體成分C3d的三聚體。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，佐劑是上述佐劑中的2、3種或更多種的混合物，例如 SBAS2 (還含有3-脫?；瘑瘟柞Ｖ|(zhì)A和QS21的水包油乳液)。胞壁酰肽包括但不限于N-こ酰-胞壁酰-L-蘇氨酰-D-異谷氨酰胺(thr-MDP)、N-こ酰-normuramyl-L-丙氨酸-2- (Γ -2’ ニ棕櫚酰_sn_甘油-3-輕基磷酰氧基)-こ胺(MTP-PE)等。在特定實(shí)施方案中，佐劑是鋁鹽。鋁鹽佐劑可以是明礬沉淀的疫苗或明礬吸附的疫苗。鋁鹽佐劑是本領(lǐng)域眾所周知的，并且例如在Harlow，E.和D. Lane (1988 ；Antibodies A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory)和 Nicklas,ff. (1992 ；Aluminum salts. Research in Immunology 143:489-493)中描述。招鹽包括但不限于水化氧化鋁、水合氧化鋁、三水合氧化鋁(ATH)、鋁的水合物、鋁的三水合物、鋁膠、Superfos、Amphogel、氫氧化招(III)、輕基磷酸招硫酸鹽(磷酸招佐劑(APA))、無定形氧化鋁、三水合氧化鋁或三羥基鋁。APA是羥基磷酸鋁的水混懸液。APA通過將氯化鋁和磷酸鈉以I: I體積比摻和以沉淀羥基磷酸鋁進(jìn)行制造。在摻和過程后，用高剪切混合器使材料尺寸減小，以達(dá)到在2-8μm范圍的靶聚集物粒子大小。隨后將產(chǎn)物針對(duì)生理鹽水滲濾且蒸汽滅菌。在特定實(shí)施方案中，商購可得的Al (0H)3(例如Denmark/Accurate Chemical andScientific Co.，Westbury,NY 的 Alhydrogel 或 Superfos)用于以 50 - 200 g 蛋白質(zhì)/mg氫氧化鋁的比吸附蛋白質(zhì)。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，蛋白質(zhì)的吸附依賴于蛋白質(zhì)的Pi(等電點(diǎn)pH)和介質(zhì)的pH。具有更低pi的蛋白質(zhì)比具有更高pi的蛋白質(zhì)更強(qiáng)地吸附至帶正電的鋁離子。鋁鹽可以建立Ag貯庫，其經(jīng)過2-3周的時(shí)期緩慢釋放，涉及巨噬細(xì)胞的非特異性激活和補(bǔ)體激活，和/或刺激先天性免疫機(jī)制(可能通過尿酸的刺激)。參見例如,Lambrecht等人,2009, Curr Opin Tmmunol 21:23。單價(jià)整體水性綴合物一般摻和在一起，且對(duì)于除了 6B外的所有血清型都稀釋至目標(biāo)8 yg/mL，所述6B將稀釋至目標(biāo)16 μ g/mL。一旦稀釋，該批次將過濾滅菌，且無菌加入等體積的磷酸招佐劑至250 μ g/mL的祀最終招濃度。佐劑化的(adjuvanted)、配制的批次將填充到一次性使用的O. 5 mL/劑量小瓶?jī)?nèi)。在特定實(shí)施方案中，佐劑是含CpG核苷酸序列，例如含CpG寡核苷酸，特別是含CpG寡脫氧核苷酸(CpG 0DN)。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，佐劑是ODN 1826，其可以從ColeyPharmaceutical Group 犾得。
“含CpG核苷酸”、“含CpG寡核苷酸”、“CpG寡核苷酸”和類似術(shù)語指長度6_50個(gè)核苷酸的核苷酸分子，其含有未甲基化的CpG部分。參見例如，Wang等人，2003，Vaccine21:4297。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，預(yù)期任何其他領(lǐng)域公認(rèn)的術(shù)語定義。含CpG寡核苷酸包括使用任何合成核苷間鍵、修飾堿基和/或修飾糖的修飾寡核苷酸。關(guān)于使用CpG寡核苷酸的方法是本領(lǐng)域眾所周知的，并且例如在Sur等人，1999，J Immunol. 162:6284-93 ；Verthelyi,2006,Methods Mol Med. 127:139-58 ;和 Yasuda 等人，2006, Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 23:89-110 中描述。施用/劑暈
借助于經(jīng)由全身或粘膜途徑施用疫苗，本發(fā)明的組合物和制劑可以用于保護(hù)或治療對(duì)肺炎球菌感染敏感的人。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)針對(duì)肺炎鏈球菌莢膜多糖綴合物的免疫應(yīng)答的方法，其包括給人施用免疫有效量的本發(fā)明的免疫原性組合物。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了針對(duì)肺炎球菌感染給人接種疫苗的方法，其包括給人施用 免疫有效量的本發(fā)明的免疫原性組合物的步驟?！坝行Я俊钡谋景l(fā)明的組合物指引發(fā)抗體所需的劑量，所述抗體顯著減少在后續(xù)攻擊過程中肺炎鏈球菌感染的可能性或嚴(yán)重性。本發(fā)明的方法可以用于預(yù)防和/或減少由肺炎鏈球菌引起的原發(fā)性臨床綜合征，包括侵入性感染(腦膜炎、肺炎和菌血癥)和非侵入性感染(急性中耳炎和鼻竇炎)。本發(fā)明的組合物的施用可以包括下述中的ー種或多種經(jīng)由肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)或皮下途徑注射；或經(jīng)由粘膜施用于ロ /消化、呼吸或泌尿生殖道。在一個(gè)實(shí)施方案中，鼻內(nèi)施用用于肺炎或中耳炎的治療(因?yàn)榉窝浊蚓谋茄蔬\(yùn)輸(carriage)可以更有效被預(yù)防，從而減弱在其最早階段時(shí)的感染)。在每個(gè)疫苗劑量中的綴合物量選擇為誘導(dǎo)免疫保護(hù)應(yīng)答而無顯著不良反應(yīng)的量。此類量可以取決于肺炎球菌血清型而改變。一般地，每個(gè)劑量將包含O. I - 100 yg每種多糖，特別是O. I - 10 yg，且更特別是I - 5 μ g0例如，每個(gè)劑量可以包含100、150、200、250、300、400、500 或 750 ng，或 I、I. 5、2、3、4、5、6、7、7· 5、8、9、10、11、12、13、14、15、16、18、20、22、25、30、40、50、60、70、80、90 或 100 μ g。關(guān)于特定疫苗的組分的最佳量可以通過涉及受試者中合適免疫應(yīng)答的觀察的標(biāo)準(zhǔn)研究進(jìn)行確定。例如，在另ー個(gè)實(shí)施方案中，用于人疫苗接種的劑量通過從動(dòng)物研究外推到人數(shù)據(jù)進(jìn)行測(cè)定。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，劑量憑經(jīng)驗(yàn)測(cè)定。在一個(gè)實(shí)施方案中，鋁鹽的劑量是10、15、20、25、30、50、70、100、125、150、200、300、500或700 μ g，或1、1. 2、1. 5、2、3、5 mg或更多。在另外ー個(gè)實(shí)施方案中，上述鋁鹽的
劑量是姆μ g重組蛋白質(zhì)。在本發(fā)明的ー個(gè)特定實(shí)施方案中，PCV-15疫苗是與CRM197個(gè)別綴合的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F的肺炎球菌莢膜多糖的無菌液體制劑。每個(gè)O. 5 mL劑量配制為含有Jyg每種多糖，除了 4 μ g的6B外；約32 μ g CRM197載體蛋白質(zhì)(例如 32 yg±5yg、±3yg、±2y g、或 ± I μ g) ；0. 125 mg元素鋁(O. 5mg磷酸招)佐劑；以及氯化鈉和L-組氨酸緩沖液。氯化鈉濃度是約150 mM(例如150 mM土 25 mM、土 20 mM、土 15 mM、土 10 mM、或 ± 5 mM)和約 20 mM(例如 20 mM ± 5 mM、土 2. 5 mM、土 2 mM、土 I mM、或 ± O. 5 mM) L-組氨酸緩沖液。
根據(jù)本發(fā)明的任何方法和在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者是人。在特定實(shí)施方案中，人患者是嬰兒(小于I歲大)、剛學(xué)步的小孩(約12 - 24個(gè)月)、或幼兒(約2 - 5歲)。在其他實(shí)施方案中，人患者是老年患者(> 65歲)。本發(fā)明的組合物還適合于對(duì)于較大的兒童、青少年和成人(例如年齡18 - 45歲或18 - 65歲)使用。在本發(fā)明的方法的一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物作為單次接種施用。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，疫苗施用足夠間隔開的兩次、三次或四次或更多次。例如，組合物可以以I、2、3、4、5或6個(gè)月間隔或其任何組合施用。免疫接種時(shí)間表可以遵循對(duì)于肺炎球菌疫苗設(shè)計(jì)的那種。例如，針對(duì)由肺炎鏈球菌引起的侵入性疾病的用于嬰兒和剛學(xué)步的小孩的常規(guī)時(shí)間表是2、4、6和12-15月齡。因此，在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物作為4劑量系列在2、4、6和12-15月齡時(shí)施用。本發(fā)明的組合物還可以包括來自肺炎鏈球菌的ー種或多種蛋白質(zhì)。適合于包括的肺炎鏈球菌蛋白質(zhì)的例子包括在國際專利申請(qǐng)公開號(hào)WO 02/083855和WO 02/053761中鑒 定的那些。制劑
本發(fā)明的組合物可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的ー種或多種方法施用于受試者，例如腸胃外、經(jīng)粘膜、經(jīng)皮、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、鼻內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)，且相應(yīng)配制。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物經(jīng)由液體制備物的表皮注射，肌內(nèi)注射，靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、皮下注射，或呼吸道粘膜內(nèi)注射進(jìn)行施用。用于注射的液體制劑包括溶液等。本發(fā)明的組合物可以配制為單劑量小瓶、多劑量小瓶或預(yù)裝注射器。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物經(jīng)ロ施用，并且因而以適合于經(jīng)ロ施用的形式即作為固體或液體制備物進(jìn)行配制。固體經(jīng)ロ制劑包括片劑、膠囊、丸剤、顆粒劑、丸劑(pellet)等。液體經(jīng)ロ制劑包括溶液、懸液、分散體、乳液、油等。用于液體制劑的藥學(xué)可接受的載體是水或非水溶液、懸液、乳液或油。非水溶劑的例子是丙ニ醇、聚こニ醇和可注射有機(jī)酯例如油酸こ酷。水性載體包括水、醇/水溶液、乳液或懸液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。油的例子包括動(dòng)物、植物或合成起源的那些，例如花生油、大豆油、橄欖油、向日葵油、魚肝油、另外的海洋油、或來自乳或蛋的脂肪。藥物組合物可以是等滲、低滲或高滲的。然而，在將它施用時(shí)，通常優(yōu)選用于輸注或注射的藥物組合物是基本上等滲的。因此，為了貯存，藥物組合物可以優(yōu)選是等滲或高滲的。如果藥物組合物為了貯存是高滲的，那么它可以在施用前稀釋以變成等滲溶液。等滲試劑可以是離子等滲試劑例如鹽或非離子等滲試劑例如糖。離子等滲試劑的例子包括但不限于NaCl、CaCl2, KCl和MgCl2。非離子等滲試劑的例子包括但不限于甘露醇、山梨糖醇和甘油。還優(yōu)選至少ー種藥學(xué)可接受的添加劑是緩沖劑。為了某些目的，例如，當(dāng)藥物組合物意欲用于輸注或注射時(shí)，通常希望組合物包含緩沖液，其能夠?qū)⑷芤壕彌_至在4 - 10范圍中的pH，例如5 - 9，例如6 - 8。緩沖液可以例如選自TRIS、こ酸鹽、谷氨酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽、碳酸鹽、甘氨酸鹽、組氨酸、甘氨酸、琥珀酸鹽和三こ醇胺緩沖液。緩沖劑可以另外例如選自用于腸胃外使用的USP相容的緩沖液，特別是當(dāng)藥物制劑用于腸胃外使用吋。例如，緩沖液可以選自一元酸例如こ酸、苯甲酸、葡糖酸、甘油酸和乳酸；ニ元酸例如烏頭酸、己ニ酸、抗壞血酸、碳酸、谷氨酸、蘋果酸、琥珀酸和酒石酸，多元酸例如檸檬酸和磷酸；和堿例如銨、ニこ醇胺、甘氨酸、三こ醇胺和TRIS。腸胃外媒介物(用于皮下、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)或肌內(nèi)注射)包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸林格和不揮發(fā)性油。靜脈內(nèi)媒介物包括液體和營養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑例如基于林格氏右旋糖的那些等。例子是無菌液體例如水和油，添加或不添加表面活性劑和其他藥學(xué)可接受的佐劑。一般而言，水、鹽水、水性右旋糖和相關(guān)糖溶液，ニ醇例如丙ニ醇或聚こニ醇，和聚山梨糖醇-80是優(yōu)選液體載體，特別是用于可注射溶液。油的例子是動(dòng)物、植物或合成起源的那些，例如花生油、大豆油、橄欖油、向日葵油、魚肝油、另外的海洋油、或來自乳或蛋的脂質(zhì)。本發(fā)明的制劑還可以含有表面活性剤。優(yōu)選表面活性劑包括但不限于:聚氧乙烯脫水山梨糖醇酯表面活性劑(通常稱為Tweens)，特別是聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80 ；在DOWFAX 商品名稱下銷售的，環(huán)氧こ烷(EO)、環(huán)氧丙烷(PO)和/或環(huán)氧丁烷(BO)的共 聚物，例如線性Ε0/Ρ0嵌段共聚物；辛苯昔醇，其可以在重復(fù)こ氧基(氧基-1，2-こニ基(ethanediyl)基團(tuán)數(shù)目中不同，其中辛苯昔醇_9 (Triton X-100,或叔辛基苯氧基聚こ氧基こ醇)是特別有利的；(辛基苯氧基)聚こ氧基こ醇(IGEPAL CA-630/NP-40);磷脂例如磷脂酰膽堿(卵磷脂)；壬基酚こ氧基化物例如Tergitol NP系列；衍生自月桂醇、鯨蠟醇、硬脂醇和油醇的聚氧こ烯脂肪醚(稱為Brij表面活性劑)，例如三甘醇單月桂基醚(Brij30);和脫水山梨糖醇酯(通常稱為SPANs)，例如脫水山梨糖醇三油酸酯(Span 85)和脫水山梨糖醇單月桂酸酷。用于包括在乳液中的優(yōu)選表面活性劑是Tween 80(聚氧こ烯脫水山梨糖醇單月桂酸酷)?？梢允褂帽砻婊钚詣┑幕旌衔?例如Tween 80/Span 85混合物。聚氧こ烯脫水山梨糖醇酯例如聚氧こ烯脫水山梨糖醇單月桂酸酷(Tween 80)和辛苯昔醇例如叔辛基苯氧基聚こ氧基こ醇(Triton X-100)的組合也是合適的。另ー種有用的組合包含Iaureth 9加上聚氧こ烯脫水山梨糖醇酯和/或辛苯昔醇。表面活性劑的優(yōu)選量(按重量計(jì)％)是聚氧こ烯脫水山梨糖醇酯(例如Tween80)0.01 - 1%,特別是約O. I % ;辛基或壬基苯氧基聚氧こ醇(polyoxyethanols)(例如Tri-η Χ-100，或在Tri-n系列中的其他去垢劑)0. 001 - 0.1 %，特別是0.005 - 0. 02% -M氧こ烯醚(例如Iaureth 9)0. I - 20 %，優(yōu)選0. I - 10 %，且特別是0. I - I %或約0.5%。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物在控釋系統(tǒng)中遞送。例如，試劑可以使用靜脈內(nèi)輸注、經(jīng)皮貼劑、脂質(zhì)體或其他施用模式進(jìn)行施用。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，使用聚合材料；例如在微球體中或埋植劑中。還由本發(fā)明包含的是通過水溶性聚合物的共價(jià)附著修飾的化合物，所述水溶性聚合物例如聚こニ醇、聚こニ醇和聚丙ニ醇的共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚こ烯醇、聚こ烯吡咯烷酮或聚脯氨酸。此類修飾可以增加化合物在水溶液中的可溶性，消除聚集，增強(qiáng)化合物的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，且極大減少化合物的反應(yīng)原性。在另ー個(gè)實(shí)施方案中，所需體內(nèi)生物學(xué)活性通過更不頻繁地或以比未修飾化合物更低的劑量施用此類聚合物-化合物加合物(abducts)來達(dá)到。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，疫苗組合物在具有氯化鈉的L-組氨酸緩沖液中配制。已就伴隨描述和附圖而言描述了本發(fā)明的多個(gè)實(shí)施方案，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明并不限于那些精確實(shí)施方案，并且多種變化和修飾可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員在其中實(shí)現(xiàn)，而不背離如在附加權(quán)利要求中定義的本發(fā)明的范圍或精神。下述實(shí)施例舉例說明但不限制本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例I :肺炎鏈球菌莢膜多糖的制備
培養(yǎng)肺炎球菌的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。參見例如，Chase，1967，Methods ofImmunology and Immunochemistry 1:52。制備肺炎球菌莢膜多糖的方法也是本領(lǐng)域眾所周知的。參見例如，歐洲專利號(hào)EP0497524。肺炎球菌亞型的分離物可從ATCC獲得。
該細(xì)菌鑒定為有莢膜、無運(yùn)動(dòng)、革蘭氏陽性、柳葉刀狀雙球菌，其在血瓊脂上是α-溶血的。亞型是在使用特異性抗血清的Quelling反應(yīng)的基礎(chǔ)上區(qū)分的。參見例如，美國專利號(hào)5，847，112。細(xì)朐庫
代表PCV-15中存在的肺炎鏈球菌血清型各自的細(xì)胞庫以冷凍小瓶得自Merck CultureCollection(Rahway, NJ)。梓種
將解凍的種子培養(yǎng)物轉(zhuǎn)移至含有合適的預(yù)滅菌生長培養(yǎng)基的種子發(fā)酵罐。種子發(fā)酵
培養(yǎng)物在種子發(fā)酵罐中伴隨溫度和pH控制生長。將種子發(fā)酵罐的整個(gè)體積轉(zhuǎn)移至含有預(yù)滅菌生長培養(yǎng)基的生產(chǎn)發(fā)酵罐。牛產(chǎn)發(fā)酵
生產(chǎn)發(fā)酵是該過程的最后細(xì)胞生長階段。溫度、PH和攪動(dòng)速率是受控的。滅活
發(fā)酵過程經(jīng)由滅活劑的添加得到終止。在滅活后，將批次轉(zhuǎn)移至滅活槽，在其中它保持在受控的溫度和攪動(dòng)下。純化
使用離心和過濾的組合去除細(xì)胞碎片。將批次超濾且滲濾。隨后對(duì)批次實(shí)施基于溶劑的分餾，其去除雜質(zhì)且回收多糖。實(shí)施例2 :肺炎球菌多糖CRM197綴合物的制備 激活過稈
不同血清型糖類使用常見エ藝流程個(gè)別綴合至純化的CRM197載體蛋白質(zhì)。在這個(gè)過程中，將糖類溶解，調(diào)節(jié)大小至靶分子量，化學(xué)激活且通過超濾更換緩沖液。隨后用激活糖類綴合純化的CRM197，且在最后0.2 μ m膜過濾前，將所得到的綴合物通過超濾純化。在每個(gè)步驟內(nèi)的幾個(gè)エ藝參數(shù)，例如pH、溫度、濃度和時(shí)間是血清型特異性的，如本實(shí)施例中所述。步驟I :溶解
將純化的多糖溶解于水中至2 - 3 mg/mL的濃度。將溶解的多糖經(jīng)過其壓カ預(yù)調(diào)為0-1000巴的機(jī)械勻漿器。在尺寸減小后，將糖類濃縮且用無菌水在10 kDa MWCO超濾器上滲濾。將滲透物棄去，并且用こ酸鈉緩沖液，50 mM終濃度，將滲余物調(diào)整至pH 4.1。對(duì)于血清型4和5，使用以pH 5. O的100 mMこ酸鈉。對(duì)于血清型4，將溶液在50° 土 2°C溫育。通過冷卻至20 - 24°C停止水解。步驟2:高碘酸鹽反應(yīng)
使用總糖類含量測(cè)定用于肺炎球菌糖類激活的所需高碘酸鈉摩爾當(dāng)量。伴隨充分混合，對(duì)于除了 5、7F和19F(關(guān)于其的溫度是2 - 6°C )外的所有血清型，允許氧化在20 -24°C進(jìn)行3 - 20小時(shí)。步驟3 :軺濾
將氧化糖類濃縮，并且在10 kDa MWCO超濾器上用10 mM磷酸鉀，pH 6.4(對(duì)于血清型5，10 mMこ酸鈉，pH 4. 3)滲濾。將滲透物棄去，并且通過添加3 M磷酸鉀緩沖液，將滲余物調(diào)整至 pH 6. 3 - 8. 4。綴合討程 步驟I :綴合反應(yīng)
將濃縮糖類與CRM197載體蛋白質(zhì)以O(shè). 2 - 2至I配料比混合。將摻和的糖類-CRM197混合物通過O. 2 μ m濾器過濾。綴合反應(yīng)通過加入氰基硼氫化鈉溶液達(dá)到1.8 - 2.0摩爾氰基硼氫化鈉/摩爾糖類而起始。將反應(yīng)混合物在20 - 240C (對(duì)于血清型3、5、6A、7F、19A和19F，8 - 12°C )溫育48 - 120小時(shí)。步驟2 :硼氫化物反應(yīng)
在綴合溫育結(jié)束時(shí)，用I. 2 M碳酸氫鈉緩沖液或3 M磷酸鉀緩沖液(除了血清型5外)，將反應(yīng)混合物調(diào)整至4 - 8°C，和pH 8 - 10。通過加入硼氫化鈉溶液達(dá)到O. 6 - I. O摩爾硼氫化鈉/摩爾糖類(對(duì)于血清型5，加入O摩爾硼氫化物)停止綴合反應(yīng)。將反應(yīng)混合物溫育45 - 60分鐘。步驟3 :超濾步驟
將反應(yīng)混合物在100 kDa MWCO超濾器上滲濾，使用最低限度20體積的100 mM磷酸鉀，pH 8. 4緩沖液。來自100 kDa超濾器的滲余物在300 kDa MWCO超濾器上滲濾，使用在20-24で最低限度20透析體積(diavolumes)的150 mM氯化鈉。將滲透物棄去。步驟4 :無菌過濾
將來自300 kDa MWCO滲濾的滲余物通過O. 2 μ m濾器過濾，且填充到合適體積的硼硅玻璃容器內(nèi)，用于釋放測(cè)試、過程中控制(in-process control)和配制(除了血清型19F外)。將血清型19F綴合物經(jīng)過O. 2 μ m濾器進(jìn)入容納槽內(nèi)，且在20 - 24°C溫育。在溫育后，將綴合物在300 kDa MWCO超濾器上滲濾，使用在20 - 24°C最低限度20透析體積的150mM氯化鈉。將滲透物棄去，并且將滲余物通過O. 2 μ m濾器過濾，且填充到合適體積的硼硅玻璃容器內(nèi)，用于釋放測(cè)試、過程中控制和配制。將最終整體濃縮物貯存于2 - 8°C。實(shí)施例3:15價(jià)肺炎球菌綴合物疫苗的配制
基于批次體積和整體糖類濃度計(jì)算整體濃縮物的所需體積。通過加入含有氯化鈉和L-組氨酸、pH 5. 8的緩沖液，將合并的15種綴合物進(jìn)ー步稀釋至靶吸附濃度。在足夠混合后，將摻和物通過O. 2 μ m膜無菌過濾。將無菌配制的整體在其與整體磷酸鋁摻和的過程中和之后輕輕混合。將配制的疫苗貯存于2 - 8°C。在可替代過程中，通過加入含有氯化鈉和L-組氨酸、pH 5. 8的緩沖液，將合并的15種綴合物進(jìn)ー步稀釋至靶濃度。在無菌過濾前，向稀釋的緩沖的綴合物混合物中加入聚山梨醇酯80至O. 005%的終濃度。在無菌過濾后，將配制的疫苗貯存于2 - 8°C。表I顯示佐劑化和未佐劑化形式的PCV-15的最終組成。表I :佐劑化和未佐劑化15價(jià)肺炎球菌綴合物疫苗制劑的組成
權(quán)利要求
1.一種免疫原性組合物，其包含 (1)由與載體蛋白質(zhì)綴合的來自肺炎鏈球菌{Streptococcuspneumoniae)的血清型1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F和33F的莢膜多糖組成的多價(jià)多糖蛋白質(zhì)綴合物混合物，和 (2)藥學(xué)可接受的載體。
2.權(quán)利要求I的免疫原性組合物，其中所述載體蛋白質(zhì)是CRM197。
3.權(quán)利要求I的免疫原性組合物,其進(jìn)一步包含佐劑。
4.權(quán)利要求3的免疫原性組合物，其中所述佐劑是基于鋁的佐劑。
5.權(quán)利要求4的免疫原性組合物，其中所述佐劑選自磷酸鋁、硫酸鋁和氫氧化鋁。
6.權(quán)利要求5的免疫原性組合物，其中所述佐劑是磷酸鋁。
7.一種誘導(dǎo)針對(duì)肺炎鏈球菌莢膜多糖的免疫應(yīng)答的方法，其包括給人施用免疫有效量的權(quán)利要求I的免疫原性組合物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中施用的所述免疫原性組合物是配制為含有下述的單個(gè)O.5mL劑量2 μ g每種多糖，除了 4 μ g的6B夕卜；約32 μ g CRM197載體蛋白質(zhì)；0. 125 mg元素鋁(O. 5 mg磷酸鋁)佐劑；150 mM氯化鈉和20 mM L-組氨酸緩沖液。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有15種不同多糖蛋白質(zhì)綴合物的多價(jià)免疫原性組合物。每種綴合物由與載體蛋白質(zhì)優(yōu)選CRM197綴合的莢膜多糖組成，所述莢膜多糖由肺炎鏈球菌的不同血清型(1、3、4、5、6A、6B、7F、9V、14、18C、19A、19F、22F、23F或33F)制備。優(yōu)選配制為在基于鋁的佐劑上的疫苗的免疫原性組合物提供了針對(duì)特別是在嬰兒和幼兒中的肺炎球菌疾病的廣泛覆蓋。
文檔編號(hào)A61K39/00GK102858365SQ201180008742
公開日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2011年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月9日
發(fā)明者M.J.考爾菲爾德, P.L.阿爾, J.T.布盧, J.L.肯農(nóng) 申請(qǐng)人:默沙東公司